高三尖杉酯碱对慢性粒细胞白血病患者骨髓CD34+细胞酪氨酸激酶活性的影响

高三尖杉酯碱（HHT）已被逐渐地应用于治疗慢性粒细胞白血病（CML）慢性期（CP）患者,但其作用机制仍有待于进一步阐明.血细胞内酪氨酸激酶（TK）活性异常升高是CML的重要生物学特征,升高的TK通过促进细胞增殖、抑制细胞分化和凋亡而导致CML的发生和病情的进展.我们观察了HHT治疗前后CML患者骨髓细胞TK活性的变化以及HHT对患者骨髓CD34^＋细胞TK活性的影响,以期对HHT治疗CML的作用机制进行探讨.     

Bcr/Abl融合基因阳性、Flk1+CD34-慢性粒细胞白血病细胞体内生物学特性的研究

目的体内研究慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓中BCR／ABL＋、Flk1＋CD34-细胞的白血病干细胞特性。方法取CML患者骨髓，淋巴细胞分离液分离单个核细胞，常规接种培养，免疫磁珠分选CD45-、GlyA-及CD34-的贴壁细胞，流式细胞术鉴定其免疫表型，将其输入经亚致死量照射的NOD／SCID小鼠体内，检测人源细胞的植入及分化情况。结果植入的CML患者骨髓源BCR／ABL＋、Flk1＋CD34-细胞在受体小鼠体内分化为白血病细胞，受体小鼠骨髓细胞中存在Bcr／Ab1融合基因阳性细胞。结论Ber／Ab1融合基因阳性Flk1＋CD34-细胞具有白血病干细胞特性。     

用Midi MACS方法从白血病患者分选CD34+/CD123+细胞

本研究的目的是应用MidiMACS方法从急性髓系白血病（AML）患者骨髓细胞分选CD34^＋／CD123^＋细胞。首先。用淋巴细胞分离液从AML患者骨髓细胞分离单个核细胞（BMMNC），然后再通过MidiMACS方法相继分选出CD34^＋细胞．以及从CD34^＋细胞中分选出CD123^＋细胞并通过流式细胞术分析分选后细胞的富集度和回收率。结果显示：经过第一次分选后，CD34^＋细胞的富集度高达98.73％，平均为95．6％，其回收率最高可达到84．6％，平均为51％；第二次分选后，CD34^＋／CD123^＋细胞的富集度高达99．23％，平均约为83％；相对于分选前BMMNC而言。CD34^＋／CD123^＋细胞的回收率为34％，但相对于第一次分选后的CD34^＋细胞而言，其回收率为56％。结论：MidiMACS方法可用于AML患者骨髓CD34^＋／CD123^＋细胞的分选，分选后细胞的富集度和回收率与文献报道的通过FACS方法所获得的结果相类似。     

Aurora激酶抑制剂VX-680对慢性髓系白血病细胞增殖及凋亡的影响

本研究探讨Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对白血病细胞系K562、KCL22和慢性髓系白血病（CML）患者骨髓CD34^＋细胞的增殖和凋亡的影响。利用CCK-8法观察VX-680对K562和KCL22细胞的增殖作用,细胞计数方法测定VX-680对CML的CD34^＋细胞增殖影响,Annexin V-PI凋亡检测试剂盒、流式细胞术分析VX-680对K562、KCL22细胞凋亡效应,集落形成试验检测VX-680对CML及正常供者（donor）的骨髓CD34^＋细胞集落形成能力影响。结果表明,Aurora激酶抑制剂VX-680（20-100 nmol/L）在处理细胞第3天时能明显抑制K562和KCL22细胞增殖（P〈0.01）,并能抑制CML患者骨髓CD34^＋细胞增殖,而且随着剂量增加,抑制作用增强;VX-680（20nmol/L）作用K562和KCL22细胞3天时可诱导细胞凋亡（P〈0.01）;集落形成试验表明,CML患者骨髓CD34^＋细胞在VX-680的体外处理下集落形成能力较正常骨髓CD34^＋细胞明显下降（P〈0.01）。结论：Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对慢性髓系白血病细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

急性髓系白血病细胞CD34+抗原表达及与预后的关系

为了检测初治急性髓系白血病（AML）细胞CD34^＋抗原的表达,并分析其与预后的关系,应用间接免疫荧光法检测了238例AML患者.结果表明：238例AML中CD34阳性表达者有92例,占38.7%.除M3无CD34阳性表达外,CD34^＋表达与FAB亚型M0、M1有关;CD34^＋组完全缓解率为32%,明显低于CD34^-纽的61%;除淋系抗原CD7在CD34^＋组表达明显增高外,其它淋系抗原表达在两组间无差异（P＜0.05）.结论：有CD34^＋表达的AML患者预后差、CR率低,检测CD34表达对判断AML疗效有一定价值.     

G-CSF对慢性粒细胞白血病患者bcr/abl+-CD34+细胞增殖、分化的影响

目的了解G-CSF对bcr／abl^＋-CD34^＋细胞增殖、分化的影响。方法采集慢性粒细胞白血病（CML）患者的bcr／abl^＋-CD34^＋细胞，分别以0、10、100、1000ng／ml的G-CSF与之共培养，并以正常骨髓CD34’细胞为对照，通过锥虫蓝拒染法、流式细胞术和光学显微镜观察研究其细胞增殖、周期分布、抗原分化和形态变化特点。结果所有实验组bcr／abl^＋-CD34^＋细胞均明显增长，其中G-CSF10ng／ml组培养48、96h，其细胞数显著高于同期无G-CSF组（P〈0．05）；而正常CD34^＋细胞数只在G-CSF存在的情况下增长明显，其中G-CSF100ng／ml组培养48、96、144h细胞数均显著高于同期无G-CSF组（P值分别为〈0．05，0．01，0．01）；G-CSF10、100、1000ng／ml组的bcr／abl^＋-CD34^＋细胞培养144h其Go／G1期比例显著低于G-CSF空白组（P〈0．05）；而正常CD34^＋细胞G-CSF10、100、1000ng／ml组培养48和96h其Go／G1期比例均明显低于无G-CSF组（P〈0．01）；bcr／abl^＋-CD34^＋细胞及正常CD34^＋细胞CD34抗原表达均随培养时间延长而下降，伴随CD33和CDl3抗原先升后降，其变化与G-CSF浓度无关。但bcr／abl^＋-CD34^＋细胞的各抗原分化显著快于正常CD34^＋细胞。bcr／abl^＋-CD34^＋细胞和正常CD34^＋细胞均随着增殖分化表现出终末细胞的形态特征。结论G-CSF能促进bcr／abl^＋-CD34^＋细胞及正常CD34^＋细胞的增殖，但并非前者增殖的必要条件。bcr／abl^＋-CD34^＋细胞比正常CD34^＋细胞分化更快，但两类细胞的分化速度均与G-CSF浓度无关。     

慢性髓系白血病患者CD34^＋CD38^-细胞水平JunB和CDHB基因启动子区域的甲基化状态研究

慢性髓系白血病（CML）是骨髓造血干细胞恶性增殖的克隆性疾病,在CML患者细胞水平由于JunB和CDH13基因启动子区甲基化而使这2个抑癌基因的表达受损。为了探讨正常人和CML患者CD34＋CD38-细胞水平JunB和CDH13（cadherin-13）基因启动子区域甲基化状态及表达水平的差异,应用流式细胞仪分选出CD34＋CD38细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）检测5例正常人和8例CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞JunB和CDH13基因启动子区域甲基化状态,用实时定量PCR（RT—PCR）检测JunB和CDH13基因的表达情况。结果表明：JUNB和CDH13基因在正常人骨髓CD34＋CD38-细胞中呈完全性非甲基化状态,CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区甲基化比例分别为87．5％（7／8）和50％（4／8）,明显高于正常人（P〈0．05）。CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因mRNA相对表达水平与正常人的相比明显降低（2^-△△CT分别为1／5．21和1／10．63）。结论：在CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区域都发生了高度的甲基化,它们的mRNA表达水平也明显降低,JunB和CDH13基因启动子区域甲基化在CML的发病机制中起到一定的作用,甲基化检测对CML的靶向治疗及新的治疗方法具有重要意义。     

CD7阳性急性髓系白血病骨髓干／祖细胞5个基因表达的研究

本研究探讨abca5、mdr-1、kdr、dapk和irf-1 5个基因在CD7^＋急性髓细胞性白血病干／祖细胞的表达。利用实时定量RT—PCR（RQ—PCR）方法检测了15例正常骨髓（NBM）和16例AML患者骨髓单个核细胞（MNC）中5个基因的表达。采用流式细胞仪（FCM）分选8例NBM和21例AML患者骨髓CD34^＋CD38^＋祖细胞和CD34^＋CD38-干细胞,利用微量细胞RQ—PCR方法检测分选细胞中5个基因的表达。结果表明：NBMMNC均表达这5个基因,其中irf-1与dapk表达水平最高,相对表达量分别为4．08和3．86;abca5和mdr-1表达水平较低,为0．49和0．84;kdr表达最低为0．02。在经分选的CD34^＋CD38^＋祖细胞中,dapk和irf-1表达明显减低（P〈0．05）,kdr表达明显增加（P〈0．05）,其余2个基因无明显变化。在CD34^＋CD38^＋Lin-干细胞中,5个基因的表达均高于CD34^＋CD38^＋祖细胞,普遍增加至近2倍,而kdr增加了3倍,其中kdr和irf-l表达的增加具有统计学差异（P〈0．05）。与NBM相比,AMLMNC中5个基因的表达水平均有不同程度减低,以abca5、mdr-1、kdr和dapk最为显著（P〈0．05）。与AMLMNC相比,AMLCD34^＋CD38^＋细胞中,irf-1和dapk表达明显减低（P〈0．05）,其余3个基因表达增加,以kdr表达增加有统计学意义（P〈0．05）。AMLCD34^＋CD38^＋与CD34^＋CD38^-细胞比较,发现5个基因在CD34^＋CD38^＋细胞中的表达均增加,尤以kdr和irf-1的表达增加有意义（P〈0．05）。AMLCD34^＋CD38^＋CD7^＋细胞与CD34^＋CD38^-CD7-细胞中5个基因的表达均比CD34^＋CD38^＋细胞中的高,其中只有CD34^＋CD38^- CD7^＋细胞中KDR和CD34^＋CD38^-CD7^-细胞中KDR和irf-1的表达增加并具有统计学差异（P〈0．05）。结论：NBM中kdr主要表达在干／祖细胞中,而dapk和irf-1主要表达在较分化的细胞中。5个基因在干细胞阶段的表达均高于祖细胞阶段。AMLCD34^＋CD38^-CD7^＋细胞与CD34^＋CD38^＋CD7^-都具有干／祖细胞的基因表达特点。     

急性髓细胞性白血病细胞培养上清对CD4+和CD8+T细胞增殖和凋亡的影响

为了研究不同的急性髓细胞性白血病（AML）细胞株培养上清对CD4^＋和CD8^＋T细胞增殖以及凋亡的影响,探讨AML的免疫抑制的形成机制,将3种AML细胞株（HL-60、NB4和U937）培养上清和普通培养液按不同比例混合,用于培养CFSE染色的淋巴细胞.抗CD3抗体和抗CD28抗体刺激3天后,标记7AAD和相应荧光抗体.利用流式细胞术检测不同T细胞亚群CFSE荧光强度和7AAD表达率的变化,分析其增殖和凋亡变化情况.结果表明：3种AML细胞株中有2种（HL-60和NB4）培养上清可显著抑制CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞的增殖,并随浓度增加而增强.同样,HL-60和NB4细胞株培养上清亦可抑制刺激后的CD4^＋T细胞的凋亡,但对刺激后的CD8^＋T细胞的凋亡并无明显影响.相反,HL-60和NB4细胞株培养上清可显著增加增殖的CD8^＋T细胞的凋亡.结论：AML细胞株培养上清液对CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞增殖的抑制以及对增殖的CD8^＋T细胞凋亡的诱导作用,可能是AML患者免疫功能缺陷的机制之一.     

CD34+干/祖细胞与纤维连接蛋白的粘附在慢性粒细胞白血病发病中的意义

目的探讨CD34 干／祖细胞与纤维连接蛋白（FN）的粘附在慢性粒细胞白血病（CML）发病中的作用。方法①采用流式细胞术双标记法检测初治CML慢性期30例和正常骨髓10份CD34 细胞上整合素β1链（CD29）和α4链（CD49d）的表达;②结晶紫染色法观察免疫磁珠分选的CML慢性期5例和5名正常人骨髓CD34 细胞与FN的粘附功能;③极限稀释液体微培养观察FN对正常和CML慢性期骨髓粒细胞-巨噬细胞祖细胞集落（CFU－GM）形成能力的影响。结果①CML慢性期骨髓CD34 细胞CD29和CD49d的表达与正常骨髓比较,差异无显著性;②CML骨髓CD34 细胞与FN的粘附明显低于正常（P＜0．01）;③FN显著抑制正常骨髓CFU-GM的形成（P＜0．01）,而对CML骨髓CFU-GM的形成无显著影响。结论CML骨髓CD34 干／祖细胞与FN的粘附功能减弱,因而缺乏FN对祖细胞增殖的调节作用是CML髓系扩增的原因之一。     

CD117/CD11b在急性早幼粒细胞白血病不同病期的表达变化

为了了解CD117／CD11b在急性早幼粒白血病细胞初诊及治疗后的表达变化，探讨其表达变化对APL诊断和预后的意义，采用CD45／SSC双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原分析，应用RT—PCR技术检测骨髓中PML／RARα融合基因的mRNA表达。结果表明：APL与CML慢性期都高表达MPO、CD13和CD33，而几乎不表达CD34、HLA—DR及T，B淋巴系列标志。有14．5％的APL患者表达cD56，有48，2％的APL患者表达CD15，CD15在APL的表达明显低于CML慢性期（48，2％船95．2％，P〈0．01）。有78．3％的APL患者表达CD117，而在CML慢性期不表达CD117。CD11b在APL的表达率仅为16．9％，而在CML慢性期几乎都表达CD11b。有72．3％的APL患者呈CD117^＋CD11b^-表型，而在CML慢性期患者细胞中均未见此表型，它几乎均呈CD117^＋CD11b^-表型。11例表型为CD117^＋CD11b^-的APL患者经治疗获完全缓解，在2个月以后CD117阳性细胞百分率均小于5％，同时细胞高表达CD11b，呈CD117^-CD11b^＋表型。检测31例APL患者PML／RARα融合基因，25例该融合基因阳性，阳性率为80．6％，其中16例（64％）为PML／RARα基因L型，9例（36％）为S型。16例PML／RARα融合基因L型APL患者CD117表达有14例（87．5％），9例S型CD117表达有4例（44．4％），6例PML／RARα融合基因阴性APL患者CD117表达有2例（33．3％）。结论：CD117／CD11b表型分析有助于APL与其它AML亚型及CML慢性期细胞的鉴别，CD117’CD11b一表型有助于APL细胞和APL患者缓解恢复期的良性髓系增生细胞的区分，对APL患者的治疗方案选择、预后判断以及发病机理的研究等均有重要价值。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34-和CD34+细胞凋亡与增殖的意义及对生存的影响

本研究分析骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓CD34^＋和CD34-细胞凋亡和增殖情况,探讨MDS的发病机制,并判断其与疾病预后的关系。流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34^＋细胞的比例、CD34^＋细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡／增殖（A／P）比。并用单变量和多变量生存分析法分析CD34^＋细胞和CD34-细胞增殖和凋亡对预后的影响。结果表明：①MDS高危组患者骨髓CD34^＋细胞的比例明显高于低危组（P〈0．05）,而低危组与对照组比较无显著差异;②CD34^＋,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组。在低危组中,CD34-细胞的凋亡率为（80．36±1．82）％,明显高于CD34^＋细胞的（54．75±2．18）％（P〈0．05）,而在高危组中,CD34^＋,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;③CD34^＋细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异。高危组CD34^＋细胞的增殖率为（50．67±3．37）％,明显高于CD34-细胞的（30．99±1．96）％（P〈0．05）;④CD34^＋、CD34-细胞的A／P值在MDS低危组均明显高于高危组和正常对照组,而CD34-细胞的A／P值在MDS高、低危组均明显高于CD34^＋细胞的A／P值（P〈0．05）。此外,CD34^＋细胞的凋亡率与生存及预后明显相关。结论：CD34^＋细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34^＋细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。此外,CD34^＋细胞的凋亡率可能是独立的预后不良因素,抑制凋亡可能诱导MDS向白血病的转化。     

610例急性髓系白血病免疫表型和白血病相关免疫表型分析

目的探讨急性髓系白血病（AML）患者免疫表型和白血病相关的免疫表型（LAIP）特征及在微量残留病（MRD）检测中的意义。方法采用CD45／SSC设门四色流式细胞术，检测610例AML患者和20名健康志愿者下列抗原的表达：CD7、CDll7、CD33、CD34、CDl0、CDl9、CD56、CD38、CDl3、CDl4、CD64、CD9、CDl6、CD2、CD5、CDllb、CDl23、HIA-DR。结果正常骨髓中CD34^＋和CDll7^＋SSC值低（SSC^low）的细胞比例分别为（0．35±0，15）％和（0．76±0．31）％。CD34^＋SSC^low细胞中绝大多数细胞共表达CDl3、CD33、CD38、CDll7、HLA-DR（84％～94％）。CD9和CDl5的相对比例为20％和33％，而CDllb、CD56、CDl9和CD64的相对比例均低于10％，CD7为12％。CDll7^＋SSC^low细胞中，CDl9^＋、CD11b^＋、CD56^＋和CD7^＋细胞相对比例低于10％，CD9^＋细胞为14％，CD38^＋和HIA-DR^＋细胞的相对比例为87％和91％，其余抗原（CDl5、CDl3、CD33、CD34）均在30％～50％。AML患者中CDll7、CD38表达率约为95％，CD33、CD9表达率约为84％。HLA-DR和CDl3表达率分别为77．23％和75．25％。CD64和CD34的表达率分别为64．41％和59．51％。CDl5表达率为43．06％，CDllb表达率为22，07％。86．39％的AML患者LAIP阳性，以AML-M1和M3最高，AML-M4E0最低。LAIP主要表现为交叉系列抗原表达和非同期共抗原表达，前者以CD34与CD7、CDl9、CD56同时阳性为主。在非同期抗原表达中，CD34^＋CD64^＋、CDll7^＋CDllb^＋、CDll7^＋CD38^-/dim、CDll7^＋HLA-DR-／^dim正常值在0．01％左右，与AML之间的对数差大于3，为灵敏度较高的LAIP。结论多参数流式细胞术适于80％以上AML患者MRD检测。     

慢性阻塞性肺疾病长期机械通气患者血清睾酮、CD4+/CD8+ T细胞的变化

目的初步研究长期机械通气慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清睾酮和CD4^＋／CD8^＋T细胞的变化，及其相关性。方法长期机械通气COPD患者42例为研究组，稳定期COPD患者34例为对照组，进行血清睾酮检测，流式细胞仪检测CD4^＋／CD8^＋T细胞，并计算其相关性。结果研究组血清睾酮水平、CD4^＋／CD8^＋T细胞比例均低于对照组（P〈0．05），但血清睾酮与CD4^＋／CD8^＋T细胞比之间无相关性（P〉0．05）。结论长期机械通气COPD患者血清睾酮、CD4^＋／CD8^＋T细胞比明显降低，但两者间无相关性。     

CD13^＋CD7^＋白血病微小残留病水平与患者生存时间的关系

目的：利用流式细胞术研究具有CD13^ CD17^ 免疫表型白血开门见山的微小残留病（MRD）水平与患者生存时间的关系。方法：选择表达CD13^ CD7^ 独特免疫表型白血病，以CD13^ CD7^ 免疫表型作为此类白血病细胞的特异标志，利用经特殊优化处理过的多参数流工本细胞系统动态监测该免疫表型的白血病细胞数量，应用SPSS软件的生存分析白血病微小残留病水平与患者中位生存时间的关系。结果：（1）18例CD13^ CD7^ 双表型白血病患者的免疫表型稳定表达，而非白血病患者骨髓细胞中无CD13^ CD7^ 免疫表型细胞存在；（2）根据MRD水平分为3组，A组3例MRD水平低于10^-4，中位生存时间３４.50个月；Ｂ组５例ＭＲＤ在１０^-3-10^-4之间，中位生存时间21.25个月；C组10例CD13^ CD7^ 白敌国开门见山细胞大于10^-3者，中位生存时间为11个月；（3）3组间中位生存时间差异具有显著意义（P=0.001)，A组长于B组（P=0.0245)，显著长于C组（P=0.0109)。B组显著长于C组（P=0.021)。结论：白血病微小残留病状态是决定白血开门见山患者生存时间的作用因素。     

急性白血病儿童外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和NK细胞的变化及其在白血病免疫中的意义

本研究观察急性白血病患儿外周血CD4^＋CCD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）及自然杀伤细胞（nature killer cell,NK）在不同病程阶段的变化,了解白血病患儿的免疫状态,以探讨CD4^＋CD25^＋Treg细胞及NK细胞在急性白血病肿瘤免疫中的意义。建立流式细胞术检测外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞和NK细胞的方法：检测急性白血病初诊患儿25例、完全缓解患儿28例及20例正常健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞及NK细胞的数量及比例。结果表明：初诊组、完全缓解组及对照组外周血CD4^＋CD25^＋CD127^＋占CD4^＋T细胞的比例分别为（9．55±2．41）％,（8．54±2．51）％和（6．25±0．85）％,在初诊患儿组和缓解患儿组高于正常对照组,且在初诊患儿组高于完全缓解组（P〈0．05）;同时,与正常对照组比较,急性白血病患儿的NK细胞数量减少,完全缓解后患儿组NK细胞数量仍低于正常对照（4．11±3．87％和10．41±7．20％w14．06±5．95％,P〈0．05）。结论：联合应用CD4、CD25及cDl27检测Treg细胞简便可行、重复性好、检测结果可靠、准确,CD4^＋CD25^＋CD127^＋T细胞可较好地反映CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例。急性白血病患儿外周血中Treg细胞数量升高,NK细胞数量降低,表明急性白血病患儿NK细胞免疫功能处于抑制状态。Treg细胞可能在白血病的发生、发展中起一定作用,参与NK细胞的调节可能是Treg细胞在白血病免疫中的一个环节。     

裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓CD34+CD59+细胞的研究

应用BALB／c裸鼠为移植模型，将在体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）病人的CD34^＋CD59^＋细胞进行移植。研究其增殖能力和重建造血的情况，为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植（ABMT）或自体外周血干细胞移植（APBSCT）奠定基础。本研究利用免疫磁珠双阳性分选法。从PNH患者骨髓中分离出足够数量的CD34^＋CD59^＋细胞进行体外扩增，并将体外扩增的细胞输注给接受亚致死剂量照射的BALB／c裸鼠。结果显示：移植6周后，用流式细胞术和DNA检测方法均检测到裸鼠骨髓、脾脏和外周血中人的CD45^＋细胞，而接受PNH病人CD34^＋CD59^＋细胞移植后的裸鼠，其血常规指标有一定恢复，但并未完全恢复。结论：PNH病人骨髓CD34^＋CD59^＋细胞体外扩增后仍能保持造血祖细胞的生物特性，在照射的裸鼠中能重建造血。     

抗CD44单抗IM7对慢性粒细胞白血病CD34+细胞黏附和迁移能力影响的体外研究

目的 探讨抗CD44单抗IM7在体外对慢性粒细胞白血病(CML)干细胞(LSC)黏附和迁移的影响及其机制.方法 取20例初诊CML患者骨髓及20名健康新生儿脐血标本,用免疫磁珠分离法分离纯化CML患者骨髓和正常人脐血CD34+细胞,流式细胞术检测CD123和CD44的表达情况,MTT法检测CD44单抗IM7孵育前后细胞的黏附能力,体外跨内皮迁移实验检测其迁移能力.结果 ①CML患者骨髓CD34+细胞(CML-CD34+细胞)中CD34和CD123双阳性细胞率为7.5%,CD44阳性细胞率为(86.60±2.10)%;脐血CD34+细胞中CD44阳性细胞率为(25.40±1.70)%,两组之间比较差异有统计学意义(P<0.05).②与IM7孵育后的CML-CD34+细胞与血管内皮细胞黏附能力为0.34±0.07[吸光度(A)570值],未经IM7处理组为0.62 ±0.11,CML-CD34+细胞经IM7处理后的黏附能力显著下降,而脐血CD34+细胞IM7处理前后无明显变化.③跨内皮迁移实验显示经IM7处理后的CML-CD34+迁移能力明显受到抑制,抑制率为46%～63%,而CD34+细胞迁移抑制不明显.④经IM7处理后的CML-CD34+细胞与骨髓基质细胞黏附能力明显降低,而脐血CD34+细胞IM7处理前后无明显变化.结论 CML患者来源的CD34+细胞与脐血CD34+细胞为性质不同的造血干细胞,抗CD44单抗IM7在体外能有效抑制CML-CD34+的黏附和迁移,从而为白血病的靶向治疗提供依据.     

Bcr/Abl融合基因阳性、Flk1+CD34-慢性粒细胞白血病细胞体内生物学特性的研究

目的体内研究慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中BCR/ABL+、Flk1+CD34-细胞的白血病干细胞特性。方法取CML患者骨髓,淋巴细胞分离液分离单个核细胞,常规接种培养,免疫磁珠分选CD45-、GlyA-及CD34-的贴壁细胞,流式细胞术鉴定其免疫表型,将其输入经亚致死量照射的NOD/SCID小鼠体内,检测人源细胞的植入及分化情况。结果植入的CML患者骨髓源BCR/ABL+、Flk1+CD34-细胞在受体小鼠体内分化为白血病细胞,受体小鼠骨髓细胞中存在Bcr/Abl融合基因阳性细胞。结论Bcr/Abl融合基因阳性Flk1+CD34-细胞具有白血病干细胞特性。     

外周血CD3+CD45+T细胞在原发性肝癌患者中的表达及意义

目的探讨原发性肝癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）患者外周血中CD3^＋CD56^＋T细胞、CD3^＋CD56^-T细胞、CD3^＋CD56^＋NK细胞在（HCC）细胞免疫中所发挥的作用。方法采用流式细胞技术对14例HCC患者及30例健康对照人群外周血中的CD3^＋CD56^＋T细胞、CD3^＋CD56^-T细胞、CD3^-CD56^＋NK细胞进行检测。结果14例HCC患者与30例正常对照组外周血测定结果比较发现：HCC患者外周血中CD3^＋CD56^-明显降低，CD3^＋CD56^＋则明显升高，与正常对照组比较差异具有极显著性（P均小于0．005）。HCC患者CD3^-CD56^＋（NK）较正常对照组下降，两组比较差异具有显著性（P小于0．05）。结论CD3^＋CD56^-T细胞在HCC患者外周血中增生活跃，提示高表达的CD3^＋CD56^-T细胞在肝癌免疫应答中具有重要意义。