异种(猪)脱细胞真皮基质在瘢痕整形中的应用

目的 探讨异种(猪)脱细胞真皮基质在切除瘢痕后做为真皮替代物的临床作用.方法 采用DR脱细胞猪皮和大张自体刃厚皮复合移植(一步法和二步法)覆盖切除瘢痕后的创面.结果 对47例瘢痕患者中的22例进行异种(猪)脱细胞真皮基质移植7 d左右,再植大张自体刃厚皮的二步法复合移植,其中在脂肪层上复合移植成活率(88.3±3.7)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(89.7±3.4)%.25例采用异种(猪)脱细胞真皮基质+自体刃厚皮同时复合移植的一步法,在脂肪层上复合移植成活率(92.5±4.1)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(93.2±5.2)%.复合移植成活后,创面颜包淡红,表面平坦光滑,柔韧性好.最长随访时间90 d,复合区皮肤近似正常,皮肤结实、光滑、平整,可捏起,仅见移植边缘有少许轻微瘢痕增生,功能好.结论 一步法复合移植比二步法成活率高,且脂肪层上的复合移植皮比深筋膜上的复合移植皮肤弹性较好,也更柔软、丰满,两者在功能上则无区别.异种(猪)脱细胞真皮基质是覆盖瘢痕切除后创面的较理想的真皮替代物.     

自异体微粒皮昆合移植的优化比例研究

目的观察不同比例自异体微粒皮混合移植后创面愈合的效果. 方法以雄性Wistar大鼠为供体,在雌性SD大鼠背部建立全层皮肤缺损创面模型.将SD大鼠随机分为4组,每组10只(1)异体皮组,移植面积扩张比为103的异体微粒皮.(2)自体皮组,移植面积扩张比为101的自体微粒皮.(3)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为101.(4)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为101和103.于移植术后2、3、4周对各组大鼠创面进行外观和组织学观察,数码相机照相后运用图像分析软件测定创面愈合率和创面收缩率,并进行各组间的比较.结果(1)异体皮组大鼠创面随着排斥反应发生,除创缘有新生表皮向内爬行外均为肉芽创面;自体皮组因微粒皮数量偏少,术后2周仍有部分为肉芽创面;两个混合移植组术后2周创面基本上皮化.(2)移植后各组创面真皮内有不同程度的血管扩张和单个核细胞浸润,在异体皮组和混合2组中更加明显,自体皮组及混合1、2组大鼠创面的表皮层明显增厚.(3)异体皮组移植后2～4周,随着排斥反应的发生,其创面愈合率明显下降.移植后3周,自体皮组创面愈合率为(55±26)%,明显低于混合1、2组的(88±6)%和(76±10)%(P《0.05或0.01).(4)移植后3周,混合2组创面收缩率为(69±7)%,高于异体皮组[(58±11)%],其余各组之间比较差异无统计学意义(P》0.05).结论适当比例的自异体微粒皮混合移植,可以促进创面愈合;当两者移植面积扩张比均为101时,具有较好的促创面愈合效果.     

应用异种皮作微粒皮移植覆盖物治疗深度烧伤的临床观察

目的探讨异种(猪)皮作为微粒皮移植覆盖物的可行性。方法选择10例深度大面积烧伤患者,于患者行切痂植皮术前1 d,将1只50 kg左右的纯白猪处死后清洗、剃毛、消毒,切取2张含少量脂肪的皮片,用鼓式取皮机反取成全厚或中厚皮。先播散自体微粒皮,再将猪皮打孔覆盖其上加压包扎。观察患者术后猪皮排异、微粒皮成活情况,以及创面愈合时间和术后1年患者的功能恢复情况。结果术后2周猪皮完整、与创面粘贴好;术后4～5周猪皮呈干痂状,逐渐与微粒皮分离,微粒皮已生长融合,创面基本愈合;术后6～8周猪皮全部脱落,创面愈合。10例患者创面愈合时间为42～56 d[(50±5)d]。术后1年见患者术区虽有表浅瘢痕,但其弹性和功能均恢复正常。结论用猪皮替代同种异体皮覆盖自体微粒皮修复深度烧伤创面可行。     

整合素β1在微粒皮混合移植中的异位表达及定量分析

目的 了解自、异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机制. 方法 建立自、异体微粒皮混合移植大鼠模型.第1部分实验分为3组,每组9只大鼠:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,移植自、异体微粒皮,面积扩张比均为10:1;(3)混合2组,移植自、异体微粒皮,面积扩张比分别为10:1和10:3.第2部分实验亦分为3组,每组6只大鼠:(1)自体皮组,移植面积扩张比为20:1的自体微粒皮;(2)混合1组,移植自、异体微粒皮,面积扩张比分别为20:1、20:3;(3)混合2组,移植自、异体微粒皮,面积扩张比分别为20:1和20:6.术后从各组大鼠愈合创面取样,第1部分实验于术后2、3、4周取样,第2部分实验于术后3、4周取样,每组大鼠各时相点检测3个样本.行常规组织学与免疫组织化学染色,测定整合素β1的表达.显微镜下测量表皮层厚度. 结果 (1)HE染色显示,术后各组大鼠创面的表皮层厚度明显增加,真皮内有不同程度的血管扩张和单个核细胞浸润.(2)术后2～4周,第1部分实验中2个混合组大鼠皮肤表皮层均明显厚于自体皮组(P＜0.05或P＜0.01);术后3、4周,第2部分实验中2个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(P＜0.05或P＜0.01).(3)免疫组织化学染色显示,术后各组新生表皮中均可见整合素β1阳性细胞,以棘层和颗粒层为主.术后2周,第1部分实验中混合组整合素β1的阳性表达明显强于自体皮组(P＜0.01),且混合1组的表达(10 982±2169)明显强于混合2组(4240±512,P＜0.01);术后3～4周,混合1组的表达仍明显强于自体皮组和混合2组(P＜0.01).第2部分实验仅在术后3周时混合2组整合素β1的阳性表达(1618±171)明显高于自体皮组(1060±146,P＜0.05). 结论 自、异体微粒皮混合移植中,整合素β1的异位表达和表达增强与表皮细胞的增殖分化、创面冉上皮化以及表皮层增厚有密切关系,在促进创面愈合过程中,整合素β1阳性表达细胞很有可能发挥了重要作用.     

活性脱细胞真皮基质微粒在裸鼠糖尿病创面的作用研究

目的探讨脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells, ADSC)复合脱细胞真皮基质微粒(ADM)在裸鼠糖尿病创面愈合的作用。方法 2017年9月至2018年8月, 在徐州医科大学附属医院整形美容科体外培养ADSC与ADM微粒复合体;24只裸鼠分为活性ADM微粒组、ADSC组、ADM微粒组、空白组4组, 每组6只。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病裸鼠模型并制作背部全层皮肤缺损创面, 实验组创面移植复合体, 其他组创面分别移植ADSC、ADM微粒并设置空白对照组。术后7、14 d各组随机选择3只裸鼠观察创面愈合情况, HE染色测量再上皮化厚度, 免疫组织化学染色观察新生血管密度, 比较各组差异。结果活性ADM微粒组中细胞存活情况明显优于ADSC组;术后7、14 d创面愈合率分别为(86.0±2.7)%、(98.5±1.1)%, 再上皮化厚度分别为(99.1±1.8) μm、(124.3±4.3) μm, 均明显高于其他组(P<0.05);活性ADM微粒组新生血管染色高于其他组。结论 ADSC复合ADM微粒移植可促进裸鼠糖尿病创面血管生成, 创面愈合速度明显...     

自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植修复烧伤患者深度创面

目的 了解自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植修复大面积烧伤深度创面的效果. 方法选择20例重度烧伤患者,采用自身同体对照法,将患者双侧肢体或躯干对称部位创面分为脂肪颗粒+微粒皮组和微粒皮组,分别行自体脂肪颗粒+微粒皮(体积比1:1)混合移植和自体微粒皮移植.术后30、45、60 d计算2组创面愈合率;术后7、14、21、28 d取创面组织,行HE染色和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学观察. 结果移植术后30、45、60 d,脂肪颗粒+微粒皮组创面愈合率分别为(56.3±3.1)%、(76.4±6.1)%、(96.2±1.5)%,均明显高于微粒皮组的(28.3±2.0)%、(47.3±4.8)%、(85.4±2.2)%(P<0.01).HE染色显示脂肪颗粒+微粒皮组创面上皮化早于微粒皮组,胶原纤维排列较整齐.脂肪颗粒+微粒皮组PCNA阳性细胞较微粒皮组多,主要分布于表皮基底层. 结论自体脂肪颗粒+微粒皮混合移植可促进创面愈合.     

点状自体皮与辐照异种皮改良复合移植的临床应用研究

目的 探讨点状自体皮与辐照异种皮改良复合移植的临床效果.方法 对入选的80例大面积烧伤患者,采用分层随机分组的方法分为治疗组及对照组,每组40例,治疗组在常规治疗的基础上,入院后第3～5天行切削痂,点状自体皮移植后辐照异种皮覆盖;对照组40例,其中20例行点状自体皮移植网眼油纱覆盖后加压包扎,20例行点状自体皮移植新鲜猪皮覆盖.观察比较两组患者点状自体皮成活情况、辐照异种皮排斥、创面愈合时间及愈合率、换药工作量、患者疼痛度及1年后患者瘢痕及功能恢复情况.结果 治疗组术后1周换药见辐照异种皮贴服完整,2周辐照异种皮呈干痂状.4～5周干痂逐渐分离,创面愈合.创面愈合时间治疗组(29.5±5)d较对照组(39.6±4)d明显缩短(P＜0.01).创面愈合率治疗组(86.8±3.8)％较对照组(34.2±2.1)％明显提高(P＜0.01).创面感染率降低30％,换药的劳动强度降低70％,减轻患者疼痛.1年后患者瘢痕平整其弹性及功能良好.结论 点状自体皮与辐照异种皮改良复合移植提高了皮肤移植的成活率,有利于创面愈合,对治疗大面积烧伤创面修复可行有效.     

异种(猪)脱细胞真皮基质与头皮薄皮片复合移植

目的探索异种(猪)脱细胞真皮基质与头皮薄皮片复合移植在整形修复方面应用的可行性.方法将制备好的异种(猪)脱细胞真皮基质移植于烧伤切痂、肉芽及瘢痕切除的创面上,4～5 d后再移植自体头皮薄皮片,并观察其成活率,以及创面修复后的质量.结果 15例25个创面,脱细胞真皮基质的成活率(96.40±2.60)%,头皮薄皮片的成活率(97.44±3.50)%,创面愈合后皮肤的颜色与正常皮肤近似,外观平整,弹性良好,无明显的瘢痕增生,相当或接近于自体大张中厚皮片移植的修复效果.结论异种(猪)脱细胞真皮基质与自体头皮薄皮片复合移植,成活率高,整复效果较为满意,头皮供区可反复供皮而不留瘢痕及影响头发生长,是修复深度烧伤及瘢痕切除后创面的可行手术方法.     

不同厚度异体皮制备的微粒皮混合自体微粒皮移植对创面愈合的影响

目的　观察不同厚度异体皮制备的微粒皮混合自体微粒皮移植于大鼠背部全层皮肤缺损后对创面愈合的影响。　方法　制作大鼠全层皮肤缺损创面模型。以移植面积扩张比为 5∶1的自体微粒皮为对照组 ( 10只 ) ,两种不同厚度异体皮制备的微粒皮与同样扩张比的自体微粒皮混合移植为实验组 ,其中实验 1组异体微粒皮厚度为 0 .3mm(10只 ) ,实验 2组 0 .6mm(6只 )。比较移植后 2、3、4周 3组大鼠创面愈合率、收缩率及组织学差异。　结果　创面愈合率 :移植后 2周实验 1组大鼠( 94 .5 8± 3.99) %和实验 2组 ( 95 .2 8± 1.93) %均高于对照组 ( 88.2 8± 6 .85 ) % (P <0.0 5 ),移植后 3周实验 2组 ( 94 .5 5± 3.4 7) %高于实验 1组 ( 89.5 1± 4 70 ) %及对照组 ( 88.5 1± 5 .5 9) % (P <0.0 5),移植后 4周 3组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。创面收缩率 :实验 1组大鼠与对照组比较 ,差异无显著性意义 (P >0.0 5),实验 2组各时相点均低于实验 1组及对照组 (P <0.0 5)。组织学检查 :移植后 2周实验组大鼠有明显的淋巴细胞灶性浸润 ,移植后 4周 3组之间比较 ,差异无显著性意义 ( P>0.0 5 )。结论　适量的异体微粒皮混合自体微粒皮移植 ,可以促进创面愈合 ;混合移植等量异体微粒皮时增加其真皮厚度 ,能够减     

组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的实验研究

目的 探索由人表皮干细胞、成纤维细胞与纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的可行性. 方法 将人全层皮肤采用胰蛋白酶消化法使表皮干细胞和真皮成纤维细胞分离后,分别在无血清培养基中行原代及传代培养.将体外扩增培养至第3、4代的表皮干细胞(5×104/mL)和真皮成纤维细胞(1×104/mL)共0.5 mL与纤维蛋白支架(0.5 mL)混合凝固构建组织工程皮肤.取4～5周龄雄性裸鼠45只,体重19.5～20.3 g,平均20.0 g,制备背部全层皮肤缺损模型.随机分为5组,每组9只,分别为空白对照组(C组),创面仅覆盖凡士林油纱,自然愈合;单纯支架组(F组),创面移植无细胞的纤维蛋白支架;表皮支架组(S组),创面移植含有表皮干细胞的纤维蛋白支架复合物;成纤维细胞支架组(Fb组),创面移植含有成纤维细胞的纤维蛋白支架复合物;组织工程皮肤组(T组),创面移植组织工程皮肤.术前及术后1、3、6、8周行全身及移植部位大体观察;移植后3、6、8周,取材行组织学、免疫组织化学及扫描电镜观察. 结果 细胞培养4周后,表皮干细胞培养皿内可见圆形细胞,在加有BrdU的培养液中培养6 d后可见BrdU染色阳性细胞;成纤维细胞培养皿内可见梭形细胞.构建的组织工程皮肤可见CK19免疫荧光染色阳性细胞、Nestin染色阳性细胞.移植后T组新生皮肤较其余各组生长快、瘢痕轻.术后6周,C、F、S、Fb及T组皮肤厚度分别为(0.460 ±0.049)、(0.480 ±0.055)、(0.540 ±0.043)、(0.510 ±0.032)及(0.60 ±0.047)mm,T组明显厚于其余各组,且差异有统计学意义(P＜0.05).术后3、6、8周,HE染色及扫描电镜示,T组新生表皮层数及真皮成纤维细胞、血管数量均多于其余各组,且T组真皮血管及胶原纤维排列均较其余各组整齐;术后3周,Ⅳ型胶原免疫组织化学染色显示,T组已形成连续的染色带,而其余各组均不连续;术后6周,CK14免疫组织化学染色显示,T组可见阳性细胞,其余各组均未见. 结论 用表皮干细胞、成纤维细胞及纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤移植后能使创面迅速愈合,可望成为一种较理想的组织工程皮肤.     

皮肤混合移植的现状和未来

1 皮肤混合移植的演变过程 皮肤移植是外科修复皮肤缺失的主要方法之一.大面积深度烧伤患者可供移植的自体皮有限,探索相应的皮肤移植技术成为烧伤医学的重要研究课题之一[1].     

Fetal wound healing. The ontogeny of scar formation in the non-human primate.

OBJECTIVE: This study determined how scar formation develops in a non-human primate model of fetal skin repair. SUMMARY BACKGROUND DATA: A transition from healing scarlessly to healing with scar formation characterizes skin repair in rat and sheep fetuses. New knowledge of the regulatory processes occurring in the fetal wound at the initial stages of scar formation may provide insights into the early mechanisms of scar formation. METHODS: Full-thickness wounds were made in fetal rhesus monkey lips from 75 through 114 days gestation (n = 6, term = 165 days). Wounds were harvested at 14 days postwounding and processed for histology (hematoxylin & eosin, Masson's trichrome) as well as immunohistochemistry (human type I or type III collagen). RESULTS: Wounds healed with complete restoration of normal tissue architecture in the 75-day gestation fetus. However in the 85-100 day gestation fetuses, wounds healed with an absence of hair follicles and sebaceous glands, but the dermal collagen pattern remained reticular and similar to that in unwounded dermis. At 107 days, a thin scar was present in the wound, thereby demonstrating a transition to scar formation between 100 and 107 days gestation (early 3rd trimester) in the non-human primate. CONCLUSIONS: In the non-human primate fetus, a transition from scarless repair to adult-type repair with scar formation occurs in the early third trimester. These data provide insight into the transition process; the ontogeny of scar formation is characterized initially by wounds healing without the presence of epidermal appendages but with a normal reticular dermal collagen pattern, which we term the "transition wound."     

Ultrastructural analysis of fetal rabbit wounds

Fetal wound healing proceeds rapidly with minimal inflammation and fibroplasia and little or no scar formation. These observations have led to the hypothesis that fetal wound healing more closely resembles regeneration rather than adult wound repair. To test this hypothesis, this study used ultrastructural analysis of fetal and adult fibroblasts and collagen to gain greater insight into differences in the healing processes. Full-thickness, primarily closed linear incisions were created dorsally on 24-day gestational age fetal rabbits (n = 9). The fetuses were killed 5 days later, and the wounds were excised and evaluated with transmission electron microscopy. Similarly, uninjured fetal skin of the same gestational age was obtained and analyzed. Adult rabbit dermal wounds were analyzed after 8 days of healing. Resting adult dermal fibroblasts had features of quiescent, inactive cells, whereas adult wound fibroblasts were highly active and filled with secretory vesicles. In contrast, both fetal normal dermal and wound fibroblasts appeared highly active and contained numerous secretory vesicles. In the adult wound, collagen fibril diameter was only 45% of the diameter of normal dermal collagen. However, fetal wound collagen fibrils were basically the same as normal dermal collagen, having a diameter that was 82% of the size of dermal collagen. These observations suggest that fetal wound fibroblasts do not require activation from an inactivated state and that fetal wound collagen deposition undergoes more rapid organization and maturation. These findings have significance in extending our understanding of the rapidity and functional superiority of fetal wound healing compared with adult wound healing.     

封闭负压引流技术结合邻近皮瓣转移修复难治性组织缺损

目的：探讨封闭负压引流技术（vacuum sealing drainage,VSD）结合邻近皮瓣转移在难治性组织缺损修复中的有效性和实用性。方法：自2010年3月,应用封闭负压引流技术结合邻近皮瓣转移修复不同原因造成的大面积深度组织缺损或骨外露患者16例,其中车祸伤后躯体大面积深度组织缺损伴感染创面2例、下肢骨折骨外露创面9例,小腿及足部的慢性溃疡3例,臀骶部褥疮2例。根据不同病情,辅助应用VSD于创面,视创面情况,在5～10天后去除或更换VSD装置,待创面缩小、感染控制、肉芽新鲜时应用邻近局部皮瓣或邻位皮瓣转移修复创面。结果：经持续负压引流并根据创面情况更换VSD敷料后,创面感染得到理想控制,创面明显缩小,结合应用邻近皮瓣转移修复,均达到理想效果。结论：持续负压封闭引流能及时清除引流区渗出物和坏死组织,改善局部微循环和促进组织炎症、水肿消退,刺激肉芽组织生长,加速创面愈合,缩小创面,只需结合相对简单易行的邻近皮瓣应用即可理想地修复多数难治性组织缺损创面。     

用自体焦痂作微粒皮移植覆盖物修复重度烧伤创面的临床观察

目的　探讨用自体焦痂作为微粒皮移植的覆盖物的可行性。　方法　选择12例重度烧伤患者,于其伤后3—7d内切痂,并用自体焦痂替代异体皮作为微粒皮移植术后的覆盖物。术后1—6周观察患者移植部位的焦痂情况和微粒皮存活情况,术后6周计算创面愈合率。记录患者创面愈合时间。结果　术后1—2周,移植部位的焦痂完整,与机体贴附紧密。术后3—4周,焦痂开始呈干痂状并逐渐与创面分离,其下的自体微粒皮已生长并融合成片状。第5—6周,焦痂进一步分离直至完全脱离创面,自体微粒皮融合成大片,残留少量肉芽创面。本组患者术后6周的创面愈合率为(87±4)%,创面愈合时间为伤后(56±8)d.　结论　用自体焦痂替代异体皮覆盖移植的微粒皮方法可行,并具有较好的临床应用价值。     

血管紧张素Ⅱ受体2型对创面愈合过程中微血管形成的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ受体2型（AT2R）在创面肉芽组织微血管形成中的作用,探讨其影响新血管形成的可能机制.方法：用打孔器在小鼠背部制成直径6.0 mm全层皮肤缺损创面模型,将24只C57BL/6J小鼠分成两组（n=12）：PD123319处理组腹腔注射特异性AT2R阻断剂PD123319（10 mg·kg-1·d-1）,对照组腹腔注射等量生理盐水.分别在创面形成后第3、5、7、和14天取创面组织标本,每个时间点3只小鼠.另有6只作为正常对照.采用HE染色观察肉芽组织和新血管形成的情况,应用ELISA法检测创面愈合过程中创面局部组织血管内皮生长因子受体1（VEGFR1）的变化,免疫组织化学方法检测正常小鼠皮肤与创面愈合过程中创面局部组织AT2R的表达情况.结果：正常小鼠皮肤AT2R在整个表皮层均有阳性表达,在真皮层,AT2R主在微血管内皮细胞,皮肤附件如毛囊、汗腺、皮脂腺有阳性表达.在小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中,创面局部组织AT2R产生逐渐增加,第7天达到峰值,以后逐渐下降.在伤后第5天和第7天,对照组创面肉芽组织的面积分别为（9.37±0.53）mm2和（7.15±0.42）mm2,PD123319处理组创面肉芽组织面积分别为（11.51±0.98）mm2和（9.32±0.67）mm2,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）.PD123319可随时间的延长明显增加肉芽组织中VEGFR1的表达和血管形成的组织学评分,在第7天达到峰值,两组间差异有显著性（P〈0.05）,然后均逐渐下降.结论：在创面愈合过程中,AT2R可能参与创面的愈合及其后期的塑性改建,并通过调节VEGFR1水平影响肉芽组织中微血管的形成.     

喷洒法皮粒播植术研究

目的　探讨喷洒法皮粒播植术在烧伤治疗中的可行性及实用性。　方法　将所取刃厚皮切碎与等渗盐水混匀 ,置入喷嘴容器内 ,以压力喷洒的方式进行植皮。同时用数码图象分析技术测定皮粒分布状况 ;动物实验观察术后创面转归及病理变化 ;住院患者采用喷洒播植法 ,以漂浮移植方式为对照 ,比较手术及治疗结果。　结果　喷洒组的皮粒分布离散度明显小于漂浮组。供 /受皮区面积比 1∶10、1∶2 0及 1∶5 0的 3组创面 ,愈合时间分别为 (2 3.2± 3.8)d、(2 4 .5± 3.5 )d及 (38.3± 6 .1)d。喷洒组与漂浮组的平均手术时间分别为 (133.3± 38.8)min及 (16 5 .6± 91.6 )min(P <0 .0 5 ) ,供 /受皮区面积比分别为 1∶18.8± 8.2及 1∶7.6± 3.0 (P <0 .0 1) ,创面一次覆盖率分别为 (92 .6± 11 5 ) %及(79.7± 2 2 .5 ) % (P <0 0 1) ,创面愈合时间分别为 (2 9.7± 9.1)d及 (37.3± 7.6 )d(P <0 .0 5 )。　结论　喷洒法播植的皮粒分布均匀 ,操作简单 ,节省皮源 ,手术时间短 ,创面愈合快 ,适用于不同种类及形状的创面覆盖物 ,具有较好的临床应用价值。