胆红素氧化酶法测定血清结合胆红素

介绍使用国产胆红素氧化酶和二牛磺酸胆红素校准物建立血清结合胆红素测定方法。测定缓冲液为０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸盐缓冲液（ｐＨ＝５．０），胆红素氧化酶浓度５００Ｕ／Ｌ，反应（终点）时间１５分钟。本法线性范围可达２４０μｍｏｌ／Ｌ，批内不精密度＜１０％，回收率为９８．３％～１０７．１％，与重氮方法比较，回归方程为Ｙ（酶法）＝０．９５６Ｘ（重氮法）－０．５１３。本法测定人血清结合胆红素参考值２．５７±２．５６μｍｏｌ／Ｌ（ｎ＝９５）。     

胆红素氧化酶法测定血清结合胆红素

介绍使用国产胆红素氧化酶和二牛磺酸胆红素校准物建立血清结合胆红素测定方法。测定缓冲液为０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸盐缓冲液（ｐＨ＝５．０），胆红素氧化酶浓度５００Ｕ／Ｌ，反应（终点）时间１５分钟。本法线性范围可达２４０μｍｏｌ／Ｌ，批向不精密度＜１０％，回收率为９８．３％～１０７．１％，与重氮方法比较，回归方程为Ｙ（酶法）＝０９５６Ｘ（重氮法）－０．５１３。本法测定人血清结合胆红素参考值２．５７±２．５     

用Triton X－100作加速剂测定胆红素

本文应用Ｔｒｉｔｏｎｘ─１００作为加速剂，利用重氮试剂配制成单一测定Ｔ．Ｂｉｌ试剂。该试剂能适用于自动生化分析仪和手工测定Ｂｉｌ，最大吸收波长５４８ｎｍ，摩尔吸光系数ε＝７１．６×１０￣３，胆红素在３０７．８μｍｏｌ／Ｌ内线性良好，平均回收率１００．８５％，批内ＣＶ＝１．１０４％，血清中Ｈｂ≥５ｇ／Ｌ时，ＴＧ≥８ｍｍｏｌ／Ｌ时对Ｂｉｌ测定产生明显影响。经与Ｔｒａｃｅ试剂实验对照，γ＝０．９９８７．ｔ＝０．０２９４，Ｐ＞０．０５。γ＝０．９２２２．ｔ＝０．０９１．Ｐ＞０．０５。     

钒酸氧化法测定血清总胆红素和结合胆红素

评价一种测定血清总胆红素和结合胆红素的方法－钒酸氧化法。本地操作简便，基本丰无溶血干扰，无叠氨钠影响，且试剂稳定。总胆红素批内不精密度０．４４％～０．８２％，日间１．６３％～２．９２％；结胆批内不精密度０．３５％～２．９１％，日间２．８４％～３．０％。测定总胆红素的准确度好，在６８４umol/Ｌ内线性较佳，测定ＢＣ的准确稍 差，在２０５umol/Ｌ内线性还欠佳。     

高碘酸钠氧化法测定血清总胆红素

目的 引进高碘酸钠测定血清总胆红素的方法。方法 利用高碘酸钠将胆红素氧化成胆绿素，在４５０ｎｍ处吸光度下降与样品中胆红素含量成正比的原理，通过对试剂配方和实验条件进行优选，建立了一种工作液稳定，不受一般溶血、脂血影响的血清总胆红素测定方法。结果 分别对高值和低值胆红素血清各１份进行测定，批内ＣＶ０．５２％和０．６８％，批间ＣＶ１．３６％和２．４５％，总ＣＶ１．３５％和２．５６％；方法线性达３５６．     

化学氧化法测定血清直接胆红素试剂的研制

利用过硫酸钾为氧化剂,在含有稳定剂的Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ缓冲液条件下,仅使血清中结合胆红素被氧化,以此作直接胆红素测定,本法与改良Ｊ－Ｇ法（Ｘ１）和胆红素酶法（Ｘ２）的直接胆红素测定相关良好,分别Ｙ＝１．０４７Ｘ１＋１．１２０,ｒ＝０．９８９６;Ｙ＝１．０３９Ｘ２＋１．５６７,ｒ＝０．９８３１。线性为０～３５０μｍｏｌ／Ｌ,低、中、高血清标本的ＣＶ值批内为３．４２％、３．２６％;２．０４％２．０４％批间为４．９７％;３．８４％,３．１８％,平均回收率１０５．６％,血红蛋白,维生素Ｃ干扰不明显,结论：化学氧化法测定结果的准确性和精密度均条例临床要求。     

二甲亚砜双试剂法测定血清胆红素

血清标本的色泽及脂浊度对胆红素测定结果有较大干扰，用双试剂两点终点法是消除此类干扰的理想方法。二甲亚砜（ＤＭＳＯ）是胆红素的优良溶剂，可破坏非结合胆红素的氢键，加速胆红素与重氮试剂的反应。通过实验我们建立了双试剂测定血清胆红素的自动分析方法，具有除干扰能力强，重复性好，与改良Ｊ－Ｇ法有较好的一致性，试剂配制简单，稳定期长等优点，现介绍如下。１材料和方法１．１仪器日立７１７０全自动生化分析仪，ＵＶ－７５４分光光度计。１．２试剂配制１．２．１总胆红素（ＴＢ）测定试剂配制试剂Ｉ（Ｒ１）：量取ＤＭＳＯ …     

重氮试剂消除胆红素对胆固醇酶法测定的干扰

应用酶法测定胆固醇 ,胆红素对结果有明显负干扰。我们在黄疸血清中先加入重氮试剂 ,使胆红素转化成偶氮胆红素后 ,再与胆固醇酶试剂反应显色 ,有效地消除了胆红素的影响。现介绍如下。1　材料与方法1 1　试剂　总胆固醇酶法测定试剂盒 (东瓯公司产品 )。咖啡因 苯甲酸钠试剂     

一种测定总胆红素的新方法

[目的]建立一种快速、简便、稳定、高灵敏度，适应于血清、血浆测定的总胆红素的新方法。[方法]用聚氧乙烯月桂醚（Brij-35）作为加速剂使结合胆红素与未结合胆红素同重氮对氨基苯磺酸反应，形成偶氮胆红素。[结果]本试剂测定中的总胆红素，在样品加入试剂后5min显色达到终点，显色后最少可稳定3h不退色，试剂空白与水接近。反应成色后最大吸收峰在510nm，线形范围可达324nmol／L，回收率97．2％-102；4％。批内变异系数（CV）为0．58％，与复星长征总胆红素试剂相关性良好。Y=0．976X＋0．862r=0．999P〉0．05。[结论]本方法测定总胆红素具有操作快速、简便，结果稳定等优点，适用于血清及血浆总胆红素的手工测定及自动化分析。     

血清结合胆红素的酶法测定

目的 建立用胆红素氧化酶（ＢＯＤ）作为催化剂，选择性地测定血清结合胆红素（ＣＢ）的新方法。方法 测定条件为：０．１ｍｏｌ／Ｌ甘氨酸缓冲液、ｐＨ１０．０，ＢＯＤ活性０．５～０．８Ｕ／反应管，反应时间２分钟。结果 线性至少可达到２２０μｍｏｌ／Ｌ；精密度为批内ＣＶ１．７１～３．９８％、批间ＣＶ８．０～９．７２％；正常参考值范围为０～３．１４μｍｏｌ／Ｌ；与偶氮法所测结果相关性较好。结论 本文所建立的Ｃ     

三种应用于自动生化分析仪的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C试剂的分析性能验证

目的 对3种应用于自动生化分析仪的颗粒增强免疫透射比浊法(PETIA)检测血Cys C试剂进行分析性能验证,并初步应用于临床.方法 在OlympusAU2700自动生化分析仪上对上海景源、北京利德曼和北京九强公司生产的颗粒增强免疫透射比浊法(PETIA)Cys C试剂(标为A、B、C)进行性能验证,参考CLSI EP6...     

尿素酰基裂解酶酶偶联法测定血清总钙

目的 介绍尿素酰基裂解酶酶偶联测定血清总钙的方法。方法 双试剂两点法；缓冲液为三乙醇胺（TEA，pH8.0,200mmol/L）；试剂I：含NaHCO326.0mmol/L,NADPH 0.4mmol/L,α－酮戊二酸8.0mmol/L，尿素酰基裂解酶115U／L，GLDH43．0kU/L；试剂Ⅱ：含NaCO3 26.0mmol/L,ATP6.2mmol/L。结果 方法线性范围为0．5－5．0mmol/L，批内和批间平均变异系数分别为2．13％和2．69％。平均回收率为102．7％ 。本法（Y）与邻甲酚酞络合酮法（OCPC法，X1）比较：r＝0．981，Y1＝1．02X1－0．021，与偶氮胂Ⅲ法（X2）比较：r＝0．978，Y＝0．99X2＋0．03。血清胆红素高达300μmol/L，血红蛋白4g/L，镁2.5mmol/L，NH4^ 2.0mmol/L,Trig 8.0mmol/L对本法无明显干扰。结论 本法具有简便、准确、快速，适用于自动分析等特点。     

参照EP方案在不同检测系统评价尿微量白蛋白试剂的分析性能

目的 通过不同检测系统测定尿微量白蛋白的分析性能评价,以探讨新成生物公司尿微量白蛋白测定试剂盒与英国朗道测定试剂盒在分析性能上的差异.方法 在同一台全自动生化分析仪上,同时对两个检测系统的正确度、精密度、最低检测限、测定范围、方法学比对共五项性能指标进行评价.结果 在正确度实验,新成和朗道试剂的相对偏差分别都小于10%.精密度试验,两种试剂的批内CV分别都小于5%.两种试剂的检测低限分别为：0.87mg/L、0.27mg/L.线性试验结果,新成试剂的回归方程和相关系数分别为：Y＝0.9827X＋0.5455,R2＝0.9987（浓度范围0～400mg/L）,朗道试剂的回归方程和相关系数分别为：Y＝1.0356X-0.9091,R2＝0.9996（浓度范围0.0～202.8mg/L）,新成试剂的测定范围更广.方法 比对试验,试验结果表明两种试剂相关性良好,回归方程和相关系数分别为：Y＝1.2555X-1.6888,R2＝0.9976.结论 两种检测系统对尿微量白蛋白的测定能得到一致的结果,其性能指标均能满足临床使用要求,无明显差异.     

Enzymatic determination of bilirubin fractions in serum

Novel enzymatic methods using bilirubin oxidase from Myrothecium verrucaria are described for the determination of bilirubin fractions in serum. These fractions include an unconjugated form (Bu), a conjugated form (Bc), and a delta fraction of bilirubin that reacts with direct diazo reagent and is irreversibly bound to serum albumin (Bδ). The determination is based on the different reactivities of the enzyme to bilirubin fractions at different pH in the presence or absence of anionic detergent such as sodium dodecyl sulfate (SDS) or sodium cholate. Thus, in the absence of detergents, Bc and Bδ are oxidized at acidic pH, while Bc is oxidized at alkaline pH; Bu is not oxidized at either acidic or alkaline pH.

The first approach is based on measuring the decreased absorbance of bilirubin colour at 450 nm caused by the enzymatic oxidation. Total bilirubin is measured at pH 8.0 in the presence of SDS. Direct bilirubin is measured at pH 3.7 and Bc is measured at pH 10.0 in the absence of SDS, respectively.

The second approach is made by coupling the diazo reaction with the enzyme reaction. Total and direct bilirubin are determined by a conventional diazo method without prior treatment by the enzyme. Bδ is determined with a direct diazo method after the serum sample is treated at pH 10.0 by the enzyme to oxidize the Bc fraction. The precision and the accuracy of these methods were compared with a precision and the accuracy of these methods were compared with a diazo method, an HPLC method and a slice method, and good results were obtained.     

尿酸原装试剂与国产试剂性能对比研究

目的研究国产尿酸试剂取代原装试剂在奥林巴斯AU-640全自动生化分析仪上应用的可行性。方法通过考察国产尿酸试剂的精密度、线性范围、干扰实验等产品性能,并与原装试剂在奥林巴斯AU-640全自动生化分析仪上做临床比对实验。结果国产尿酸试剂的批内精密度及天间精密度均在5%以下,线性范围0～1 000μmol/L,干扰物质胆红素含量达15mg/dL,抗坏血酸含量达7mg/dL,血红蛋白含量达3.75g/L时,相对偏差在10%以内,属于临床可接受范围。与原装试剂在奥林巴斯AU-640全自动生化分析仪上进行临床比对实验,决定系数r2为0.999 5,相关性良好。结论在奥林巴斯AU-640全自动生化分析仪上可用国产尿酸试剂替代原装试剂。     

对钒酸氧化法测定血清中胆红素的评价

目的 :评价钒酸氧化法测定血清中总胆红素和直接胆红素。方法 :钒酸氧化法的精密度、准确度实验及其重氮法相关和干扰因素实验。结果 :批内 CV总、直接胆红素分别为 0 .8%与 1 .3%。日间 CV为1 .8%与 1 .7% ,平均回收总胆红素为 1 0 1 .1 % ,直接胆红素 1 0 0 .1 %。与重氮试剂法相关 ( J- G法 )总胆为 Y(本法 ) =1 .0 1 5X(重氮法 ) - 0 .1 1 9,r=0 .998,直接胆红素为 Y(本法 ) =1 .1 0 1 x(重氮法 ) 0 .81 ,r=0 .952。相关良好 ,血红蛋白浓度和脂血分别高达 3g/L和 9.0 mmol/L不干扰。结论 :该法简单、快速、稳定 ,而且对溶血、乳糜等干扰因素的影响比重氮法小     

In vitro effects of light on serum bilirubin subfractions measured by high-performance liquid chromatography: comparison with four routine methods.

The effects of light on serum bilirubin subfractions in vitro were investigated by HPLC and four routine methods for bilirubin analysis. By HPLC, the rate of photodegradation of unconjugated bilirubin (Bu) was nearly twice that of monoconjugated bilirubin (mBc) and threefold that of diconjugated bilirubin (dBc); delta bilirubin (Bd) was most stable against photoirradiation. In the diazo method, the rate of photodegradation of direct bilirubin was almost the same as that of the sum of mBc, dBc, and Bd determined by the HPLC method. However, the rate of photodegradation of indirect bilirubin was significantly lower (P < 0.001) than that obtained by HPLC, because approximately 30% of the bilirubin photoproducts reacted with the diazo reagent as indirect bilirubin. The rate of photodegradation of total bilirubin determined by the direct spectrometric method was lower than that determined by the diazo method, but equal to that of the total peak areas of HPLC. In the Ektachem method, bilirubin photoproducts affected total bilirubin negligibly, and Bc and Bu positively, so that the value of Bd decreased. In the bilirubin oxidase method, bilirubin photoproducts were oxidized enzymatically by both the total and direct bilirubin reagents. We re-emphasize the importance of shielding serum from light to avoid generating bilirubin photoproducts that interfere with the accurate determination of serum bilirubin subfractions. We also recommend HPLC analysis as a standard method for bilirubin measurement.     

国产全自动生化检测系统的应用评价

目的参照我国全自动生化分析仪行业标准（讨论稿）和美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）检测系统性能评价方案，对我国自主研发的全自动生化检测系统进行分析性能的评价，探讨国产检测系统的临床应用价值。方法对上海丰汇公司FH400型全自动生化分析仪、配套试剂和校准品组成的检测系统（简称丰汇检测系统），根据项目的反应原理特征选择丙氨酸氨基转移酶（ALT，零级动力学法）、尿素（Urea，一级动力学法）、总蛋白（TP，二点终点法）和胆固醇（Chol，终点法）进行精密度、线性范围、抗干扰能力实验评价，并与日立全自动生化分析仪与罗氏诊断产品有限公司试剂检测系统作患者样本比对实验。结果丰汇检测系统ALT、Urea、TP和Chol的批内精密度变异系数（CV）中值分别为1．18％、1．35％、0．62％和0．39％，高值分别为0．84％、0．97％、0．34％和0．41％。患者样本比对实验4个项目的相关方程和相关系数（r）分别为ALT：Y：1．068X-0．797，r=0．999；Urea：Y=1．006X＋0．181，r=0．999；TP：Y=0．989X＋0．629，r=0．997；Chol：Y=1．001X-0．128，r=0．998，其在医学决定水平处的偏倚均低于美国临床实验室改进修正法案（CLIA’88）允许误差范围。线性范围和抗干扰能力[维生素C（VitC）、总胆红素（TBil）、血红蛋白（Hb）和乳糜液]基本符合厂家的声明。结论被评价的丰汇检测系统各项分析性能满足临床使用要求，检测成本较低，有较高的临床应用价值。     

血清总胆红素参考方法的建立及其不确定度评估

目的建立血清总胆红素（T-BIL）参考方法,评价其性能,并评估其测量结果不确定度。方法根据国际医学检验溯源联合委员会（JCTLM）公布的相关文献建立参考实验室内部的血清总胆红素参考方法,对方法的线性、精密度和准确度进行评估,测量结果不确定度参照GUM文件进行评估。结果总胆红素标准曲线线性方程为：Y=0．00750X=0．00308,R2=0．9999,线性范围0～200mg／L;测量血清样本的相对标准偏差（CV）小于1．0％;测量IFCC-RELA样本,结果在等效范围内,相对标准不确定度[urep（c）]小于2．0％。结论成功建立了血清总胆红素参考方法,可用于血清总胆红素项目的量值溯源和标准化,为血清总胆红素常规检测系统向参考方法／g考物质溯源提供有效途径。     

参照CLSIEP方案评价直接胆红素试剂分析性能

目的通过应用CLSIEP方案分别对国产和进口直接胆红素（DBil）试剂分析性能进行评价,了解国产直接胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法在同一台全自动生化分析仪上,同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等7项技术指标。结果两种试剂准确度测定,其相对偏差≤±10％;批间变异系数小于4．0％;国产DBil试剂线性范围0．2—595．0umol／L,进口试剂线性范围-0．4—595．7umol／L;国产DBil试剂的最低检测限为0．4umoL／L,进口试剂的最低检测限为0．9umol／L;方法比对实验结果Y=0．997X＋5．2467,R^2=0．9996（浓度范围0.2—595．0umol／L）;抗干扰能力无明显差异;试剂稳定性相近。结论：国产直接胆红素试剂与进口试剂的分析性能无显著性差异,能满足临床实验室的需要。