乳鼠及人肺原代成纤维细胞的分离培养

目的 建立体外原代培养乳鼠及人肺成纤维细胞的方法.方法　采用非胰酶消化组织块法培养乳鼠及人肺成纤维细胞,细胞长出组织块后经形态学检测确定是否为成纤维细胞.结果 乳鼠肺成纤维细胞需3～5 d可增殖形成单层,并进行第1次传代;人肺成纤维细胞30～35 d左右增殖形成单层,并进行第1 次传代.结论 非胰酶消化组织块法是一种可行的成纤维细胞培养方法.     

体外肿瘤药敏试验指导非小细胞肺癌个体化新辅助化疗的临床研究

目的探讨应用三磷酸腺苷生物荧光肿瘤化疗药敏检测（ATP-TCA）法指导非小细胞肺癌（NSCLC）个体化新辅助化疗的临床疗效。方法79例Ⅱ～Ⅲ期NSCLC患者，分为试验组40例，行ATP—TCA体外药敏检测，根据检测结果，选择敏感化疗方案行个体化新辅助化疗，体外无效者不行新辅助化疗；对照组39例选择常规第三代含（顺）铂两药联合化疗方案行新辅助化疗。结果试验组标本可评估率为92．5％，体外无效13．5％；四种化疗方案的体外有效率依次为吉西他滨＋顺铂81．1％，多西他赛＋顺铂（DP）78．4％，长春瑞滨＋顺铂（NP）62．2％及柴杉醇＋顺铂（TP）59．5％，各组比较差异无统计学意义。试验组临床有效率78．1％，手术完全切除率93．8％，对照组分别为64．1％和82．9％，差异无统计学意义。病理学疗效评价，试验组有效率78．1％，对照组54．3％，差异有统计学意义，与临床疗效评价不完全一致。结论根据ATP-TCA药敏检测结果指导NSCLC患者个体化新辅助化疗，结合病理组织学分级评价辅助化疗效果，有可能提高化疗疗效，减少无效化疗。     

原代乳腺癌细胞培养及药敏试验

目的 探讨手术过程中取乳腺癌组织制备单细胞悬液进行原代细胞培养及药敏试验指导治疗的效果.方法 应用四种抗癌药物对原代乳腺癌细胞进行药物敏感性试验,MTT比色法检测原代乳腺癌细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化.结果 5-FU、MTX对原代乳腺癌细胞敏感性强,对乳腺癌细胞有明显的增殖抑制作用,流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多.结论 化疗前进行肿瘤细胞敏感性试验,对于提高肿瘤治疗效果、减少毒副作用、避免多药耐药的产生具有重要意义.     

SD大鼠肺成纤维细胞的原代培养及分离纯化

目的建立大鼠肺成纤维细胞的体外高效稳定的培养方法。方法取成年SD大鼠,采用差速贴壁法纯化与胰酶反复消化法传代,得到纯度更高产量更多的肺成纤维细胞。所得细胞采用免疫细胞化学方法加以鉴定,且进行生长曲线测定。结果肺成纤维细胞纯化率可达99.3%,细胞增殖快,生长良好,产量大。结论成功建立了肺成纤维细胞纯化与传代的方法,适用于细胞水平上的间质性肺病发病机制的研究。     

小鼠甲状腺细胞原代培养及鉴定

目的分离培养小鼠甲状腺细胞，为探讨甲状腺功能调节和疾病发生提供一种体外模型。方法取6～8周龄Balb／c小鼠甲状腺，用胶原酶-中性蛋白酶双酶法分离甲状腺滤泡上皮细胞。用含10％胎牛血清（FCS）的F-12培养基培养，细胞贴壁后FCS降至5％，另外添加促甲状腺激素（TSH）、氢化可的松、转铁蛋白、胰岛素和L．谷氨酰胺。光镜下对不同培养时间的细胞进行形态学观察，并结合免疫细胞化学染色法、RT—PCR法和电化学发光免疫法对培养小鼠甲状腺细胞从形态、甲状腺球蛋白（取）、取特异抗原蛋白表达、甲状腺过氧化物酶（TPO）、钠碘转运子（NIS）、促甲状腺激素受体（TSH—R）等特异基因mRNA表达和甲状腺激素T3、T4分泌功能等方面进行鉴定。结果小鼠甲状腺细胞在体外呈贴壁式生长，具有上皮样细胞特点；取染色呈胞浆阳性，并具有特异TPO、Tg、NIS、TSH—RmRNA表达和分泌T3、T4的功能，但其表达与分泌量有随培养时间的延长呈递减趋势。结论成功建立小鼠甲状腺细胞原代培养模型，可用于甲状腺功能与疾病研究。     

原代口腔鳞癌细胞的分离培养及CD133 CD44的表达

目的探讨从人新鲜口腔鳞癌组织中培养原代鳞癌细胞的方法以及干细胞表面标志物CD133、CD44表达量的检测情况。方法选取该院2016~2017年行口腔鳞状细胞癌切除术的新鲜肿瘤标本6例,应用机械法获得原代口腔鳞癌细胞并用酶消化法传代。应用细胞形态学及角蛋白免疫组化方法对原代鳞癌细胞进行鉴定。流式细胞仪技术检测鳞癌细胞中干细胞表面标志物CD133、CD44的表达情况。结果(1)成功培养出纯化的口腔鳞癌细胞,并能成功传代,至目前为止已传至27代。(2)培养出的OSCCs呈多边形铺路石状,角蛋白染色其胞浆中可见阳性棕色染色。(3)流式细胞检测鳞癌细胞中干细胞表面标志物CD133的平均表达率为0.41%、CD44的平均表达率为33.76%。结论从人新鲜口腔鳞癌标本中利用机械法可成功获得大量原代口腔鳞癌细胞并能顺利传代,口腔鳞癌细胞中干细胞表面标志物CD44表达偏高,CD133的表达量明显偏低。     

人甲状腺原代细胞的长期培养

目的　探索人甲状腺细胞长期原代培养的方法及细胞在不同时期的功能变化。方法　常规分离甲状腺细胞,并用含有10%胎牛血清(FBS)、谷氨酰胺、牛胰岛素、10mU/LTSH和氢化可的松的MEM培养,细胞铺成单层后换用4% FBC的培养基培养,分别在不同时间观察甲状腺细胞吸碘率、细胞生长情况,免疫组化观察甲状腺特异抗原甲状腺球蛋白(Tg)表达水平,RT PCR测定钠碘转运子(NIS)基因表达水平。结果　甲状腺细胞在培养40d左右仍生长良好,培养14d细胞具有80%的吸碘率,培养7dTg表达可达95%,培养14dTg表达仍达60%,NISmRNA表达在培养7d达98%,而培养14d表达率只有40%。结论　应用该研究所建立的培养条件可以使甲状腺细胞生存40d以上,该实验条件下培养3, 7, 14,28d的原代甲状腺滤泡上皮细胞以培养7d的细胞NISmRNA,Tg表达、摄碘功能最接近基线水平。     

三种原代小胶质细胞纯化培养方法的对比及分析

目的寻找简捷、高效的原代小胶质细胞纯化培养方法。方法以小胶质细胞原代培养的经典培养方法为基础,通过提高初次接种密度、减少细胞离心过滤、进行营养丧失培养等改进,培养后期分别采用经典机械分离法、低浓度胰酶消化法和利多卡因分离纯化法行细胞分离与纯化,记录形态变化并采用同倍数视野动态计数,借助CD68及OX42抗体间接免疫荧光标记进行鉴定、计算纯度。结果三种分离方法均获得了较高纯度和产量的小胶质细胞,其中利多卡因分离纯化法获得细胞数及纯度明显高于其他分离方法,低浓度胰酶消化法次之。结论小胶质原代细胞培养过程中,利多卡因分离纯化法及低浓度胰酶消化法均可有效提高培养产量及纯度,以利多卡因分离纯化法最佳。     

湖北钉螺细胞原代培养的初步研究

目的研究湖北钉螺组织细胞的原代培养。方法无菌处理并解剖钉螺成螺及螺胚,分别获得软体、肝脏、外套膜及胚胎组织。将软体、肝脏及胚胎组织剪碎,用0.25％胰蛋白酶和0.02％乙二胺四乙酸(EDTA)混合液4℃下消化数小时,所得细胞按三宅的湿润系统固定法接种于钉螺的外套膜组织。培养液为1/2浓度的RPMI1640含20％小牛血清附加常量抗生素(青霉素100IU/ml,链霉素100μg/ml),温度为27℃～28℃,pH7.2～7.4。结果钉螺的胚胎组织冷消化后,获大量游离细胞。接种培养5d,见有贴壁细胞,扁平状,多边或不规则形,大小约为(15～20×12～15)μm。培养细胞以悬浮状为主,直径为8～12μm,少数为30～35μm。生长良好,可传代培养。结论钉螺胚胎细胞可进行原代培养及传代。     

循环肿瘤细胞的检测及其在肺癌患者中的临床应用

循环肿瘤细胞在早期发现患者术后复发与远处转移、评估疗效与预后等方面的应用价值已经成为临床研究的热点.外周血循环肿瘤细胞非常少,仅能通过肿瘤特异性抗原来检测.本文主要介绍了循环肿瘤细胞富集、检测过程、常用标记物及其在肺癌患者中的临床应用.     

肺癌循环肿瘤细胞研究进展

肺癌是引起肿瘤相关死亡的首要原因.循环肿瘤细胞(CTCs)在肺癌的远处转移中起到关键作用.最近研究显示,CTCs水平可以预测肺癌患者的预后和治疗效果.CTCs检测作为一种“液体活检”具有更小的创伤性.CTCs可以及时反映患者的疾病状态,并为肺癌患者提供更好的个体化治疗策略.     

Influence of priming with 5-hydroxytryptophan on APUD characteristics in human small cell lung cancer cell lines

Two established human small cell cancer lines (SCCL) were exposed to 5-hydroxytryptophan (5-HTP) for various time intervals. The levels ofl-dopa decarboxylase (DDC), formaldehyde-induced fluorescence (FIF), number and volume density of dense-cored granules, and levels of bombesin-like immunoreactivity (BLI) and of immunoreactive calcitonin (ICT) were examined in controls and after 5-HTP treatment. The levels of DDC and BLI were not changed by 5-HTP treatment, while FIF was significantly increased in all 5-HTP treated groups. Immunoreactive calcitonin was undetectable in all groups including the controls. A quantitative increase in number and volume density of dense-cored granules was measured in one cell line after 18 h of 5-HTP and was accompanied by exocytosis of granules. The data demonstrate that while 5-HTP increased cellular activity in one of the cell lines (increase in number of densecored granules and evidence of secretion), not all of the measured parameters of APUD cells correlate under these experimental conditions.     

应用免疫磁性分离技术检测小细胞肺癌循环癌细胞的实验研究

目的 在免疫磁性细胞分离技术的基础上探索一种能检测小细胞肺癌循环癌细胞敏感而有效的方法。方法 将微量小细胞肺癌细胞按比例加入到外周血单个核细胞悬液中混匀，再通过特异性单抗包被的免疫磁性微珠吸附，富集，免疫细胞化学鉴定，计算癌细胞的回收率和检测敏感性。结果 免疫磁性微珠与小细胞肺癌能敏感而特异地结合。与免疫细胞化学方法结合可检出45．6％混入外周血单个核细胞中的微量癌细胞。未有假阳性。应用此种方法，每5ml外周血单个核细胞悬液中含有5个癌细胞阳性率可达4／5。结论 免疫磁性细胞分离技术是一项检测外周血中循环癌细胞的有效技术，将来可能具有较高的临床价值。     

CIK 细胞治疗晚期非小细胞肺癌 50 例临床观察简

目的 探讨CIK细胞治疗晚期非小细胞肺癌患者的临床疗效.方法选取我科50例晚期非小细胞肺癌患者,采用自体或亲属CIK细胞治疗三个周期.结果 46例患者的KPS评分稳定或者提高,24例患者部分缓解,近期有效率48%,CEA 数值下降.结论 CIK细胞治疗晚期非小细胞肺癌有较好疗效,能提高患者生活质量,副反应较少,有临床推广的价值.     

Clinical significance of tumor necrosis and viability in non-small cell lung cancer

BackgroundWe included tumor necrosis (TN) and tumor viability (TV) in our prognostic assessment of patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) and investigated their clinical significance.MethodsMedical records of all consecutive subjects who underwent a lobectomy with standard mediastinal lymph node dissection for NSCLC between 2015 to 2016, were reviewed retrospectively. We analyzed the associations of TN and TV with various parameters associated with prognosis as well as survival in NSCLC patients. All analyses were performed regarding neoadjuvant therapy status [the group without neoadjuvant therapy (WON) vs. the group with neoadjuvant therapy (WN)].ResultsA consecutive 154 patients (mean age: 65.0±10.1 years) were included into the present study. Fifteen patients underwent neoadjuvant therapy. Final pathologic stages were IA1 (n=13), IA2 (n=30), IA3 (n=32), IB (n=40), IIA (n=9), IIB (n=18), and IIIA (n=12). WN significantly showed higher TN (P=0.005) and lower TV (P<0.001) than WON. Tumors with vascular, lymphatic, and perineural invasion showed significantly lower TV and higher TN than cases without these features (P=0.014, P=0.019, and P=0.012 for TV; P=0.001, P<0.001, and P<0.001 for TN, respectively). Tumors with poorer differentiation had lower TV (P<0.001) and higher TN (P<0.001) than more differentiated tumors. There was a positive correlation between TN and tumor size (P<0.001) and a negative correlation between TV and tumor size (P=0.031). TN significantly increased as pathologic stage increased (P=0.001), and TV significantly decreased as pathologic stage increased (P=0.038). The group without TN survived significantly longer than the group with TN (P=0.016) in N0 disease and presence of TN and pT stage were independent prognostic factors for survival in N0 disease (P=0.037 and P=0.021, respectively). There was a positive correlation between TN and Ki-67 level (P=0.027). In WN, TN was significantly associated with differentiation (P=0.035), tumor size (P=0.008), and pT stage (P=0.031) but not overall pathologic stage or survival.ConclusionsPresence of histological TN was associated with prognosis of NSCLC, especially in N0 disease, and its usage as a diagnostic or prognostic tool and determination of resection extent could potentially provide prognostic information that can facilitate better management of NSCLC.     

肺癌微环境中免疫细胞与肿瘤免疫逃逸相关研究进展

肺癌肿瘤局部浸润的免疫细胞、间质细胞及所分泌的活性介质等与肺癌细胞共同构成的局部内环境又被称之为肺癌微环境。肺癌微环境中浸润的免疫细胞参与了肺癌的疾病进展和免疫逃逸。本文对这一群细胞的浸润特征、功能和相互关系进行阐述,探讨其在肺癌发生发展过程中的作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞及其与肺癌关系的研究

调节性T细胞通过抑制对自身抗原和非自身抗原的免疫反应在维持自身耐受方面起重要作用.近年来的研究表明,肿瘤微环境中的调节性T细胞减弱了T细胞对肿瘤相关抗原的免疫,从而造成了机体对 肿瘤成功免疫的障碍.本文主要介绍了调节性T细胞的表型、来源、作用机制及其一些最新的研究进展,并重点探讨了其与肺癌的关系.     

Inhibition of protein-kinase-C — dependent cell proliferation of human lung cancer cell lines by the dihydropyridine dexniguldipine

The dihydropyridine, dexniguldipine hydrochloride (B859-35), has shown therapeutic activity in experimentally induced neuroendocrine hamster lung tumors and demonstrated antiproliferative effects in a mammary cancer cell line via inhibition of Ca²⁺ calmodulin. Studies in NIH 3T3 fibroblasts have provided evidence that dexniguldipine may also inhibit protein kinase C (PCK). In this study, we have tested the hypothesis that dexniguldipine may inhibit the proliferation of lung cancer cells in response to autocrine or exogenous activation of PKC. Using a panel of human lung cancer cell lines, we show that dexniguldipine is a potent inhibitor of mitogenic signal transduction pathways dependent on PKC activation in several small-cell and non-small-cell lung cancer cell lines while it failed to inhibit cyclic-AMP-dependent cell proliferation.Supported in part by grant R55 CA 51211-01A1 with the National Cancer Institute     

COX-2在肺鳞癌及腺癌组织中的表达及其与MVD的相关性

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）在肺鳞癌、肺腺癌发生发展中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法收集临床肺鳞癌、腺癌标本76例,其中包括鳞癌31例、腺癌45例,并用免疫组化法检测标本中COX-2的表达及以CD34衡量的微血管增生情况。结果31例肺鳞癌肿瘤细胞表面COX-2表达阳性率为29%;45例肺腺癌标本COX-2表达阳性率为66.7%。肺鳞癌与腺癌标本以及TNM分期中COX-2表达评分差异均有显著性。MVD与肺癌的TNM分期和淋巴结转移有相关性。COX-2表达与MVD计数正相关。结论COX-2在肺癌发生、发展中具有重要作用,该作用与促进微血管生成具有密切的关系。