益气化瘀补肾方及拆方影响椎间盘细胞外基质胶原和代谢酶mRNA表达的研究

目的探讨益气化瘀补肾方及拆方影响退变模型大鼠颈椎间盘细胞外基质中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和相关代谢酶MMPs／TIMPmRNA的表达。方法采用RT—PCR法检测胶原和MMPs／TIMPmRNA表达,凝胶成像系统扫描仪对各条带进行扫描,计算机自动计算出光密度。结果与假手术组比较,模型组Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13 mRNA表达明显升高（P〈0．01）;TIMP-1 mRNA表达无明显统计学差异（P〉0．05）。益气化瘀补肾方及其拆方可明显降低Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13 mRNA的过度表达（P〈0．01或P〈0．05）。结论退变椎间盘的Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原mRNA表达增高,MMP-13 mRNA的高表达和TIMP-1 mRNA的低表达,MMPs／TIMP的比例失调,反映了退变椎间盘ECM合成和降解的失调。益气化瘀补肾方及拆方可能通过影响颈椎间盘组织胶原及相关代谢酶mRNA表达而延缓椎间盘的退变。     

活血补肾方及其拆方对退变腰椎间盘IL-1β、TNF-α mRNA表达的影响

目的:观察活血补肾方及其拆方对退变椎间盘组织IL-1β、TNF-α mRNA表达的影响。方法:采用纤维环针刺法复制腰椎间盘退变动物模型。造模成功后,将50只新西兰大白兔随机分为活血补肾方、活血方、补肾方、吲哚美辛及模型对照组5组,给药6周。采用逆转录聚合酶链反应检测IL-1β和TNFαmRNA表达情况。结果:与模型组比较,活血补肾方、补肾方、活血方和吲哚美辛组IL-1β、TNFα mRNA的表达均下调(P<0.01)。结论:活血补肾方具有抑制IL-1β、TNFα mRNA表达的作用,这可能是活血补肾方减轻退变椎间盘炎症反应,减缓椎间盘退变,治疗椎间盘源性腰痛的机理之一。     

生肌化瘀方及拆方对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达影响

目的 :观察生肌化瘀方及拆方对创面成纤维细胞的α1(Ⅰ )mRNA和α1(Ⅲ )mRNA表达的影响 ,探讨其促进创面修复呈皮肤修复的作用机理。方法 :采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞 ,以乳鼠皮肤成纤维细胞作对照 ,分别加入生肌方、化瘀方及生肌化瘀方大、小剂量药物血清 ,运用NthernBlot分子杂交法检测成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA的表达。结果 :生肌方能够加强创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,高于模型组 ;化瘀方能够降低创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达 ,低于模型组 ;生肌化瘀方各剂量组Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达与正常组相比差异均无显著性。结论 :生肌化瘀方通过调控创面成纤维细胞的α1(Ⅰ )mRNA和α1(Ⅲ )mRNA表达使创面修复呈皮肤修复     

益气化瘀补肾法对颈椎病动物椎间盘病理变化与Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的 :观察益气化瘀补肾法对颈椎病动物退变椎间盘病理变化及髓核Ⅱ型胶原mRNA表达的影响。方法 :把健康成年新西兰大白兔随机分为益气化瘀补肾组、消炎痛组、模型对照组和正常对照组 ,运用静力平衡失调颈椎病动物模型 ,造成动物椎间盘的退变 ,然后分别喂以相应药物或医用淀粉胶囊 ,观察24周后 ,取颈6/7椎间盘 ,用HE染色法观测椎间盘组织病理变化 ,用生物素标记原位杂交法观测椎间盘髓核组织内细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达 ,并运用图像分析仪对其进行数据转换 ,采用SPSS统计软件分析。结果 :益气化瘀补肾法对退变椎间盘病理变化的影响不显著 ,但对椎间盘髓核组织内Ⅱ型胶原mRNA表达的影响有显著作用。结论 :益气化瘀补肾法对颈椎病动物退变椎间盘髓核组织胶原的形成过程的环节有正面影响。     

益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘Ⅱ型胶原mRNA表达的影响。方法健康成年新西兰大白兔42只,随机平均分为益气化瘀补肾组、益气化瘀组、补肾组、消炎组、模型对照组、正常对照组。建立颈椎病椎间盘退变模型,原位杂交后病理图像分析。结果正常对照组髓核组织中Ⅱ型胶原mRNA表达的量显著高于模型对照组和消炎痛治疗组（P<0.01）,与益气化瘀组、补肾组相比较也有显著差异(P<0.05);益气化瘀补肾法与益气化瘀法、单纯补肾法比较有较显著差异(P<0.05),与消炎痛组、模型组比较有非常显著差异(P<0.01);益气化瘀法、补肾法对髓核组织中Ⅱ型胶原mRNA的表达有一定的增强作用。结论颈椎病家兔椎间盘的Ⅱ型胶原mRNA表达比正常组显著降低,益气化瘀补肾法可以上调Ⅱ型胶原mRNA基因的表达,使之维持在正常范围,说明益气化瘀补肾法对延缓椎间盘的退变有积极作用。     

益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘II型胶原mRNA表达的影响

目的：益气化瘀补肾法对爱变颈椎间盘II型胶原mRNA表达的影响。方法：健康成年新西兰大白兔42只,随机分均分为益气化瘀补肾组,益气化瘀组,补肾组,消炎组,模型对照组,正常对照组。建立颈椎闰椎间盘退变模型,原位杂交后病理图像分析,结果：正常对照组髓核组中II型胶原m RNA表达的量显著高于模型对照组和湖炎痛治疗组（P＜0．01）,与益气化瘀化,补肾组相比较也有显著差异（P＜0．05）,益气化阏补肾法与举气化瘀法,单纯补肾法比较有显显著差异（P＜0．05）,与消炎痛组,模型组比较有非常显著差异（P＜0．01）,益气化瘀法,补肾法对髓核组织中II型胶原mRNAR的表达有一定的增强作用,结论：颈椎病家兔椎间盘的II型胶原mRNA表达比正常组显著降低,益气化瘀化法可以上调II型胶原mRNA基因的表达,使之维持在正常范围,说明益气化瘀补肾法对延缓椎间盘的退变有积极作用。     

活血补肾方及其拆方对退变腰椎间盘细胞Fas表达和凋亡率的影响

目的:观察活血补肾方及其拆方对退变腰椎间盘细胞Fas表达和凋亡率的影响.方法:采用纤维环针刺法复制腰椎间盘退变动物模型.造模成功后,将50只新西兰大白兔随机分为活血补肾方、活血方、补肾方、吲哚美辛及模型对照组5组,给药6周.采用流式细胞仪检测椎间盘细胞凋亡率,免疫组化法检测椎间盘细胞Fas表达情况.结果:活血补贤方及其...     

赤芍和茜草水提取物对系统性硬皮病成纤维细胞增殖及胶原合成影响的研究

目的:研究赤芍和茜草水提取物对系统性硬皮病成纤维细胞增殖和I、Ⅲ型前胶原mRNA合成的影响。方法:MTT法测定对成纤维细胞增殖的影响,RT-PCR测定对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA合成的影响。结果:赤芍和茜草水提取物对成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达都具有一定的抑制作用。赤芍水提取物可以使Ⅰ型前胶原表达减少29%,Ⅲ型减少33%;茜草水提取物使Ⅰ型减少27%,Ⅲ型减少23%。结论:赤芍和茜草水提取物能够抑制系统性硬皮病成纤维细胞增殖,不同程度的抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,具有一定的抗纤维化作用。     

槌果藤对进行性系统性硬化症患者成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原产生的影响

目的:探讨槌果藤乙醇提取物对进行性系统性硬化症(PSS)患者及正常人成纤维细胞增殖、Ⅰ型胶原产生的影响。方法:MTT比色法观察槌果藤提取物对成纤维细胞增殖活性的影响及其抗氧化作用,流式细胞仪检测提取物对细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blot检测提取物对PSS患者Ⅰ型胶原mRNA表达及蛋白合成的影响。结果:槌果藤提取物可抑制PSS患者成纤维细胞的增殖、Ⅰ型胶原mRNA表达及蛋白合成,呈剂量和时间依赖性,但无细胞毒性或诱导凋亡作用。该提取物对正常人成纤维细胞的增殖及胶原合成无影响,对过氧化氢造成的成纤维细胞损伤有一定保护作用。结论:槌果藤乙醇提取物可抑制PSS患者成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原的合成,并有抗氧化作用。     

补肾活血汤调节rabHK-2外泌体对椎间盘髓核细胞凋亡及Wnt信号通路的影响

目的:观察补肾活血汤对兔退变椎间盘组织细胞凋亡及Wnt信号通路的影响，以及调节兔肾小管上皮细胞(rabHK-2)来源外泌体的分泌，对退变椎间盘髓核细胞(NPCs)增殖、凋亡及Wnt信号通路蛋白表达的影响。方法:建立兔椎间盘退变模型，补肾活血汤干预8 w后，采用TUNEL法检测椎间盘组织凋亡阳性细胞率，Western-blot法检测椎间盘组织中Wnt信号通路相关蛋白的表达；5.41 g/kg补肾活血汤灌胃新西兰白兔制备含药血清，以10%补肾活血汤含药血清作用于rabHK-2细胞，采用超高速离心法提取rabHK-2细胞外泌体，透射电镜观察外泌体形态，Western-blot法检测外泌体标志蛋白集群分化因子9(CD9)和集群分化因子63(CD63)的表达；用PKH67荧光试剂盒标记后的外泌体与退变NPCs共孵育，荧光显微镜观察不同浓度外泌体作用于退变NPCs后，退变NPCs对rabHK-2细胞外泌体的摄取情况，CCK-8法检测退变NPCs活力。rabHK-2外泌体与补肾活血汤含药血清单独或联合干预后，应用流式细胞术检测退变NPCs凋亡情况，RT-PCR检测退变NPCs中II型胶原和蛋白多糖的...     

臭氧盘内注射治疗椎间盘源性腰痛52例临床观察

目的探讨臭氧椎间盘内注射治疗椎间盘源性腰痛的临床疗效。方法选择椎间盘源性腰痛患者52例,X线透视下行小关节内侧缘＋后外侧入路穿刺椎间盘内注射臭氧,按照M acNab腰腿痛手术评价标准评定,观察治疗后疗效。结果所有患者均一次穿刺成功,随访3个月显效29例,有效15例,总有效率84.6%。结论小关节内侧缘＋后外侧入路穿刺椎间盘内注射臭氧治疗椎间盘源性腰痛临床疗效确切,是治疗椎间盘源性腰痛的有效方法。     

益肾软坚散含药血清拮抗马兜铃酸对人肾间质成纤维细胞的作用

目的研究益肾软坚散含药血清能否干预马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)的致细胞外基质(excellular matrix,ECM)蓄积效应。方法用马兜铃酸钠盐(AA-Na,40μ-／ml)加或不加10％大鼠含药血清与hRIFs孵育,而后检测hRIFs对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)、金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)和Ⅰ型胶原(type Ⅰ Colla-en,Col Ⅰ)的mRNA(RT-PCR方法)和蛋白质表达(ELISA或Western blot方法)。结果大鼠含药血清能显著下调AA-Na刺激后hRIFs对TGF-β1、CTGF、TIMP-1和Col ⅠmRNA及蛋白质高表达(P<0．05),但不影响PAI-1 mRNA及蛋白质高表达(P>0．05)。结论益肾软坚散含药血清可通过下调hRIFs促ECM合成因子及抗ECM降解因子的表达,而拮抗从导致的ColⅠ等ECM蓄积。     

补肾活血方对心肌梗死大鼠心肌修复作用及机制探讨

目的:观察不同剂量补肾活血方对异丙肾上腺素所致心肌梗死大鼠内皮祖细胞(EPCs)的动员作用及其对缺血心肌组织的损伤修复作用,并探讨可能的作用机制。方法:雄性SD大鼠48只随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组、补肾活血方低、中、高剂量组,皮下注射异丙肾上腺素造模后检测各组外周血EPCs数量、HE染色及TTC染色观察病理改变、心肌组织中Notch1蛋白表达及心肌组织中CD+34蛋白表达。结果:补肾活血方各剂量组及辛伐他汀组均可见外周血EPCs数量增多(P<0.01),心肌缺血损伤程度减轻,心肌组织中CD+34含量增多,且Notch1蛋白表达量较模型组明显增多,补肾活血方中高剂量组作用明显。结论:补肾活血方有可能通过激活Notch信号通路,动员心肌梗死大鼠EPCs,促进血管新生,从而达到修复受损心肌的作用。     

蠲痹汤调控淋巴管回流功能治疗膝骨关节炎的研究＊

目的 探讨蠲痹汤（JBT）对膝骨关节炎（KOA）小鼠模型淋巴管回流功能及关节病理退变的影响。方法 将120只C57BL小鼠随机分成JBT，莫比可（MOBIC）与PBS组。小鼠右膝接受内侧半月板失稳（Destabilization of medial meniscus，DMM）手术以诱导KOA模型，左膝作为假手术对照。使用近红外光谱检测系统评估关节淋巴管回流情况；ABHO染色评估关节软骨的面积及OARSI评分；免疫组织化学染色观察膝关节II型胶原含量及软骨细胞退变指标蛋白聚糖降解产物（Nitege）的积累。结果 与PBS、Mobic组比较，JBT组小鼠膝关节的ICG清除率在术后4周和8周明显增强，OARSI评分较低；JBT组关节软骨中Nitege的表达低于PBS组，但是II型胶原表达高于PBS组。结论 JBT可以促进早期KOA小鼠膝关节淋巴管回流功能，并且延缓KOA的病理进程。蠲痹汤是一种有效治疗膝骨关节炎的中医药经典方剂，其疗效机制可能是通过上调关节淋巴回流功能实现的。     

腰痹通胶囊对退变腰椎间盘Ⅱ型胶原含量和 TNF-α、IL-1βmRNA 表达的影响

目的：观察腰痹通胶囊对兔退变腰椎间盘Ⅱ型胶原含量和TNF-α、IL-1βmRNA表达的影响。方法：采用纤维环针刺法复制兔腰椎间盘退变动物模型。造模成功后,将48只新西兰大白兔随机分为腰痹通、腰痛宁、美洛昔康、模型对照组4组,给药6周,处死后取退变的腰椎间盘,采用免疫组化染色法测定Ⅱ型胶原含量,RT-PCR法检测TNF-α、IL-1βmRNA的表达情况。结果：腰痹通、腰痛宁组Ⅱ型胶原的含量较美洛昔康和模型对照组均有明显提高,相比差异具有统计学意义（F=9．41,P=0．008〈0．01）。与模型组比较,腰痹通、腰痛宁、美洛昔康组TNF-α、IL-1βmRNA的表达均下调（F=10．32,P：0．006〈0．01）;腰痹通、腰痛宁、美洛昔康组TNF-α、IL-1βmRNA的表达比较差异没有统计学意义（F=3．26,P=0．086〉0．05）。结论：腰痹通胶囊提高了椎间盘中Ⅱ型胶原的含量,并下调了TNF-α、IL-1βmRNA的表达,减少了炎症介质的合成,这可能是腰痹通胶囊减缓椎间盘退变,治疗椎间盘退行性疾病的机制之一。     

龙血竭对大鼠肺损伤间质过度修复及其TGFβ_1mRNA表达的影响

目的：探讨龙血竭（LXJ）对博莱霉素肺损伤大鼠肺间质过度修复及其TGFβ1mRNA表达的调控作用。方法：60只健康SD大鼠,随机分为生理盐水组（NS）、博莱霉素肺损伤组（BLM）及龙血竭组（LXJ）,每组20只,再分成两亚组,每亚组10只,通过博莱霉素一次性气管内滴入复制肺损伤修复大鼠模型,并在肺损伤修复过程中予龙血竭灌胃干预,分别于14和28天取大鼠肺组织,运用组织芯片,进行HE、胶原纤维染色及免疫组化分别定量肺内炎性细胞数、胶原蛋白、I型胶原,用实时荧光定量RT-PCR技术定量转化生长因子beta（TGFβ1）mR-NA的表达。结果：龙血竭对两时相肺组织的炎症程度和胶原（IOD分别从0.5492±0.2105和0.9578±0.3756降至0.2749±0.1592和0.3181±0.1210）及28天的I型胶原过度沉积（IOD从0.9348±0.3774降至0.5045±0.2796）皆有明显抑制作用（P〈0.05）,对两时相TGFβ1mRNA表达（从0.0219±0.0110和0.0170±0.0157分别降至0.0083±0.0024和0.0062±0.0051）有明显下调的作用（P〈0.05）。结论：龙血竭具有抑制炎症性肺损伤促进修复,并可通过抑制胶原尤其是I型胶原的过度沉积而调控肺损伤肺间质过度修复之作用,后者可能主要与下调肺组织TGFβ1mRNA的表达有关。     

大蒜素对NIH3T3细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究大蒜素对NIH3T3细胞生长增殖和Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗纤维化作用机理。方法 大蒜素加入NIH3T3细胞培养液,以丹参为对照药物,测定H^3-thymidineDNA掺入量;碱消化法检测细胞培养液中羟脯氨酸含量,荧光免疫染色方法检测NIH3T3细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达一结果大蒜素在0．2～5μg／mL剂量范围内剂量依赖的抑制NIH3T3细胞生长和增殖;药物作用后,细胞培养液中的羟脯氨酸含量减少,Ⅰ型胶原蛋白的表达减少。结论 大蒜素对NIH3T3细胞生长增殖有抑制作用,减少细胞胶原的合成,减少Ⅰ型胶原的表达,可能具有抗纤维化作用。     

痔血宁合剂对湿热下注证痔病患者纤维降解和血管增生调控的影响

目的:探讨痔血宁合剂对湿热下注证痔病患者纤维降解和血管增生调控的影响。方法:40例患者随机分为两组,服痔血宁合剂患者纳入痔血宁组,未服中药者设为对照组,取两组患者术后痔组织标本,分别采用Weigert染色观察弹性纤维含量,免疫组化法观察MVD、IV型胶原表达,免疫荧光定量法、Western Blot法检测MMP-9、VEGF mRNA及其蛋白的表达。结果:两组弹性纤维含量无统计学差异(P>0.05),MVD个数、IV型胶原表达有显著性差异(P<0.05);与对照组相比,痔血宁组MMP-9、VEGF mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.01)。结论:痔血宁合剂可降低痔组织中MMP-9、VEGF蛋白含量和表达,抑制新生血管形成,延缓痔支持结构退行性变化。