Tideglusib 对MPP+ 诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡的保护作用及其机制研究

目的：研究特异性GSK-3β抑制剂Tideglusib 对1- 甲基-4- 苯基- 吡啶离子（1-methyl-4- phenylpyridinium ion,MPP+）诱导SH-SY5Y 神经细胞凋亡的保护作用及其可能的作用机制。方法：通过MPP+ 诱导SH-SY5Y 细胞凋亡建立体外帕金森病细胞模型,采用MTT 筛选出对SHSY5Y起保护作用的Tideglusib 有效浓度;采用免疫化学染色方法检测Tideglusib 对SH-SY5Y 的神经保护作用;分别采用Hoechst33258 核染方法和流式细胞仪检测Tideglusib 的抗凋亡作用;通过Western-blot 检测经Tideglusib 处理后,SH-SY5Y 细胞中与神经元凋亡密切相关的磷酸化 tau蛋白（p-tau）及其上游激酶磷酸化糖原合成激酶（p-GSK-3β）的表达水平。结果：300 μmol·L-1 的MPP+ 处理SH-SY5Y 细胞48 h 构建体外帕金森细胞模型,通过MTT 及免疫化学染色方法筛选Tideglusib 的有效保护浓度发现5 μmol·L-1 的Tideglusib 可对SH-5Y 细胞产生保护作用,细胞存活率与MPP+ 处理组相比差异具有统计学意义（P<0.01）;通过Hoechst33258 和流式细胞仪发现MPP+ 可导致SH-SY5Y 产生凋亡,5 μmol·L-1 的Tideglusib 可有效改善SH-SY5Y 的凋亡情况,差异具有统计学意义（P<0.01）;Western-blot 结果显示MPP+ 可引起 GSK-3β的活化并诱导 tau 的异常磷酸化;而Tideglusib 可下调 GSK-3β的活性,降低磷酸化 tau 的水平（P<0.05）。结论：Tideglusib可抑制MPP+ 引起的SH-SY5Y 神经细胞凋亡,作用机制可能是通过抑制GSK-3β从而降低tau 蛋白的磷酸化水平,进一步发挥神经元保护作用。     

连翘苷对MPP+诱导人神经母细胞株SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：研究连翘苷对1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP⁺）诱导人神经母细胞株SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用。方法：培养的SH-SY5Y细胞加入不同浓度的连翘苷,以MTT代谢率为指标确定连翘苷的无毒范围;对培养的SH-SY5Y细胞加入连翘苷100,10,1 μmol·L^-1预孵育24 h,加入1 mmol·L^-1 MPP⁺ 作用48 h诱导损伤,观察MTT代谢率、乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）漏出率的改变。结果：连翘苷在1~100 μmol·L^-1浓度范围内不影响SH-SY5Y细胞存活率;与正常对照组细胞相比,MPP⁺损伤模型组MTT代谢率明显降低（P＜0.001）,LDH漏出率显著增加（P＜0.001）;与模型组相比,连翘苷各组细胞活性显著升高（P＜0.05）,LDH漏出率明显降低（P＜0.01）。结论：连翘苷对MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有神经保护作用。     

乌梅总黄酮对MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究乌梅总黄酮(Fructus mume,FMF)对1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的修复作用,同时探讨其可能机制.方法:采用体外细胞培养的方法,MPP+诱导损伤建立SH-SY5Y细胞模型,将细胞分为5组:正常对照组、模型组(250μmol/L MPP+)、FMF...     

氯化钴诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤作用的研究

目的探讨氯化钴(Co Cl2)诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤的作用及相关机制。方法用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察不同浓度Co Cl2对SH-SY5Y细胞生长情况影响;ELISA法检测细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3及缺氧相关蛋白HIF-1α的表达情况。结果 Co Cl2可以诱导SH-SY5Y细胞损伤,并呈现浓度和时间依赖性;Co Cl2作用于SH-Y5Y细胞导致HIF-1α、Caspace-3和Bax的表达增多(P<0.05),Bcl-2表达减少(P<0.01)。结论 Co Cl2诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤与上调HIF-1α表达、促进细胞凋亡有关。     

芦荟大黄素对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的 研究芦荟大黄素对MPP＋诱导的人神经母细胞株SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用.方法 采用体外SH-SY5Y细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞MPP＋损伤模型.通过观察细胞形态,测定细胞存活率（MTT法）,检测芦荟大黄素对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用.结果 同正常对照组细胞相比,MPP＋损伤模型组细胞活性明显降低;同模型组比较,浓度为2 μmol/L、4 μmol/L、6 μmol/L、8 μmol/L的芦荟大黄素能减轻MPP＋引起的SH-SY5Y神经细胞的损伤,明显提高细胞的存活率.结论 芦荟大黄素对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用.     

芡实提取物对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用及体外抗氧化活性研究

目的 观察芡实80％乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物对过氧化氢(H2O2)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用及其体外抗氧化活性.方法 采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型.用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒法检测以上不同浓度芡实提取物对H2O2诱导损伤的SH-SY5Y神经细胞活力的影响,计算抑制率.用体外抗氧化实验方法检测芡实3种提取物清除DPPH、ABTS自由基及还原铁的能力.结果 芡实80％乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物在含生药量10～30 mg/mL浓度范围内,均表现出明显的抑制H2O2对SH-SY5Y神经细胞氧化损伤的作用(P＜0.05,P＜0.01),且对DPPH、ABTS自由基及三价铁离子有很好的清除作用及还原能力,其中芡实正丁醇提取物的作用最强.结论 芡实具有保护SH-SY5Y神经细胞免受H2O2氧化损伤的作用,有着很好的抗氧化活性,其中正丁醇提取物的抗氧化活性最强.     

新型方酰胺化合物bpV(pis)对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤保护作用研究

目的:探讨新型方酰胺化合物双过氧(吡啶-2-方酰胺)氧代钒酸钾[bpV(pis)]对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-Methyl-4-phenylpyridinium iodide,MPP+iodide)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的作用及可能机制.方法:将SH-SY5Y细胞分别给予20、200、2000 nmol/L...     

远志正丁醇提取物对SH-SY5Y细胞增殖及抗氧化损伤作用

目的:研究远志正丁醇提取物对SH-SY5Y细胞的增殖作用及对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用.方法:增殖实验以0(对照组)、5、10、20、40、80和100μg/mL的远志正丁醇提取物培养SH-SY5Y细胞48 h,观察细胞形态,用MTT法测算存活率.损伤实验重取细胞并随机分为空白组、对照组、实验组...     

原人参三醇组皂苷和人参皂苷-Re对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：探讨原人参三醇组皂苷（protopanaxatriol group，PPT）和人参皂苷-Re对1-甲基-4-苯基-吡啶阳离子（1-methyl-4-phenylpyridiniumion，MPP＋）诱导的人多巴胺能神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法：用不同浓度的PPT和人参皂苷-Re预处理细胞，以及不同体积分数的PPT和人参皂苷-Re含药血清预处理细胞，采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）法检测细胞活力，计算细胞存活率，比较各组间的差异。结果：5μmol·L^-1和10μmol·L^-1的PPT和人参皂苷-Re均可以显著增加细胞存活率（与模型组比较，P〈0．05），体积分数10％的PPT和人参皂苷-Re含药血清能显著增加细胞存活率（与模型组比较，P〈0．001）。结论：PPT和人参皂苷-Re对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤有显著的保护作用，具有潜在的抗帕金森病作用。     

6-羟基-1-氢-吲唑保护 MPP +诱导凋亡的 SH-SY5Y 细胞的机制

目的：研究6-羟基-1-氢-吲唑对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP +)诱导凋亡的 SH-SY5Y 细胞的保护作用机制。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y,以200μmol/ L MPP +诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡建立体外帕金森病细胞模型。 Western blot 法分别检测200μmol/ L MPP +和200μmol/ L MPP +联合0.1μmol/ L 6-羟基-1-氢-吲唑作用后 SH-SY5Y 细胞内糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)以及凋亡蛋白酶3(caspase-3)的活性。结果200μmol/ L MPP +作用 SH-SY5Y 细胞8 h, GSK-3β、CDK5与 caspase-3活性升高。200μmol/ L MPP +联合0.1μmol/ L 6-羟基-1-氢-吲唑作用 SH-SY5Y 细胞8 h,GSK-3β、CDK5与 caspase-3的活性降低。结论6-羟基-1-氢-吲唑对MPP +诱导凋亡的 SH-SY5Y 细胞的保护机制可能是抑制GSK-3β、CDK5和 caspase-3的活性。     

氨甲酰基促红素的制备及其对过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞保护作用的观察

目的 制备氨甲酰基促红细胞生成素并研究其对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用。方法 将促红细胞生成素与氰酸钾共同作用使其转化为氨甲酰基促红细胞生成素,并通过电泳鉴定。分别选用300、400μmol/L H2O2作用于SH-SY5Y细胞12h后分别加入相同浓度的氨甲酰基促红细胞生成素及促红细胞生成素,作用24h终止培养,分别测定各组的噻唑兰(MTT)、乳酸脱氢酶值,通过Annexin V /PI双染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测Bcl-2及Caspase-8的表达,比较氨甲酰基促红素及促红素对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用,并探讨其作用机制。结果 成功将促红素已氨甲酰化为氨甲酰基促红素。经氨甲酰基促红细胞生成素与促红细胞生成素作用后,H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的MTT值增高,乳酸脱氢酶降低,细胞凋亡率减少。结论 氨甲酰化促红素对氧自由基损害的SH-SY5Y细胞具有与促红素同样的保护作用,且在一定浓度范围内保护程度随着浓度的升高而增加。     

五味子甲素SchA缓解MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤的机制研究

目的：探讨五味子甲素（SchA ）缓解1-甲基-4-苯基吡啶离子（M PP＋）诱导S H-SY5Y细胞损伤的可能机制。方法实验分为5组,空白对照组,加入无血清培养基进行培养;模型组（M PP＋进行诱导）;SchA组;SchA与M PP＋共同处理的SchA组,其中SchA终浓度分别为1、3、5μmol/L ,M PP＋终浓度为1 mmol/L。NO检测试剂盒检测各组细胞 NO含量,Western blot检测细胞总Akt、p-Akt的蛋白表达情况。结果与对照组相比,1 mmol/L MMP＋诱导后,SH-SY5Y细胞NO含量明显增高（P＜0．05）,经5μmol/L SchA及MPP＋共同处理的SH-SY5Y细胞,NO的含量明显降低。各组总Akt相对表达水平没有明显变化（P＞0．05）;模型组细胞p-Akt相对表达水平较对照组减少,SchA组细胞p-Akt蛋白相对表达水平随SchA浓度的升高而升高,且与模型组比较差异都有统计学意义（P＜0．05）。结论 SchA缓解MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤可能与影响NO含量及p-Akt蛋白表达有关。     

五味子乙素对谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制

目的: 探讨五味子乙素(Sch B)对谷氨酸(Glu)致人神经母瘤细胞SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,阐明其对ATR信号通路的影响。 方法: 将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分为对照组、DMSO组、模型组、Sch B1组、Sch B2组和Sch B3组。对照组SH-SY5Y细胞不做任何处理;DMSO组SH-SY5Y细胞用17 mmol·L^-1 DMSO作用24h;模型组SH-SY5Y细胞用20 mmol·L^-1 Glu孵育24h造成细胞损伤模型;Sch B1、Sch B2和Sch B3组采用0.05、 0.10和1.00 μmol·L^-1浓度Sch B预处理SH-SY5Y细胞24 h后再用Glu(20 mmol·L^-1 )继续孵育24 h。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting法检测ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达情况。 结果: MTT法检测,与模型组比较,Sch B1、Sch B2和Sch B3组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01),且Sch B2组细胞存活率最高,故选取Sch B2组作为Sch B组进行后续实验。细胞周期检测,与对照组比较,模型组G₀/G₁期细胞所占百分比降低(P<0.05),S期和G₂/M 期细胞所占百分比升高(P<0.05);与模型组比较,Sch B组G₀/G₁期细胞所占百分比升高(P<0.05),S期和G₂/M 期细胞所占百分比降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,模型组细胞中ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,Sch B组细胞中ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达水平均降低(P<0.05)。 结论: Sch B对Glu致SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与下调ATR信号通路、减少细胞周期阻滞有关。     

瘦素减轻鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的 探讨瘦素对鱼藤酮（rotenone） 所诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡的抑制作用。 方法 建立鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型,用瘦素进行干预,采用MTT 比色法检测细胞存活率,锥虫蓝检测细胞死亡率,细胞形态学观察,并用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、p-GSK-3β（Ser9） 和GSK-3β 的表达水平,免疫荧光检测α-synuclein 的表达水平。 结果 成功建立了鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型。在模型的基础上,瘦素干预后,细胞状态改善,细胞存活率提高约14%（P ＜ 0.05）,细胞死亡率降低约17%（P ＜ 0.05）,α-synuclein 的浓度下降,Bcl-2 和p-GSK-3β 的表达显著提高。 结论 瘦素对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤具有明显的抑制作用,可能是通过抑制GSK-3β 的活性上调Bcl-2/Bax 的比率和降低α-synuclein 的表达而得以实现。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

食源性原花青素对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用及其机制

目的：探讨食源性原花青素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的抑制作用,并阐明其作用机制。方法：培养SH-SY5Y细胞,将细胞分为对照组及10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组,各组细胞中加入含不同浓度（0、10、20和40mg·L^-1）食源性原花青素的培养基,采用噻唑蓝（MTT）法检测药物作用24、48和72h时SH-SY5Y细胞增殖率,流式细胞术检测药物作用72 h时不同细胞周期SH-SY5Y细胞百分率,Annexin Ⅴ凋亡试剂盒检测药物作用72 h时SH-SY5Y细胞的凋亡率。结果：与对照组比较,各时间点10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组SH-SY5Y细胞增殖率均降低,作用48和72h时20mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,作用24、48和72h时40mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较,40mg·L^-1组食源性原花青素组细胞中G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.01）,G₂/M期细胞百分率降低（P<0.01）。与对照组比较,10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。结论：食源性原花青素可抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长,其机制主要是阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

可溶性耐药相关钙结合蛋白在MPP+诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病模型中的表达及意义

目的:观察1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中可溶性抗药性相关钙结合蛋白(sorcin)表达的变化,寻求参与PD多巴胺能神经元细胞神经变性的蛋白质改变,为阐明PD的发病机制提供理论依据.方法:应用1.0 mmol·L-1 MPP+处理未分化的SH-SY5Y细胞24 h,在...     

瘦素减轻6-羟基多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的探讨瘦素对6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）所诱导的人神经母细胞瘤细胞（SH—SY5Y）凋亡的抑制作用。方法建立6-OHDA诱导的SH—SY5Y细胞损伤模型,用瘦素进行干预,采用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,LDH法检测细胞损伤,台盼蓝检测细胞死亡率,流式细胞术检测细胞凋亡率,并用免疫荧光检测activecaspase-3的荧光强度,Westernblot检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果成功建立了6-OHDA诱导的SH—SY5Y细胞损伤模型。在模型的基础上,瘦素干预后,细胞凋亡率降低约15％,细胞存活率提高约14％,细胞损伤降低率和死亡率,activecaspase-3的浓度下降,Bcl～2／Bax的比值显著提高（P〈0．05）。结论瘦素对6-OHDA诱导的SH—SY5Y细胞凋亡具有一定的抑制作用,这对瘦素可能参与帕金森病的保护作用提供了证据。