转录介导融合基因RBM6-RBM5在肿瘤细胞及组织中的表达

目的: 鉴定RBM6-RBM5融合基因的存在,研究其与肿瘤发生的关系。方法:采用GLC20、MDA、MB、231、 Jurkat、TF-1、MCF-7、Hela、BT-474、A431、K562及Raji 10种肿瘤细胞株,肺、卵巢、骨骼肌、皮肤、脾脏、子宫、心脏、骨、脑、淋巴结、胰腺、前列腺及睾丸等肿瘤组织及其相应正常对照组织的cDNA,5例乳腺癌组织,以巢式PCR方法检测融合基因的存在,并通过QPCR方法研究融合基因的产生与RBM6、RBM5基因表达水平之间的关系。结果:RBM6-RBM5融合基因首次在MDA、MB、231细胞株中获得鉴定,序列分析发现该基因为RBM
6和RBM5的融合体,该融合体不包括RBM6的外显子20、21以及RBM5的外显子1。该融合基因在10种肿瘤细胞株及部分肿瘤组织中表达,但在正常组织中却未见表达。融合基因的表达与RBM6和RBM5 mRNA 的表达有关;RBM6和RBM5 mRNA的表达水平在融合基因阳性的肿瘤组织中明显高于融合基因阴性的肿瘤组织。结论:融合基因的表达与肿瘤发生有关,高水平的RBM6和RBM5 mRNA水平可能是融合基因产生的原因之一。 
［关键词］ RNA结合基序蛋白; 转录介导融合基因;肿瘤细胞,培养的     

Angiostatin基因对C6胶质瘤体内生长的抑制作用

目的:研究血管生成抑制因子angiostatin对C6胶质瘤体内生长的影响。方法:以阳离子脂质体介导将angiostatin基因导入C6胶质瘤细胞,G418(1000μg/m1)克隆筛选、扩大培养后接种于裸小鼠皮下,观察移植瘤生长的体积、重量变化及肿瘤抑制率,应用SABC免疫组化技术检测肿瘤微血管密度。结果:angiostatincDNA对体内生长的胶质瘤有显著抑制作用,抑瘤率可达82.2%(P<0.01),转染组胶质瘤中微血管密度眼(6.8±2.1)/HP演低于对照组眼(16.7±4.8)/HP演(P相似文献   

脂质体介导B7基因在C6胶质瘤细胞中表达的实验研究

目的 通过脂质体介导基因转移方法,将含B7基因的重组逆转录病毒表达质粒导入C6细胞中。使之能有效的表达B7分子,探索胶质瘤免疫基因治疗的新方法。方法 用脂质体将pLXSN—B7重组表达质粒导入Wistar大鼠胶质瘤细胞系C6中,经G418筛选出阳性克隆。通过PCR、狭缝杂交及B7单克隆抗体免疫荧光方法检测B7基因在C6细胞中的整合、转录及表达情况。结果 PCR可从B7基因转导的C6细胞(C6pLXSN-B7)基因组中扩增出0．8 kb的B7基因片断;以B7为探针狭缝杂交显示C6pLXSN—B7细胞中有B7基因的转录;以抗-B7单克隆抗体进行的免疫荧光检测显示C6pLXSN—B7细胞表面有B7分子的表达,而对照组肿瘤细胞(C6pLXSN、C6)则无B7分子的表达。结论 脂质体介导B7基因转移方法可将B7基因完整整合到C6细胞基因组中并使之能稳定、有效的表达。     

RAD_（24）基因在多种细胞系及大鼠组织中的表达

ＲＡＤ＿（２４）基因在多种细胞系及大鼠组织中的表达朱应葆，傅欣，韩云，童坦君（北京医科大学第三医院中心实验室１０００８３北京医科大学生物化学与分子生物学系）ＤＮＡ修复系统缺陷会使细胞灯损伤因素（如紫外线、Ｘ线、致突变剂等）极其敏感，使细胞的分裂行为和...     

逆转录病毒介导的MTS1基因在人膀胱癌细胞中的表达

逆转录病毒介导的ＭＴＳ１基因在人膀胱癌细胞中的表达袁建林１，惠宏襄２，黄斌３，柴玉波２，于茂生１，王成济２（１第四军医大学西京医院泌尿外科，西安７１００３３，２第四军医大学分子生物学和生物化学教研室３西安空军电讯工程学院医院）关键词逆转录病毒载体ＭＴ...     

外源P16基因对人类恶性脑胶质瘤细胞系活性的影响

①目的探讨5型腺病毒载体（Ad5）携带P16基因对恶性脑胶质瘤细胞系T／905生长状态的影响。②方法免疲组织化学法测定P16蛋白表达；甲基噻唑基四唑法测定恶性脑腱质瘤细胞系生长状态及感染病毒细胞克隆形成数的测定。③结果重组体腺病毒能介导P16外源基因在恶性脑肢质瘤细胞系TJ905细胞中阳性表达，6天时肿瘤经胞生长抑制率为98％，并且能显著地抑制肿瘤细胞的克隆形成能力。④结论腺病毒介导P16基因能在肿瘤细胞中表达，并能明显抑制肿瘤细胞生长的状态。     

逆转录病毒介导的SHP-1基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达

目的 构建逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1.获取重组逆转录病毒.并将SHP-1基因转导入乳腺癌MDA-MB-231细胞株.方法 采用RT-PCR方法从高表达SHP-1的人乳腺癌细胞株MCF-7中克隆出SHP-1基因全长cDNA,构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,通过脂质体介导将其转染入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定产病毒的细胞株,将病毒感染人乳腺癌细胞MDA-MB-231.采用Western blotting方法检测SHP-1基因在MDA-MB-231细胞中的表达情况.结果 成功构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,转染包装细胞PT67,筛选出对G418具有稳定抗性的克隆PT67/SHP-1,获取重组逆转录病毒上清液,并感染人乳腺癌细胞MDA-MB-231.从蛋白水平证实,感染后的MDA-MB-231有SHP-1基因的表达.结论 将SHP-1基因定向克隆入逆转录病毒载体的方法可成功获取重组逆转录病毒,感染MDA-MB-231细胞得到稳定表达SHP-1基因MDA-MB-231/SHP-1,为进一步研究奠定了基础.     

榄香烯对大鼠胶质瘤C6细胞Bcl-2家族基因及蛋白表达的影响

目的探讨莪术提取物-榄香烯诱导大鼠胶质瘤C6细胞系凋亡机制及其对Bcl2家族基因及蛋白质表达的影响。方法应用RTPCR、Westernblot方法检测榄香烯在0、20、40、60、80μg/ml浓度及作用时间为12、24、36、48、72h时处理的大鼠胶质瘤C6细胞系,利用流式细胞仪观察细胞的凋亡、细胞增殖的变化和Bcl2家族基因及蛋白质表达的变化。结果经榄香烯20、40、60、80μg/ml处理大鼠胶质瘤C6细胞48h后,单视野细胞计数分别为(536±9)个、(375±10)个、(246±9)个、(112±10)个,与浓度为0μg/ml时单视野细胞计数(625±12)个相比体外增殖抑制效应比差异有统计学意义(F=1292.416,P<0.05)。经不同浓度榄香烯处理后C6细胞凋亡率分别增加到(27±2)%、(29±4)%、(32±3)%、(35±5)%,同时有亚二倍体凋亡峰,即Ap峰出现。榄香烯可明显下调Bcl2/Bclx/l基因及蛋白质表达,且该作用呈浓度、时间依赖性,而对Bax基因及蛋白质无明显影响。结论下调Bcl2/Bclx/l基因及蛋白质表达可能是榄香烯诱导凋亡、抑制C6细胞增殖的主要机制。     

腺病毒介导PTEN基因对胶质瘤血管生成和肿瘤生长的影响

目的 :探讨 PTEN 对人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长的抑制作用。 方法 :用含 PTEN基因的重组腺病毒载体Ad PTEN,体外转染人胶质瘤细胞 U87,Western印迹分析检测其表达 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜实验检测其对血管生成的作用 ,体内实验检测腺病毒对肿瘤体积的影响 ,同时以免疫组化法检测 因子相关抗原和基质金属蛋白酶 (MMP- 2 )的表达 ,并与U87组 (不予任何处理 )和 Ad X- gal转染组相比较。结果 :U87转染 Ad PTEN腺病毒后 PTEN表达上调 ,U87组的血管指数、体内肿瘤体积、 因子相关抗原和 MMP- 2的表达病理指数均显著多于 Ad X- gal和 Ad PTEN组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1 )。结论 :PTEN可抑制肿瘤血管生成 ,并抑制体内肿瘤的生长。提示 PTEN可作为有效的抗胶质瘤血管生成与肿瘤生长治疗基因     

逆转录病毒载体介导的人IFN—r基因在膀胱癌细胞中的表达

逆转录病毒载体介导的人ＩＦＮ－ｒ基因在膀胱癌细胞中的表达辛军王晓雄王鑫冯东晓李春海孟书礼本课题为“九五”全军医药卫生科研基金资助项目作者单位：１００８５３北京中国人民解放军总医院泌尿外科（辛军、王晓雄、孟书礼）；中国人民解放军军事医学科学院基础医学研...     

重组逆转录病毒介导的人载脂蛋白AI基因在肌源细胞中的表达

目的 探索一种安全有效的载脂蛋白ＡＩ基因表达系统。方法 构建含人载脂蛋白ＡＩ ｃＤＮＡ的双顺反子逆转录病毒载体ｐＬＡＥＮ,用其转化小鼠原代肌母细胞及肌源性细胞Ｃ２Ｃ１２,ＥＬＩＳＡ法检测细胞液中人载脂蛋白ＡＩ的含量。结果 转化后的小鼠原代肌母细胞及Ｃ２Ｃ１２细胞在分化为肌管细胞后均获得异源表达人载脂蛋白ＡＩ的能力;而且经Ｇ４１８筛选也获得稳定转化的Ｃ２Ｃ１２细胞株,３０天后仍保持有效表达人载脂蛋白     

外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:研究IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞增殖活性及相关基因表达的影响. 方法:用流式细胞仪观察C6/IL-18细胞周期、增殖指数的变化;用RT-PCR,蛋白印迹、免疫细胞化学方法分析C6/IL-18细胞cyclin D1,cyclin B1,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达. 结果:与亲代C6细胞相比,C6/IL-18细胞表现为G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,细胞增殖指数(PI)降低. C6/IL-18细胞的cyclin D1和cyclin B1,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低. 结论: 外源性IL-18基因可降低C6细胞的增殖活性,其机制可能与Bcl-2,cyclin B1和cyclin D1表达下调有关.     

靶向survivin基因RNAi沉默表达对恶性胶质瘤细胞侵袭的影响

目的 探讨存活素(survivin)基因对胶质瘤细胞侵袭的影响和可能机制.方法 应用survivin基因小干扰RNA(siRNA)转染处理胶质瘤SNB19细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测survivin基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞集落生长数和侵袭力.采用Western blot 方法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)蛋白水平.结果 survivin siRNA转染组细胞的survivin基因mRNA和蛋白水平明显下调.转染组胶质瘤细胞集落生长数和癌细胞穿膜细胞数明显下调,且与浓度相关.转染组癌细胞uPA蛋白水平明显下降.结论 Survivin基因在胶质瘤细胞侵袭中起着重要作用,采用靶向survivin siRNA转染可抑制其侵袭能力.其机制可能与下凋uPA基因表达有关.     

反义GFAP对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5增殖及分化的影响

目的观察抑制内源性胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)基因表达对恶性胶质瘤细胞生物学特性的影响,为进一步深入研究GFAP基因在胶质瘤恶性转化及诱导分化治疗中的作用提供实验基础.方法构建反义GFAP 逆转录病毒表达载体,经包装后以病毒上清感染人恶性胶质瘤细胞系CHG-5;采用RT-PCR、原位杂交以及免疫细胞化学方法检测GFAP基因及其蛋白的表达;并通过形态学、细胞生长曲线、软琼脂克隆形成及流式细胞分析等观察抑制GFAP基因表达后CHG-5细胞形态、增殖和细胞周期进程的变化.结果反义逆病毒感染后CHG-5细胞GFAP mRNA及其蛋白表达显著减弱甚至缺失,瘤细胞异型性增加,细胞增殖速度加快,体外成瘤能力增强,S期、G2/M期细胞比例升高.结论抑制内源性GFAP基因表达可使CHG-5细胞呈现更为恶性的表型,提示GFAP基因在调控胶质瘤细胞分化程度及恶性生物学行为方面具有重要作用.     

逆转录病毒载体介导的RNAi抑制Bmi-1基因表达对MCF-7细胞的影响

目的:研究RNA干扰(RNAi)抑制Bmi-1基因表达后对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡和增殖的影响.方法:将表达Bmi-1短发夹RNA(shRNA)的重组逆转录病毒载体pSuper-retro/Bmi-1si瞬时转染MCF-7乳腺癌细胞株,携带针对绿色荧光蛋白干扰序列的载体pSuper-retro/GFPsi作为阴性对照.用RT-PCR和Western Blot分别从mRNA,蛋白水平检测Bmi-1的表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测MCF-7细胞周期和凋亡的变化.结果:pSuper-retro/Bmi-1si明显抑制MCF-7细胞Bmi-1 mRNA及蛋白表达.与空白对照组及阴性对照组相比较凋亡细胞数无明显增加;抑制Bmi-1基因表达使MCF-7细胞G1/S周期转换及细胞增殖速率受抑制.结论:表达shRNA的重组逆转录病毒载体pSuper-retro/Bmi-1si能显著抑制乳腺癌细胞株MCF-7中Bmi-1基因表达,从而有效抑制MCF-7细胞增殖,为乳腺癌的基因治疗提供了实验依据.     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5体内外生长的影响.方法采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG-5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况.结果NDGA可显著抑制CHG-5细胞体外增殖,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,凋亡细胞增加.采用接种后第5天按50 mg/kg腹腔内注射给药,治疗组移植瘤体积较对照组缩小,未见明显的毒副作用.结论NDGA对CHG-5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用,其作用可能与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

Survivin基因沉默对脑胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Survivin基因沉默对脑胶质瘤细胞株C6体外细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法设计并合成针对Survivin基因的siRNA,构建Survivin-shRNA和阴性对照shcontrol慢病毒表达载体并感染脑胶质瘤C6细胞,用Western Blot法检测感染后C6细胞Survivin蛋白表达的抑制率,MTT法观察感染后24、48和72 h细胞增殖的变化,流式细胞术检测感染后48 h细胞凋亡和细胞周期的改变。结果 Survivin shRNA慢病毒载体感染C6细胞后Survivin蛋白的抑制率约为80%,阻滞C6细胞由G1期进入S期,抑制细胞的生长,增加了细胞的凋亡。结论 Survivin shRNA慢病毒表达质粒特异高效地抑胶质瘤C6细胞Survivin基因的表达,阻断C6细胞的细胞周期,抑制其增殖并促进凋亡。     

全反式维甲酸对大鼠C6胶质瘤细胞周期及周期因子表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸对大鼠C6胶质瘤细胞周期及周期因子的影响及其机制。方法:建立大鼠C6脑胶质瘤模型,腹腔注射全反式维甲酸后,流式细胞仪检测细胞增殖时相变化,免疫组化法检测p27kip1蛋白和Cyc-lin D1蛋白表达的变化。结果:治疗组较对照组,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,p27kip1蛋白表达增多,Cyc-lin D1蛋白表达减少。结论:维甲酸处理后,大鼠C6胶质瘤细胞周期发生G1期阻滞,其机制同上调p27kip1蛋白表达及下调Cyclin D1蛋白表达有关。