早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马GAP-43表达的影响

目的 探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain injury, HIBI)新生大鼠海马生长相关蛋白(Growth-associated protein-43, GAP-43)表达的影响.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBI模型,随机分为干预组和非干预组,假手术大鼠作为对照组.干预组大鼠于HIBI后第2天开始丰富环境干预,分别于术后第3、7、14、21、28天取各组大鼠脑组织进行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,观察不同时间点各组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达的差异.结果 非干预组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达强于对照组(P＜0.01),干预组海马GAP-43表达于术后第14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05),GAP-43mRNA表达于术后第7、14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05). 结论 早期丰富环境干预可以增强HIBI新生大鼠海马GAP-43及其mRNA的表达,提示GAP-43表达的增多可能参与了丰富环境影响HIBI新生大鼠损伤修复的机制.     

饮水砷暴露对子代雌性大鼠海马组织神经生长因子、神经生长相关蛋白mRNA表达的影响

目的 探讨孕期和哺乳期大鼠亚砷酸钠暴露后,对第一子代雌性大鼠海马神经生长因子(NGF)和神经生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA表达的影响。 方法 12只雌鼠于受孕后第6 d开始以自由饮水方式分别暴露于0、10、50、100 mg/L NaAsO₂水溶液,连续染毒直到仔鼠出生后第21 d,取子代雌性大鼠脑海马组织进行HE、尼氏体染色观察海马CA1、CA3、DG区神经元的形态及数目改变;应用RT-PCR检测各组仔鼠海马NGF、GAP-43 mRNA的表达。 结果 HE结果显示对照组仔鼠CA1、CA3区海马神经元细胞结构正常,各染砷组仔鼠可见海马神经元边缘欠清晰,胞体皱缩,有核固缩等凋亡征象。尼氏体染色:对照组海马神经元胞浆富含尼氏体,随着染毒剂量的增加,尼氏体减少,其中以CA1区损伤最为明显。RT-PCR结果显示,各剂量组仔鼠NGF、GAP-43 mRNA表达降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。各砷暴露组之间NGF、GAP-43 mRNA的表达随砷剂量增高而下降(P均<0.05)。 结论 大鼠孕期和哺乳期砷暴露,可以损伤第一子代雌性大鼠海马神经元细胞,抑制海马区NGF、GAP-43 mRNA的表达,从而损害学习记忆能力。     

新生鼠脑缺血预处理后海马CA1区GAP-43的表达

目的:观察新生Wistar鼠脑缺血再灌注后海马CA1区生长相关蛋白43(GAP-43)的表达和意义. 方法:通过阻断7日龄新生Wistar大鼠右侧颈总动脉45 min制备脑缺血模型,设置假手术组、缺血再灌注组和预缺血-缺血再灌注组. 采用免疫组化方法和计算机图像分析技术检测三组新生鼠不同时点海马CA1区脑组织GAP-43的动态变化及三组光镜下脑组织病理改变. 结果: ①脑组织病理改变:假手术组大鼠无异常病理改变,缺血再灌注组神经细胞变性、坏死,预缺血组-病理损伤较缺血再灌注组轻. ②GAP-43表达:缺血再灌注组海马GAP-43表达在再灌注后24 h时开始增高,7 d达高峰,至14 d与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05);预缺血-缺血再灌注组GAP-43表达较缺血再灌注组增加更明显,与假手术组和缺血再灌注组比较均差异有统计学意义(P＜0.05). 结论: 新生鼠脑缺血预处理可减轻再次严重脑缺血对神经细胞的损伤,脑缺血预处理后海马CA1区GAP-43表达和合成增加,GAP-43表达增加可能与神经元再生和轴突重塑有关,是脑缺血后神经细胞内源性代偿机制之一.     

新生鼠脑损伤后神经蛋白聚糖的变化

目的 观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑内神经蛋白聚糖的动态变化,探讨神经可塑性相关抑制因素在发育期脑损伤后的改变. 方法 7 d龄SD大鼠随机分为假手术组和HIBD组,于脑缺氧缺血术后1,4,7,14,28 d分别取脑组织进行H-E染色和免疫组织化学染色观察组织病理变化及神经蛋白聚糖蛋白表达,并以RT-PCR法检测其mRNA表达. 结果 假手术组神经蛋白聚糖的表达于术后7 d达到高峰(P<0.05),此后阳性表达逐渐减少;HIBD组术后4 d、7 d的神经蛋白聚糖蛋白及其mRNA表达均低于假手术组(P<0.05),至术后14 d、28 d表达增高,均高于假手术组(P<0.05). 结论 新生大鼠HIBD后脑组织神经蛋白聚糖蛋白及其mRNA表达随着时间推移发生变化.提示HIBD后神经可塑性调控的关键时期为损伤后2周内.     

大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化

目的：探讨大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化。方法：采用RT-PCR法，半定量分析坐骨神经横断后1d、2d、4d、1W、2W、4W远侧端组织中GAP-43m．RNA含量的变化。结果：大鼠正常坐骨神经中存在NGF mRNA，但表达量较低。坐骨神经横断后，其远侧端组织中GAP-43 mRNA表达量显著升高，1周达到高峰，两周开始下降，4周则降至一般水平。结论：坐骨神经损伤后,GAP-43基础的表达呈现出增高现象，提示OAP-43 mRNA的表达和蛋白质合成与神经损伤再生密切相关。     

新生大鼠脑缺氧缺血后μ-calpain mRNA及蛋白的表达

目的 观察μ-calpain基因及蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)脑组织中的表达情况,探讨其在HIBD发生中的作用.方法 7日龄新生SD大鼠随机分为假手术对照组及HIBD后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72 h各组,采用实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术观察μ-calpain mRNA及蛋白随时间变化的表达情况.结果 HIBD后6 h损伤侧脑组织μ-calpain mRNA开始增高,24 h达到高峰(P＜0.05),48～72 h下降,但是仍然高于对照组(P＜0.05);μ-calpain蛋白的活性在HIBD后6～12 h表达增高(P＜0.05),24 h达到高峰(P＜0.01),48～72 h仍处于较高水平(P＜0.05).结论 μ-calpain mRNA及蛋白在HIBD新生鼠脑中表达增高,可能参与了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发生.     

新生大鼠脑缺氧缺血损伤时的COX-2表达变化

目的采用免疫组化方法研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时环氧合酶2(COX-2)的表达变化.方法 通过制备新生大鼠左脑的HIBD模型,应用免疫组化方法研究2、6、24、72 h、7 d时不同时相点脑皮层及海马CA1区COX-2免疫化学阳性细胞的表达及免疫细胞化学阳性数表达变化.结果 7日龄Wistar大鼠对照组可见微量COX-2阳性表达,HIBD 2 h后即见明显增高,并于6～24h出现表达高峰,其后出现下降,并可维持明显表达至7d.结论新生鼠HIBD可诱导COX-2表达,并可能参与HIBD后的神经毒性损伤.     

不同剂量托吡酯对癫癎大鼠海马组织中NCAM和GAP-43 mRNA表达的影响

目的 研究不同剂量托吡酯(TPM)干预下,大鼠海马组织中神经细胞黏附分子(NCAM)和生长相关蛋白- 43(GAP- 43)mRNA的表达变化.方法 将48只大鼠随机分成正常对照组、海人酸(KA)组、10 mg/kg TPM组、40 mg/kg TPM组、100 mg/kg TPM组和400 mg/kg TPM组,每组8只;建立不同剂量的TPM干预癫大鼠模型.观察大鼠行为学改变;通过Real-time PCR测定各组大鼠海马组织中NCAM和GAP- 43的mRNA表达.结果 KA组大鼠海马NCAM及GAP- 43的mRNA表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),10 mg/kg TPM组和40 mg/kg TPM组与KA组的差异无统计学意义,100 mg/kg TPM组和400 mg/kg TPM组明显低于KA组(P<0.01),其中400 mg/kg TPM组明显低于100 mg/kg TPM组(P<0.01).结论 KA诱导癫大鼠海马NCAM和GAP- 43 mRNA表达上调,较大剂量TPM能够抑制NCAM和GAP- 43 mRNA的表达,且抑制作用与TPM剂量有关.     

不同剂量托吡酯对癫大鼠海马组织中NCAM和GAP- 43 mRNA表达的影响

目的 研究不同剂量托吡酯(TPM)干预下,大鼠海马组织中神经细胞黏附分子(NCAM)和生长相关蛋白- 43(GAP- 43)mRNA的表达变化.方法 将48只大鼠随机分成正常对照组、海人酸(KA)组、10 mg/kg TPM组、40 mg/kg TPM组、100 mg/kg TPM组和400 mg/kg TPM组,每组8只;建立不同剂量的TPM干预癫大鼠模型.观察大鼠行为学改变;通过Real-time PCR测定各组大鼠海马组织中NCAM和GAP- 43的mRNA表达.结果 KA组大鼠海马NCAM及GAP- 43的mRNA表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),10 mg/kg TPM组和40 mg/kg TPM组与KA组的差异无统计学意义,100 mg/kg TPM组和400 mg/kg TPM组明显低于KA组(P<0.01),其中400 mg/kg TPM组明显低于100 mg/kg TPM组(P<0.01).结论 KA诱导癫大鼠海马NCAM和GAP- 43 mRNA表达上调,较大剂量TPM能够抑制NCAM和GAP- 43 mRNA的表达,且抑制作用与TPM剂量有关.     

新生大鼠视神经损伤后视觉系统中GAP-43的表达

目的：研究新生大鼠视神经横断伤后视觉系统中神经生长相关蛋白质(GAP-43)的表达变化及意义。方法：新生健康SD大鼠（24 h）72 只,随机分为正常对照组和视神经横断组。采用免疫组织化学方法检测正常发育及视神经损伤后发育过程中1、3、7、14、28和56 d的SD大鼠视觉系统中GAP-43的表达。结果：正常对照组SD大鼠出生后整个发育阶段视觉系统中均可检测到GAP-43阳性细胞的表达,且随着神经元发育成熟表达逐渐下降（P< 0.05）;视神经横断组GAP-43在损伤后发育过程中可检测到阳性表达,且较正常对照组增高,1 d变化不明显,3 d开始增高, 7~14 d达峰值,之后逐渐下降至正常水平,直至56 d基本恢复正常水平（P<0.05）。结论：GAP-43在新生鼠视觉系统中随生长发育而改变,在神经横断后GAP-43表达增强,表明GAP-43在视觉系统发育和再生过程中起重要作用。     

早期干预对脑损伤大鼠神经可塑性相关蛋白的影响

目的 研究早期干预对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠学习记忆能力及脑细胞中神经生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。方法 选用SD大鼠建立宫内HIBD动物模型，随机分为HIBD干预组、HIBD非干预组和对照组，每组12只。HIBD干预组采取早期触摸和丰富环境刺激，HIBD非干预组与对照组常规饲养。干预28d后，通过三等臂Y型迷宫试验检测大鼠学习记忆功能，而后取大鼠额皮质和海马组织，用免疫组织化学染色法检测GAP-43表达情况。结果 HIBD非干预组学习与记忆能力明显低于对照组（P〈0．01），HIBD干预组Y迷宫测试成绩则优于HIBD非干预组（P〈0．01）。同时，HIBD非干预组额皮质和海马神经元GAP-43阳性系数高于对照组（P〈0．01），而HIBD干预组GAP-43的表达又明显高于HIBD非干预组（P〈0．01）。结论 早期干预具有改善HIBD大鼠认知能力的效果，其促进HIBD脑功能修复的作用与增加脑组织GAP-43的表达有关。     

神经干细胞分化过程中GAP-43基因的表达及其意义

目的:探讨神经干细胞(NSC)在分化过程中生长相关蛋白43(GAP-43)基因的表达及其意义。方法:NSC提取于新生鼠的海马区,经培养及Nestin免疫细胞化学鉴定,用RT-PCR和免疫组化方法观察GAP-43基因在NSC分化过程中不同时间点的表达。结果:GAP-43mRNA在NSC处于克隆球阶段未检测到其表达,开始分化12h可检测到其低表达,并逐渐升高,3d表达量达到高峰,5d表达量下降。GAP-43最初在NSC分化1d的胞质内表达并逐渐升高,5d表达增强,于细胞的突起中明显,7d时GAP-43反应减弱并逐渐消失。结论:在神经干细胞分化为神经元过程中GAP-43基因参与引导突起的生长并发挥重要作用。     

海马区Bcl-2蛋白在新生大鼠脑缺血后的表达

目的：通过研究新生大鼠脑缺血时Bcl-2蛋白在海马区的表达特点,探讨Bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤的作用。方法：48只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达情况。结果：TUNEL染色的阳性细胞数与Bcl-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异,海马区Bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6 h达到高峰。结论：Bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。     

慢性间断性低氧大鼠脑皮层GAP-43表达的时间变化

目的观察慢性间断性低氧(CIH)大鼠脑皮层生长相关蛋白(GAP-43)表达的时间变化,探讨这些变化与缺氧性脑损伤修复间的关系。方法成年雄性SD大鼠40只,随机均分为对照组、CIH 1周、CIH 3周和CIH 5周组。CIH组大鼠在自制缺氧舱内每天缺氧8小时,连续缺氧1、3和5周。利用免疫组化方法检测大脑皮层神经元生长相关蛋白的表达。结果与对照组比较,慢性间断性低氧大鼠脑皮层神经元GAP-43阳性表达增多,表达高峰出现在1周后(P<0.05),3周后表达逐渐减少(P>0.05),5周后表达接近对照组水平(P>0.05)。结论慢性间断性低氧大鼠脑皮层生长相关蛋白的表达呈现时间变化,这可能与缺氧性脑损伤后的修复有关。     

新生大鼠缺氧缺血再灌注后海马神经元凋亡与c-Jun蛋白的表达检测

目的:检测新生大鼠缺氧缺血再灌注后即刻早期基因c-jun的表达与海马神经元的凋亡.方法:49只7d龄SD大鼠经弹性管穿线阻断右颈总动脉3 h,予低氧1 h,制备缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型,并于再灌注3 h、6h、12 h、24 h、48 h、96 h、7 d处死大鼠,取脑组织.采用免疫组织化学SABC法检测海马CA1、CA3区c-Jun蛋白的表达.采用TUNEL染色法计数海马CA1、CA3区凋亡神经元.8只7 d龄SD大鼠仅手术不行HIBD及再灌注(对照组).结果:海马CA1、CA3区c-Jun的表达和凋亡细胞数于HIBD再灌注3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、96 h均高于对照组(P＜0.05),c-Jun的表达于再灌注6 h达高峰,锥体神经元凋亡于再灌注24 h达高峰.再灌注7 d组c-Jun蛋白的表达及凋亡细胞数与对照组相比差异均无统计学意义.结论:c-Jun可能参与轻度HIBD后神经元的凋亡与修复.     

大鼠岛叶电点燃模型海马GAP43、P38 mRNA和蛋白的表达

目的 探讨神经生长相关蛋白(GAP43)和突触素(P38)基因及蛋白在岛叶电点燃致癫大鼠海马的表达及其意义.方法 健康雄性SD大鼠72只,随机分为点燃组和假手术组,每组均36只大鼠.点燃组和假手术组各随机分为1、3、7、15、30及60 d 6个亚组,每亚组大鼠6只.点然后,标本应用免疫组化、原位杂交组织化学方法研究岛叶电点燃致癫大鼠海马GAP-43及P38表达的变化.结果 致癫1 d,海马齿状同颗粒细胞、门区、CA3区锥体细胞层GAP-43mRNA及蛋白表达高于对照组(P＜0.05);致癫3 d,表达减少(P＞0.05),致癫7 d后,表达呈现第2次增高;15 d、30 d显著高于对照组(P＜0.01);致癫60 d,仍高于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).P38 mRNA及蛋白表达:致癫7 d,齿状回颗粒细胞层、门区、CA3区椎体细胞杂交信号及免疫染色开始增;15 d时差异达高峰(P＜0.01),这些变化一直持续到4周开始下降.结论 岛叶癫痫和颞叶海马密切相关;GAP43及P38可能是岛叶癫痫的病理基础--突触可塑性的重要分子机制.