银杏黄酮对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织的保护作用

目的 探讨银杏黄酮对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法 制备脑缺血再灌注脑损伤大鼠模型,并随机分为假手术组、模型组和银杏黄酮组,观察大鼠日常行为,并对实验大鼠脑进行病理组织学观察,检测脑组织匀浆中还原性谷胱甘肽(GSH)水平及过氧化氢酶(CAT)活力,Western blot检测大鼠脑组织中NF-κB蛋白表达水平。结果 模型组大鼠活动减少、部分大鼠出现明显的神经缺损症状; 模型组大鼠脑组织水肿,皮质神经细胞层次紊乱; 银杏黄酮组与模型组比较, 病理改变减轻; 模型组神经细胞基质密度减低,胞质内空泡形成,未见明显核仁结构; 银杏黄酮组神经细胞变性程度较模型组缓解,细胞核内染色质较均匀; 与模型组比较,银杏黄酮组的GSH水平及CAT活力均升高(P<0.05); Western blot检测显示,模型组NF-κB蛋白水平明显升高,与假手术组比较有明显差异(P<0.05); 银杏黄酮治疗后NF-κB蛋白水平降低,与模型组比较有明显差异(P<0.05)。结论 银杏黄酮对缺血再灌注损伤大鼠脑组织有保护作用。     

缝隙连接蛋白-43阻断剂辛醇对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的观察小鼠脑缺血再灌注后缝隙连接蛋白-43(Cx43)表达变化及缝隙蛋白阻断剂辛醇对小鼠梗死体积的影响。方法采用线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞模型(MCAO模型),应用免疫印迹(Western blot)方法观察脑缺血再灌注损伤前后Cx43表达变化和辛醇对Cx43表达的影响,并计算各组死亡率及脑梗死体积。结果小鼠脑缺血2h再灌注损伤24h条件下,缺血区Cx43表达在损伤前后无明显变化(P>0.05)。辛醇能显著抑制脑缺血再灌注损伤后Cx43表达,降低死亡率及减少脑梗死体积,具有统计学差异(P<0.05)。结论由Cx43组成的缝隙连接蛋白在脑缺血再灌注损伤过程中具有重要作用,缝隙蛋白-43阻断剂辛醇通过抑制海马及皮质Cx43表达,进而降低死亡率及梗死体积,从而发挥神经保护作用。     

巴豆生物碱通过ERK1/2通路对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤及自噬的影响

目的 探讨巴豆生物碱(Croton alkaloids,CA)通过细胞外调节蛋白激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase1/2,ERK1/2)通路对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤及自噬的影响。方法 50只大鼠建立大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,造模成功大鼠(48只),并随机分为模型组(12只)、CA低剂量组(12只)、CA中剂量组(12只)和CA高剂量组(12只),其余10只为对照组; CA低、中和高剂量组分别注射0.6、1.2、2.4 mg/kg的CA注射液,连续注射7 d; 对照组及模型组给予等量生理盐水注射; 应用神经功能评分法评定大鼠神经功能缺损和改善情况; 苏木精-伊红染色法(Hematoxylin eosin staining,HE)检测大鼠脑组织海马神经元的形态及数量; 原位末端转移酶标记法(Terminal uridine nick end labeling,TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马ERK1/2、哺乳动物同源蛋白(Mammalian homologous protein,Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3-Ⅱ)mRNA和蛋白表达水平。结果 与模型组比较,CA低、中、高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05); 与CA低剂量组比较,CA中、高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05); 与CA中剂量组比较,CA高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 CA可降低MCAO大鼠神经细胞凋亡率,在一定程度上修复MCAO大鼠神经功能,发挥神经保护作用,其机制可能与激活ERK1/2信号通路有关。     

CpG-ODN对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨CpG-ODN对大鼠脑缺血/再灌注（I/R）损伤的保护作用及其机制。方法 将54只大鼠随机分为假手术组、脑I/R模型组、CpG-ODN组,每组18只。采用大脑中动脉线栓法构建大鼠脑I/R模型。CpG-ODN组造模前1 h腹腔注射CpG-ODN（10 μg/25 g）,脑I/R模型组注射等量生理盐水。再灌注12 h采用Longa 5分评分法评估神经功能。再灌注24 h采用TTC染色测定脑梗死体积,HE染色观察组织结构,TUNEL染色分析细胞凋亡,PCR检测酪氨酸激酶（JAK）、信号转导和转录激活因子（STAT）mRNA表达水平,免疫印迹法分析Caspase3、Caspase7、JAK、p-JAK、STAT和p-STAT蛋白水平。结果 与假手术组比较,脑I/R模型组神经功能障碍严重,脑梗死体积显著增大,脑组织发生水肿、坏死等病变;与脑I/R模型组比较,CpG-ODN组明显改善。与假手术组比较,脑I/R模型组脑组织细胞凋亡率和Caspase3、Caspase7蛋白水平明显升高（P<0.05）,脑I/R模型组JAK、STAT mRNA水平和蛋白磷酸化程度显著上调（P<0.05）;与脑I/R模型组比较,CpG-ODN组细胞凋亡率和Caspase3、Caspase7蛋白水平明显降低（P<0.05）,JAK、STAT mRNA和蛋白磷酸化程度均明显下降（P<0.05）。结论 CpG-ODN能有效保护大鼠脑I/R损伤,其机制可能与影响JAK、STAT蛋白磷酸化抑制细胞凋亡有关。     

雌激素对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用的研究

目的　研究外源性雌激素替代对大鼠局灶性脑缺血 再灌注损伤的神经保护作用。方法　将12 0只大鼠分为对照组、双侧卵巢切除 (OVX)组、OVX +雌二醇 (E2 )组 (E2 2 0 0 μg/kg ,皮下注射每周 1次 ,连续 4周 )。 4周后用线栓法建立脑缺血再灌注模型 ,在缺血再灌注不同时间观察大鼠脑梗死体积、病理改变、凋亡细胞数及检测血浆雌激素水平。结果　缺血再灌注不同时间均以OVX +E2 组脑梗死体积最小 ,OVX组最大 ,两组比较有显著差异 (均P <0 0 1)。凋亡细胞数OVX组明显多于OVX +E2 组 (P <0 0 5 )。结论　雌激素对缺血 再灌注后脑损伤具有明显的保护作用     

ERK和CREB磷酸化在硫氢化钠对大鼠脑缺血再灌注神经保护的机制探讨

目的探讨磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)和磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)在外源性硫化氢(NaHS)干预下对大鼠脑缺血再灌注的神经保护作用及机制。方法将180只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和NaHS干预组(100μmol/L),每组60只。线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,2h后再灌注,灌注前20min给予生理盐水或NaHS腹腔注射,术后6h、1d、2d、5d、7d后行TTC染色观察脑梗死体积,尼氏染色检测神经元表达,WesternBlot检测海马p-ERK1/2、p-CREB表达,免疫组化检测Bcl-2表达。结果干预组脑梗死体积和神经元凋亡相对于模型组显著减少(P0.05)。与模型组相比,干预组各时间点p-ERK1/2、p-CREB蛋白表达均升高(P0.05),两者之间呈正相关;干预组Bcl-2相对于模型组升高(P0.05)。结论大鼠脑缺血再灌注损伤后NaHS可能通过诱导ERK1/2和CREB蛋白磷酸化,激活下游Bcl-2蛋白表达,起到抗凋亡作用,减少脑梗死体积,发挥神经保护作用。     

胰岛素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :研究胰岛素对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型 ,按胰岛素不同给药时间分为 4组 ,检测各组不同时限的血糖、神经功能缺陷评分以及梗死灶体积 ,并在电镜下对缺血边缘区进行超微结构观察。结果 :在 6h内给予胰岛素治疗 ,可使神经功能缺陷评分显著降低 ,梗死灶体积明显缩小 ,缺血边缘区超微结构损伤明显减轻。结论 :在有效治疗时窗内 (6h) ,胰岛素可明显减轻脑缺血再灌注损伤     

孕酮预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的 探讨孕酮预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤(focal cerebral ischemic and reperfusion injury,fCIRI)的作用及机制.方法 在建立大鼠fCIRI模型前96、48、1h分别给予孕酮(8mg/kg)1次性腹腔注射.建立大鼠fCIRI模型,在fCIRI后第3～8天,检查大鼠的空间记忆功能和缺血侧海马CA1区存活神经元数量.检测孕酮预处理后1～96 h的海马细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平和活化ERK1/2核转移.结果 造模前48、1h经孕酮预处理的大鼠海马CA1区神经元存活数量(mm-1)较造模后明显增多(164.3±11.0、218.5±9.1与142.7±12.1,F=29.45,P＜0.01);造模前48、1h经孕酮预处理的大鼠能明显缩短脑缺血导致的水迷宫逃避潜伏期(s)延长(32.4±14.3、10.3±11.1与19.2±9.6;F=35.84,P＜0.01).海马CA1区ERK1/2磷酸化水平在孕酮给药后的12 ～48 h明显增强,96 h恢复基线.核内ERK1/2磷酸化水平在孕酮给药后2h增加,并持续到48 h.孕酮增加胞质ERK1/2及胞核内ERK1/2磷酸化的水平能被RU486阻断.结论 孕酮预处理对缺血引起的海马CA1区神经元死亡有保护作用,并能改善空间记忆功能;孕酮预处理的神经保护作用有48 h以上的有效时间窗;在孕酮的神经保护作用依赖于孕酮受体介导的ERK1/2信号通路.     

硫酸镁对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：探讨不同时间、不同剂量硫酸镁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能的保护作用。方法：50只雄性SD大鼠被随机分为再灌注前高硫酸镁组、再灌注前低硫酸镁组、再灌注后高硫酸镁组、再灌注后低硫酸镁组和对照组共五组。采用改良的Longa′s法制作脑缺血再灌注模型,术后4h予以再通。术后6h采用胡氏脑组织微量分析法,测定梗死脑组织的Na^ 、K^ 、水含量,术后24h先进行神经病学评分,再断头取脑染色后进行梗死灶体积的测定。结果：硫酸镁治疗组与对照组相比,梗死灶体积缩小,脑水肿减轻,神经功能恢复好。治疗效果高硫酸镁组优于低硫酸镁组,再灌注前组又优于再灌注后组,其中再灌注前高硫酸镁组效果最为显著。结论：硫酸镁对脑缺血后再灌注损伤有明显地神经保护作用,且治疗效果与治疗时间早晚和剂量大小密切相关。     

核因子κB在大鼠脑缺血耐受中的作用及其对细胞间黏附分子-1和Bcl-2表达的影响

目的探讨核因子κB(NFκB)在大鼠脑缺血耐受中的作用及其可能的参与途径。方法建立大鼠4血管闭塞的全脑缺血耐受模型。将实验动物随机分为4组：假手术组(sham)。缺血再灌注组(1／R)。缺血预处理加缺血再灌注组(IP I／R)。DTTC(NFκB的特异性抑制剂)加缺血预处理组加缺血再灌注组(Ip^DTTC I／R)。用凝胶电泳迁移率改变分析法检测NFκB的活性，免疫组化技术检测细胞间黏附分子=1(ICAM-1)和Bcl-2的表达。结果I／R中NFκB被激活。IP可抑制其激活，DTTC可逆转IP对I／R中NFCB的抑制效应；IP I／R组与I／R组相比。神经元计数明显增高，ICAM-1的表达降低．Bcl-2的表达增加；给予DTTC处理后，IP的神经保护作用明显减弱。Ip^DTTC I／R组与I／R组ICAM-1和Bcl-2的表达无显著性差异。结论IP的神经保护效应依赖于NFκB的激活，可能部分通过上调Bcl-2的表达，同时抑制I／R中NFκB的活性而减少ICAM-1的产生发挥作用。     

柚皮苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究柚皮苷(Naringin,NRG)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及星形胶质细胞是否参与其中。方法柚皮苷连续灌胃7 d后进行大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO),缺血2 h后拔出线栓进行再灌注。24 h后TUNEL染色观察凋亡细胞数量,苏木精-伊红(hematoxyli-eosin,HE)染色观察形态学改变,免疫荧光染色分别检测星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)。结果同模型组相比,柚皮苷预干预后凋亡细胞数量显著减少(P0.05),细胞损伤明显减轻。免疫染色显示柚皮苷可以减轻星形胶质细胞的激活程度,同时Cx43的表达也有所降低(P0.05)。结论柚皮苷预干预可有效减轻脑缺血再灌注损伤,该保护作用同降低星形胶质细胞Cx43表达密切相关。     

七叶皂苷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨七叶皂苷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 60只成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组和七叶皂苷钠组,各20只.采用线栓法建立大鼠局灶性大脑中动脉闭塞再灌注损伤模型,七叶皂苷钠组建模成功后1h腹腔注射七叶皂苷钠(2.8 mg/kg),假手术组和模型组腹腔注射等量生理盐水.造模后24 h,使用Longa...     

疏血通对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对NO、NOS含量的影响

目的　探讨疏血通对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　 4 8只成年雄性沙土鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组和治疗组 ,阻断双侧颈总动脉 7分钟后血液复流 ,制成沙土鼠脑缺血再灌注模型。每组随机取 8只沙土鼠于再灌注后 2 4小时处死 ,分离出海马区及额顶部脑组织 ,作脑组织匀浆。测定脑组织匀浆中的NO、NOS含量 ,同时对再灌注后 12小时、3天、7天海马区的病理学改变进行观察。然后比较假手术组、缺血再灌注组和治疗组上述指标的变化。结果　缺血再灌注后 12小时治疗组较缺血再灌注组海马CA1区神经元变性、坏死程度明显减轻 ,随再灌注时间的推移两组变性、坏死及形态不规则的神经元均逐渐增多 ;超微结构显示治疗组细胞器、细胞核及细胞内膜系统的损伤性改变较缺血再灌注组明显减轻。治疗组NO、NOS含量则明显低于缺血再灌注组 (P <0 .0 5 ) ,而缺血再灌注组NO、NOS含量明显高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;治疗组与假手术组NO、NOS含量差别无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　疏血通可能通过抑制NO合成来对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注后梗死灶周围中性粒细胞浸润和核转录因子-κB表达水平的影响

目的 观察阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注后梗死灶周围中性粒细胞浸润以及核转录因子-κB表达水平的影响.方法 采用常规尼龙线栓法制备SD大鼠脑缺血再灌注模型,并将大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻断再灌注(Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)(对照)组和M...     

阿托伐他汀钙对实验性脑缺血MMP-9表达变化的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9mRNA及蛋白表达的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,参考Longa5分制法在动物麻醉清醒后进行评分,应用原位杂交和免疫组化法检测MMP-9mRNA及蛋白表达。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中MMP-9mRNA和蛋白表达增加(P<0.01),24h达高峰;阿托伐他汀钙干预治疗后能减少缺血脑组织中MMP-9mRNA和蛋白表达(P<0.05);降低神经功能缺损评分(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9mRNA及蛋白表达,减轻缺血再灌损伤。     

抑制ERK1/2对大鼠弥漫性脑损伤后细胞凋亡的影响

目的 探讨抑制细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）对大鼠弥漫性脑损伤（DBI）后脑组织细胞凋亡的影响。方法 按随机数字表法将228只成年SD大鼠随机分为假手术组（n=12）、DBI组（n=72）、阻滞剂组（n=72）、对照组（n=72）,后三组按动物处死时间分为30 min、3 h、24 h、48 h、72 h和7 d六个亚组,每亚组12只。参照Mamarou自由落体方法制作重型DBI模型。阻滞剂组损伤后尾静脉注射ERK1/2特异性阻滞剂U0126（0.05 mg/kg）,对照组注射等量溶剂二甲基亚砜。免疫印迹法法检测脑组织磷酸化ERK1/2（pERK1/2）的表达水平,免疫组化法检测Caspase-3表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 伤后30 min,脑组织pERK1/2表达水平显著增高（P<0.05）,并持续高水平表达至72 h,伤后7 d与假手术组无统计学差异（P>0.05）。伤后3 h,脑组织Caspase-3表达水平和细胞凋亡率均明显增高,72 h达到高峰,伤后7 d仍明显高于假手术组（P<0.05）。伤后30 min、3 h、24 h、48 h、72 h和7 d,阻滞剂组脑组织Caspase-3表达水平和细胞凋亡率均明显低于DBI组和对照组（P<0.05）,而DBI组和对照组均无统计学差异（P>0.05）。结论 阻滞ERK1/2通路,可显著抑制DBI大鼠脑组织Caspase-3的表达,降低细胞凋亡率。     

促红细胞生成素在脑缺血再灌注损伤中对线粒体的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)在脑缺血再灌注损伤中对线粒体功能的保护作用. 方法 30只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、缺血再灌注组和EPO治疗组3组,每组各10只.EPO治疗组和缺血再灌注组用线栓法复制脑缺血再灌注模型.EPO治疗组在缺血再灌注后1、24、48、60 h腹腔注射EPO,剂量为3000 U/kg(用生理盐水以1:1比例稀释),缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水.正常对照组仅分离颈部动脉,动脉不做栓塞处理.缺血后72h观察各组大鼠脑组织神经细胞线粒体跨膜电位、线粒体丙二醛、超氧化物歧化酶、Na十_K+.ATP酶活性、一氧化氮含量和免疫组化检测海马区Caspase-3阳性细胞数的变化. 结果 EPO治疗组的神经细胞线粒体跨膜电位(77.48±5.93)、超氧化物歧化酶[(96.91±8.66)p,kat/g]、Na+_K+-ATP酶活性[(10.48±2.77)μkat/g]明显高于缺血再灌注组[44.47±17.35、(84.46±8.54)μkat/g、(7.37±2.87)μkat/g],线粒体丙二醛[(37.99±5.38)μmol/g]、一氧化氮含量[(10.18±2.02)μmol/g]、Caspase-3阳性细胞数(66.31±8.09)明显低于缺血再灌注组[(44.83±6.48)μmol/g、(12.12±2.14)μmol/g、74.90±7.42]. 结论 EPO对缺血再灌注损伤脑组织产生保护作用的重要机制之一是保护神经细胞线粒体的功能,其核心是抑制线粒体跨膜电位的下降.     

GM1对高血压大鼠脑缺血再灌注后DNA损伤修复的影响

目的探讨GM1对局灶性脑缺血再灌注后神经元凋亡作用的机制。方法运用双肾双夹法建立肾血管性高血压大鼠模型,采用线栓法制备高血压大鼠短暂性局灶性脑缺血再灌注模型,免疫组化法检测再灌注过程中鼠脑DNA损伤修复蛋白XR—CC1、TUNEL法检测凋亡。结果与假手术组相比,脑缺血再灌注3h至24h在缺血区皮质XRCC1表达出现显著减低（P〈0.05）;再灌注24h缺血区皮质神经细胞发生凋亡,神经细胞XRCC1的表达强度与凋亡呈负相关。GM1治疗后缺血区皮质XRCC1的表达显著升高,凋亡显著减少（P〈0．05）。结论GM1通过提高肾血管性高血压大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞XRCC1的表达,发挥了抗神经细胞凋亡的作用。     

甘珀酸治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的体内实验研究

目的 探讨缝隙连接抑制剂甘珀酸对实验性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的治疗作用.方法 建立兔蛛网膜下腔二次出血模型,脑池及静脉分别给与缝隙连接抑制剂甘珀酸,脑血管造影及光镜观察分析基底动脉的直径及形态学变化,并应用Western blotting检测基底动脉Cx43蛋白的表达变化.结果 给与甘珀酸后,基底动脉狭窄程度及光镜下形态学变化显著减轻:单纯注血组(65.7±10.3)%,脑池处理组(91.2±6.4)%,静脉处理组(96.4±11.0)%,腑池预处理组(89.7±12.8)%;同时也显著抑制了痉孪后Cx43蛋白表达水平的升高:单纯注血组(57.2±2.8)%,脑池处理组(10.0±5.3)%,静脉处理组(15.2±1.7)%.结论 缝隙连接抑制剂甘珀酸可能对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛起到预防和治疗作用.