辛伐他汀促大鼠BMSCs成骨分化作用机制的研究

[目的]研究辛伐他汀(aimvastatin,SIM)促进大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)向成骨细胞分化的作用机制.[方法]取4周雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨骨髓细胞进行体外成骨诱导培养,并干第一次传代后(d 8)加入浓度为10-7mol/L SIM(给药组,SIM组)或等量溶剂培养(对照组,N组),d 16行碱性磷酸酶(ALP)染色,d 28行von Kossa染色观察细胞外基质矿化,并采用realtime RT-PCR法子上述两个时间点检测b-catenin、BMP-2、Smad1、ALP、OCN、mRNA的表达.[结果]①辛伐他汀可促进成骨诱导分化大鼠BMSCs的ALP表达及细胞外基质的矿化能力.②mRNA表达水平:d 16 SIM组ALP的表达显著高于N组;d 28 SIM组BMP-2、Smad1、OCN表达水平均明显高于N组,b-catenin的表达显著低于N组(P<0.05).[结论]辛伐他汀可促进大鼠BMSCs向成骨细胞分化,其作用机制可能与调节TGFβ/BMP、WNT信号途径相关基因的表达水平有关.     

Cbfα1、PPARγ在骨髓间质干细胞定向分化中的作用及对骨质疏松症的影响的研究

目的研究转录因子Cbfα1、PPARγ对骨髓间质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞分化的调控,探讨骨质疏松症的发病机制。方法塑料包埋椎骨组织,通过Goldner′s Massion Triehrome染色,通过骨量测量,分析骨密度正常组、低骨量组和骨质疏松组椎骨骨组织形态计量学参数的变化;采用免疫组织化学的方法,检测不同组成骨细胞中Cbfα1、PPARγ蛋白阳性表达率在三组中的差异及其与骨计量学参数的相关性。结果骨质疏松组与正常组相比,成骨细胞中Cbfα1蛋白的表达明显下调(P<0.05),与骨小梁间隔呈负相关,与骨小梁数目、骨小梁占全部骨小梁体积呈正相关;基质细胞中PPARγ蛋白的表达明显增强(P<0.05),与骨小梁间隔呈正相关,与骨小梁数目、骨小梁占全部骨小梁体积呈负相关。结论Cbfα1、PPARγ蛋白具有使骨髓间质干细胞分别向成骨细胞和脂肪细胞分化的潜能。两者表达水平的失衡导致成骨细胞生成减少,脂肪细胞生成增多,骨吸收增强,骨量丢失增加,这可能是骨质疏松发病的又一重要机制。     

十溴联苯醚对C57BL/6小鼠组织中脂联素和PPARγ的影响

目的研究十溴联苯醚(BDE-209)对小鼠组织中脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的影响。方法 24只成年雄性C57/BL小鼠随机分为BDE-209染毒处理高(800 mg/kgbw)、中(600 mg/kgbw)、低(300 mg/kgbw)剂量组和未染毒的对照组,6周后采用反转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法测定小鼠肝、肺和脂肪中脂联素和PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果 4组小鼠肺质量、脂肪质量和体重增重差异均有统计学意义(P0.05),其中高剂量组小鼠肺质量、脂肪质量和体重增重均大于对照组和低剂量组(P0.05)。4组小鼠肝、肺和脂肪脂联素mRNA和蛋白表达量差异均有统计学意义(P0.05);其中高剂量组小鼠肝、肺和脂肪脂联素m RNA表达量均高于对照组,但低于低剂量组(P0.05)。4组小鼠肝、肺和脂肪PPARγm RNA和蛋白表达量差异均有统计学意义(P0.05);其中高剂量组小鼠肝、肺和脂肪PPARγm RNA和蛋白表达量均高于对照组和低剂量组(P0.05)。结论 BDE-209可增加小鼠肺质量、脂肪质量和体重,可能与BDE-209激活了PPARγ受体,导致脂肪细胞异常分化和脂联素含量下降有关。     

SOCS-3抑制对膳食诱导肥胖大鼠脂肪细胞PPARγ及aP2表达的影响

目的通过对膳食诱导肥胖大鼠脂肪细胞SOCS-3进行抑制,探讨是否可以恢复瘦素的抗脂肪合成作用。方法采用SOCS-3小发夹RNA（shRNA）慢病毒,感染瘦素抵抗肥胖大鼠成脂诱导分化后的脂肪细胞,检测SOCS-3的抑制效果。再采用50 nmol/L瘦素处理6 h,观察脂肪合成相关基因（PPARγ及aP2）mRNA表达的变化。结果 SOCS-3 shRNA慢病毒可有效抑制脂肪细胞SOCS-3 mRNA的表达,抑制率达50%。50 nmol/L瘦素处理6 h后,感染SOCS-3 shRNA慢病毒组PPARγ及aP2 mRNA的表达显著降低（P〈0.01）,空白对照组和感染阴性对照病毒组的表达无明显变化（P〉0.05）。结论通过抑制膳食诱导肥胖大鼠的脂肪细胞SOCS-3,在一定程度上可以解除脂肪细胞的瘦素抵抗。     

人骨髓间充质干细胞诱导成骨分化

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外诱导培养分化为成骨细胞的方法,并研究其生物学特性。方法采用成年人hMSCs传代培养2～3代,经条件培养液诱导培养后,进行形态学观察及MTT实验,RT-PCR分析,蛋白质印迹实验,茜素红染色方法分析细胞矿化作用,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,骨钙素(osteocalcin,OCN)、RUNX2和BMPR2的检测。结果 hMSCs细胞,在诱导培养条件下,细胞碱性磷酸酶ALP活性明显增高,并出现了矿化结节。经过体外成骨诱导的hMSCs表现出增殖、聚集、结节和矿化期的阶段性形态特征。在矿化期骨钙素mRNA OCN表达升高,RUNX2和BMPR2蛋白表达增高。结论 hMSCs易于体外分离培养及扩增,体外成骨定向诱导的hMSCs具有典型的成骨细胞的形态和功能性特征,可以定向分化为成骨细胞。     

血管紧张素Ⅱ对前脂肪细胞分化相关转录因子表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1表达的调节从而研究AngⅡ调节前脂肪细胞分化可能的分子机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞体外传代培养及诱导分化,用RT-PCR技术检测诱导分化过程中不同浓度AngⅡ处理6d对前脂肪细胞分化相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA表达水平的影响。结果 RT-PCR结果显示,100 nmol/L的AngⅡ处理细胞6 d后,PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的相对表达量与对照组(AngⅡ添加浓度为0 nmol/L)有显著性差异(P<0.05),比对照组相应的转录因子分别增加了48%、50%、43%。结论前脂肪细胞分化过程中AngII能够上调PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的表达量,AngⅡ可能通过影响PPARγ、C/EBPα和SREBP1-c/ADD-1的表达来调节前脂肪细胞的分化过程。     

TSG-6基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化

[目的] 探讨TSG-6基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化。[方法] 采用细胞培养和RT-PCR技术，检测细胞诱导分化不同时段脂肪细胞中TSG-6基因的表达水平。[结果] ①随着脂肪细胞逐渐分化成熟，TSG-6基因mRNA表达水平逐渐升高；②TSG-6基因表达水平除在细胞分化第0-2d、第3-5d和第7-10d各时段内差异无显著性(P＞0.05)外，其余各时段之间表达水平差异均有显著性(P＜0.05)。[结论] TSG-6基因与细胞分化以及脂原形成可能相关。     

生物活性陶瓷与细胞外基质骨形成对Ca、P、ALP影响

目的通过对钙(Ca)、磷(P)及碱性磷酸酶(ALP)评价,探讨生物活性陶瓷及细胞外基质与骨细胞相互作用机理,为骨替代材料成骨效应提供依据.方法选用多种材料进行蒸馏水及血浆接触,体外成骨细胞培养及体内骨诱导试验.采用原子吸收、钼蓝比色及速率法分析化学性能,血浆、细胞冻溶液及组织匀浆中Ca、P、ALP的变化规律.结果材料组体内、外接触Ca、P、ALP值高于对照组.细胞外基质复合材料组高于相应的非复合材料组,TGF-β1加材料高于BMP复合材料组,而不同材料有所不同,TCP材料高于其它材料.结论生物活性陶瓷材料均有不同程度的Ca、P离子释放,细胞外基质及Ca、P离子可提高成骨细胞活性,异位骨形成及ALP活性.     

粗杂粮对大鼠脂代谢紊乱干预作用的机制探讨

目的观察粗杂粮对大鼠脂代谢紊乱及其脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ) mRNA表达水平的影响,探讨粗杂粮改善脂代谢紊乱的作用机制。方法44只SPF级大鼠随机分为阴性对照组(饲常规饲料)和3个实验组(饲高脂饲料6周),造模成功后分别给予高脂粗杂粮、高脂米面和高脂模型饲料共15周。结果粗杂粮高脂组的血清总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、白细胞介素-6(IL-6)和C反应蛋白(CRP)显著低于高脂模型组(P<0.05),血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著高于高脂模型和米面高脂组(P<0.05),脂蛋白酯酶(LPL)和肝酯酶(HL)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)最接近阴性对照组水平;粗杂粮高脂组白色脂肪组织PPARγ mRNA的表达水平明显高于高脂模型组和米面高脂组(P<0.05)。结论复配式粗杂粮可以激活PPARγ,促进脂肪细胞LPL和HL活性逐步恢复,使血脂水平下降;同时抑制和减少IL-6、TNF-α及CRP的产生,炎症反应减轻,脂代谢紊乱得到改善。     

脑源性神经营养因子对幼儿前体脂肪细胞分化的抑制作用

目的 探究脑源性神经营养因子(BDNF)对幼儿脂肪细胞增殖和分化的影响,为儿童肥胖症的治疗提供借鉴。方法 采集正常和肥胖儿童脂肪,real-time qPCR和Western blotting分别检测脂肪组织中BDNF、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白13(CTRP13)和IL-6 mRNA以及蛋白的表达;分离培养原代前体脂肪细胞,采用不同浓度的BDNF和BDNF siRNA分别处理细胞,MTT和油红O染色分别检测细胞增殖和分化,甘油三酯( TG) 测定试剂盒检测细胞成脂情况,Western blotting 技术检测PPARγ、aP2、CTRP13和IL-6的表达。结果 与正常组相比,肥胖组脂肪组织中IL-6的表达较高,而CTRP13和BDNF的表达较低;BDNF对脂肪细胞的增殖没有影响;BDNF促进CTRP13的表达,抑制脂肪细胞分化和IL-6的表达,而BDNF siRNA则作用相反。结论 肥胖儿童脂肪组织中IL-6表达增高,CTRP13和BDNF表达降低,BDNF可抑制幼儿原代脂肪细胞的分化。     

尿氟的基准剂量及其与改水后儿童碱性磷酸酶相关性研究

[目的]通过对汕头市地氟病区改水后儿童尿氟含量(UF)及血清碱性磷酸酶(AKP)活性的测定,探索尿氟的接触限值及其与AKP活性的相关性。[方法]采用氟离子电极法测定汕头市4个病区村,1个对照村饮水氟含量及8～12岁小学生尿氟含量并测定血清中AKP活性,用基准剂量法(BMD法)计算氟接触基准剂量。[结果]汕头市地氟病区4病区村及1个对照村饮用水水氟测定结果均低于0.2mg/L,除改水14年村外,不同改水年限的各村儿童尿氟含量与对照村相比差异有统计学意义(χ2=132.411,td分别为16.814、17.403、19.550,P均﹤0.05),改水15、17年村AKP活性与对照村相比显著降低(F=9.885,td分别为1.348、1.514,P均﹤0.05)。在尿氟﹤2.0mg/L水平,AKP活性异常率随着尿氟含量升高而上升,呈显著剂量—反应关系。基准剂量(BMD)法计算得尿氟基准剂量值及基准剂量下限(BMDL)值分别为2.77mg/L,1.19mg/L。[结论]AKP活性随改水时间延长呈下降趋势;氟病区8～12岁儿童尿氟致AKP改变的生物接触限值为﹤1.0mg/L。     

蔬菜水果的抗氧化活性与总黄酮含量的相关性

[目的]研究蔬菜、水果的抗氧化活性与总黄酮的相关性。[方法]采用Ferric Reducing Antioxidant Powerassay,FRAP法和分光光度法测定了51种蔬菜和30种水果的抗氧化活性、总黄酮含量,分析它们之间的相关性。[结果]蔬菜的抗氧化活性与总黄酮之间的相关系数为0.398,水果的抗氧化活性与总黄酮之间的相关系数为0.710。[结论]蔬菜、水果的抗氧化活性与总黄酮含量具有一定的相关性,但不同种类的蔬菜和水果,相关性有一定的差异。     

THE ACUTE EFFECTS OF ETHANOL AND ACETALDEHYDE ON THE SYNTHESIS OF MIXED AND CONTRACTILE PROTEINS OF THE JEJUNUM

An investigation was made into the acute effects of ethanoland acetaldehyde with or without enzyme inhibitors of alcoholdehydrogenase (4-methylpyrazole) and aldehyde dehydrogenase(cyanamide) on fractional rates of protein synthesis of mixedand contractile proteins of the jejunum. Ethanol decreased thefractional rates of mixed and contractile protein synthesis(i.e. k_o defined as the percentage of tissue protein renewedeach day) by -25%. Pretreatment with 4-methylpyrazole followedby treatment with ethanol further reduced mixed and contractilek_o by -30%, when compared with saline plus saline and 4-methylpyrazoleplus saline groups. The greatest reductions in k_o of mixed andcontractile proteins occurred with cyanamide pretreatment followedby ethanol treatment: mixed and contractile protein k_o in thecyanamide plus ethanol group decreased by -60% when comparedwith saline plus saline and cyanamide plus saline groups, whereask_o decreased by -45% when compared with the saline plus ethanolinjected group. Acetaldehyde treatment alone caused no significantinhibition of protein synthesis. However, 4-methylpyrazole pretreatmentplus acetaldehyde treatment significantly reduced mixed andcontractile k_o by -20% when compared with the saline group,and by -15% when compared with the 4-methylpyrazole plus salineand saline plus acetaldehyde groups. These data show that ethanolalone and perhaps high levels of acetaldehyde may be responsiblefor the inhibition of intestinal protein synthesis and relatedpathological derangements, e.g. motility disturbances due toloss of contractile proteins.     

胎膜早破与难产的关系及处理

目的 了解胎膜早破难产发生率升高的原因。方法 分析119例胎膜早破孕妇中发生难产的原因和类型，随机抽取无胎膜早破的健康孕妇119例作为对照组。结果 观察组119例胎膜早破孕妇发生难产68例，发生率为57.1％，对照组119例孕妇中难产45例，难产发生率37.8％。结论 应进一步重视胎膜早破，加强产前宣教，对胎膜早破孕妇加强临床观察，一旦有难产发生，应及时处理，减少母儿并发症的发生。     

癌症患者家属焦虑、抑郁状况调查分析与对策

目的探讨肿瘤介入手术患者家属的焦虑、抑郁状况。方法以Zung氏焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)对60例癌症患者家属进行问卷调查。结果18.3%患者家属存在焦虑情绪,焦虑评分高于常模,差异有显著意义(p<0.01)。其中与家属性别、病人是否知道真实病情、疼痛程度、是否接受化疗、付费方式、陪护病人时间及家属得知诊断时间等因素有关。结论提示癌症患者家属的心理存在不同程度的焦虑、抑郁情绪,应重视那些得知诊断不久、疼痛严重、接受化疗及自费的患者家属,特别是女性家属的心理支持和关怀,帮助减轻压力,减少焦虑、抑郁状态的发生。     

助产士工作压力源及应对方式的调查分析

目的了解助产士主要的工作压力源和采取的应对方式,为助产士减轻压力、提高应对能力提供依据。方法采用便利取样法,对我市两间医院产科的助产士66人,采用基本资料调查表、护士工作压力源量表及简易应对方式问卷表进行问卷调查,结果采用SPSS 17.0统计学软件包分析和t检验。结果助产士压力源排位前3名为:护理专业及工作方面、病人护理和工作量及时间分配;采取的应对方式是积极面对,得分高于中国常模(p<0.05),而消极应对方式得分与常模比较差异无统计学意义(p>0.05);其积极应对方式受年龄、文化程度、职称、工作年限、经济收入、婚姻等多种因素的影响(p<0.01)。结论助产士主要的工作压力源于护理专业及工作方面,护理管理者应重视工作流程的改善,提高工作效率,按人力资源管理标准配置人员,减少助产士工作倦怠。助产士应对方式受多种因素影响,应帮助低年资、低学历、低职称的助产士提高工作成就感、提高自信。