重组人白细胞介素-6对胶质瘤细胞U87增生侵袭的影响

目的探讨重组人白细胞介素(IL)-6对胶质瘤细胞U87增生、侵袭能力的影响及其机制。方法应用CCK-8法检测IL-6对U87细胞增生的影响并计算增殖率;应用Transwell小室检测IL-6对U87侵袭的影响;应用Western印迹检测IL-6对胶质瘤细胞STAT3蛋白及其磷酸化状态的影响。结果 IL-6能促进U87增生和侵袭能力(P<0.05),并伴随STAT3及p-STAT3蛋白表达上调(P<0.05)。结论 IL-6通过促进胶质瘤细胞STAT3磷酸化,从而促进了胶质瘤细胞的增生侵袭能力,为脑胶质瘤的临床治疗提供了理论支持。     

大蒜素对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与迁移的影响及其机制探讨

目的探讨大蒜素对人脑胶质瘤U251细胞体外迁移侵袭作用的影响及可能机制,为大蒜素在脑胶质瘤治疗中的应用提供依据。方法用高度纯化的大蒜素制剂处理人脑胶质瘤U251细胞（大蒜素组）,应用划痕试验、Tran—swell迁移与侵袭试验、Westernblotting法测定药物处理后U251细胞迁移、侵袭能力变化以及侵袭相关蛋白MMP2、MMP9表达;并与未做干预的对照组比较。结果大蒜素能明显抑制细胞生长,抑制细胞侵袭与迁移,呈量效和时效关系（P〈0．001）,大蒜素组较对照组明显增加（P〈0．001）,有浓度依赖性。结论大蒜素能抑制U251细胞侵袭与迁移,该抑制作用具有时间、浓度依赖性。其作用机制可能为下调人脑胶质瘤U251细胞MMP2、MMP9表达。     

五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响

目的探讨五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法人胶质母细胞瘤株U251置于胎牛血清中培养,分为观察组和对照组。观察组应用五味子多糖作用于人胶质瘤U251细胞,对照组未应用任何药物作用于人胶质瘤U251细胞。四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响。RT-PCR观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞周期素(cyclin)B1 mRNA、原癌基因(c-Myc)mRNA的影响。Western印迹观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞cyclin B1、c-Myc蛋白的影响。结果培养48 h后,观察组不同浓度用药组OD570值均低于对照组,且随着用药浓度的上升,五味子多糖对人胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用逐渐加强趋势。观察组cyclin B1 mRNA、c-Myc mRNA相对表达量均低于对照组(P0.05)。观察组cyclin B1、c-Myc蛋白表达量均低于对照组(P0.05)。结论五味子多糖能够有效抑制人胶质瘤U251细胞增殖,这可能与五味子多糖抑制cyclin B1与c-Myc的表达作用有关。     

氯化甲基汞抗裸鼠皮下U251胶质瘤细胞的体内实验研究

目的 在建立裸鼠皮下U251胶质瘤模型基础上,通过体内实验及相关形态学研究,分析氯化甲基汞(MMC)的抗脑胶质瘤作用.方法 制备裸鼠皮下U251胶质瘤模型,随机分为对照组和实验组,实验组裸鼠注射U251脑胶质瘤细胞1 w后,每天灌胃给予10 mg/kg体重MMC,连续5 d,对照组给予相同体积的生理盐水.全部裸鼠于肿瘤接种后14 d处死.结果 大体病理显示实验组肿瘤体积明显小于对照组,病理组织学观察发现实验组U251胶质瘤细胞生长密度较对照组低,并可见细胞体积变小、核固缩等凋亡的形态学改变.透射电镜显示实验组肿瘤细胞发生核固缩、染色质周边化、核断裂、胞浆空泡变性等改变,实验组瘤体汞含量明显高于对照组.结论 MMC对裸鼠U251胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现的,相关分子机制有待进一步深入研究.     

恶性脑胶质瘤U87细胞系肿瘤干细胞放疗敏感性的体外实验研究

目的探讨脑胶质瘤细胞系U87细胞及其肿瘤干细胞（CSCs）对体外放疗的敏感性。方法应用神经干细胞（NSCs）培养基分离培养形成细胞球克隆,检测细胞球细胞的NSCs特性。采用不同剂量放射线照射U87细胞及其CSCs,应用集落形成实验和生存曲线检测其生存情况。结果 U87细胞在NSCs培养基中形成悬浮的细胞球克隆,具有自我更新和多向分化能力,表达CD133、Nestin;两种细胞的存活率均随照射剂量增加而下降,且CSCs的存活率明显高于U87细胞（P〈0.01）。结论在体外条件下,CSCs的放射敏感性明显低于U87细胞,其可能是恶性脑胶质瘤放疗抵抗的主要原因。     

地喹氯铵对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的探讨地喹氯铵对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法用50、100、200μmol/L的地喹氯铵作用于脑胶质瘤细胞U251、U87、C6,作用时间分别为12、24、48、72、96 h,MTT检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测76μmol/L的地喹氯铵作用48 h后的脑胶质瘤细胞U251的细胞凋亡情况。Transwell小室检测地喹氯铵对脑胶质瘤细胞侵袭能力的影响。Western印迹检测细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达水平。结果 50、100、200μmol/L的地喹氯铵对U251、U87、C6脑胶质瘤细胞增殖均具有抑制作用。地喹氯铵对脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用随着作用时间的增加而增加,随着药物作用浓度的增加而增加。地喹氯铵作用胶质瘤U251、U87、C6细胞48 h的半数抑制浓度由大到小依次为:C6>U87>U251。76μmol/L的地喹氯铵作用后的脑胶质瘤细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。脑胶质瘤细胞经地喹氯铵作用后的侵袭细胞数明显低于对照组(P<0.01)。地喹氯铵作用后的脑胶质瘤细胞中PI3K、Akt的表达水平与对照组相比无明显差异,而p-PI3K、p-Akt的表达水平明显下降。结论地喹氯铵对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭能力具有抑制作用,对脑胶质瘤细胞凋亡具有促进作用,作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

βig—h3对人神经胶质瘤U87细胞侵袭力的影响

目的应用转化生长因子β诱导基因克隆3（βig—h3）真核表达载体pEGFP—C2／βig—h3转染人神经胶质瘤U87细胞,观察βig-h3对U87细胞侵袭力的影响。方法重组质粒pEGFP-C2／βig—h3用脂质体转染人神经胶质瘤U87细胞,采用明胶酶谱法和Transwell小室细胞侵袭实验检测转染后细胞基质金属蛋白酶（MMPs）表达水平和侵袭力的变化。结果与未转染的U87细胞和转染pEGFP—C2空载体的U87／vector相比较,在转染重组质粒pEG-FP-C2／βig-h3的U87／h3细胞中,βig-h3mRNA和蛋白表达均显著增高,U87／h3细胞MMPs表达水平明显提高,细胞侵袭率显著增高（P均〈0．01）。结论βis—h3可促进人神经胶质瘤U87细胞分泌MMPs,从而增强细胞的侵袭力,与神经胶质瘤的侵袭和转移密切相关。     

RNA干扰靶向XIAP对人脑胶质瘤细胞U251的生物学行为影响

目的 采用RNA干扰技术(RNAi)抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP),观察抑制前后人脑胶质瘤细胞U251的生物学行为.方法 DNA重组技术合成针对人脑胶质瘤U251细胞XIAP基因三条siRNA(siRNA1,siRNA2,siRNA3),以脂质体2000作为载体进行转染,RT-PCR法检测XIAP的mRNA表达,选择特异性较高的siRNA,以此 siRNA为标准建立20 nmol/L、30 nmol/L、50 nmol/L3个浓度梯度,转染细胞,Western blot 检测XIAP基因的蛋白表达,选出最低有效浓度;流式细胞仪检测抑制前后细胞周期和凋亡率.结果 siRNA成功转染了人脑胶质瘤细胞U251,转染率达到80%以上;RT-PCR检测siRNA2特异性较高;Western-blot检测终浓度为30 nmol/L的siRNA抑制效率较高;流式细胞仪检测停滞在G0/G1期的细胞增多,在S期的细胞减少,并且细胞的凋亡率增加.结论 通过RNA干扰可以抑制人脑胶质瘤U251细胞XIAP的表达,促进人脑胶质瘤细胞凋亡,从而抑制细胞的生长.     

辛伐他汀体外对人U251脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察辛伐他汀体外对人U251胶质瘤细胞增殖及诱导其凋亡的作用。方法对照组和实验组分别行辛伐他汀干预,培养24、48、72、96 h,采用MTT比色法和流式细胞仪检测不同浓度及不同时间干预后人U251胶质瘤细胞增殖活性和细胞周期的变化;采用TUNEL法检测干预后细胞凋亡的情况及RT-PCR检测对照组和实验组在干预48 h后检测Caspase-3的表达。结果辛伐他汀体外可明显降低人U251胶质瘤细胞增殖活性及诱导其凋亡,浓度到达1.0μmol/L时抑制作用明显,与对照组相比具有显著性差异(P0.05)。此外,辛伐他汀对人U251胶质瘤细胞的生长抑制呈明显的量-效关系。人U251胶质瘤细胞凋亡随药物浓度增加而显著,Caspase-3的表达亦呈剂量依赖关系。结论辛伐他汀在体外可一定程度上抑制人U251胶质瘤细胞的增殖及诱导其凋亡,Caspase-3参与细胞的凋亡过程。     

初步探索DIM-C-pPhOH（ NR4A1拮抗剂）对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用及作用机制

目的探索DIM-C-pPhOH（NR4A1拮抗剂）对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其作用机制，以及对于胶质瘤小鼠模型生存期及肿瘤生长的影响。 方法不同浓度DIM-C-pPhOH处理胶质瘤细胞系（GL261、U251、U118）48 h后，用CellTiter法检测细胞活性及IC₅₀；采用划痕实验和3D-invasion实验检测DIM-C-pPhOH对U251细胞系侵袭迁移作用的影响；通过腹腔注射该化合物治疗小鼠胶质瘤模型，观察DIM-C-pPhOH对于小鼠胶质瘤生长以及生存期的影响。 结果U251、GL261和U118胶质瘤细胞系经DIM-C-pPhOH处理48 h后，细胞活性随药物浓度增加显著降低，IC₅₀分别为5.76、6.87、9.93 μmol/L；U251细胞系经10 μmol/L DIM-C-pPhOH处理后其迁移和侵袭能力显著下降；同时DIM-C-pPhOH可以抑制由TGF-β诱导的NR4A1出核表达；小鼠胶质瘤模型中DIM-C-pPhOH治疗组生存期延长，肿瘤生长受到抑制。蛋白免疫印迹显示DIM-C-pPhOH可以明显抑制Akt、P70S6K蛋白表达，通过抑制PI3K/Akt/mTOR/p70s6k信号通路，诱导细胞自噬发生。 结论DIM-C-pPhOH可以抑制胶质瘤的迁移及侵袭能力，延长小鼠胶质瘤模型的生存期并抑制肿瘤生长，作用机制可能与DIM-C-pPhOH诱导细胞发生自噬有关。     

MGMT反义RNA对人脑胶质瘤细胞系U251／BCNU耐药性逆转的研究

为逆转胶质瘤的耐药性，模拟临床亚硝基脲类药物的用药程序，在体外建立由MGMT介导的人脑胶质瘤耐药细胞系U251／BCNU，并进行细胞耐药性检测和细胞中MGMTmRNA表达的分析；观察MGMT反义RNA对U251／BCNU细胞MGMT表达的调节作用及对U251／BCNU细胞BCNU敏感性的影响。经过5次用药过程，首次在体外成功地建立了对BCNU具有稳定抗性的U251／BCNU，其对BCNU的耐受程度约为U251的17倍；RT－PCR结果显示，U251／BCNU细胞有MGMTmRNA的表达。MGMT反义RNA的表达载体pLaMT5SN和pLaMTSN能够在一定程度上降低U251／BCNU细胞中MGMTmRNA的表达水平，提高其对BCNU的敏感性。认为MGMT反义RNA能够在一定程度上抑制MGTMT的表达水平，提高肿瘤细胞对亚硝基脲类药物的敏感性。     

CD105与人脑胶质瘤肿瘤血管生成关系的研究进展

<正>人脑胶质瘤是颅内原发性肿瘤中发病率最高的肿瘤,生长迅速且呈恶性侵袭性发展,虽可采用手术切除、放化疗以及生物治疗等多方案对肿瘤进行干预,但肿瘤仍可在短时间内复发及远处转移,严重威胁患者的生命安全,至今仍是神经外科最棘手的问题〔1〕。广泛间质微血管形成是胶质瘤生长的生物学基础,在侵袭和转移过程中起关键作用,而近年来的大量实验研究表明,内皮细胞增殖标记物CD105与泛内皮细胞标记物如CD31、CD34、FⅧRAg等不同的是:CD105仅在处于增殖状态的     

HCMV感染对人神经胶质瘤细胞HOXB1～4及HOXB9基因表达影响的研究

目的　研究人神经胶质瘤U2 5 1细胞株的HOXB基因表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对U2 5 1细胞HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB9基因表达的影响 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。方法　应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术检测U2 5 1细胞感染HCMV和 /或全反式维甲酸 (ATRA)处理前后HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4和HOXB9基因的相对表达水平。结果　U2 5 1细胞表达HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB9基因 ;HCMV感染后 ,U2 5 1细胞HOXB1基因表达明显上调 ,HOXB2和HOXB4基因表达轻微上调 ,HOXB3基因于HCMV感染后表达被抑制 ,HOXB9基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化 ;ATRA能显著上调HCMV感染后U2 5 1细胞HOXB1基因的表达。结论　HCMV感染能诱导U2 5 1细胞HOXB基因表达改变 ,HCMV有可能通过调控HOXB基因表达异常引起胚胎发育畸形。     

低剂量辐射对荷人胶质瘤(U251)裸小鼠移植瘤细胞凋亡相关基因蛋白Bcl-2表达的影响

目的研究低剂量辐射对荷人胶质瘤（U251）裸小鼠移植瘤细胞凋亡相关基因蛋白Bcl-2表达的影响。方法对荷人胶质瘤裸小鼠进行全身深部X射线照射，采用免疫组化技术检测荷人胶质瘤裸小鼠移植瘤组织的Bcl-2蛋白表达水平。结果D1（75mGy）照射后，胶质瘤细胞的Bcl-2蛋白表达呈下降趋势，与假照组（0mGy）比，无显著差异（P〉0．05）；D2（4Gy）组、D1＋D2组的Bcl-2蛋白表达明显减少，与假照组（0mGy）比有统计学差异（P〈0．05）；而D1＋D2组与D2组比较，有统计学差异（P〈0．05），以D1＋D2组Bcl-2蛋白的表达减少更为显著。结论低剂量辐射在一定程度上可能下调了胶质瘤细胞的Bcl-2蛋白的表达，同时对其后的大剂量辐射有协同作用。     

Endoglin蛋白对恶性胶质瘤内皮细胞的影响

恶性胶质瘤是老年患者中最为常见的原发性肿瘤〔1〕,其感染部位特殊且极具侵袭性,通过手术或放/化疗均不能取得理想的效果,因此复发率高、生存期短〔2〕。新生血管是肿瘤增殖的基础,也是侵袭和转移的根基,同时胶质瘤也是血管化程度最高的肿瘤之一,因此靶向抑制胶质肿瘤血管生成是目前研究     

立体定向引导125Ⅰ间质内放疗治疗胶质瘤的现状

胶质细胞瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,其发病率约占全部颅内肿瘤的33.3%～58.6%,多数为高恶度胶质瘤,由于其具有侵袭性和侵润性且生长速度快等特点,患者预后不能令人满意,虽经积极的手术、放射治疗和化学治疗,大部分胶质瘤患者的存活期在诊断后2 a以内.对手术并放化后复发的患者更无有效治疗方法.     

立体定向引导125I间质内放疗治疗胶质瘤的现状

胶质细胞瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，其发病率约占全部颅内肿瘤的33．3％-58．6％，多数为高恶度胶质瘤，由于其具有侵袭性和侵润性且生长速度快等特点，患者预后不能令人满意，虽经积极的手术、放射治疗和化学治疗，大部分胶质瘤患者的存活期在诊断后2a以内。对手术并放化后复发的患者更无有效治疗方法。     

不同U87细胞数量对裸鼠原位恶性胶质瘤模型构建的影响

目的 观察不同数量的人恶性胶质瘤U87细胞对裸鼠原位恶性胶质瘤模型构建的影响。方法 将20只裸鼠随机分成A、B、C、D组各5只,于右侧纹状体分别注射0、0.05×105、0.2×105、1×105/μL的U87细胞悬液5μL。接种前及接种后4周称取体质量,接种4周后取脑组织测量肿瘤体积,并行脑组织病理检查。结果 接种后4周,D组体质量较A组降低(P<0.05),其他组间无统计学意义。A组无肿瘤形成,脑组织病理检查未见异常;B、C、D组均可见肿瘤组织,细胞核中Ki-67蛋白表达强阳性;肿瘤体积分别为(1.57±0.09)、(4.25±1.15)、(16.32±0.41)mm3,组间比较,P均<0.05。结论 U87细胞颅内接种可构建原位恶性胶质瘤模型,且接种细胞数量越多建模效果越好。     

U251和U87细胞的Ezrin蛋白生物信息学分析

目的 应用生物信息学方法分析Ezrin蛋白的功能、结构域,探讨胶质瘤细胞U251和U87浸润性生长的机制.方法 Transwell检测U251和U87细胞的迁移侵袭能力.RT-PCR钓取U251和U87细胞Ezrin基因,TA克隆后测序.应用Basic Local Alignment Search Tool(nucleotide blast及blastx)分析Ezrin基因与GenBank登录的Ezin的相似性及氨基酸变异,EBI＞ Tools＞ Protein,SWISS-MODEL,SWISS-PDB Viewer分析Ezrin蛋白功能、结构域并建模观察其空间结构及变异氨基酸的位置.结果 Transwell检测结果显示穿过膜底面的U87细胞为(35.5±6.89)个,明显高于U251细胞[(13.3±3.01)个](P＜0.001).RT-PCR扩增产物为l 700 bp,与Ezrin基因的大小相符,TA克隆后XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切选取阻性质粒测序.分析显示,U251和U87细胞Ezrin基因序列与GenBank登陆序列的相似性为99％,U251细胞Ezrin基因序列中有一个位点突变,U87细胞有5个位点;U251细胞Ezrin蛋白第407位氨基酸变异,U87细胞Ezrin蛋白第66、258、265和577位变异.EBI＞Tools＞ Protein在线分析Ezrin蛋白功能,与U251细胞Ezrin匹配的蛋白有362个,与U87细胞Ezrin匹配的蛋白却有1 503个;Ezrin的结构分析显示,蛋白质结构数据库PDB中U87细胞Ezrin的数量多于U251细胞,而蛋白质结构等级分类显示的结构域的结构分级和分层分级相同;U87细胞Ezrin的结构域有45个,而U251细胞的Ezrin只有5个.SWISS-MODEL分析,U87细胞Ezrin的3D空间结构有8处与U251细胞的不同,QMEAN4评分UJ87细胞Ezrin低于U251细胞.SWISS-PDB Viewer显示U87细胞Ezrin第258、265位氨基酸相对位于空间结构的内侧.结论 胶质瘤细胞U87的迁移浸润能力强于U251.U87细胞和U251细胞Ezrin基因序列与GenBank登录的相似性达99％,U87细胞Ezrin氨基酸变异多于U251细胞,导致其功能、结构域及空间结构不同.Ezrin蛋白影响U87、U251细胞的迁移和浸润.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACsi)对脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法 2.0、5.0、10.0、20.0和40.0 nmol/L HDACsi MS-275与U251人胶质瘤细胞共同孵育48 h后,通过CCK-8法检测U251细胞增殖能力的变化、Tranwell小室检测MS-275对U251细胞迁移能力的影响、Annexin V-PI双染色法检测U251细胞凋亡程度。结果 MS-275处理48 h后,与空白组相比,各浓度组U251人胶质瘤细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞的迁移能力显著降低,细胞凋亡率明显升高;随着MS-275浓度的增加,其抑制U251细胞增殖和迁移的能力、诱导U251细胞凋亡的能力逐渐增强。结论 HDACsi MS-275能抑制U251人胶质瘤细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡,MS-275有望成为胶质瘤的新手段。