阿霉素诱导人粘液表皮样癌细胞凋亡和p53蛋白表达的研究

本试验发现10μg／ml阿霉素可诱导人粘液表皮样癌MEC-1细胞凋亡，在用流式细胞仪（FCM）测细胞DNA变化及p53蛋白表达时，p53蛋白表达和凋亡细胞随着药物作用时间的延长而剧增，p53的免疫组化也说明了阿霉素可使细胞中p53蛋白表达增强。这些结果揭示了阿霉素诱导的MEC-1细胞凋亡为p53依赖性的。p53蛋白与细胞凋亡之间关系密切，也为基因疗法和凋亡的机理提供了一定的理论依据。     

肿瘤坏死因子-α增强化疗机制的研究进展

研究认为肿瘤坏死因子-α增强化疗敏感性的机制:诱导耐药肿瘤细胞的细胞凋亡通路;下调抗凋亡基因p21的表达;抑制被激活的细胞核因子-κB进入细胞核;提高肿瘤组织内血管的通透性,提高化疗药物的抗肿瘤活性.     

抗肿瘤药物诱导细胞凋亡机制研究进展

抗肿瘤药物通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥其抗肿瘤活性，其作用机制的研究主要有：①激活Fas／FasL(CD95／Apo-1)信号系统，抗Fas／Apo-1抗体则能降低药物诱导凋产的敏感性。通过DR4、DR5／TRAIL途径诱导细胞凋产。②众多基因参与了细胞凋产。野生型p53抑制细胞增殖．突变型p53抑制细胞凋亡。bcl-2基因过表达与肿瘤多药耐药有关，bcl-2发挥其抑制凋亡的效应需要与其家族的其它成员如bax相互协调。⑧Caspase-3的活化诱导凋产：有些细胞毒药物可直接活化Caspase促使细胞凋亡。     

内质网应激调节顺铂引起的肿瘤细胞凋亡

目的:总结国内外关于内质网应激在化疗药物顺铂诱导肿瘤细胞死亡中的作用及研究进展.方法:应用Medline和CNKI期刊全文数据库系统,以"肿瘤抑制因子p53、DNA损伤应激反应、细胞凋亡、内质网应激"为关键词,检索2000-2010年的相关文献,共检索到英文文献1256篇和中文文献32篇.纳入标准:1)肿瘤抑制因子p53的调节及其引发的细胞凋亡分子机制;2)内质网应激的发生条件及内质网应激反应的分子调控;3)内质网应激在肿瘤细胞治疗中对凋亡的影响.根据纳入标准,符合分析的文献21篇.结果:内质网应激与肿瘤抑癌基因p53蛋白及其细胞凋亡作用有重要关系.传统的化疗药物对某些肿瘤细胞有耐药性,内质网应激相关调控可能会增加化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用.结论:抑制肿瘤细胞的内质网应激状态为肿瘤的治疗提供了一个新的思路.     

谷胱甘肽巯基转移酶对肿瘤化疗药物耐药的影响

肿瘤对化疗药物的内源性或获得性的耐药是目前肿瘤化疗失败的重要原因.耐药现象产生的原因有多种:多药耐药相关蛋白表达变化,药物代谢或摄取发生变化,药物靶标分子的突变、增殖或凋亡关键基因(如p53)的改变造成细胞逃避凋亡,药物解毒酶如谷胱甘肽巯基转移酶(glutathionine S-transferase,GST)的过表达等[1-3].本文就GST对肿瘤化疗耐药性的影响的相关研究作一综述.     

5-FU诱导白血病细胞凋亡的分子机制研究

目的:检测化疗药物5氟尿嘧啶(5FU)引起的T淋巴白血病细胞凋亡,及与之相关蛋白的表达和信号通路,为探索T淋巴细胞凋亡分子机制打下基础,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法:用5FU(10μg/mL)刺激Jurkat细胞36h以诱导细胞发生凋亡,用流式细胞术和MTS比色法检测细胞存活率,计算细胞凋亡率;用Western blot检测p53的表达和caspase3的变化;向Jurkat细胞中瞬时共转染野生型或突变型pCMV p53和pEGFP c1检测p53在5FU诱导的T淋巴细胞凋亡中的作用。结果:5FU能诱导Jurkat细胞凋亡并伴随p53表达增加及caspase3的活化;野生型p53过表达可明显增加细胞对5FU的敏感性。结论:5FU诱导的T淋巴白血病细胞凋亡的分子机制可能涉及p53及caspase3。     

p73基因过量表达对人肺癌细胞A549凋亡及其化疗敏感性的作用

背景与目的：部分非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表达野生型p53基因（wild-type p53,wt-p53）,因此在基因治疗中克服这些NSCLC对wt-p53的抵抗机制就非常重要。P53基因家族的新成员p73是p53的同源体,本研究旨在探讨对wt-p53基因治疗抵抗的人肺腺癌细胞A549在外源p73基因转染或联用化疗药后凋亡程度和对化疗药物敏感性的变化。方法：将真核表达重组质粒pcDNA3-HA-p53或pcDNA3-HA-p73α转染入A549细胞,G418筛选,Western blot检测P53或P73α的表达。MTT法分析转染细胞对顺铂和阿霉素的敏感性,用流式细胞术、TUNEL法和DNA片段法分析化疗药作用下转染细胞的凋亡变化,克隆形成实验观察细胞生物学性状的改变。结果：转染p53或p73α基因的A549细胞可以稳定高表达p53或p73α蛋白。转染p73α的A549细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度（6．25μmol／L的顺铂或0．25μmol／L的阿霉素）作用下生长明显受到抑制。顺铂的IC50值从22．65μmol／L降至3．75μmol／L,阿霉素的IC50值从4．20μmol／L降至0．06μmol／L。p73能使A549细胞受顺铂和阿霉素诱导的细胞凋亡增加。而p53没有明显作用。流式细胞术显示p73α基因转染后,顺铂诱导的细胞凋亡率从10．6％升高到36．8％（P〈0．01）,阿霉素诱导的细胞凋亡率从13．0％升高到41．1％（P〈0．01）。克隆形成实验显示．p73α基因转染能明显降低顺铂和阿霉素作用后A549细胞的克隆形成数（P〈0．01）。对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为2．0和2．4倍。结论：外源性p73基因的导入增加了wt-p53型A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药的敏感性。该作用可能与p73基因能不依赖于p53基因诱导细胞凋亡有关。p73基因可用于治疗wt-p53不能发挥作用的恶性肿瘤。     

自噬与白血病多药耐药

多药耐药（MDR）是白血病化疗失败的主要原因。自噬在调控MDR中发挥重要作用。一方面,自噬作为程序性死亡机制能直接促进MDR细胞凋亡;另一方面,不同信号传导通路和诱导因子如Hedgehog（Hh）信号通路、p53可诱导保护性自噬,促进MDR细胞的存活。因此,自噬激动剂或自噬抑制剂联合化疗药物有望成为治疗白血病的新策略。     

野生型p53基因蛋白在氨肽酶抑制剂诱导人白血病细胞株K562细胞凋亡的实验研究

目的研究野生型p53基因蛋白对国产氨肽酶抑制剂乌苯美司(ubenimex)诱导人白血病细胞凋亡的影响及其作用机制。方法真核转导试剂FuGEMNE^TM6转导入K562细胞，免疫组化法检测细胞p53蛋白的表达，DNA片段原位末端标记及流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡，Rhodamin(Rh)123染色后，FCM检测细胞线粒体跨膜电位。结果p53基因cDNA转导的细胞p53蛋白表达增加；p53基因转导能促进ubenimex诱导K562细胞凋亡并增加ubenimex诱导的K562细胞线粒体跨膜电位(△ψm)的下降。结论野生型p53基因转导能促进ubenimex诱导K562细胞凋亡，并可能参与线粒体信号传导通路的调控。     

Raji细胞抵抗阿霉素诱导细胞凋亡分子机制的实验研究

目的 :观察 Raji细胞抵抗阿霉素诱导细胞凋亡的分子机制 ,从细胞凋亡的角度探讨肿瘤细胞耐药机制。方法 :MTT方法测定阿霉素和肽素诱导的细胞毒实验 ,碘化丙啶染色 FACS和 DNA降解断裂法分析阿霉素诱导的细胞凋亡 ,FACS分析 Raji细胞 bcl- 2的表达 ,Western bolt观察 Raji细胞 p5 3、bax分子的表达 ,RT- PCR检测 MDR1、MRP和 GSTπ的表达水平。结果 :Raji细胞对阿霉素和肽素均产生明显药物耐受 ,同时抵抗药物诱导的细胞凋亡 ;Raji细胞中 bcl- 2分子呈诱导性表达 ,不表达或弱表达 bax、p5 3分子 ;Raji细胞组成性高表达 MDR1、MRP、GSTπ等耐药相关分子。结论 :Raji细胞抵抗药物诱导的细胞凋亡是化疗耐受的重要原因。其中细胞膜表面分子 MDR1、MRP的高表达 ,细胞质中 bcl- 2诱导性高表达 ,bax、p5 3分子的弱表达是导致药物耐受和抵抗细胞凋亡的重要因素。     

鼻咽癌中p73蛋白表达与细胞凋亡关系

p73基因是抑癌基因p53基因家族的一个新成员,一般认为它能以p53同样的方式激活p53的靶基因,抑制细胞生长,诱导凋亡[1].本文应用免疫组化方法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)技术检测鼻咽癌中p73蛋白表达和细胞凋亡的情况,旨在探讨p73基因在鼻咽癌发生发展中的作用以及p73蛋白表达与细胞凋亡的相互关系.     

珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应及机制研究

目的观察珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应并初探其分子机制。方法体外细胞培养采用人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照(BL)组、珠子参(PJ)组、二甲基亚砜(DMSO)组及5-FU组,采用电镜观察作用后肝癌细胞超微结构改变;流式细胞仪检测肝癌细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、p21表达的变化。结果与对照组比较,电镜下珠子参组SMMC-7721细胞染色质浓缩,分解成大小不一有膜包绕团块,内含有新月形DNA物质及细胞器,形成凋亡小体;周期分析可见G0/G1期细胞阻滞,阻止了细胞向S期的转换,并引起细胞凋亡,凋亡率达38.34%;RT-PCR半定量分析珠子参能降低癌基因c-myc表达(P<0.05),增高抑癌基因p53和p21表达(P<0.05)。结论珠子参能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,部分作用机制可能与阻滞细胞停留在G0/G1,降低癌基因c-myc和c-fos表达,增高抑癌基因p53和p21表达有关。     

口腔鳞状细胞癌铂类药物耐药分子机制研究进展

口腔鳞状细胞癌是头颈部常见的恶性肿瘤,化疗是其常规治疗手段之一,铂类化疗药物作为一线化疗药物应用于口腔鳞状细胞癌的治疗中。然而化疗耐药极大地限制了铂类化疗药物的临床应用,因此阐明口腔鳞状细胞癌铂类化疗耐药的分子机制具有十分重要的临床意义。本文从药物转运蛋白、DNA损伤修复、细胞凋亡、自噬、上皮间质转化和miRNA等方面综述了口腔鳞状细胞癌铂类化疗耐药的分子机制,以期为逆转铂类耐药及相关肿瘤的生物治疗靶点的开发提供新的思路。     

野生型p53基因与双脱水二乙酰卫矛醇联合诱导肝癌HLE细胞凋亡的研究

背景和目的：p53基因是抑癌基因,研究发现在人类肿瘤中p53基因常发生突变。实验证明野生型p53基因不但抑制肿瘤细胞增殖,而且诱导肿瘤细胞凋亡。但是,单独应用野生型p53基因诱导肿瘤细胞凋亡的作用不很明显。因此,野生型p53基因与药物的联合作用来提高肿瘤细胞凋亡率是目前对肿瘤研究的一新领域。本实验通过转染野生型p53基因联合双脱水二乙酰卫矛醇(1,2：5,6-dianhydro-3,4-diacetylgalactitol,DADAG)作用于肝癌细胞株HLE,研究联合诱导肿瘤细胞的凋亡作用。方法：野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞株HLE,同时加入DADAG。96h后,用流式细胞仪、DNA电泳方法进行细胞凋亡分析。结果：流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为1．4％、转染pUHD10-3组为3．5％、DADAG处理组为32．6％、转染pUHD10-3-p53组为43．4％、转染p53基因及DADAG处理组为74．6％。DNA电泳发现,转染p53基因及DADAG处理组有到DNA梯形条带。结论：野生型p53基因与DADAG均可诱导人肝癌细胞HLE发生凋亡,转染野生型p53基因与DADAG联合作用,有促进肝癌细胞凋亡的作用。     

红毛五加多糖对胃癌细胞的诱导凋亡作用

目的：研究红毛五加多糖对胃癌的诱导凋亡作用及其作用机制。方法：采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比及基因和细胞因子蛋白含量。结果：该多糖使癌基因bcl-2蛋白表达降低,而使抑癌基因p53、bax、Fas、Fas-L及细胞因子TGFβ1蛋白表达增高。结论：该多糖通过降低原癌基因蛋白表达,增高抑癌基因和细胞因子蛋白表达,从而诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。     

凋亡在正常造血及恶性血液病中的意义

细胞凋亡(apoptosis)是由基因控制的细胞程序化死亡,在维持机体平衡状态方面有积极的生物学意义.凋亡受抑在肿瘤发生和对化疗耐药中起重要作用,对细胞凋亡机制的研究有助于恶性血液病治疗策略的改进.而bcl-2和p53基因是调节细胞凋亡的重要分子,它们功能的改变与人类肿瘤凋亡受抑有关.下面就其对细胞凋亡的调控以及在正常造血系统和恶性血液病中的表达作一简要综述.     

膀胱移行细胞癌P—gp表达与凋亡相关蛋白p53、bcl—2的关系

目的探讨膀胱移行细胞癌组织中MDR1基因产物P-gp表达与凋亡相关蛋白p53、bcl-2的相互关系及其临床意义.方法采用免疫组化S-P法检测107例原发性膀胱移行细胞癌组织中P-gp、p53、bcl-2蛋白的表达情况.结果P-gp、p53、bcl-2蛋白的阳性表达率分别为63.6%、72.9%、54.2%,三者的过度表达均与膀胱癌的病理分级、临床分期和术后腔内化疗后复发有关;P-gp表达与p53、bcl-2蛋白的表达密切相关(P＜0.01或P＜0.05).结论P-gp、p53、bcl-2蛋白的过度表达不仅是判定原发性膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的重要指标,而且凋亡相关蛋白p53、bcl-2可能参与膀胱移行细胞癌多药耐药的形成.     

TGF-β1对人肝癌细胞系凋亡的调控作用研究

目的肝细胞对TGF-β1敏感性的丧失据认为是肝癌重要的致病因素之一。本研究旨在明确人肝肿瘤细胞系中TGF-β1的作用及其与凋亡的关系。方法选用三种含不同p53基因状态的人肝肿瘤细胞系,应用脱氧核糖核苷酸末瑞转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对TGF-β1诱导的肝肿瘤细胞的凋亡进行定量检测。结果在应用TUNEL检测三个细胞系中,TGF-β1仅能诱导Hep3B细胞(缺失p53)则凋亡较少。这提示凋亡p53基因的表达具有明确的联系。结论HepG2细胞系比Huh-7和Hep3B系细胞更易发生TGF-β1诱导的凋亡,TGF-β1通过p53依赖性途径诱导肝癌细胞系发生凋亡。     

p53转录非依赖活性诱导细胞凋亡的研究进展

p53主要有两条途径来介导细胞凋亡:通过促进下游促凋亡因子的基因转录来诱导凋亡;通过转录非依赖活性诱导细胞凋亡.研究发现在p53转录活性缺失,或者基因转录、蛋白翻译受抑制的情况下,p53仍然可以诱导细胞凋亡.研究结果提示p53的转录非依赖途径在促细胞凋亡中发挥着重要的甚至是关键的作用,所以对转录非依赖活性诱导细胞凋亡途径的深入了解将会对肿瘤治疗有所裨益.     

野生型p53基因对肝癌细胞多药耐药的逆转作用及其相关机制

背景与目的：细胞凋亡的发生机制在肿瘤多药耐药中起重要作用,野生型p53基因是细胞凋亡的激活剂,与肿瘤多药耐药密切相关。本研究旨在探讨野生型p53基因能否实现对肝癌细胞多药耐药的逆转以及逆转的相关机制。方法：构建野生型P53蛋白表达序列的真核表达载体pCR3．1-p53,用脂质体转染技术建立人肝癌细胞Bel-7402的p53转染细胞株,对转染细胞株进行MTT实验,观察p53基因对肿瘤细胞生长的抑制作用和对肝癌细胞对长春新碱（vincristine,VCR）药物敏感性的影响,姬姆萨染色法观察细胞形态,免疫组织化学SP法检测细胞P糖蛋白（P—glycoprotein,P—gp）的表达,逆转录PCR法检测细胞内mdr1、MRP、GSTπ、TopoⅡ mRNA的表达。结果：转染p53的Bel—p53细胞生长明显慢于未转染的Bel-7402细胞。转染野生型p53的Bel-p53细胞在VCR浓度为0．01μg／ml,0．1μg／ml,1．0μg／ml,10μg／ml,25μg／ml时,其药物敏感性增加;VCR作用最佳浓度为1．0μg／ml。形态学检查转染细胞,在VCR作用下细胞数明显减少,细胞散在不成片、细胞高度水肿、胞体不规则突起,可见核固缩、核裂解、核溶解。p53基因对Bel-7402细胞的mdr1／P—gP的表达有明显的抑制作用．对TopoⅡα基因的表达有上调作用,对GSTπ、MRP基因表达没有影响。结论：p53基因对肝癌细胞多药耐药有逆转作用．其逆转机制可能与降低mdr1／P—gp的表达、上调TopoⅡα的表达．从而增加细胞内VCR药物浓度和VCR药效有关。