神经生长因子对小鼠红系造血的影响及内在机制研究

本研究探讨神经生长因子（NGF）对红系造血的影响及内在机制。采用流式细胞术、祖细胞集落测定、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法（ELISA），对经大腿肌肉注射NGF一定时间后小鼠骨髓细胞的（BMC）增殖周期、BFU—E、CFU—E集落产率、外周血红细胞相关指标、肾脏EPO水平、骨髓细胞GM—CSF、脾脏EPO受体（EPOR）mRNA的表达及血清中EPO，GM—CSF和IL-1浓度进行检测，并观察培养体系中加入不同浓度的NGF时BFU—E、CFU—E集落产率的变化及与EPO、IL-3的关系。结果表明：注射NGF（7．5μg／kg）持续7天，骨髓细胞中S＋G2／M期细胞比例、CFU-E和BFU—E集落产率、脾EPOR mRNA量显著高于注射生理盐水的对照组。持续13到19天，外周血网织红细胞比例、红细胞数、血红蛋白含量也有升高；在体外CFU—E培养中，无论是否加入EPO，加入的NGF均能剂量依赖性地促进集落的形成，且只加入NGF组的集落产率显著高于只加入EPO组。在BFU—E培养中加入NGF和IL-3时，集落产率显著高于加入EPO和IL-3组。结论：NGF可能通过提高造血细胞对EPO的反应性并可激活造血细胞上与EPO作用后一样的信号通路，进而促进骨髓细胞进入有丝分裂，促进造血干细胞向红系方向分化，促进BFU—E和CFU—E的形成，增加外周血中网织红细胞、红细胞、血红蛋白含量。     

血清EPO检测评价全身热疗对恶性实体肿瘤贫血的疗效

红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是由肾脏近曲小管附近细胞合成和分泌的一种糖蛋白类激素。EPO的作用受体为膜受体,只存在于红系前体细胞,EPO的作用是促进红系干细胞及原红细胞的有丝分裂,刺激骨髓红系造血,促进原始红细胞增殖、分化和成熟,以维持外周血中红细胞和血红蛋白的恒定,是调节红细胞生成的主要因子。正常情况下,血清EPO水平受肾组织氧分压的影响,低氧和贫血是EPO增高的主要刺激因素。近年来,41.8℃全身热疗(41.8℃whole body hyperthermia,41.8℃WBH)治疗恶性实体肿瘤成为肿瘤治疗领域研究的热点,建立了坚实的理论基础,…     

氧感受通路对红系造血调控的研究进展

体内促红细胞生成素(EPO)是调节红系造血的主要因子,而EPO基因的表达依赖于氧感受通路的调控.笔者就氧感受通路中的脯氨酰羟化酶、缺氧诱导因子-α、VHL肿瘤抑制蛋白与红系造血调控作用的研究进展进行综述.     

黎族地中海贫血患者血清促红细胞生成素和转铁蛋白受体水平的研究

为研究地中海贫血患者与血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)和红细胞生成素(EPO)的关系，并估计地中海贫血骨髓红系增生程度，应用酶联免疫法检测50例地中海贫血患者和50例正常人对照的sTfR和EPO水平：结果显示，β—重型地中海贫血患者血清EPO和sTfR水平均明显高于正常对照组(P＜0.05)，而轻型患者与正常人无显著差别。结论：黎族地中海贫血患者血清中EPo和sTfR水平升高与地中海贫血的类型有关。     

红细胞生成素的生物合成调节研究进展

红细胞生成素(EPO)是特异性的作用于红系祖细胞的激素蛋白,它的合成存在着复杂的调节机制,低氧可诱导EPO的合成,反式作用因子(如HIF-1)与顺式作用元件增强子结合,促进EPO的转录。增强子和启动子在EPO转录的调节中具有协同效应,由于衰减子的存在,决定着EPO的基础转录及其组织分布。     

胎肝造血与凋亡

细胞凋亡是多细胞器官控制自身细胞增殖率和死亡率以保持自身组织稳定的一种重要方式,是有别于坏死的一种生理性过程。胚胎时期胎肝造血以红系为主,受EPO水平的调节。EPO作用于CFU-E和部分BFU-E,通过调节CFU-E和BFU-E的凋亡控制红系造血。EPO能促进红系的有丝分裂,并维持其生存和分化,当EPO低于正常时,可致大部分CFU-E凋亡,一小部分维持红系造血。胎肝EPO生成细胞对胎肝红系造血起调节作用,其分泌EPO的变化受遗传因素的控制。     

氯化高铁血红素诱导血红蛋白合成的作用机制

氯化高铁血红素(Hemin,Hm)通过对红系特异性转录因子(NF-E2)、铁效应性元件连接蛋白(IRE-BP)、血红素调节性翻译抑制因子以及钙调蛋白依赖性蛋白激酶等反式作用元件活性的调节,增加红系特异性血红素合成所需酶的基因(σ-氨基γ-酮戊酸合成酶及亚铁螯合酶基因)以及γ、β珠蛋白基因的表达。Hm还可通过增加红系细胞EPO受体mRNA的表达,来提高诱导细胞对EPO的敏感性。     

重组人促红细胞生成素对兔耳皮肤缺损创面愈合的影响

促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是哺乳动物体内的一种糖蛋白激素，其主要功能是促进红系祖细胞增殖、分化及成熟。EPO主要由肾脏合成，除此以外，人类皮肤毛囊也可以合成EPO，并表达EPO受体（EPOR），可见皮肤不但是EPO的合成器官，也是EPO的靶器官。本实验，我们通过建立兔耳皮肤缺损创面，将rHuEPO局部应用于皮肤创面，与金因肽（重组人表皮生长因子）作对照，观察rHuEPO对皮肤缺损创面愈合及上皮化的作用。为皮肤缺损创面愈合治疗寻找一种新的药物及给药途径提供理论依据。     

成骨生长肽对红系造血祖细胞的体外促增殖作用

目的：通过研究人工合成成骨生长肽(sOGP)对红系造血祖细胞的体外促增殖作用，初步探索sOGP促造血活性的作用环节。方法：将正常小鼠和人骨髓有核细胞在标准红系祖细胞基础培养基中进行培养，设定sOGP的不同浓度梯度，于培养48h后计数小鼠CFU—E集落数，培养第4天与第14天计数人CFU—E、BFU—E集落数，将数据与空白对照组及EPO阳性对照组进行比较。结果：sOGP能够有效促进小鼠CFU—E及人CFU—E、BFU—E的体外增殖，量效关系明显，其有效作用浓度范围为10^-16～10^-10mol／L，高峰浓度约为10^-14～1011^-12 mol／L，呈低浓度、广范围及双相作用的特点。但是，sOGP对红系造血祖细胞的体外促增殖效果要弱于阳性对照药EPO。结论：sOGP能够在体外有效地促进红系造血祖细胞的增殖，可能是通过对骨髓基质细胞的作用而促进造血和造骨。     

CEBPA基因突变和表达异常在急性髓系白血病中的作用研究

CCAAT增强子结合蛋白A(CEBPA)基因及其编码的转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)通过促进造血干/祖细胞向粒系分化并抑制细胞增殖,在造血系统早期分化过程中起重要作用。CEBPA基因的突变及其在转录、翻译及翻译后水平受到的异常调控可引起C/EBPα蛋白结构或表达异常,导致粒系分化成熟障碍、不成熟粒系前体细胞异常增殖,是急性髓性白血病(AML)的重要发病机制。CEBPA基因突变和表达异常调节对AML患者的预后有重要影响,并可作为诱导分化治疗的靶点。本文就CEBPA基因突变与AML、C/EBPα蛋白表达调控异常与AML及C/EBPα蛋白与靶向治疗进行综述。     

缺铁性贫血与促红细胞生成素的关系

目的探讨缺铁性贫血与促红细胞生成素的关系。方法采用EPO测定法，血浆EPO浓度的测定运用了ELISA测定法，用Blotkalbumin取代血液BSA进行非特异性蛋白结合部分的实验，并采用了YHA、EPO、EPOGIN标准，在进行老鼠血浆浓度测定时，YHA——EPO标准的运用的稳妥性的认证。结论通过实验分析由缺铁性贫血而导致血液中携氧能力的下降，会使血浆中EPO浓度增加，促进红细胞的生成。此外，在铁缺乏的状态下，特久训练会促成EPO的生成。然而，对于机能增加而相关联的携氧能力的改善，被促成的EPO生成相对应的体内铁的含量的确是必不可少的。     

红细胞生成素对人单核细胞hepcidin的影响及其机制

目的 探讨红细胞生成素(EPO)对单核细胞hepcidin的影响及其分子学机制.方法 采用实时定量PCR和Western blot方法检测hepcidin及信号分子C/EBPα、Smad1/5/8、磷酸化(p)-Smad1/5/8和p-STAT3的表达水平.采用IL-6或脂多糖(LPS)刺激人单核细胞系THP-1细胞,观察EPO对THP-1细胞hepcidin及信号分子表达的影响.加入EPO受体(EPOR)的抗体,观察其对EPO的拮抗作用以及对信号分子的影响.结果 EPO能抑制由20 ng/ml IL-6或1 μg/ml LPS诱导的THP1单核细胞hepcidin mRNA表达,作用呈时间和浓度限制性,EPO 2 U/ml(降低56%或64%)、作用6 h(降低53%或66%)抑制作用最明显.在20 ng/ml IL-6诱导作用下,EPO还可抑制hepcidin蛋白表达,EPO 2 U/ml作用6 h hepcidin蛋白表达明显降低.同时信号分子C/EBPα、p-Smad1/5/8和p-STAT3表达也受抑制,EPOR抗体能够拮抗EPO对hepcidin以及上述信号分子的抑制作用.结论 EPO可以抑制IL-6或LPS诱导的单核细胞hepcidin表达;在体外,EPO可能是通过下调C/EBPα、p-Smad1/5/8和p-STAT3进而抑制单核细胞hepcidin表达.

Abstract：

Objective To investigate the in vitro effect of erythropoietin (EPO) on hepcidin of monocytes and its molecular mechanisms.Methods Hepcidin and signaling molecules including C/EBPα, Smad1/5/8,p-Smad1/5/8 and p-STAT3 were detected by real time PCR and Western blot.THP-1 monocytes were stimulated by interleukin-6 (IL-6 ) or lipopolysaccharide ( LPS).EPO receptor ( EPOR) antibody was added to observe its antagonistic effect on EPO and impact on the signaling proteins.Results EPO suppressed mRNA expression of THP-1 hepcidin of monocytes induced by 20 ng/ml IL-6 or 1 μg/ml LPS in both dose and time dependent manner.The most decrease of hepcidin expression was observed at 2 IU/ml EPO for 6 hours.EPO also down-regulated hepcidin protein induced by 20 ng/ml IL-6.At 2 IU/ml EPO for 6 hours hepcidin protein was down-reguleted, as was C/EBPα, p-Smad1/5/8 and p-STAT3.Antibody to EPOR antagonized the down-regulation of EPO on hepcidin and signaling proteins.Conclusion s Monoytes hepcidin can be reduced by EPO when stimulated by IL-6 or LPS.The mechanism of which may be at least in part, via suppression of C/EBPa, p-Smadl/5/8 and p-STAT3 signaling.     

转录因子C/EBPα异常与急性髓系白血病

增强子结合蛋白C/EBPα在造血系统髓系分化中扮演着重要的角色,其功能的改变与白血病的发生发展存在着关联,尤其是与急性髓系白血病(AML)的分类及预后关系密切,同时对AML的治疗具有指导意义.本文就转录因子C/EBPα异常与AML的相关性进行综述.     

转录因子C/EBPα异常与急性髓系白血病

增强子结合蛋白C/EBPα在造血系统髓系分化中扮演着重要的角色,其功能的改变与白血病的发生发展存在着关联,尤其是与急性髓系白血病(AML)的分类及预后关系密切,同时对AML的治疗具有指导意义.本文就转录因子C/EBPα异常与AML的相关性进行综述.     

转录因子C/EBPα异常与急性髓系白血病

增强子结合蛋白C/EBPα在造血系统髓系分化中扮演着重要的角色,其功能的改变与白血病的发生发展存在着关联,尤其是与急性髓系白血病(AML)的分类及预后关系密切,同时对AML的治疗具有指导意义.本文就转录因子C/EBPα异常与AML的相关性进行综述.     

人类ermap基因在脐血单个核细胞向红细胞系分化发育过程中表达的研究

为探讨人类红细胞膜相关蛋白（erythroid membrane associated protein，ERMAP）基因在红细胞分化发育过程中的作用，本研究以SCF、IL-3和EPO体外诱导脐血单个核细胞（mononuclear cells，MNCs）向红系细胞方向分化，在此过程中用光学显微镜观察细胞形态，用联苯胺染色计数细胞阳性率，流式细胞术检测CD36^＋／CD235a^-、CD36^＋／CD235a^＋、CD36^-／CD235a^＋细胞的比例，同时以荧光定量PCR（fluorescent quantitative PCR，FQ—PCR）检测人类ermap基因表达量的变化。结果表明，SCF、IL-3和EPO可诱导脐血MNCs向红系方向分化，在此过程中人类ermap基因的表达量不断增加。结论：人类ermap基因与红细胞分化发育密切相关     

血清促红细胞生成素水平和血清转铁蛋白受体水平联合测定的临床意义

人血清促红细胞生成素浓度能反映体内促红细胞生成素的生成能力，并受病理情况下体内产生的细胞因子和红系造血前体总量的影响，而血清转铁蛋白受体水平能反映骨髓红系造血活性和机体铁代谢状况。联合测定sEPO和sTfR水平可反映多种病理情况下，体内红系造血的病理生理机制，指导临床治疗并监测外源性EPO的滥用。     

诱骗RNA靶向阻断RNA结合蛋白E2诱导K562细胞向粒系分化

目的 应用诱骗RNA(decoy RNA)靶向阻断RNA结合蛋白E2(hnRNP E2)调节CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)基因异常翻译的作用,诱导白血病细胞株K562细胞向粒系分化,并初步探讨其分子机制.方法 将已构建的hnRNP E2 decoy RNA表达质粒经阳离子脂质体的介导转染K562细胞,用G418筛选出稳定表达细胞株,用RT-PCR和Western blot方法检测该细胞株C/EBPα和粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)的表达,通过瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态,免疫细胞化学法分析细胞粒系分化抗原CD13、CD15的表达.结果 筛选到稳定表达细胞株pG细胞,与未转染的K562细胞相比,其C/EBPα mRNA水平无改变,但相对分子质量42×103的C/EBPα蛋白(42kD-C/EBPα)水平升高了(49.7±5.5)%(P＜0.05);G-CSFR mRNA水平升高了(42.1±3.6)%(P＜0.05),其蛋白水半也.升高了(37.4±6.2)%(P＜0.05);细胞形态学方面观察到pG细胞出现中、晚幼粒细胞甚至成熟粒细胞的特征,且免疫细胞化学法检测显示粒系分化抗原CD13、CD15表达增高[阳性细胞百分比分别为(18.7±2.5)%和(15.2±2.6)%].结论 hnRNP E2 decoy RNA能够诱导K562细胞向粒系分化,G-CSF对其分化过程有促进作用,其作用机制可能与decoy RNA靶向阻断hnRNP E2,调节C/EBPαmRNA翻译,恢复42kD-C/EBPα表达,上调42kD-C/EBPα下游分化基因G-CSFR的表达有关.     

转铁蛋白受体2研究进展

转铁蛋白受体2(transferrin receptor2，TfR2)是一种新近发现的铁转运和铁稳态调节蛋白，在基因结构、蛋白结构、与转铁蛋白(Tf)结合和铁摄取方面与转铁蛋白受体1(transferrin receptorl，TfRl)具有相似性，但在mRNA表达的组织分布和调节方面有很大的差异。TfR2 mRNA不具有3’一端未翻译区的铁效应元件(Iron Responsive Element，IRE)结构，其表达水平不受细胞内铁状况的调节，在肝细胞、红系前体细胞、K562细胞和HepG2细胞高水平表达。TfR2的突变可导致遗传性血色病Ⅲ的发生。TfR2可能在铁转运、铁代谢调节、肝脏功能和红系细胞分化发育方面具有十分重要的作用，可能是红系前体细胞的一种分子标志。现综述TfR2基因和蛋白的结构特点、mRNA的表达和调控，及其可能的生物学功能。     

IL-6受体α亚单位mRNA和蛋白在人白血病细胞中的表达

为了探讨IL－6R的α亚单位基因与蛋白在人白血病细胞中的表达，为临床利用IL－6／IL－6R系统介导重组IL－6－PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞提供可靠依据，采用RT－PCR半定量技术、直接免疫荧光标记及流式细胞术检测了IL－6R的α亚单位基因及蛋白在多种人白血病细胞细胞系中的表达。结果表明，粒系、单核系、红白血病细胞系HL－60，KG－1，U937和TF－1均高表达IL－6R的α亚单位基因和蛋白；淋巴系白血病细胞系Raji亦有一定量的基因表达；而淋巴系细胞等CEM和HuT28以及慢性粒细胞白血病细胞系K562无论是IL－6Rα亚单位的基因还是蛋白均为阴性。相对表达丰度依次为KG－1＞TF－1＞U266＞U937＞HL－60＞Raji。鉴于粒系、单核系、红白血病细胞高表达IL－6Rα亚单位的基因和蛋白，而IL－6Rα亚单位蛋白在正常人外周血细胞均为阴性表达这一事实，提示可以利用IL－6／IL－6R系统介导重组IL－6－PE40外毒素融合蛋白进行靶向杀伤和治疗这些白血病，而且不会对正常血细胞产生毒副作用。