硝酸甘油和硝酸异山梨酯抗柯萨奇B组3型病毒感染的体内实验研究

目的 研究硝酸甘油(glyeeryl trinatrate,GTN)和硝酸异山梨酯(isosorbide dinitrate,ISDN)抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)的作用,为GTN和ISDN今后在抗CVB性心肌疾病的临床应用提供实验依据.方法 用HeLa细胞扩增并收获CVB3后,测定CVB3的半数组织培养感染剂量(TCID50),BALB/c小鼠腹腔注射5000 TCID50的CVB3,同时给予GTN和ISDN,14天后处死小鼠,取心脏做常规组织病理学检查.结果 用GTN、ISDN保护的小鼠心肌病理标本每视野(x100)病灶数明显低于病毒 对照组,GTN组为0.89±0.18,ISDN组为1.25±0.22.与病毒对照组差异显著(P<0.05).结论 GTN、ISDN等临床常用于抗心绞痛的硝酸酯类药物具有明确的抗CVB3感染BALB/c小鼠心肌细胞的作用.     

硝酸甘油抗B组柯萨奇病毒的作用特点和机制

目的 研究硝酸甘油（GTN）抗柯萨奇B组3型病毒（CVB3）的作用特点和机制。方法 比较先经GTN预处理及与GTN同时加入的两种处理方法相同滴度的病毒所引起的CPE抑制率的差异;分别测定并比较多次给予GTN及不同时间点给予GTN对CVB3感染的HeLa细胞组间的细胞病变效应抑制效果;测定GTN在HeLa细胞中不同时间点代谢产生的N0浓度,并做N0浓度与不同时间点给予GTN的细胞病变效应抑制结果的相关性分析。结果 预加GTN组与同时加GTN组经等量病毒攻击所引起的CPE无显著性差异（P〉0．05）;多次给药的组间CPE抑制率无显著性差异（P〉0．05）,但不同时间点给药的组间CPE抑制率具有显著差异（P〈0．05）,NO浓度与不同时间点给予GTN的细胞病变效应抑制结果呈正相关（r=0．97,P〈0．01）。结论 GTN是通过其代谢产物NO来发挥抗CVB3作用的。     

阿昔洛韦抗柯萨奇病毒B3作用的初步观察

目的观察阿昔洛韦抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用.方法通过活细胞计数评价阿昔洛韦对Hep-2细胞的细胞毒作用;通过观察病毒感染后的细胞病变效应计算病毒抑制率,评价阿昔洛韦在Hep-2细胞培养中的抗CVB3作用.结果阿昔洛韦对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度(TC50)在0.2mg/mL以上;CVB3的半数抑制浓度TC50为25μg/mL,治疗指数为8.4.结论阿昔洛韦安全性较高并能有效地抑制柯萨奇病毒B3在Hep-2细胞中的增殖.     

重组蓝藻抗病毒蛋白N抗柯萨奇B3病毒的体外实验研究

目的:研究重组蓝藻抗病毒蛋白N (CV-N)体外抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用. 方法:通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖,判断CV-N的细胞毒性及抗病毒效果. 结果:CV-N对Vero细胞毒性较低(TC50为359 μg/ml),对CVB3无直接灭活作用,对阻止CVB3病毒吸附细胞的作用优于病毒唑,而对病毒的复制无明显抑制作用. 结论:CV-N作用于CVB3病毒感染的早期,有可能作为柯萨奇病毒感染的预防药物.     

菘蓝的4种单体成分抗柯萨奇病毒作用的研究

目的 :了解菘蓝 4种有效单体 (6 ,7,8,9号 )抗柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3 )的活性。方法 :通过观察细胞病变效应 (CPE) ,噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性 ,用半定量RT PCR检测不同药物浓度下病毒核酸含量 ,以确定有效单体抗CVB3 的作用。结果 :菘蓝的 4种单体成分对CVB3 生物合成均有抑制作用 ,且强于阳性对照药物病毒唑。表现在随着药物浓度的增加 ,CPE程度逐渐减弱 ,病毒核酸的含量逐渐下降。结论 :菘蓝的 4种单体能在体外通过抑制生物合成发挥抗CVB3 作用。     

RNA干扰用于柯萨奇病毒B3感染治疗作用研究

目的研究观察自行构建的siRNA表达载体对柯萨奇病毒B3（CVB3）感染的潜在治疗作用。方法以CVB3聚合酶编码区基因序列为靶点,构建发夹型siRNA真核表达载体pGCsi—U6／GFP／P及与CVB基因组序列无关的阴性对照pGCsi—U6／GFP／N。利用脂质体转染进入Hela细胞后,用CVB3毒株进行攻击,观察感染后Hela细胞病变情况,并用RT—PCR法检测细胞培养上清中的CVB3负链RNA水平。结果构建的表达质粒pGCsi—U6／GFP／P在Hela细胞能够正确表达,其表达产物能够使CVB3基因沉默,并间接抑制了CVB3的复制。结论本实验成功构建了能够抑制CVB3的发夹状siRNA表达质粒,该质粒具有增强细胞抗CVB3感染的能力。     

苦豆总碱、苦参总碱体外抗柯萨奇B3病毒的作用

目的　通过对苦豆总碱、苦参总碱的体外抗柯萨奇B组 3型病毒 (CVB3 )作用的对比研究 ,为其在临床应用提供实验依据。方法　以盐酸胍作为实验阳性对照药物 ,采用细胞培养技术及细胞病变效应 (CPE)抑制法、噻唑蓝 (MTT)比色法、组织培养半数感染 (TCID50 )微量法进行苦豆总碱、苦参总碱的体外抗CVB3 作用研究。结果　苦豆总碱、苦参总碱均有明显的抗CVB3 作用 (P <0 .0 5 ) ,对CVB3 的抑制指数均 >2 ,细胞保护率最高可达 95 % ,其中感染后给药及药物与病毒先作用 2小时然后加入细胞层的给药方法抗病毒效应较强。结论　苦豆总碱、苦参总碱在体外有明显抗CVB3 、抑制细胞病变的作用     

黄芩苷体外抑制柯萨奇病毒B组3型感染的机制研究

目的：探讨黄芩苷（baicalin,BA）体外抑制柯萨奇病毒B组3型（coxsackie virus B3,CVB3）感染的效用及机制。方法：CellTiter 96? AQueous 单溶液试剂检测Hela细胞存活率,病毒空斑实验检测病毒滴度,CHOD?PAP法和ACS?ACOD法分别用于检测细胞中游离脂肪酸（free fatty acids,FAA）和胆固醇（cholesterol,CHO）的含量,RT?PCR检测脂类代谢关键分子脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,Fasn）和乙酰?CoA羧化酶（acetyl?CoA carboxylase,ACC）的mRNA表达,Western blot检测CVB3病毒衣壳蛋白VP1表达。结果：BA在低于100 μg/mL时对Hela细胞无明显毒性效用,但能呈剂量依赖地抵抗CVB3诱导细胞病变,显著减少病毒滴度和抑制CVB3/VP1的表达;CVB3感染能显著增加细胞中FFA和CHO含量以及Fasn和ACC的mRNA表达,但是经BA处理后,能显著减少这些脂类代谢物质的含量;棕榈酸预处理细胞,能恢复BA处理组中CVB3/VP1的表达。结论：BA能通过调节细胞脂类合成来发挥抗CVB3感染的效用。     

反义寡核苷酸抑制柯萨奇病毒B_3致病作用的实验研究

目的 :观察在细胞培养系统和小鼠体内反义寡核苷酸 (AODN)抑制柯萨奇病毒B3(CVB3)致病作用。方法 :观察细胞病变效应 (CPE) ,常规微量法滴定病毒的50 %组织细胞感染量 (TCID50)以及观察感染小鼠心肌组织的病理改变。结果 :1 AODN可推迟和减轻CVB3 感染细胞CPE ,且随AODN浓度增高 ,对CPE的抑制作用增强 ;培养上清中病毒滴度随AODN浓度升高而降低。2 随AODN剂量增加 ,感染小鼠心肌组织病毒滴度逐渐降低 ;心肌细胞病变程度逐渐减轻 ;心肌炎发病率也逐渐降低。结论 :AODN可能通过抑制CVB3 复制来保护Vero细胞和小鼠心肌组织抵抗感染。     

柯萨奇病毒激活ERK信号途径的初步研究

柯萨奇病毒B组3型(coxsackievins B3,CVB3)是引起病毒性心肌炎和扩张性心肌病的主要病原体。CVB3在其感染过程中致细胞产生病变效应．直至死亡。CVB3感染也能引起细胞凋亡．但其病变机制尚不清楚。胞外信号调节激酶1／2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1／2)是促分裂原活他蛋白激酶家族中一类．参与了细胞生长、转化，分化     

复方羌芪水提液体外抗柯萨奇病毒B3作用的研究

目的：测定复方羌芪水提液的体外抗ＣＶＢ３作用，并对其抗病毒机理进行初步的探讨。方法：用含有不同浓度复方羌芪水提液的维护液培养ＣＶＢ３感染的Ｖｅｒｏ细胞，４８ｈ后用ＭＴＴ法测定细胞活性；培养上清液滴定ＴＣＩＤ５０。结果：复方氏水提液能抑制ＣＶＢ３对Ｖｅｒｏ细胞的致病变作用（ＣＰＥ），使细胞夏活率升高，培养上清病毒滴度降低；且随药物浓度及药物与病毒作用时间的延长抑制作用增强。结论：复方羌芪水提液的抗病     

清咽滴丸抗柯萨奇病毒B3,B5的实验研究

目的：探讨清咽滴丸在细胞水平及血清水平对柯萨奇病毒B3、B5（CVB3、CVB5）的抑制作用。方法：利用CPE法和MTT法在细胞水平上检验清咽滴丸抗CVB3、CVB5感染的作用;观察不同时间段的含药血清抑制CVB3、CVB5的情况,进而在血清水平上验证清咽滴丸的抗病毒作用。结果：（1）细胞水平上,清咽滴丸在7.81×10-5g/mL时对CVB3的抑制作用最好,在3.91×10-4g/mL时对CVB3的治疗作用最强。血清水平上,当血药浓度1：10且在灌胃65 min时对CVB3呈现最好的抑制作用,抑制率达到58.74%（P〈0.05）。（2）细胞水平上,清咽滴丸在7.81×10-5 g/mL时对CVB5的抑制作用最好,在3.91×10-5 g/mL时对CVB5的治疗作用最强。血清水平上,当血药浓度1：10且在灌胃85 min时对CVB5呈现最好的抑制作用,抑制率达到74.23%（P〈0.05）。结论：清咽滴丸有一定的抗柯萨奇病毒B3、B5的功效。     

芪芍五味子复方制剂抗CVB3病毒抑制心肌细胞凋亡机制的研究

目的 研究中药芪芍五味子复方制剂抗柯萨奇B3病毒(CVB3)效果及抑制病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的机制.方法 采用细胞培养法观察细胞病变效应(CPE)与广谱抗病毒药物病毒唑对照,进行复方制剂体外抗病毒实验;BALB/c小鼠接种CVB3建立病毒性心肌炎动物模型,随机分为正常对照组、病毒对照组、复方制剂治疗组和维生素C与病毒唑联用组,观察各组心肌病理变化,Real-time定量PCR检测小鼠心肌CVB3RNA水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡和坏死率.结果 复方制剂体外最大无毒浓度为19.53g/L,预防给药、同时给药和治疗给药3种方式细胞培养所需有效药物浓度均低于病毒唑;与同期病毒对照组小鼠比较,复方制剂治疗组小鼠心肌炎症性病理变化明显减轻,CVB3RNA拷贝数降低(P<0.05),心肌细胞凋亡和坏死率显著降低(P<0.05).结论 芪芍五味子复方制剂可有效抗病毒,抑制病毒诱导心肌细胞凋亡,对CVB3感染小鼠心肌有良好的保护作用.     

BGM细胞,Hela细胞,HEL细胞与A549细胞对HSV-1敏感性的比较

用单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１）感染ＢＧＭ细胞、Ｈｅｌａ细胞、ＨＥＬ细胞及Ａ５４９细胞，利用空斑试验，比较四种细胞对ＨＳＶ－１的敏感性。结果示，ＨＳＶ－１在ＢＧＭ细胞培养中空斑形成单位（ＰＦＵ）数最多，出现细胞病变的时间早。提示ＢＧＭ细胞可为ＨＳＶ－１的分离培养提供一种新的、敏感细胞。     

BGM细胞,Hela细胞,HEL细胞与A549细胞对HSV—1敏感性的比较

用单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１）感染ＢＧＭ细胞、Ｈｅｌａ细胞、ＨＥＬ细胞及Ａ５４９细胞，利用空斑试验，比较四种细胞对ＨＳＶ－１的敏感性。结果示，ＨＳＶ－１在ＢＧＭ细胞培养中空斑形成单位（ＰＦＵ）数最多，出现细胞病变的时间早。提示ＢＧＭ细胞可为ＨＳＶ－１的分离培养提供一种新的、敏感细胞。     

MTT法在抗病毒药物筛选中的应用

目的 :采用MTT法评价清热消炎复方制剂体外抗柯萨奇病毒 (CVB3 )、呼吸道合胞病毒 (RSV)效果。方法 :待正常细胞长成单层 ,用病毒感染 ,培养一定时间后 ,根据不同病毒感染细胞出现细胞病变 (CPE)时间的不同 ,加入一定量的MTT液 ,然后测定OD570 值 ,计算病毒抑制率。结果 :MTT法较光镜CPE法更为客观 ,能以OD值变化反映药物对病毒的抑制程度 ,从而获得实验结果 ,且便于统计学处理。结论 :MTT法是一种能广泛应用于抗病毒药物筛选和评价的方法