我国急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）自深圳、长春、杭州等地４１份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得２８株ＨＥＶｃＤＮＡ，对其中３株ＨＥＶｃＤＮＡ的ＯＲＦ２基因片段，用荧光法直接测定其核苷酸序列，并与戊型肝炎病毒墨西哥株（Ｍ）、缅甸株（Ｂ）和新疆流行株（ＣＨ１·１）进行了比较，结果该３株散发性ＨＥＶ与Ｍ株的核苷酸序列同源性分别为８０．２％、７９．９％和７９．４％；与Ｂ流行株的同源性为９５．５％、９３．９％和９５．１％；与散发株的同源性为９３．４％、９２．３％和９３．８％；与ＣＨ１·１的同源性为９７．０％、９６．５％和９５．９；表明该３株散发性ＨＥＶ与ＨＥＶ（Ｂ）和ＣＨ１·１的核酸序列同源性较高，可能属同一亚型。     

广州地区散发性戊型肝炎病毒基因片段序列分析

目的对广州地区散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）作基因片段序列分析。方法用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测了８例广州地区散发性戊肝患者粪便和血清中的ＨＥＶＲＮＡ，其中３例粪便阳性。对阳性ＰＣＲ产物进行基因克隆、核酸序列分析。结果广州地区Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３株与缅甸株（Ｂ）、巴基斯坦株（Ｐ）、墨西哥株（Ｍ）、中国新疆株（Ｃｈ１．１）和广州血清株（Ｇ－９）的核苷酸和氨基酸的同源性均值分别为８０．６７％和８８．６０％（Ｂ）、８１．２５％和８９．２０％（Ｐ）、７７．４５％和８４．８１％（Ｍ）、８１．２５％和８９．２０％（Ｃ）、９７．８５％和９６．２０％（Ｇ）。结论广州ＨＥＶ株有一定程度的变异。     

一株新型戊型肝炎病毒的部分克隆及分析

目的　对得自北京地区一例急性散发性戊型肝炎病人病毒 (ChinaT)作基因克隆分析。方法　用逆转录套式聚合酶链反应方法从患者粪便中克隆病毒并做核苷酸序列分析。结果　ChinaT株与 4株典型中国株HEV(ChinaA、ChinaB、ChinaC、ChinaD)、缅甸株、墨西哥株、美国株、非洲的乍得株核苷酸 /氨基酸同源性分别为 78% /92 %、78% /92 %、79% /90 %、78% /94%、76 % /92 %。结论　ChinaT株有较高的基因异质性 ,与其它HEV株有很大的不同 ,是一新型HEV。     

猪戊肝病毒的克隆和部分序列分析

目的：调查戊型肝炎病毒（HEV）对猪的感染情况。方法：用HEV抗体试剂盒检测猪血清中的抗体；用逆转录聚合酶链方法（RT－PCR）检测猪血清中的HEV RNA，对PCR阳性产物进行克隆测序，并对序列进行分析。结果：10份猪血清中有1份为HEV抗体阳性，2份为HEV RNA阳性，其中1份为抗体和RNA均阳性。序列分析显示，从猪中克隆的2株序列（G6和G8）之间在ORF1（102－387bp）和ORF2（6007－6354bp)区域的核苷酸序列的同源性分别为94％和93％，该2株序列在ORF1区在HEVⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ型的同源性分别为76％－79％、80％、79％－80％、88％－90％、75％－76％、79％、78％－79％和75％－78％；在ORF2区与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型的同源性为75％－77％、74％－77％、77％－78％和84％－99％，与ⅣA亚型的同源性为93％－97％。结论：猪感染的HEV的基因序列与人群中散发性戊型肝炎病毒的ⅣA亚型同源性最高。     

丁型肝炎病毒中国湖南株高变区部分序列分析

用耐高温逆转录以及套式聚合酶链反应方法,对HDV中国湖南株基因组高变区1642～417片段(D1),以及保守区681～895片段(D3)进行扩增,用荧光法直接测序,对其进行序列分析。D1片段除去引物外可判读222nt(1662～197),D3片段除去引物还有176nt(701～875)。两段序列分别与美国株、意大利株、日本株以及中国河南株进行了比较。结果显示,中国湖南株高变区1662～197片段(D1)与日本株的同源性仅为44.06％,与意大利株的同源性相对较高,但也仅为72.57％。日本株在该片段的同源性特别低,而中国河南株在该片段的同源性并不特别低。各株之间在该片段的同源性仅为44.06％～72.56％,说明HDV基因组1662～197片段是高变区。中国湖南株D1片段与其它各株的同源性为44.06％～72.57％,且与中国河南株同源性也仅为62.61％,提示中国湖南株可能系一新的亚型。各株之间在701～875片段(D3)的同源性较高,中国湖南株与意大利株更为接近(93.03％),而与中国河南株(91.82％)、美国株(89.54％)和日本株(89.54％)的同源性相对较低。各株之间的同源性比较接近,提示HDV基因组701～875片段是相对保守区。同源性的高低与地理位置分布不一致,其原因有待进一步研究。     

中国上海丁型肝炎病毒部分基因的克隆与序列分析

从我国上海无症状乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）携带者混合血清中提取ＲＮＡ，通过逆转录聚合酶链反应获得丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）的长约３７０个碱基对的ｃＤＮＡ片段，将其克隆测序并与已知的ＨＤＶ各基因型代表株序列比较，结果表明，它与意大利株的同源性较高（９８．１％），与台湾株（Ｉａ型）及美国－１（Ｉｂ型）的同源性相近（９１．０％，９２．０％），与日本－１株（Ⅱ型）及秘鲁株（Ⅲ型）的同源性为７９．３％（     

戊型肝炎病毒与戊型肝炎

病毒性肝炎是我国最重要的传染病之一，国内外对其病原学研究进展甚快，至少已确认有五种肝炎病毒，其中戊肚的散发流行。为使从事传染病防治方面的专业人员病房了解本病毒的特征，进一步完善肝炎的病原学诊断及流行病学调查结果，本刊编辑部特约请第二军医大学微生物教研室戚中田教授撰写了有关戊肚用其戊肝病毒的综述；　　本综述简要报道戊型肝炎病毒的生物学及分子生物学特征，戊型肝炎的临订特征及特异性诊断，并对戊肝免疫预防、基因疫苗的展望作了介绍，对从事病毒学及传染病学的及传染病学的工作人员具有重要的参考价值。     

中国南京庚型肝炎病毒部分基因的克隆及cDNA序列分析

采用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）从南京地区某输血后丙型肝炎患者血清中克隆出庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构区部分基因。序列分析结果表明：该序列与国外发表的庚型肝炎病毒ＨＧＵ４４４０２，ＨＧＵ４５９６６，ＨＧＵ３６３８０（ＧＢＶＣ）对应位置核苷酸序列同源性分别为８９０９％，９２１２％，８７２７％，与已报道的ＨＧＶ河北株序列同源性为９３９４％。对４０份输血后丙型肝炎血清和３０份非甲非乙非丙非丁非戊型肝炎血清进行了检测，ＨＧＶＲＮＡ阳性率分别为１０００％和６６７％。     

丙型肝炎病毒E2／NS1区基因cDNA的克隆及序列分析

从北京地区１份丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中提取ＲＮＡ，经逆转录和套式聚合酶链反应扩增ＨＣＶＥ２／ＮＳ１区基因约９３０ｂｐ，将其插入至ｐＧＥＭ－Ｔ质粒载体中，利用双脱氧链末端终止法测出该基因５’端４３１ｂｐ的核苷酸序列，将此序列与其它９个ＨＣＶ分离株的相应序列进行比较分析，结果表明，此序列与ＨＣＶⅡ型序列同源性较高，核苷酸水平同源性在８０％以上。由其编码的ＨＣＶ外膜蛋白Ｎ端存在两个高变部位（ＨＶＲ），在ＨＶＲ内、外具有几个保守氨基酸残基和氨基酸区域，它们与外膜蛋白空间构型的维持有关。     

中国大陆庚型肝炎病毒NS区部分基因序列分析及变异 …

目的 研究中国庚型肝炎患者分离的病毒基因的特异性及变异规律。方法 应用逆转录－巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从１６例庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染住院病人血清中扩增了ＨＧＶＮＳ５区部分基因片段。经纯化后采用双脱氧链末端终止法进行序列分析。     

腮腺炎病毒疫苗株与野毒株的部分核苷酸序列分析

目的比较腮腺炎病毒疫苗株与野毒株的核苷酸序列差异。方法腮腺炎病毒疫苗株Ｓ７９株和ＪｅｒｙｌＬｙｎｎ株在鸡胚细胞上从第５代连续传至第２５代,采用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）法,从传代前后的腮腺炎病毒疫苗株以及野毒株的基因组中扩增血凝素－神经氨酸酶基因片段（ＨＮ）、融合蛋白基因片段（Ｆ）和小分子疏水蛋白基因（ＳＨ）,并利用双脱氧核苷酸链终止法对ＰＣＲ产物进行测序。结果传代之前第５代的两种疫苗株的目的基因的核苷酸序列完全一致;传至第２５代的Ｓ７９株的目的基因的核苷酸序列比２５代的ＪｅｒｙｌＬｙｎｎ株显示了更高的突变率。比较现行疫苗株与野毒株的核苷酸序列后发现,１９９５年分离的野毒株的核苷酸序列与疫苗株有明显的差异。结论推测Ｓ７９株可能与ＪｅｒｙｌＬｙｎｎ株同源,同一地区可能有两种以上的腮腺炎病毒野毒株导致流行性腮腺炎的发生     

戊型肝炎病毒Ⅳ型在300例急性肝炎中的感染比例

目的：调查戊型肝炎病毒（HEV）Ⅳ型在北京地区的急性散发性肝炎中的分布。方法：采用RT－nPCR的方法检测300例急性散发性肝炎患者中HEV RNA，并对阳性产物进行克隆测序，然后对其基因型进行分析。结果：在300例急性散发性肝炎患者中PCR阳性为25例，测序证实25例PCR阳性者中，24例为HEV的基因序列；其中9例为HEV I型，15例为HEVⅣ型，占HEV感染的62．5％（15／14）。结论：在北京地区的部分急性散发性肝炎中HEVⅣ感染占戊型肝炎的较大比例。     

PCR结合单酶切对戊型肝炎病毒进行基因分型的研究

目的　建立PCR结合单酶切对戊型肝炎病毒(HEV)进行基因分型的方法,并将其应用于HEV基因型分布的研究。方法　采用简并引物扩增1～4型HEVORF1片段,1、2型HEVPCR产物为2 75、2 6 9bp ,3、4型PCR产物为317、314bp ,分别应用NaeⅠ、NotⅠ消化两种长度的PCR产物,根据酶切结果区分4种基因型。结果　采用此方法对4种基因型的HEV标准株分型,结果与预期一致;4 3份HEVIgM阳性的临床标本中,19份PCR阳性,分型结果均为4型HEV。结论　此方法可以快速简便地区分HEV 4种基因型。南京地区散发戊型肝炎大多由4型HEV所致。     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

中国庚型肝炎病毒河南株非结构基因（NS）3区cDNA的克隆 …

目的 为了研究中国庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构（ＮＳ３）区基因结构特征。方法 利用逆转录－半巢式－聚合酶链反应从河南１份ＨＧＶ ＲＮＡ阳性血清获得覆盖ＨＢＶ ＮＳ３全长ｃＤＮＡ的４个片段，并克隆到ｐｃＤＮＡⅡ载体中，采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定全部ｃＤＮＡ序列。结果 发现克隆到的包括ＨＢＶ ＮＳ３区在内的ｃＤＮＡ序列和度为２１３７个核苷酸，编码７１１个氨基酸。与国内外已测定的５株全序列的相     

Complete genome sequence and phylogenetic analysis of hepatitis B virus (HBV) isolated from Mongolian patients with chronic HBV infection

Although there is a report of a high rate of hepatitis B virus (HBV) infection in Mongolia, the entire nucleotide sequence of HBV circulating among Mongolian patients has not been reported. To obtain the complete nucleotide sequence of the Mongolian HBV, viral DNA was extracted from sera of patients with HBV infection. Six Mongolian HBV strains were amplified by PCR. Complete genomic sequences were determined for two Mongolian HBV isolates, MBT181 and MMU36. The entire genome of Mongolian HBV isolates was 3,182 bp long and genetic distance between Mongolian HBV isolates was 3.2%. Precore stop codon resulting from a guanine to adenine mutation at nucleotide 1,896 was detected in MBT181 strain. Based on phylogenetic analysis, the six Mongolian isolates were classified as genotype D.