药物AC-88对荷瘤鼠T细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA含量及其增殖功能影响

目的：探讨AC-88抗肿瘤作用及可能机制。方法：以移植H22肝癌细胞的小鼠为体内模型，研究了AC-88的抑瘤作用；应用细胞培养和MTT法研究荷瘤小鼠T淋巴细胞的增殖功能；用RT-PCR法研究荷瘤小鼠T淋巴细胞TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA含量变化。结果：实验发现，AC-88的体内抑瘤率可高达76％，而且AC-88能促进荷瘤鼠T淋巴细胞的增殖，能使T细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6等细胞因子的mRNA含量增加2～4倍。结论：AC-88有良好的抑瘤作用，还可以调节T淋巴细胞的功能，是一种具有较高开发价值的抗癌药物。     

半枝莲多糖的抗肝癌作用及其机制的研究

目的探讨半枝莲多糖（SPS）的抗肝癌作用及其机制。方法建立小鼠移植瘤模型,采用荷瘤小鼠抑瘤率检测SPS对H22肝癌小鼠的抗肿瘤作用;制备荷瘤小鼠脾细胞悬液,检测SPS对脾淋巴细胞增殖和脾细胞分泌IL-2和TNF-α的影响。结果SPS在50-200mg／（kg-d）范围内可抑制小鼠H22肝癌的生长,促进荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖,提高脾细胞分泌IL-2和TNF-α的水平。结论SPS可能是通过增强机体免疫功能达到治疗肿瘤的功效。     

灵芝多糖对小鼠肿瘤的抑制作用及免疫指标的观察

目的:观察灵芝多糖的抑瘤作用及对小鼠免疫系统的影响。方法:MTT法测定灵芝多糖的细胞毒作用。小鼠荷瘤建立动物模型,观察灵芝多糖对荷瘤小鼠的存活期、抑瘤率和免疫系统的影响。结果:灵芝多糖对肿瘤细胞无直接杀伤作用(P<0.005),体内可延长荷瘤小鼠的存活期;治疗组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞转化率、血清中TNF蛳α均有显著提高。结论:灵芝多糖抗肿瘤作用是通过机体的免疫系统介导的。     

五行汤对黑色素瘤小鼠抑瘤作用及免疫功能的影响

背景与目的:民间验方"五行汤"由牛蒡、白萝卜、白萝卜叶、胡萝卜和香菇组成,有一定的抗肿瘤效果,值得深入研究.本研究通过动物体内实验观察五行汤对小鼠黑色素瘤的抑瘤作用和免疫功能的影响,同时检测比较单方和复方作用差异.方法:用不同成分汤剂处理小鼠黑色素瘤细胞B16,MTT法检测汤剂对细胞生长的影响;C57/BL6 小鼠接种B16建立小鼠黑色素瘤模型,随机分为阳性组、空白组和各汤剂处理组;接种后第2天给小鼠灌胃,每天1次, 25 d后处死小鼠取瘤称重;MTT法检测小鼠T淋巴细胞转化功能,乳酸脱氢酶(LDH)法检测NK细胞杀伤活性.结果:体外实验显示不同成分汤剂均可抑制B16细胞生长,以复方五行汤抑制作用最强,同时呈浓度依赖性;体内实验显示不同成分汤剂有不同程度的抑瘤作用;不同成分汤剂灌胃后小鼠淋巴细胞转化功能相应增强;同时NK细胞杀伤活性也有不同程度的增加;抑瘤作用和免疫功能的单、复方的比较中都是五行汤的作用最强.结论:五行汤对小鼠黑色素瘤有较明确的抑制作用同时可以增强荷瘤小鼠细胞免疫功能.     

IL-24对B16细胞生长抑制作用的体内外实验研究

目的:构建白细胞介素24(Interleukin24,IL24)真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL24真核表达质粒pEGFPIL24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察其表达,用MTT法检测B16细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的体内生长抑制作用。结果:pEGFPIL24转染B16细胞后,LSM可观察到IL24在细胞中的表达。转染IL24基因的B16细胞体外增殖能力明显受到抑制,细胞被阻滞在G2/M期。与对照组相比,IL24基因治疗组肿瘤在体内的生长受到明显抑制,P<0.05。结论:IL24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。于荷瘤小鼠的瘤内注射pEGFPIL24可抑制肿瘤生长,提示IL24具有明显的体内外抗肿瘤作用。     

氧化苦参碱对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的研究氧化苦参碱(OMT)的抑瘤作用和免疫功能变化的关系.方法应用HEP-A-22肝癌小鼠模型进行免疫指标比较.结果显示OMT在近期内(15天)对荷瘤小鼠有明显抑瘤作用.结论氧化苦参碱可明显提高荷瘤小鼠免疫功能,并产生抑瘤效应.     

多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响和抑瘤作用的实验研究

目的　探讨多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响和抑瘤作用。方法　建立B16黑色素瘤小鼠模型 ,Ⅰ组瘤体周围皮下注射IL 2 ,Ⅱ组注射IL 2和人参多糖 ,Ⅲ组注射人参多糖 ,通过测量瘤重、瘤体积和抑瘤率观察其抑瘤作用 ;同时取小鼠脾细胞培养 ,1组加IL 2 ,2组加IL 2和人参多糖 ,3组加人参多糖 ,用台盼蓝染色 ,观察多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响。结果　人参多糖与IL 2联合体内应用抗肿瘤作用显著强于LAK细胞 (P <0 .0 5 ) ;人参多糖与IL 2联合体外培养表明 ,人参多糖能促进LAK细胞的增殖能力 (P <0 .0 5 )。结论　人参多糖与IL 2联合应用在体内抗肿瘤作用显著强于LAK细胞 ,在体外培养能促进LAK细胞的增殖能力     

"乳癌术后方"抗高转移小鼠乳腺癌作用机制的研究

目的:初步探讨治疗乳腺癌的作用机制是否与调节机体免疫功能有关。方法:采用4T1乳腺癌小鼠为实验模型,口服中药"乳癌术后方",观察其抑瘤及抗肺转移作用,并对荷瘤小鼠T细胞增殖功能、T细胞表型及细胞因子IL-10、IL-12、IFNγ-等免疫指标进行检测。结果:实验显示"乳癌术后方"对荷瘤小鼠瘤体积抑制率及肺转移抑制率分别为42.70%、13.14%,与模型组相比能显著抑制肿瘤生长(P<0.01);中药与CTX同时使用还能将CTX的抑瘤率再提高13%(P<0.01),肺转移抑制率再提高近10%。与模型组相比,"乳腺癌术后方"能明显上调荷瘤小鼠T细胞和B细胞活性,下调巨噬细胞百分比,明显增强T淋巴细胞增殖能力(P<0.01),并能抑制荷瘤小鼠淋巴细胞IL-10的生成,增强IFNγ-及IL-12的产生,使之更接近正常小鼠水平。结论:"乳癌术后方"的抗肿瘤作用可能是通过减轻荷瘤宿主的免疫抑制、增强机体抗肿瘤免疫反应来实现的。     

莪术醇修饰的肿瘤疫苗抗MFC效应的研究

目的:研究中药莪术提取的有效成分-莪术醇生物修饰构建的肿瘤细胞疫苗对荷瘤(MFC)小鼠的免疫功能变化及治疗效应。方法:用现代生物学技术修饰构建瘤苗,观察莪术醇-MFC细胞瘤苗体外激活脾淋巴细胞的能力,体内成瘤性变化及作为瘤苗对荷瘤胃癌的小鼠治疗作用。结果:莪术醇-MFC细胞瘤苗在体外能有效诱导免疫细胞活化增殖和特异性CTL活性的产生,体内的成瘤能力明显下降,免疫接种瘤苗后对荷瘤鼠胃癌小鼠有较好的治疗效果。结论:莪术醇修饰的肿瘤细胞瘤苗能明显增强其免疫原性、对荷瘤胃癌小鼠有较好的治疗效应。     

灵芝发酵液对小鼠肿瘤的抑制作用及免疫指标观察

目的观察灵芝发酵液的抑瘤作用及其机制.方法MTT法测定灵芝发酵液的细胞毒作用.小鼠荷瘤制造动物模型,观察灵芝发酵液对其生存期、抑瘤率及免疫指标的影响.结果灵芝发酵液对肿瘤细胞无直接杀伤作用(P＜0.05),能显著延长荷瘤小鼠的生存时间(P＜0.005),(P＜0.005),对实体瘤的抑瘤率达64.84%(P＜0.01),治疗组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞转化率、血清中TNF-α和NO浓度均显著提高.结论灵芝发酵液抗瘤作用是通过机体的免疫系统介导的.     

Klotho 蛋白通过TGF-β1/Foxp3/RORγt 通路抑制Treg 和Th7 细胞介导的宫颈癌细胞的免疫逃逸

目的: 研究抗衰老蛋白Klotho 对荷宫颈癌小鼠体内调节性T细胞（Treg 细胞）和辅助性T细胞17（Th7）细胞介导宫颈癌细胞免疫逃逸的影响及其作用机制。方法: 建立宫颈癌U14 细胞移植瘤小鼠模型,并设Control 组（正常小鼠组）、Model 组（荷宫颈癌小鼠模型组）、Klotho 处理组（荷宫颈癌小鼠经Klotho 蛋白处理组,200 ng/d)。分别在处理7、14 d 时称取各组小鼠体内宫颈癌移植瘤质量,以流式细胞术检测各组小鼠脾淋巴细胞功能、Treg和Th7细胞比例变化,qPCR检测各组小鼠Treg和Th7细胞关键转录因子Foxp3、RORγt的表达情况,ELISA方法检测各组小鼠脾淋巴细胞培养液中IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β、IL-23 等因子的含量变化,WB检测各组小鼠脾淋巴细胞中Klotho、TGF-β1、Foxp3、RORγt 蛋白表达的变化。结果: 14 d 时,Klotho 组宫颈癌荷瘤小鼠肿瘤抑瘤率显著高于Model 组[(52.16±8.25)% vs (23.33±6.29)%,P<0.05]。Model 组与Control 组相比,荷瘤小鼠脾淋巴细胞中Treg、Th7 细胞比例均显著升高（均P<0.05）,总T淋巴细胞（CD3+）、辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）比例及免疫指数（CD3+CD4+/CD3+CD8+）显著下降（均P<0.05）,Foxp3、RORγt 基因mRNA表达显著增加（均P<0.05）,IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β、IL-23 等因子分泌显著增加（均P<0.05）,Klotho 蛋白水平明显下降（P<0.05）,TGF-β1、Foxp3、RORγt 蛋白表达均明显升高（均P<0.05）;而Klotho 处理组与Model 组相比,上述指标均出现了相反的变化（均P<0.05）,但与Control 组无显著差异（均P>0.05）。结论: Klotho 蛋白可能通过调控TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路抑制宫颈癌荷瘤小鼠体内Treg和Th7 细胞介导的免疫逃逸,从而发挥抗肿瘤作用。     

蛋氨酸脑啡肽联合低剂量纳曲酮治疗胰腺癌的实验研究

目的:通过单独应用MENK、NTX 与联合应用MENK 与NTX 的体内外实验,探讨MENK、NTX 及二者联合时对胰腺癌的抑制作用。方法:体外实验中,MTS方法检测各实验组中胰腺癌增殖细胞的抑制情况;体内实验中,通过建立胰腺癌荷瘤小鼠模型,检测各实验处理组中胰腺癌的抑制情况。 WB法检测荷瘤小鼠胰腺癌组织阿片受体蛋白表达量;流式细胞术检测荷瘤小鼠淋巴细胞亚群（CTL、Treg、NK、γδT）的增殖情况。结果:在体外实验中,MENK 在浓度为10-6 mol/L时对胰腺癌细胞的抑制作用最强;NTX在浓度为10-5 mol/L时对胰腺癌细胞的抑制作用最强;二者相比较,MENK的作用更加显著,具有统计学意义（P＜0.05）;在体内实验中,MENK 与NTX 联合应用在48 小时后与对照组相比较,具有统计学意义（P＜0.05）,在96小时,与MENK组和NTX 组相比较抑癌率升高,具有统计学意义（P＜0.05）;在体内实验中,在1次/24 h的给药方式下,MENK在剂量为20 mg/kg 时抑癌效果最显著;NTX 在剂量为5 mg/kg 时抑癌效果最显著;MENK组与NTX组相比较作用更加显著,具有统计学意义（P＜0.05）;MENK 与NTX 联合应用时,MENK 在剂量为20 mg/kg 1 次/24 h 与NTX 在剂量为5 mg/kg 1 次/96 h 给药方式时,抑癌效果最显著,与对照组相比具有统计学意义（P＜0.05）;Western-blot 技术检测荷瘤小鼠肿瘤组织阿片受体的蛋白的表达含量,NTX 组与MENK+NTX 组肿瘤组织阿片受体蛋白表达量增加,NTX 组高于MENK+NTX 组,具有统计学意义（P＜0.05）;流式细胞技术检测荷瘤小鼠淋巴细胞亚群增殖情况,MENK组、NTX 组与MENK+NTX组都可以促进淋巴细胞亚群（CTL、NK、γδT）增殖,抑制Treg增殖,与对照组相比具有统计学意义（P＜0.05）。结论:MENK在体内外能够抑制胰腺癌细胞增殖,NTX在体内外能够抑制胰腺癌细胞增殖,两者相比MENK作用更加显著;MENK与NTX联合应用,在NTX给药72小时后具有协同作用;NTX在体内能够上调肿瘤组织阿片受体的蛋白表达;MENK和NTX均能在体内能够促进CTL、NK、γδT细胞的增殖,抑制Treg细胞的增殖,二者联合具有协同作用。     

定位表达的新城疫病毒HN蛋白对荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫作用

背景与目的 新城疫病毒HN蛋白是新城疫病毒产生溶瘤作用的重要免疫原.在前期体外实验基础 上,比较定位表达细胞不同部位的HN蛋白体内抗肿瘤免疫作用.方法 通过构建荷瘤小鼠,瘤内注射定位表达于 细胞不同部位的新城疫病毒HN蛋白,即胞浆型(Cy-HN)、跨膜型(M-HN)、分泌型(Sc-HN)重组真核表达质 粒,比较荷瘤小鼠的肿瘤生长速度,脾淋巴细胞增殖反应和细胞毒T细胞活性.结果 瘤内注射跨膜型重组真核表达 质粒的荷瘤小鼠肿瘤生长缓慢,与瘤内注射胞浆型和分泌型重组真核表达质粒的荷瘤小鼠相比有统计学差异(第18 天:P=0.022;第21天:P<0.01),同时,该组荷瘤小鼠的淋巴细胞增殖反应和细胞毒T细胞活性也较高[M-HN vs Cy- HN, P=0.019; M-HN vs Sc-HN, P=0.043; M-HN vs pcDNA3.1(+), P<0.01].结论 定位表达于细胞不同部位的HN蛋白体内 抗肿瘤免疫作用存在差异,跨膜型HN蛋白的重组DNA质粒能够提高荷瘤小鼠的特异性细胞免疫应答.     

表达RANTES基因的腺病毒载体构建及抗肿瘤作用研究

目的:构建表达活化T细胞表达和分泌的调节因子(regulatedonactivationnormalTexpressedandsecreted,RANTES)基因的腺病毒载体并研究其抗肿瘤作用机制和效果。方法:RT-PCR法克隆人和鼠源性(regulatedonacti-vationnormalTexpressedandsecreted,RAN-TES)基因,采用AD-easyXLAdenovirusVectorSystem试剂盒分别构建表达上述基因的腺病毒载体。通过趋化试验验证表达RANTES基因的腺病毒载体转染细胞后所具有的趋化肿瘤免疫细胞的作用。应用于体外及小鼠体内试验,包括成瘤试验及抑瘤试验,通过观察免疫效应细胞对小鼠体内肿瘤的抑制作用来评价其在肿瘤治疗方面的作用。结果:克隆了人和鼠源性RANTES基因编码序列并成功地构建腺病毒表达载体;功能试验表明由腺病毒表达的RANTES具有趋化肿瘤免疫细胞的作用。体内试验表明该病毒载体可抑制肿瘤细胞成瘤作用,应用于荷瘤小鼠可抑制肿瘤的发展,延长荷瘤小鼠的生存时间。结论:表达RANTES基因的腺病毒载体可显著地趋化免疫细胞到肿瘤局部杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞成瘤作用并延长荷瘤小鼠的生存时间,为肿瘤的生物学治疗提供了新的研究方向。     

新城疫病毒D817对裸小鼠人结肠癌移植瘤的抑制作用

目的 观察新城疫病毒DK/HK/817/1980(NDV D817)对裸小鼠人结肠癌移植瘤的抑制作用.方法 采用LoVo细胞株建立裸小鼠人结肠癌移植瘤模型,分别给予裸小鼠尾静脉注射PBS、氟尿嘧啶(5-Fu)以及NDV D817高、中、低3个剂量,观察不同剂量NDV D817对移植瘤的抑制作用,病理学观察NDV D817对移植瘤和肝细胞的损伤程度,流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡和坏死情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测荷瘤小鼠体内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,血凝实验检测荷瘤小鼠体内活病毒量.结果 中剂量NDV D817可明显抑制移植瘤的生长,肿瘤抑制率达48.1%.NDV D817对荷瘤小鼠体重和肝脏的损伤较小,且具有诱导肿瘤细胞凋亡和诱导机体产生TNF-α的能力.荷瘤小鼠处死后只在瘤内检测到活病毒,而在血清和其他脏器中并没有检出活病毒.结论 在对裸小鼠人结肠癌移植瘤的抑制过程中,NDV D817有明显的抑瘤效果,适当剂量的NDVD817更安全有效.     

阿片类药物对肝癌小鼠细胞免疫功能及IL-2和TNF-α的影响

目的 探讨不同的阿片类药物对肝癌小鼠细胞免疫功能及IL-2和TNF-α的影响.方法 采用细胞接种的方法建立H22肝癌小鼠动物模型,随机分成5组,每组10只,流式细胞仪技术检测肝癌小鼠T淋巴细胞亚群中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ /CD8+数值,双抗体夹心法(ELISA)检测小鼠血清IL-2和TNF-α数值.结果 与0.9％氯化钠溶液组相比哌替啶组中肝癌小鼠T淋巴细胞亚群中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+没有明显变化(P＞0.05),吗啡组、芬太尼组和舒芬太尼组均明显降低(P＜0.05);与0.9％氯化钠溶液组比较哌替啶组小鼠血清IL-2含量明显升高(P＜0.05),血清TNF-α含量无明显差别(P＞0.05),与0.9％氯化钠溶液组比较吗啡组、芬太尼组、舒芬太尼组血清IL-2和TNF-α均明显降低(P＜(0.05).结论 吗啡、芬太尼、舒芬太尼对肝癌小鼠T淋巴细胞亚群和IL-2、TNF-α明显抑制.哌替啶对肝癌小鼠T淋巴细胞亚群抑制不明显,能提高血中IL-2含量,对TNF-α水平无明显抑制.     

食道癌患者IL-2RαmRNA表达的初步研究

癌症患者的免疫功能与肿瘤的发生发展密切相关，IL-2通过和细胞膜上的IL-2R结合，调节T、B淋巴细胞、NK、LAK细胞的增殖和功能．发挥其抗瘤作用。IL2R的正常或异常表达与机体的生理、病理过程密切相关。本文重点探讨食道癌患者IL-2R mRNA表达与肿瘤转移的关系。     

转染4-1BBL基因的胃癌细胞在小鼠体内的抗肿瘤及免疫调节作用

目的:观察转染4-1BBL基因的小鼠胃癌细胞株MFC的体内致瘤性及其对小鼠免疫功能的影响。方法:通过脂质体介导以重组质粒pMKITneo和pMKITneo/4-1BBL转染小鼠胃癌细胞株MFC。用RT-PCR法检测目的基因的表达。计数法绘制体外培养细胞生长曲线。将转染前后肿瘤细胞,分别接种于615小鼠背部皮下观察其致瘤性。流式细胞仪测定荷瘤小鼠外周血NK、CD4 T和CD8 T细胞数,并测定荷瘤小鼠肿瘤结节内细胞凋亡率。结果:MFC/4-1BBL细胞中可检测到4-1BBLmRNA表达。转染前后肿瘤细胞的体外生长速度无明显变化。MFC/4-1BBL细胞在小鼠体内的致瘤性较MFC/pMKITneo细胞和野生型MFC细胞明显降低。接种MFC/4-1BBL细胞的小鼠外周血NK细胞及CD8 T细胞数明显增多;其肿瘤结节内细胞凋亡率亦明显增高。结论:转染4-1BBL基因后并未影响MFC细胞的体外生长,但其在小鼠体内的致瘤性明显降低。MFC/4-1BBL细胞可诱导荷瘤小鼠体内CD8 T和NK细胞增殖,而且能促进肿瘤细胞的凋亡。     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

全复配食用菌提取物对C26荷瘤小鼠的抑瘤作用和免疫功能影响

背景与目的:食用真菌在医疗保健领域的研究展现出强大的应用潜力.该课题探讨全复配食用菌提取物的抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法:小鼠随机编号分组,其中预防组预先给予全复配食用菌提取物灌胃2周,每天1次,之后各组均接种C26细胞建立荷瘤小鼠模型,接种后第2天给小鼠予以不同制剂灌胃(空白组灌0.9%氯化钠溶液,治疗组、预防阻灌复配食用菌提取物,CTX阳性组腹腔注射CTX)每天1次,观察记录小鼠一般状态,2周后处死小鼠无菌取脾脏、取瘤称重.MTT法检测小鼠脾淋巴细胞转化功能,乳酸脱氢酶(LDH)法检测NK细胞杀伤活性.结果:复配食用菌提取物预防组对小鼠C26肿瘤有30.4%的抑制率;小鼠脾淋巴细胞在ConA刺激下的增殖能力和NK细胞杀伤功能均显著高于空白组.结论:复配食用菌提取物预防性摄入对再接种C26小鼠有抑瘤和免疫增强作用.