循环纤维细胞在慢性哮喘模型小鼠气道重塑中的作用

目的探讨循环纤维细胞在慢性哮喘气道重塑中的作用。方法将30只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组,哮喘组和氯化钆清空组。建立小鼠慢性哮喘模型,利用氯化钆清空循环纤维细胞,观察其对慢性哮喘模型气道重塑的影响,HE染色观察其病理改变;Masson染色观察气道胶原沉积;图像分析系统软件测量气道网状基底膜、平滑肌厚度和胶原面积;免疫组化法检测气道CD45、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和Ⅰ型胶原的表达。结果 HE染色形态学变化:哮喘组气道上皮细胞脱落,黏膜下见大量炎性细胞浸润,基底膜及平滑肌层明显增厚;与哮喘组相比,氯化钆清空组上述病变均减轻。各组网状基底膜及平滑肌层测量结果:哮喘组小鼠基底膜、平滑肌厚度均显著大于对照组(P0.01);氯化钆清空组基底膜、平滑肌厚度明显薄于哮喘组(P0.01);但显著厚于对照组(P0.01)。Masson染色及胶原面积测量结果:与对照组相比,哮喘组和氯化钆清空组胶原沉积量明显增加(P0.01);与哮喘组相比,氯化钆清空组胶原沉积量明显减少(P0.01)。免疫组化法检测结果:与对照组相比,哮喘组和氯化钆清空组纤维细胞表面CD45、α-SMA和Ⅰ型胶原表达明显增加(P0.01);与哮喘组相比,氯化钆清空组上述表达明显降低(P0.01)。结论循环纤维细胞在慢性哮喘气道重塑中起着重要的作用。     

1,25-二羟维生素D3对支气管哮喘小鼠气道重塑及基质金属蛋白酶9表达的影响

目的观察1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotease-9,MMP-9)表达的影响,探讨1,25-(OH)2D3在哮喘治疗中的作用。方法BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及1,25-(OH)2D3组。卵白蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型;HE染色观察各组气道结构改变情况;采用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况;采用RT-PCR法检测各组的MMP-9mRNA表达水平。结果①HE染色提示哮喘组与对照组相比出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变,而1,25-(OH)2D3组可部分逆转上述病理改变;②1,25-(OH)2D3组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05);③1,25-(OH)2D3组肺组织MMP-9mRNA表达水平均明显低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05)。结论1,25-(OH)2D3干预可显著减轻慢性哮喘气道重塑的病理改变;并可通过部分抑制肺内MMP-9的表达来延缓气道重塑进程。     

H2型松弛素对慢性支气管哮喘小鼠气道重塑与肺组织细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 研究H2型松弛素(H2Relaxin)对慢性支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠气道重塑及肺组织细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)表达的影响,探素松弛素在哮喘治疗中的可能作用.方法 将40只BALB/c小鼠按随机数字表法分为健康对照组、哮喘组、阴性对照组(vehicle)、松弛素组4组,每组10只;卵清白蛋白(OVA)致敏、激发建立慢性哮喘小鼠模型;vehicle组和松弛素组每日分别给予生理盐水和松弛素(0.25 mg·kg-1 ·d-1)皮下注射.HE和马森(Masson)染色观察各组小鼠气道炎症及胶原沉积情况;采用免疫组织化学半定量法测定气道壁α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)的表达;酶联免疫吸附测定( ELISA)法检测肺组织羟脯氨酸含量;用逆转录-PCR(RT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)分别测定各组小鼠肺组织中cyclin D1mRNA和蛋白表达水平.结果 哮喘组、vehicle 组与健康对照组相比,嗜酸粒细胞浸润增多,气道管腔狭窄,平滑肌层增厚,胶原纤维增生,而松弛素组上述改变较此2组轻.与健康对照组相比,哮喘组、vehicle组小鼠支气管α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径显著增加(均P ＜0.05),松弛素组小鼠支气管α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径低于哮喘组和vehicle组(均P＜0.05);哮喘组和vehicle组小鼠羟脯氨酸含量[每克肺组织中分别为(0.68±0.10)mg、(0.67±0.10) mg]高于健康对照组的(0.26±0.05)mg(q值分别为16.61和16.01,均P＜0.01),松弛素组小鼠羟脯氨酸含量为(0.40±0.06)mg,低于哮喘组和vehicle组(q值分别为10.88和10.26,均P＜0.05);Western blot检测结果显示,cyclin D1在哮喘组、vehicle组和松弛素组的表达(分别为1.38±0.18、1.50±0.10和0.72±0.13)高于健康对照组的0.38±0.10(q值分别为13.00、14.65和4.49,均P＜0.05),而松弛素组表达量低于哮喘组与vehicle组(q值分别为8.51和10.16,均P＜0.05).哮喘组与vehicle组各项检测指标间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 松弛素可以显著减轻慢性哮喘小鼠气道炎症反应和平滑肌层的增厚,延缓哮喘小鼠气道重塑进程,该作用可能部分与其下调cyclin D1表达有关.     

支气管哮喘大鼠细胞周期蛋白D1与气道重塑关系的研究

目的 观察支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型肺组织中细胞周期蛋白D1的表达变化,以及细胞周期蛋白D1与气道重塑的关系.方法 16只SD大鼠随机分成正常组和哮喘组,每组8只.应用卵清蛋白致敏和激发的方法建立哮喘大鼠动物模型.HE染色观察气道炎症情况,采用马松染色观察气道胶原沉积变化,免疫组织化学和蛋白印迹法观察细胞周期蛋白D1的表达变化,免疫组织化学法观察气道平滑肌肌动蛋白-α表达变化.结果 哮喘组大鼠气道胶原沉积、细胞周期蛋白D1和肌动蛋白-α表达较正常组明显增高(P＜0.05),哮喘组肌动蛋白-α与细胞周期蛋白D1表达呈明显正相关(r1=0.20,P＜0.05;r2=0.53,P＜0.05).结论 细胞周期蛋白D1参与哮喘气道重塑的调节.     

支气管哮喘大鼠细胞周期蛋白D1与气道重塑关系的研究

目的 观察支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型肺组织中细胞周期蛋白D1的表达变化,以及细胞周期蛋白D1与气道重塑的关系.方法 16只SD大鼠随机分成正常组和哮喘组,每组8只.应用卵清蛋白致敏和激发的方法建立哮喘大鼠动物模型.HE染色观察气道炎症情况,采用马松染色观察气道胶原沉积变化,免疫组织化学和蛋白印迹法观察细胞周期蛋白D1的表达变化,免疫组织化学法观察气道平滑肌肌动蛋白-α表达变化.结果 哮喘组大鼠气道胶原沉积、细胞周期蛋白D1和肌动蛋白-α表达较正常组明显增高(P<0.05),哮喘组肌动蛋白-α与细胞周期蛋白D1表达呈明显正相关(r1=0.2C,P<0.05;r2=0.53,P<0.05).结论 细胞周期蛋白D1参与哮喘气道重塑的调节.     

支气管哮喘大鼠细胞周期蛋白D1与气道重塑关系的研究

目的 观察支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型肺组织中细胞周期蛋白D1的表达变化,以及细胞周期蛋白D1与气道重塑的关系.方法 16只SD大鼠随机分成正常组和哮喘组,每组8只.应用卵清蛋白致敏和激发的方法建立哮喘大鼠动物模型.HE染色观察气道炎症情况,采用马松染色观察气道胶原沉积变化,免疫组织化学和蛋白印迹法观察细胞周期蛋白D1的表达变化,免疫组织化学法观察气道平滑肌肌动蛋白-α表达变化.结果 哮喘组大鼠气道胶原沉积、细胞周期蛋白D1和肌动蛋白-α表达较正常组明显增高(P＜0.05),哮喘组肌动蛋白-α与细胞周期蛋白D1表达呈明显正相关(r1=0.20,P＜0.05; r2=0.53,P＜0.05).结论 细胞周期蛋白D1参与哮喘气道重塑的调节.     

转化生长因子β1Ⅰ型受体拮抗剂对支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)Ⅰ型受体拮抗剂SB 431542对慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型气道炎症及气道重塑的影响,为哮喘的治疗提供新思路.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组及SB 431542组,每组10只;卵清蛋白(OVA)致敏、激发建立慢性哮喘小鼠模型;布地奈德组和SB 431542组分别给予布地奈德雾化吸入和SB 431542滴鼻,每周3次.HE和Masson染色观察各组小鼠气道炎症及胶原沉积情况;AB-PAS染色观察杯状细胞增生情况;免疫组织化学半定量法测定气道壁α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1水平及血清总IgE水平;免疫印迹法(Western blot)测定各组小鼠肺组织中Smad3、p-Smad3及Smad7蛋白表达.结果 哮喘组与正常组相比,嗜酸粒细胞浸润增多,气道管腔狭窄,平滑肌层增厚,胶原纤维增生;布地奈德组上述改变均较哮喘组轻;SB 431542组嗜酸粒细胞浸润较哮喘组减轻,但仍高于正常组及布地奈德组,平滑肌层增厚、胶原纤维增生较哮喘组明显减轻(P＜0.05),与布地奈德组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,哮喘组小鼠支气管AB-PAS及α-SMA 阳性染色面积/支气管基底膜周径显著增加(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组小鼠支气管AB-PAS及α-SMA 阳性染色面积/支气管基底膜周径低于哮喘组(P＜0.05).哮喘组气道炎症指标(血清总IgE、IL-4、IL-5及TGF-β1)显著高于正常组(P＜0.05),布地奈德组上述指标低于哮喘组(P＜0.05),SB 431542组与哮喘组比较差异无统计学意义(P＞0.05).MMP-9、TIMP-1在哮喘组的表达明显高于正常组(P＜0.05),在布地奈德组及SB 43542组的表达低于哮喘组(P＜0.05),两治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot检测显示,各组小鼠肺组织Smad3的表达差异无统计学意义(P＞0.05);哮喘组p-Smad3表达明显高于正常组(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组p-Smad3表达低于哮喘组(P＜0.05);与正常组比较,哮喘组Smad7表达降低(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组Smad7表达高于哮喘组(P＜0.05),且这两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SB 431542能显著减轻哮喘小鼠细胞外基质沉积及平滑肌增厚,延缓哮喘小鼠气道重塑进程,该作用可能部分与其调节MMP-9、TIMP-1的表达有关.SB 431542对哮喘小鼠气道炎症浸润无明显改善,说明哮喘气道炎症可能不依赖于TGF-β1/Smads通路.     

转化生长因子β1Ⅰ型受体拮抗剂对支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)Ⅰ型受体拮抗剂SB 431542对慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型气道炎症及气道重塑的影响,为哮喘的治疗提供新思路.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组及SB 431542组,每组10只;卵清蛋白(OVA)致敏、激发建立慢性哮喘小鼠模型;布地奈德组和SB 431542组分别给予布地奈德雾化吸入和SB 431542滴鼻,每周3次.HE和Masson染色观察各组小鼠气道炎症及胶原沉积情况;AB-PAS染色观察杯状细胞增生情况;免疫组织化学半定量法测定气道壁α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1水平及血清总IgE水平;免疫印迹法(Western blot)测定各组小鼠肺组织中Smad3、p-Smad3及Smad7蛋白表达.结果 哮喘组与正常组相比,嗜酸粒细胞浸润增多,气道管腔狭窄,平滑肌层增厚,胶原纤维增生;布地奈德组上述改变均较哮喘组轻;SB 431542组嗜酸粒细胞浸润较哮喘组减轻,但仍高于正常组及布地奈德组,平滑肌层增厚、胶原纤维增生较哮喘组明显减轻(P ＜0.05),与布地奈德组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,哮喘组小鼠支气管AB-PAS及a-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径显著增加(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组小鼠支气管AB-PAS及α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径低于哮喘组(P＜0.05).哮喘组气道炎症指标(血清总IgE、IL-4、IL-5及TGF-β1)显著高于正常组(P＜0.05),布地奈德组上述指标低于哮喘组(P ＜0.05),SB 431542组与哮喘组比较差异无统计学意义(P＞0.05).MMP-9、TIMP-1在哮喘组的表达明显高于正常组(P＜0.05),在布地奈德组及SB 43542组的表达低于哮喘组(P＜0.05),两治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot检测显示,各组小鼠肺组织Smad3的表达差异无统计学意义(P＞0.05);哮喘组p-Smad3表达明显高于正常组(P＜0.05),布地奈德组及SB431542组p-Smad3表达低于哮喘组(P＜0.05);与正常组比较,哮喘组Smad7表达降低(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组Smad7表达高于哮喘组(P＜0.05),且这两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SB 431542能显著减轻哮喘小鼠细胞外基质沉积及平滑肌增厚,延缓哮喘小鼠气道重塑进程,该作用可能部分与其调节MMP-9、TIMP-1的表达有关.SB 431542对哮喘小鼠气道炎症浸润无明显改善,说明哮喘气道炎症可能不依赖于TGF-β1/Smads通路.     

β2-肾上腺素受体表达水平与支气管哮喘气道重塑的关系

目的通过观察β2-肾上腺素受体(β2-adenergic receptor,β2-AR)在支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠气道壁组织表达水平的变化,探讨β2-AR表达水平与气道重塑的关系及观察应用β2-受体激动剂对小鼠气道重塑的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠分为3组,每组10只,分别为对照组(DZ)、哮喘模型组(MX)和特布他林组(TB)。采用0.2%卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)溶液腹腔注射致敏及2.5%OVA溶液雾化吸入激发的方法制作小鼠哮喘气道重塑模型,同时给予β2-受体激动剂(特布他林)干预,最后一次激发24h内处死小鼠,取其肺组织,对肺组织切片进行HE染色,以医学图像分析软件测量支气管基底膜周径(Pbm)、总气道壁面积(Wat)和平滑肌面积(Wam),同时采用免疫组织化学法,应用上述图像分析软件检测气道壁组织β2-AR的积分光密度值(IOD)。结果①各组小鼠总气道壁面积/支气管基底膜周径(Wat/Pbm):MX组(25.37±4.25)与DZ组(12.89±1.71)、TB组(15.98±2.58)相比较,气道壁显著增厚(P<0.01),TB组与DZ组相比较,气道壁厚度无明显差别(P>0.05);各组小鼠平滑肌面积/支气管基底膜周径(Wam/Pbm):MX组(7.58±2.16)与DZ组(2.55±0.72)、TB组(3.54±1.63)相比,气道平滑肌增厚(P<0.05),TB组与DZ组相比气道平滑肌厚度无明显差别(P>0.05)。②各组小鼠气道壁β2-AR表达的IOD值:与DZ组(24.90±2.42)相比较,MX组(19.88±1.94)小鼠气道壁组织β2-AR的表达水平显著降低(P<0.01),同时TB组(22.10±1.08)小鼠气道壁组织β2-AR的表达水平也显著低于对照组小鼠(P<0.01)。结论①应用β2-受体激动剂可通过抑制气道平滑肌增殖,减轻小鼠哮喘气道壁增厚,干预气道重塑;②哮喘发生气道重塑时,小鼠气道壁组织β2-AR表达明显下调,同时应用-受体激动剂(特布他林)可下调小鼠气道壁组织-AR的表达。     

外源性间充质干细胞减轻支气管哮喘小鼠气道炎症的研究

目的 观察鸡卵清蛋白诱导小鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型中外源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)在哮喘小鼠肺组织气道炎症中的作用.方法 45只雌性SPF级C57BL/6小鼠,体质量18～22 g.随机分为对照组(P:P:P)、哮喘组(O:P:O)和MSC治疗组(O:M:O).哮喘组与MSC治疗组第1天和第8天致敏,第15天、第16天和第17天使用OVA气道内滴入激发哮喘.MSC治疗组于哮喘造模第14天移植外源性MSC.对照组小鼠予PBS处理.三组小鼠于末次激发结束后24 h(第18天)处死,取支气管肺泡灌洗液上清,ELISA检测IL-5、IL-9及β-氨基己糖苷酶;支气管肺泡灌洗液细胞计数总细胞数、嗜酸粒细胞数;取肺组织行病理切片苏木精-伊红染色观察肺部气道炎症情况.结果 ①MSC下调了哮喘小鼠气道局部炎症;②MSC减轻了哮喘小鼠肺组织中的炎细胞浸润;③MSC减轻了哮喘小鼠气道中的肥大细胞脱颗粒现象;④MSC抑制了哮喘小鼠过度的Th2变态反应.结论 外源性MSC通过抑制Th2变态反应,减轻哮喘肺组织的气道炎症.     

外源性间充质干细胞减轻支气管哮喘小鼠气道炎症的研究

目的观察鸡卵清蛋白诱导小鼠支气管哮喘（简称哮喘）模型中外源性间充质干细胞（mesenehymal stem cells,MSC）在哮喘小鼠肺组织气道炎症中的作用。方法45只雌性SPF级C57BL／6小鼠,体质量18-22g。随机分为对照组（P：P：P）、哮喘组（O：P：O）和MSC治疗组（O：M：O）。哮喘组与MSC治疗组第1天和第8天致敏,第15天、第16天和第17天使用OVA气道内滴入激发哮喘。MSC治疗组于哮喘造模第14天移植外源性MSC。对照组小鼠予PBS处理。三组小鼠于末次激发结束后24h（第18天）处死,取支气管肺泡灌洗液上清,ELISA检测IL-5、IL-9及β-氨基己糖苷酶;支气管肺泡灌洗液细胞计数总细胞数、嗜酸粒细胞数;取肺组织行病理切片苏木精-伊红染色观察肺部气道炎症情况。结果①MSC下调了哮喘小鼠气道局部炎症;②MSC减轻了哮喘小鼠肺组织中的炎细胞浸润;③MSC减轻了哮喘小鼠气道中的肥大细胞脱颗粒现象;④MSC抑制了哮喘小鼠过度的Th2变态反应。结论外源性MSC通过抑制Th2变态反应,减轻哮喘肺组织的气道炎症。     

血管紧张素Ⅱ对哮喘大鼠气道重塑影响的研究

目的 观察哮喘大鼠肺组织局部肾素-血管紧张素系统(renin -angiotensin system,RAS)的活化,探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)特异性血管紧张素1受体拮抗剂Irbesartan对哮喘气道重塑的影响.方法 将30只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组(C组)、哮喘模型组(A组)和Irbesartan干预组(I组),以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并雾化吸入激发制备大鼠哮喘模型.观察各组大鼠肺功能变化情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)定量分析血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中AngⅡ水平;半定量分析气道壁厚度(Wat/Pbm,气道壁面积/基底膜周径)和气道平滑肌厚度(Wam/Pbm,平滑肌面积/基底膜周径);免疫组织化学方法观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在气道壁的表达,苦味酸天狼猩红染色-偏振光方法观察Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)在气道壁的表达,并对三者的表达水平进行半定量分析.结果 ①Ang水平:血清AngⅡ水平:I组大鼠较A组和C组显著升高(P<0.05),A组和C组间比较差异无显著性(P>0.05).BALF上清中AngⅡ水平:A组较C组显著升高(P<0.05),I组较A组显著升高(P<0.05).②肺功能:吸气阻力(Ri):A组大鼠显著高于C组(P<0.05),I组大鼠与A组、C组比较差异无显著性(P>0.05).呼气阻力(Re):A组大鼠显著高于C组和I组(P<0.05).肺顺应性(CL)A组大鼠较C组明显降低(P<0.05),I组较A组显著提高(P<0.05),但较C组仍有下降(P<0.05).③气道壁厚度:A组大鼠较C组显著增厚(P<0.05),I组较A组显著降低(P<0.05),但仍显著高于C组(P<0.05).气道平滑肌厚度:A组、I组与C组比较均有显著性差异(P<0.05),并且I组较A组显著降低(P<0.05).④TGF-β1表达:I组大鼠气道壁TGF-β1阳性表达:较A组显著降低(P<0.05),较C组仍有显著增加(P<0.05).⑤胶原表达:C组、A组和I组ColⅠ阳性表达:各组间比较差异无显著性(P>0.05).A组ColⅢ阳性表达显著高于I组和C组(P<0.05),I组气道壁ColⅢ表达较C组仍有显著增加(P<0.05).⑥相关性分析:哮喘组大鼠BALF上清中AngⅡ水平与气道壁表达的TGF-β1呈显著正相.结论 哮喘大鼠肺组织局部RAS活化,AngⅡ产生增多.局部增多的AngⅡ可能通过上调TGF-β1的表达,促进ASM增殖肥大和气道壁胶原沉积增加,从而在哮喘气道重塑中发挥重要作用.AngⅡ特异性血管紧张素1受体阻断剂Irbesartan可以减轻气道重塑的发生,并对肺功能有一定程度的改善.     

屋尘螨变应原Der p2 T细胞表位疫苗对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果

目的 探讨屋尘螨变应原Der p2的4个T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为阴性对照组(PBS组)、阳性对照组(哮喘组)以及Der p2 T细胞融合肽治疗组(Der p2 T组)。用屋尘螨粗提取液致敏小鼠建立哮喘模型,PBS组以PBS缓冲液代替,Der p2 T组分别于小鼠致敏第25~27天雾化致敏前30 min行背部皮下注射相应治疗蛋白。最后一次雾化激发24 h后,收集各组小鼠血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)。采用ELISA法检测小鼠BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13以及血清中屋尘螨粗提取液致敏的特异性IgE、IgG2a抗体水平,并行肺组织切片HE染色。结果 哮喘组小鼠BALF中的嗜酸性粒细胞数量为(5.57±0.64)×10~5个/ml,高于PBS组[(0.50±0.30)×10~5个/ml](P0.01)和Der p2 T组[(3.45±0.36)×10~5个/ml](P0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IFN-γ含量分别为(267.00±21.98)、(155.80±20.53)pg/ml和(234.40±24.46)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中产生了较高的IFN-γ水平(P0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量分别为(23.40±5.96)、(53.28±8.26)pg/ml和(30.00±5.50)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量显著降低(P0.01)。与哮喘组[(308.10±28.32)pg/ml]比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-13含量[(174.50±25.99)pg/ml]显著下降(P0.01);PBS组鼠BALF中IL-13含量为(95.99±31.14)pg/ml。肺组织切片显示,Der p2 T组小鼠肺部炎症较哮喘组明显减轻,且炎性细胞浸润显著减少、气道上皮结构重塑。结论 Der p2 T细胞表位融合肽可有效改善哮喘小鼠变态反应性气道及肺部炎症,可作为屋尘螨哮喘患者特异性免疫治疗的候选疫苗。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ在哮喘气道血管重构中的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)在哮喘小鼠气道血管重构中的作用。方法50只小鼠随机分为5组:对照组、激动组、拮抗组、激素组和哮喘组。卵白蛋白雾化吸入建立小鼠哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液、肺组织中炎症反应和重构情况;并以western blot技术测定肺组织中PPARγ的表达水平,比较其与重构程度的关系。结果哮喘组血管管壁厚度[(4.66±0.73)μm]和血管旁胶原纤维沉积量[(22.1±2.42)μm2/μm]较对照组[(2.87±0.46)μm(、1.73±0.73)μm2/μm]明显增加;激动组和激素组中这一变化均较哮喘组明显减轻,且两组间比较无显著性差异。血管管壁厚度与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积(r=0.576、0.692,P<0.01)以及血管旁胶原纤维面积与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积呈正相关(r=0.825、0.928,P<0.01)。除激素组外,核内PPARγ的表达水平与气道平滑肌厚度、气道旁胶原纤维面积和血管旁胶原纤维面积呈负相关(r=-0.73、-0.85、-0.91,P<0.01),而与血管管壁厚度无相关性。结论PPARγ激动剂通过促进PPARγ的核定位,抑制哮喘的气道炎症和气道重构。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ在哮喘气道血管重构中的作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)在哮喘小鼠气道血管重构中的作用.方法 50只小鼠随机分为5组:对照组、激动组、拮抗组、激素组和哮喘组.卵白蛋白雾化吸入建立小鼠哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液、肺组织中炎症反应和重构情况;并以western blot技术测定肺组织中PPARγ的表达水平,比较其与重构程度的关系.结果 哮喘组血管管壁厚度[(4.66±0.73) μm]和血管旁胶原纤维沉积量[(22.1±2.42) μm2/μm]较对照组[(2.87±0.46) μm、(1.73±0.73) μm2/μm]明显增加;激动组和激素组中这一变化均较哮喘组明显减轻,且两组间比较无显著性差异.血管管壁厚度与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积(r=0.576、0.692,P<0.01)以及血管旁胶原纤维面积与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积呈正相关(r=0.825、0.928,P<0.01).除激素组外,核内PPARγ的表达水平与气道平滑肌厚度、气道旁胶原纤维面积和血管旁胶原纤维面积呈负相关(r=-0.73、-0.85、-0.91,P<0.01),而与血管管壁厚度无相关性.结论 PPARγ激动剂通过促进PPARγ的核定位,抑制哮喘的气道炎症和气道重构.     

高良姜素对哮喘小鼠气道炎症及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨高良姜素对哮喘小鼠气道炎症及肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法 40只小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松组、高良姜素组。卵白蛋白致敏并激发建立小鼠哮喘模型,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞,观察支气管肺组织病理的改变,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清TNF-α的水平,Western印迹法检测肺组织TNF-α蛋白的表达。结果高良姜素组BALF中嗜酸粒细胞计数及肺内炎症细胞评分明显低于哮喘组(P<0.01);哮喘组血清TNF-α含量、肺组织TNF-α蛋白表达均显著高于正常对照组,高良姜素组上述指标均低于哮喘组(P<0.01)。结论高良姜素可降低哮喘小鼠TNF-α的表达,减轻哮喘小鼠气道炎症。     

基质金属蛋白酶及基质金属蛋白酶组织抑制因子在支气管哮喘发病中作用及早期预防性吸入糖皮质激素的干预研究

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)及基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)与支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑的相关性以及预防性吸入激素对气道重塑的干预作用.方法 按随机数字表法将72只清洁级雄性Wistar大鼠分为对照组、哮喘组(卵原蛋白)、干预组(布地奈德+卵原蛋白),每组大鼠24只,分别于雾化激发后第7天、第28天和第35天处死每组大鼠中8只进行气道形态学观察,并采用病理图像分析系统测量大鼠的气道形态学参数.采用免疫组织化学测定肺组织MMP-9、TIMP-1的表达及ELISA方法 检测支气管肺泡灌洗液的上清中MMP-9及TIMP-1的含量.结果 ①与相应对照组相比,28d、35 d哮喘组内管壁厚度、平滑肌厚度、胶原沉积明显增厚(P＜0.05或＜0.01);经治疗后28 d、35 d组平滑肌厚度与相应哮喘组相比差异无统计学意义;而胶原沉积在治疗28 d、35 d组与相应哮喘组相比明显减少(P＜0.01);内管壁厚度治疗35 d组与相应哮喘组相比差异开始下降,但仍高于对照组(P值均＜0.05).②哮喘组支气管肺泡灌洗液中MMP-9及MMP-9/TIMP-1在初始阶段表达上调,在后期下降(P＜0.01);TIMP-1在初始阶段表达上调,在后期亦有下降的趋势,但差异无统计学意义;应用糖皮质激素干预后,在早期MMP-9、TIMP-1及两者比值明显低于哮喘组(P＜0.05),在晚期哮喘组与治疗组无明显差异.结论 哮喘发生、发展过程中,存在MMP-9/TIMP-1的表达失衡,糖皮质激素可能通过调节MMP-9/TIMP-1的平衡,阻抑胶原沉积而干预气道重塑的发生.     

钙池操纵性钙通道抑制剂SKF96365对慢性哮喘小鼠气道重塑和气道高反应性的作用

目的:观察钙池操纵性钙通道抑制剂SKF96365对小鼠慢性哮喘模型气道重塑和气道高反应性的影响。方法:用鸡卵清白蛋白(OVA)致敏和激发小鼠,建立慢性哮喘模型,33只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:对照组、哮喘组、SKF96365组,每组11只,其中SKF96365组于每次激发前30 min给予SKF96365(10mg/kg)干预。哮喘组和SKF96365组于第0、7、14 d腹腔注射(i.p)200μL致敏液(含OVA粉剂20μg、氢氧化铝凝胶2 mg);自第21天起,腹腔注射1%戊巴比妥钠(70mg戊巴比妥钠/kg小鼠体重)麻醉小鼠后,OVA(40μg)滴鼻(i.n),连续6周,每周3次,共18次。对照组则在相同时间给予相应剂量的生理盐水腹腔注射和滴鼻。最后一次激发后24 h,各组分别随机取5只小鼠用于检测组织病理学变化,另6只小鼠采用Buxco小动物肺功能仪检测气道高反应性。其中组织病理学检测计算杯状细胞(过碘酸希夫染色阳性,PAS+)、胶原细胞(Masson阳性)和平滑肌细胞(α-SMA阳性)阳染面积/支气管基底膜周长值来评估小鼠气道重塑;观察给予不同浓度乙酰甲胆碱雾化时的气道阻力(resistance index,RI)最大值,评估小鼠气道高反应性。结果:对照组未见PAS阳性染色区域,哮喘组和SKF96365组杯状细胞增生高于对照组(7.29±2.04,4.49±1.70 vs 0.00±0.00,均P0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P0.05)。Masson染色显示哮喘组和SKF96365组上皮下胶原沉积高于对照组(9.23±1.41,7.30±1.33 vs 1.60±0.77,均P0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P0.05)。α-SMA免疫组化显示哮喘组和SKF96365组平滑肌增生肥大高于对照组(4.54±1.05,3.15±0.57 vs 1.97±0.69,均P0.05),且SKF96365组低于哮喘组(P0.05)。当乙酰甲胆碱(Mch)≤6.25 mg/m L时,3组小鼠气道阻力无显著差异(P0.05),当25 mg/m LMch≥12.25 mg/m L时,哮喘组小鼠气道阻力明显大于对照组小鼠(P0.001),当Mch≥25 mg/m L时,哮喘组小鼠气道阻力大于SKF96365组(P0.05)。结论:采用SKF96365干预后,慢性哮喘小鼠气道重塑和气道高反应性指标均有改善,提示SKF96365可能对哮喘气道重塑和气道高反应性具有抑制作用。     

Sunitinib对支气管哮喘气道重塑小鼠模型Erk通路和cyclin D1表达的影响

目的探讨sunitinib对支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑的干预作用及可能的作用机制。方法 18只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组以及sunitinib组,每组6只;以卵清蛋白(OVA)致敏、激发,建立慢性哮喘气道重塑模型。Sunitinib组每次雾化吸入前半小时给予sunitinib(40mg/kg)灌胃给药。OVA末次激发结束后24h处死小鼠,HE染色观察气道炎症及形态学改变,采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13和血清总IgE的表达,免疫组织化学法观察肺组织增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达水平。蛋白印记法(Westernblot)测定细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk)蛋白磷酸化水平及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。结果 HE染色示哮喘组小鼠黏膜下层和平滑肌层增厚,管腔狭窄,大量炎性细胞浸润,sunitinib组上述改变较哮喘组为轻;sunitinib干预后哮喘小鼠BALF中Th2细胞因子IL-4、IL-13和血清总IgE以及肺组织羟脯氨酸含量显著降低(P0.01)。哮喘组小鼠气道PCNA阳性细胞百分比、α-SMA表达及肺组织Erk磷酸化水平、cyclin D1蛋白表达较对照组明显升高(P0.01),sunitinib干预后其表达均降低(P0.01)。结论 Sunitinib可能通过抑制Erk途径影响cyclin D1的表达,抑制了慢性哮喘模型中气道平滑肌的增殖,发挥抗气道重塑作用。