构建淫羊藿苷/聚己内酯纳米纤维膜及体外促成骨能力

背景:在骨组织工程中,静电纺丝的应用使得促成骨生长因子能够更长久的发挥作用。研究表明,淫羊藿苷可促进MC3T3-E1细胞的增殖。目的:构建载淫羊藿苷/聚己内酯纳米纤维膜,评估其生物相容性及体外促成骨能力。方法:采用同轴静电纺丝技术制备淫羊藿苷/聚己内酯纳米纤维膜,表征其微观形貌及体外药物释放。体外培养MC3T3-E1细胞,分4组处理:空白组常规培养细胞,纳米纤维膜组加入聚己内酯纳米纤维膜,药物组加入含淫羊藿苷的培养基,实验组加入淫羊藿苷/聚己内酯纳米纤维膜,检测各组细胞骨架形态、增殖、碱性磷酸酶活性及骨钙素m RNA表达。结果与结论:(1)扫描电镜显示,淫羊藿苷/聚己内酯纳米纤维膜具有三维立体的网状交织的结构,相互交错,空隙大小均一,孔径100-200μm,纤维平均分布范围为300-600 nm;(2)观察淫羊藿苷/聚己内酯纳米纤维膜1个月内的药物释放累积量,开始1-5 d药物有突释现象,释药量达45%左右,后期药物呈缓慢持续释放,到30 d时药物释放量达80%以上;(3)培养24 h后激光共聚焦显微镜下可见,细胞黏附于纳米纤维膜生长,细胞肌动蛋白走行及细胞内部结构清晰;(4)CCK-...     

仿生组装淫羊藿苷-壳聚糖/羟基磷灰石骨修复材料的体外释药行为

背景:淫羊藿苷性质稳定,可促进成骨细胞的增殖,可作为一种骨诱导活性因子用于骨组织工程的研究。目的:探讨淫羊藿苷-壳聚糖/羟基磷灰石骨修复材料的体外释药行为。方法:将载药量分别为10-7,10-6,10-5mol的淫羊藿苷-壳聚糖/羟基磷灰石材料置于盛有PBS的密闭玻璃离心管中,37℃恒温振荡,分别于1,2,3,10,15,20,30,60,90 d定时收集全部溶液进行超高效液相色谱检测。通过精密度实验、重复性实验、加样回收率实验、稳定性实验考查实验方法的精密度、灵敏度和淫羊藿苷的稳定性,通过标准曲线换算供试品每次释药量,并将其进行累积绘制成释药曲线,采用Logarithmic模型对释药行为进行曲线拟合。结果与结论:实验方法的精密度、准确度与重复性良好;淫羊藿苷性质稳定,可在室温避光的环境下保存至少90 d;在1-2 000 ng质量范围内,淫羊藿苷的色谱峰面积与进样量之间呈良好的线性关系。释药初期(0-3 d),药物从支架材料中突释,约达载药量的25%,而后释药速度迅速下降,至第20天有40%-60%的药物释出,之后以低速持续释放,90 d后仍有部分药物存留于支架材料中。3种载药量淫羊藿苷-壳聚糖/羟基磷灰石材料的释药行为遵循一级方程模型,所有模型均有统计学意义(P=0)。表明仿生组装淫羊藿苷-壳聚糖/羟基磷灰石骨修复材料对淫羊藿苷具有良好的控释效果,其体外释药行为符合一级方程。     

可控释淫羊藿苷的羟基磷灰石/壳聚糖缓释支架修复骨缺损*

 背景：如何将中药有效活性化合物通过生物支架材料的缓释作用更好的应用于骨科临床尚需大量的研究。目的：通过文献检索和综合分析,客观评估中药活性成分复合淫羊藿苷的缓释支架在骨修复领域应用的可行性。方法：分别用英文检索词“bone defect,icariin,release bracket,chitosan,hydroxyapatite”;中文检索词“骨缺损,淫羊藿苷,壳聚糖,羟基磷灰石,缓释支架”检索CNKI及PubMed数据库1995-01/2010-12相关文章,纳入和研究目的相关的文章进行分析综述。结果与结论：共纳入相关文献24篇,已有研究表明中药淫羊藿苷可促进成骨细胞的生成,抑制骨吸收。而纳米羟基磷灰石-壳聚糖复合支架具有良好的理化性质和细胞相容性,可以应用于组织工程骨的构建。因此在进一步完善纳米级晶体合成工艺的基础上,对淫羊藿苷的释放速度和释放模式加以控制,达到持续、稳定的药物缓释是可行的。     

镀膜工艺结合3D打印制备Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架的表征及成骨能力

背景：修饰生长因子的骨组织工程支架在骨修复材料中具有广阔的应用前景,但生长因子释放过快导致复合支架仅能在早期促进骨修复,镀膜工艺为解决该问题提供了新思路。目的：制备Mg-F膜/淫羊藿素/β-磷酸三钙支架,表征该支架的生物学特性。方法：应用3D打印技术制备β-磷酸三钙支架,通过低能电子束沉积技术制备淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架,再通过脉冲激光沉积技术制备Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架,检测支架的微观结构、孔隙直径、孔隙率、丝径、抗压强度及元素组成,并分析淫羊藿素的结合力和缓释性能。将兔骨髓间充质干细胞分别与β-磷酸三钙支架、淫羊藿素/β-磷酸三钙支架与Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架浸提液共培养,利用CCK8法检测细胞增殖;将兔骨髓间充质干细胞分别与上述3种支架共培养,加入成骨诱导培养基,利用茜素红染色观察成骨分化能力。结果与结论：(1)扫描电镜下可见,β-磷酸三钙支架结构较为规则,孔隙连通率好;淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架表面有较为致密的淫羊藿素膜覆盖原微观孔隙;Mg-F膜在淫羊藿素膜表面沉积,留下较为粗糙、疏松的表面,存在微观孔隙;3种支架的孔隙直径、孔隙率、丝径、...     

多孔β磷酸三钙-聚吡咯-生物素-淫羊藿素微球复合支架促进骨髓间充质干细胞的募集

文题释义：β磷酸三钙-聚吡咯-生物素：亲和素-生物素复合物是目前已知的最强非共价结合物,其结合不受温度、pH值及蛋白变性剂等影响,聚吡咯与磷酸三钙混合可赋予支架整体存在导电特性,其表面适合多种细胞黏附与生长。通过化学反应合成方法,以聚吡咯为亲和素,形成β磷酸三钙-聚吡咯-生物素结构,利用生物素多靶点结合能力提高支架与骨诱导因子的结合能力。 载药支架：骨组织工程支架负载药物能有效提高其修复性能。淫羊藿素是中药有效单体,其类似于雌激素的化学结构,易于与生物素产生非共价结合,从而达到更好地控释,且能保持成骨诱导作用。因此该载药方式可能将支架性能进一步理想化。 背景：淫羊藿素作为成骨诱导活性物质已被广泛负载于骨科支架材料中,然而现有研究基本均以淫羊藿素聚合微球形式直接放置于支架孔隙中,导致其释放与支架降解难以同步,且局部有效利用率较低。 目的：制备多孔β磷酸三钙-聚吡咯-生物素-淫羊藿素微球复合支架,初步探索该支架与骨髓间充质干细胞共培养的生物学特点。 方法：以FeCl₃为氧化剂,通过氧化化学合成聚吡咯,将聚吡咯、生物素与β磷酸三钙共混合并进行电化学合成,此后采用3D打印技术制备多孔β磷酸三钙-聚吡咯-生物素复合支架,运用HDDD反应制备淫羊藿素-生物素-聚乳酸微球,并将二者组合。将同样3D打印制备的负载淫羊藿素-聚乳酸微球的多孔β磷酸三钙支架设置为对照组。检测并对比两组支架的抗压强度、孔隙率、载药量、药物结合力及药物缓释性能,绘制淫羊藿素释放曲线,扫描电镜观察两组支架对骨髓间充质干细胞的生物学作用。 结果与结论：多孔β磷酸三钙-聚吡咯-生物素复合支架的载药量、药物结合力及药物缓释性能显著优于对照组(P < 0.05),扫描电镜下支架表面贴壁生长的骨髓间充质干细胞数量显著高于对照组(P < 0.05),两组支架抗压强度及孔隙率差异无显著性意义(P > 0.05)。结果表明,多孔β磷酸三钙-聚吡咯-生物素复合支架较传统缓释支架进一步提高了载药能力及缓释性能,并具有良好的力学强度,同时可能具有更好的募集骨髓间充质干细胞参与支架周围骨修复的作用。ORCID: 0000-0001-8284-1994(刘锌) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

淫羊藿苷调节酸性微环境减轻绝经后老年骨质疏松性疼痛

背景：前期研究已证明，淫羊藿苷在促进骨形成和抑制骨吸收方面具有重要作用，但其对骨质疏松介导的骨痛产生的影响尚未见报道。目的：探讨淫羊藿苷减轻绝经后老年性骨质疏松性骨痛的可能机制。方法：(1)动物实验：将200只C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组、模型组、模型+淫羊藿苷组，模型+碳酸酐酶Ⅱ抑制剂组。除假手术组外，其余各组摘除小鼠卵巢建立绝经后骨质疏松模型。模型+淫羊藿苷组在造模后第2天灌胃淫羊藿苷，每2周进行1次疼痛行为学实验并取材，持续20周。microCT检测股骨骨量、苏木精-伊红染色及TRAP染色检测破骨细胞活性、免疫荧光染色检测神经元形态及相关离子通道表达。(2)细胞实验：提取小鼠骨髓来源的破骨细胞前体细胞，在体外使用RANKL/M-CSF体系诱导分化为破骨细胞并添加不同浓度淫羊藿苷(1,10μmol/L)干预。采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞分化，采用鬼笔环肽染色检测破骨细胞肌动蛋白环，采用骨板吸收实验检测破骨细胞噬骨功能，采用pH计检测体系pH值，采用Western Blot检测破骨细胞分化相关蛋白表达。此外，提取小鼠背根神经节来源神经细胞并用淫羊藿苷处理，采用C...     

3D打印淫羊藿苷/脱钙骨基质修复兔股骨髁骨缺损

文题释义：脱钙骨基质：主要由93%胶原、5%可溶性蛋白及2%残余矿化基质组成的商业化生物材料，包含不同浓度的骨形态发生蛋白、生长因子及转化生长因子，具备良好的骨传导与骨诱导能力，可以单独或联合其他材料广泛用于骨折、骨不连、骨肿瘤、骨融合、股骨头坏死等治疗中。结构模型指数：是描述骨小梁组成结构中板层结构和杆状结构比例的参数。如果结构中骨小梁主要为板层结构，那么结构模型指数接近于0；如果结构中骨小梁主要为杆状结构，那么结构模型指数接近于3，该值越小骨小梁越成熟。背景：淫羊藿苷可促进骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化，具有良好的促成骨性能。脱钙骨基质具备良好的骨传导与骨诱导能力，可以单独或联合其他材料广泛用于骨修复中。 目的：观察3D打印淫羊藿苷/脱钙骨基质材料的缓释性能、细胞相容性与体内成骨性能。方法：利用3D打印技术制备淫羊藿苷/脱钙骨基质材料与脱钙骨基质材料，检测淫羊藿苷/脱钙骨基质材料的体外缓释性能。将骨髓间充质干细胞分别接种于两种材料表面，以单独培养的细胞为对照，于设定的时间点进行活/死染色、MTT、碱性磷酸酶活性与骨钙素含量检测。取新西兰大白兔30只，建立股骨髁骨缺损模型后分3组处理：对照组不植入任何材料，一组植入脱钙骨基质与同种异体兔骨髓间充质干细胞复合物，另一组植入淫羊藿苷/脱钙骨基质材料与同种异体兔骨髓间充质干细胞复合物，术后4，12周进行Micro-CT、组织学与力学性能检测。结果与结论：①3D打印淫羊藿苷/脱钙骨基质材料具有缓释性能，在28 d时淫羊藿苷释放量达总量的(54.9±7.9)%；②活/死染色显示，接种1 d后两组材料表面的细胞数量较少，随着培养时间的延长，细胞数量明显增多，至7 d时细胞形态良好，并且淫羊藿苷/脱钙骨基质材料表面的细胞更加均匀、数量更多；③MTT检测显示，淫羊藿苷/脱钙骨基质组培养7，10，14 d的细胞增殖快于其余两组(P < 0.05)；④淫羊藿苷/脱钙骨基质组培养7，10，14 d的碱性磷酸酶活性与骨钙素含量均高于其余两组(P < 0.05)；⑤术后12周Micro-CT显示，植入材料两组均可见大量的骨小梁，其中淫羊藿苷/脱钙骨基质组骨小梁数量更多、骨小梁厚度增加、骨小梁分离度更小；⑥术后12周组织学显示，植入材料两组可见大量骨组织形成，其中淫羊藿苷/脱钙骨基质组新生骨量最多；⑦淫羊藿苷/脱钙骨基质组抗压强度高于其余两组(P < 0.05)；⑧结果表明，3D打印淫羊藿苷/脱钙骨基质具有良好的缓释性能、细胞相容性与骨诱导性能。ORCID: 0000-0002-5272-812X(张虎雄) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程     

淫羊藿苷通过YAP促进大鼠关节软骨细胞增殖的研究

目的 研究淫羊藿苷（Icariin）通过yes相关蛋白（YAP）促进大鼠关节软骨细胞增殖的作用和机制。方法 采用细胞增殖实验、RT-qPCR和免疫荧光染色测定淫羊藿苷促进大鼠关节软骨细胞增殖的作用。采用RT-qPCR检测淫羊藿苷促进YAP表达的作用。通过沉默YAP基因的表达来确定YAP在细胞增殖中的作用以及淫羊藿苷是否通过YAP来促进细胞的增殖。结果 大鼠关节软骨细胞的增殖与YAP表达上调有关。淫羊藿苷能促进YAP表达和去磷酸化,使其进入细胞核内启动增殖相关基因的表达,从而促进软骨细胞增殖。结论 淫羊藿苷通过上调YAP表达以及激活YAP来促进软骨细胞增殖,可能有助于损伤软骨的再生修复。     

淫羊藿苷抑制钛颗粒诱导的炎症反应

背景：体外实验表明,淫羊藿苷可抑制脂多糖诱导的急性肺炎,其抗炎作用在磨损颗粒存在的条件下是否依然有效？目的：通过体内外实验相结合的方法探讨淫羊藿苷对磨损颗粒诱导炎症反应的调控作用。方法：①体内实验：将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,钛组和钛+淫羊藿苷组采用钛诱导小鼠颅骨无菌炎症模型,对照组、淫羊藿苷组也进行相同手术过程,但不植入钛,淫羊藿苷组、钛+淫羊藿苷组建模当天灌胃给予淫羊藿苷200 mg/(kg·d),对照组、钛组灌胃给予等量的安慰剂,2周后酶联免疫吸附实验、定量RT-PCR检测肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β蛋白或mRNA的表达量。②体外实验：将小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分别与核因子кB受体配体、核因子кB受体配体+淫羊藿苷、核因子кB受体配体+钛颗粒及核因子кB受体配体+钛颗粒+淫羊藿苷共培养72 h,ELISA检测培养基上清中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β水平,RT-PCR分析肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β基因mRNA表达。结果与结论：①体内实验：在钛颗粒存在的条件下,口服淫羊藿苷可明显减少颗粒诱导的炎症细胞浸润,使炎性增厚的骨膜变薄,抑制颅骨标本中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β的表达。②体外实验：经钛颗粒刺激后,细胞培养基中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β质量浓度显著增加,细胞中相应mRNA表达量上调,而经淫羊藿苷干预后这两种炎性因子在蛋白和基因水平的表达量显著下调。结果表明淫羊藿苷在体内外均可显著抑制钛颗粒诱导的炎症反应。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

淫羊藿苷对精神分裂症模型大鼠认知及海马组织NRG1/ErbB信号通路的影响

背景:淫羊藿苷是补肾助阳中药淫羊藿的有效活性成分之一,除了可促进生殖系统功能外,还能明显改善精神分裂症,但其具体作用机制仍处于研究与探索阶段。目的:探究淫羊藿苷对精神分裂症大鼠认知功能的影响及机制。方法:采用随机数字表法将48只SD大鼠分4组,每组12只:正常组不造模;模型组、淫羊藿苷低、高剂量组通过腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(1次/d)诱导精神分裂症模型,连续注射14 d。确认造模成功后,淫羊藿苷低、高剂量组分别灌胃给予25,50 mg/(kg·d)的淫羊藿苷,对照组、模型组灌胃生理盐水,连续给药28 d。给药结束后,进行行为学检测及海马组织尼氏染色和FJB染色、氧化应激水平、炎症因子水平、NRG1/ErbB4信号通路蛋白表达。结果与结论:(1)与模型组比较,给药两组刻板行为评分、自发活动总路程和逃避潜伏期明显减少(P <0.05),穿台次数明显增加(P <0.05);淫羊藿苷高剂量组刻板行为评分、逃避潜伏期(第3-5天)明显低于淫羊藿苷低剂量组(P <0.05);(2)与模型组比较,给药两组海马组织线粒体膜电位、超氧化物歧化酶活性升高(P...     

不同浓度淫羊藿苷修复骨损伤:争议与探索

背景:作为淫羊藿主要有效成分之一的淫羊藿苷,对于骨损伤后的修复具有重要作用。淫羊藿苷在体内的持续有效浓度对于骨损伤的修复至关重要。目的:综述近年国内外淫羊藿苷对于骨修复的研究进展,探讨淫羊藿苷的药理活性浓度。方法:第一作者应用计算机检索2000年1月至2013年10月PubMed数据(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)及CNKI中国期刊全文数据库(http://www.cnki.net/)有关淫羊藿苷对骨组织修复作用,或者与淫羊藿苷治疗骨损伤的相关基础研究文献。英文检索词"icariin,concentration,bone";中文检索词"淫羊藿苷,浓度,骨"。排除重复性研究,共检索到76篇相关文献,44篇文献符合纳入标准。结果与结论:利用淫羊藿苷的有效活性成分联合缓释支架材料,可以诱导骨髓间充质干细胞成骨分化,增强成骨细胞活性,抑制破骨细胞的吸收,从而起到修复骨组织的作用。淫羊藿苷促进细胞分化作用虽已得到肯定,但是否具有促进细胞增殖作用还存在一定的争议。研究发现,淫羊藿苷的药理活性浓度从10-8到10-5 mol/L不等,总体来看,10-8-10-5 mol/L应该是淫羊藿苷发挥其最佳药理活性可能出现的区间,但目前临床试验尚未开展,具体的持续给药浓度还不确定,这些都需要进一步研究探索。     

用复合诱导型骨修复材料修复兔桡骨缺损的实验研究

以不同的载药方式构建4种壳聚糖/聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯(PHBV)复合诱导型骨修复材料,检测并比较4种支架材料对兔桡骨缺损的修复效果,筛选出最佳骨修复材料并确定最佳药物控释方式。以淫羊藿苷为诱导因子,采用两相混合冷冻干燥技术以微球载药、改性药物微球(W/O法制得并表征)、改性药物与材料共价结合等药物添加方式及不加药制得4种支架材料,并对其进行显微结构以及载药支架药物缓释表征,后将4种材料分别植入兔桡骨缺损处,于1、3、6个月进行X射线及三维CT观察支架材料对兔桡骨缺损的修复情况,HE,Masson染色观察其诱导成骨效果。结果表明,支架材料呈网络状串珠状的显微结构,载药微球粒径分布在3～11 μm,载药支架材料有着良好的药物缓释,其中共价结合组药物释放峰值时间较其他组推迟,为72 h,且峰值后药物缓释量迅速平稳为75 μg左右。X射线及三维CT观察显示,最终共价结合组支架材料骨缺损处连通,且骨密度高于其他3组。HE、Masson染色结果显示,共价结合组成骨效果优于其他组。共价结合的药物添加方式能使支架具有良好的药物缓释效果,进而对兔桡骨缺损表现出良好的修复效果。     

补肾中药成分配伍对成骨细胞成骨活性及Smad4 mRNA表达的影响

背景：补肾中药对动物及细胞实验研究提示具有防治骨质疏松及改善骨代谢作用,但补肾中药的配伍研究较少且复杂,且有效作用成分之间的相互作用及药物物质基础尚不确定,筛选最佳配伍困难。 目的：通过采用不同补肾中药成分配伍,对新生SD大鼠成骨细胞进行干预性培养,并对其增殖、分化、Smad4 mRNA表达进行测定,从而筛选并确定补肾中药的最佳配伍。 方法：第5代成骨细胞分为5组：淫羊藿苷组细胞中加入1×10^-5 mol/L的淫羊藿苷;淫羊藿苷+柚皮苷组细胞中加入1×10^-5 mol/L淫羊藿苷+1×10^-5 mol/L柚皮苷;淫羊藿苷+薯蓣皂苷元组细胞中加入1×10^-5 mol/L淫羊藿苷+1×10^-5 mol/L薯蓣皂苷元;淫羊藿苷+梓醇组细胞中加入1×10^-5 mol/L淫羊藿苷+1×10^-5 mol/L梓醇;对照组细胞中加入10 μL生理盐水。每组6个复孔。 结果与结论：与对照组相比,淫羊藿苷+柚皮苷组和淫羊藿苷+薯蓣皂苷元组成骨细胞增殖能力及Smad4 mRNA表达水平增加,且培养72 h时,淫羊藿苷+柚皮苷组成骨细胞增殖能力最强。48 h时,淫羊藿苷+柚皮苷组和淫羊藿苷+薯蓣皂苷元组成骨细胞碱性磷酸酶活性高于对照组;72 h,淫羊藿苷+柚皮苷组和淫羊藿苷+梓醇组成骨细胞碱性磷酸酶活性高于对照组。提示淫羊藿苷等补肾中药成分配伍可以影响成骨细胞的成骨活性,且其中以淫羊藿苷配伍柚皮苷的作用最强。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

抗菌型纳米纤维膜的释药及生物相容性研究

目的探讨药物含量对抗菌型纳米纤维膜释药行为、抑菌性能及生物相容性及降解性能的影响。方法电纺制备聚己内酯(PCL)/甲硝唑(MNA)纳米纤维膜(MNA占PCL的质量比为0、1%、5%、10%、20%、30%及40 wt%),对应编号P0、P1、P5、P10、P20、P30及P40。通过高效液相色谱(HPLC)检测不同载药量样品不同时间段的药物释放量。通过测量载药膜周围抑菌圈的直径来表征膜的抗菌性能。四唑盐比色法(MTT)测试测试细胞毒性。细胞计数Kit-8法(CCK-8)评价小鼠成纤维细胞L929在不同膜表面粘附及增殖情况。通过兔皮下埋植,伊红苏木素(HE)染色切片及扫描电镜(SEM)观察不同膜的组织相容性及降解性能。结果药物释放具有1周内突释,后逐渐缓释的特点。药物含量5%以上样品1天后开始呈现抑菌圈,且持续抑菌时间达30天。随药物含量增加,抑菌圈直径增加。载药膜具有良好的细胞相容性,其中P30的细胞相容性最好。加载药物能够提高组织相容性及降解速率。结论 PCL/MNA纳米纤维膜具有良好的抑菌性能及生物相容性。P30的综合性能最佳。     

淫羊藿苷通过调节PGRN表达减轻L-谷氨酸诱导的HT22细胞损伤

目的:研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)对L-谷氨酸诱导HT22细胞损伤的保护作用及对颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)表达的影响。方法:应用CCK-8法检测不同浓度L-谷氨酸(0、2.5、5、10、20、40、80 mmol/L)诱导HT22细胞损伤24 h后细胞存活率,确定L-谷氨酸对细胞损伤的浓度;CCK-8法确定淫羊藿苷对HT22细胞的无毒范围及不同浓度淫羊藿苷对L-谷氨酸诱导的HT22细胞存活率下降的影响;免疫组织化学法检测PGRN在HT22正常细胞中的表达;免疫荧光法和蛋白质印迹法检测淫羊藿苷对PGRN在HT22细胞中表达的影响。结果:确立10 mmol/L L-谷氨酸与HT22细胞共孵育24 h为损伤模型的实验条件;淫羊藿苷实验浓度范围内HT22细胞存活率无明显下降;加入淫羊藿苷与L-谷氨酸共孵育后,HT22细胞存活率出现明显上升,且具有显著性差异(P0.001);PGRN在HT22细胞的胞浆和突起中有明显表达;免疫荧光法和蛋白质印迹法均表明不同浓度淫羊藿苷影响PGRN在L-谷氨酸诱导HT22细胞损伤模型中的表达,且随着淫羊藿苷浓度增加,PGRN表达量增加。结论:高浓度L-谷氨酸对HT22细胞具有明显的损伤作用,且呈剂量依赖性,而淫羊藿苷可发挥保护作用,显著提高细胞存活率。淫羊藿苷可能通过调节PGRN的表达从而缓解L-谷氨酸诱导的HT22细胞损伤。     

力学过载对成骨细胞损伤及中药修复的研究进展

骨的生长代谢由成骨细胞的成骨及破骨细胞的吸收共同控制,而成骨细胞在成骨过程中起主要作用。过载影响成骨细胞的增殖与分化,其加载方式、强度、持续时间等因素都可改变成骨细胞的生物特性,进而影响成骨细胞的功能活性。而过载引起成骨细胞应答的机制还处于探索阶段,需要进一步深入研究。大量实验证明,中药淫羊藿苷促进成骨细胞增殖及分化,一定浓度的淫羊藿苷对骨损伤修复起重要作用。综述骨细胞对过载刺激后的反应及淫羊藿苷对成骨细胞的损伤修复。     

载盐酸四环素壳聚糖缓释膜的制备

背景：壳聚糖具有良好的生物相容性、生物可降解性及较好的抗菌活性。 目的：使用流延法制备载有不同盐酸四环素的壳聚糖载药纳米纤维膜,观察其缓释性能和抑菌性能。 方法：采用流延法制备厚度为0.03 mm的载有不同含量(0,3%,5%,10%,20%)盐酸四环素的壳聚糖载药缓释膜,测定载药率,绘制盐酸四环素缓释曲线。分别用液体培养和固体培养检测载药缓释膜的体外抑菌性能,用磷酸盐缓冲液观察载药缓释膜的降解性能。 结果与结论：随盐酸四环素含量的增加,缓释膜载药率降低,突释量增大。载药壳聚糖膜可有效抑制金黄色葡萄球菌的生长,并随盐酸四环素含量的增加,抑菌效果提高,当盐酸四环素含量超过10%时,载药壳聚糖膜抑菌率的变化不明显。盐酸四环素的加入加快了壳聚糖膜降解,并随着盐酸四环素含量的增加,降解速率增大,当盐酸四环素载药量超过10%时,降解可在8 d内完成。相比较得出,盐酸四环素含量在10%时,在疗效和性价比上是较好的选择。     

淫羊藿苷改善糖尿病大鼠睾丸病变及其对转化生长因子β1 和Ⅳ型胶原蛋白酶表达的影响

目的: 研究淫羊藿苷对糖尿病大鼠睾丸病变的改善,并初步讨论其可能的作用机制。方法: 采用链脲佐菌素(40 mg·kg^-1)尾静脉注射建立糖尿病大鼠模型。实验分为3组:正常组、模型组和淫羊藿苷组。淫羊藿苷组给予淫羊藿苷溶液80 mg·kg^-1·d^-1灌胃。12周末处死各组大鼠,测血清葡萄糖和睾酮含量,睾丸组织中特异性酶琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)及乳酸脱氢酶(LDH)活性; HE染色,置光镜下观察睾丸组织病理变化;免疫组化法测定转化生长因子β₁ (TGF-β₁)和Ⅳ型胶原蛋白酶的表达。结果: 与正常对照组比较,模型组血清葡萄糖水平上升和睾酮水平下降;睾丸组织特异性酶活性降低;病理学检测可见生精上皮层变薄,各级生精细胞减少;TGF-β₁和Ⅳ型胶原蛋白酶表达增加。淫羊藿苷组明显改善上述指标(P<0.01)。结论: 淫羊藿苷对糖尿病所致的睾丸损伤有明显的保护作用,其机制可能与促进睾酮释放、抑制睾丸Ⅳ型胶原蛋白酶及TGF-β₁表达有关。     

淫羊藿苷促进骨髓间充质干细胞成骨分化缓解小鼠骨质疏松的机制

背景:淫羊藿苷是临床用于治疗骨质疏松的常用中草药淫羊藿的主要活性成分,但是其分子机制尚待深入研究。目的:探究淫羊藿苷缓解小鼠骨质疏松的效果和作用机制。方法:通过皮下连续注射地塞米松5周构建C57BL/6小鼠骨质疏松模型,将20只造模成功的小鼠随机分成模型组和治疗组,每组10只,另选择10只未经造模的C57BL/6小鼠作为对照组,治疗组灌胃给淫羊藿苷和生理盐水的混悬液,模型组和对照组灌胃等量生理盐水,每天给药1次,给药期间每天监测小鼠状态,并称量体质量。给药治疗2个月后,采用Micro-CT机对胫骨近端干骺端进行扫描,分析小鼠骨组织微观结构,研究淫羊藿苷对小鼠骨质疏松的治疗效果。同时,分离培养各组小鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测其碱性磷酸酶、成骨特异性转录因子、骨钙素、转化生长因子β及RUNX家族转录因子2的表达量,qRT-PCR检测骨桥蛋白、骨涎蛋白、过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA的表达水平,茜素红和油红O染色检测成骨和成脂分化能力。结果与结论:(1)与对照组相比,模型组小鼠胫骨和股骨总湿质量、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数目明显下降(P <0.01),骨小梁分离度变...     

淫羊藿苷对ConA诱导的小鼠肝脏损伤保护机理的研究

目的:利用刀豆蛋白A(ConA)诱导建立小鼠肝炎模型,观察淫羊藿苷对该损伤模型保护作用的细胞免疫学和分子免疫学机制。方法:采用C57BL/6雄性小鼠,随机分为淫羊藿苷+ConA组、生理盐水+ConA组、淫羊藿苷+生理盐水组。小鼠尾静脉注射ConA,建立T细胞介导的免疫性肝脏损伤模型;采用转氨酶试剂盒测定各组小鼠血液中转氨酶含量;组织病理学观察实验小鼠肝脏组织和肝细胞坏死变化;采用ELISA试剂盒测定血清中炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α含量;流式细胞术观察注射ConA后肝脏淋巴细胞的活化变化。结果:与ConA对照组相比,淫羊藿苷干预组小鼠血液中ALT和AST水平明显降低,P<0.01;IFN-γ、TNF-α含量明显降低,P<0.05;H&E染色可见淫羊藿苷干预组小鼠肝细胞核完整,未见炎性细胞的浸润,而ConA对照组小鼠肝细胞核固缩,部分核膜破裂,肝组织内有炎症细胞和红细胞浸润;流式细胞技术发现淫羊藿苷可明显延缓由ConA引起的肝脏NKT细胞的活化,减弱T细胞的浸润。结论:淫羊藿苷对ConA诱导的小鼠肝脏损伤有明显的保护作用,其机理可能与淫羊藿苷降低血液中IFN-γ、TNF-α表达及影响肝脏NKT细胞的活化有关。