二烯丙基三硫对巨噬细胞抗癌活性的调节

二烯丙基三硫对巨噬细胞抗癌活性的调节张桂梅，冯作化，郝天玲，张慧，姜志尧同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室，武汉４３００１０关键词二烯丙基三硫；巨噬细胞；细胞毒性；免疫中图法分类号Ｒ３２９．２．Ｒ４４６．６３二烯丙基三硫（ＤＡＴＳ）是大...     

二烯丙基三硫对MGC-803细胞凋亡的影响

目的探讨二烯丙基三硫(dially disulfide，DATS)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及作用机制。方法光学显微镜观察凋亡形态，流式细胞术检测凋亡及细胞内活性氧水平。结果12mg／LDATS作用于胃癌MGC-803细胞24小时后，在光学显微镜下出现了典型的凋亡细胞形态学改变，流式细胞仪检测结果提示，活性氧水平升高，出现明显的亚G1峰。用抗氧化剂NAC预处理细胞，能抑制细胞内活性氧水平的升高及DATS诱导的凋亡。结论DATS诱导胃癌细胞凋亡可能与细胞内活性氧产生增加有关。     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡的作用

目的 探讨二烯丙基三硫（diallyl trisulfede，DAlS）诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。方法 采用倒置显微镜、光学显微镜、透射电镜分别观察DATS诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的形态学改变以及用流式细胞术观察亚G1峰。结果 MGC-803细胞经DATS处理24h后，光镜可见细胞胞浆浓缩、核固缩深染等早期凋亡细胞；电镜可见到不同时期凋亡细胞；流式细胞术检测有亚G1峰的出现。结论 DATS具有诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。     

大蒜提取物二烯丙基化三硫对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

目的:研究大蒜提取物二烯丙基化三硫(diallyl trisulfide,DATS)在体外对T24细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制.方珐:应用荧光染色形态学观察DATS作用后T24细胞凋亡形态学改变.并应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化.采用蛋白质印迹法检测不同浓度DATS作用后T24细胞中caspase-3、PARP蛋白的表达,并进一步研究其分子机理.结果:DATS可明显诱导T24细胞细胞凋亡并呈显著剂量依赖性.DATS作用于T24细胞后,procaspase-3表达减少,同时出现PARP的裂解片段,并呈显著的剂量依赖性.DAlS作用于T24细胞后,p-PDK1,p-Ser 473-Akt的表达逐渐降低,呈剂量依赖性,但t-Akt的表达不受影响.DATS作用于T24细胞后,Bax表达逐渐增高,Bcl-2的表达逐渐降低,呈显著的剂量依赖性.结论:DATS能诱导T24细胞凋亡,凋亡的诱导作用呈显著剂量依赖性.DATS诱导产生凋亡的机理可能通过抑制124细胞PI3K/Akt信号通路的激活从而调节Bcl-2家族蛋白,并最终诱导凋亡发生.     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨二烯丙基三硫（dially trisulfide，DATS）对人胃癌MGC-803细胞凋亡和凋亡调控基因Bcl-2和Bax的影响。方法用光学显微镜，荧光显微镜，流式细胞术检测凋亡，免疫组化研究人胃癌MGC-803细胞Bcl-2，Bax表达的变化。结果在光学显微镜及荧光显微镜下，通过DATS作用后的胃癌细胞出现了凋亡的典型形态学改变；流式细胞术检测可见亚G1峰出现。免疫组化显示，经DATS处理后，Bax的表达增强（P〈0．05），Bcl-2表达未见明显改变。结论Bcl-2基因家族可能参与了DATS诱导的MGC-803细胞凋亡。     

大蒜提取物二烯丙基化三硫对人膀胱癌T24细胞侵袭转移的影响

目的:研究大蒜提取物二烯丙基化三硫(dially trisulfide,DATS)于体外对T24细胞侵袭转移能力的影响及其可能机制。方法:应用MTT法检测DATS对T24细胞黏附纤连蛋白能力的影响,应用Transwell小室进行人工重组基膜侵袭实验检测DATS对T24细胞侵袭能力的影响,并应用划痕愈合试验检测DATS对T24细胞迁移能力的影响。采用蛋白质印迹方法检测DATS作用后T24细胞中MMP-9蛋白的表达。结果:黏附试验表明DATS作用24h后,能有效抑制T24细胞与细胞外基质的黏附,呈剂量依赖性。划痕试验显示DATS作用不同时间对T24细胞迁移力的影响呈剂量和时间依赖性。侵袭试验表明DATS作用于T24细胞24h后,随着药物浓度的升高,T24细胞的侵袭力逐渐降低。DATS可减少T24细胞中MMP-9蛋白的表达。结论:DATS能显著抑制T24细胞的黏附、迁移和侵袭能力。DATS的侵袭转移抑制能力可能与降低MMP-9的表达有关。     

二烯丙基三硫下调肉毒素底物1和细胞分裂周期蛋白42的表达对Hela细胞运动的影响

目的研究二烯丙基三硫(DATS)对Hela细胞迁移运动能力的影响及其作用机制。方法用100μmol/L的DATS处理Hela细胞24 h(以等量的PBS为对照),Transwell小室观察细胞体外迁移能力的变化,Western blot检测Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况。结果 DATS处理组的迁移运动能力比对照组明显减弱(P<0.01),且Rac1和Cdc42蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 DATS可以抑制Hela细胞的迁移运动能力,下调Rac1和Cdc42蛋白的表达是其作用机制之一。     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞作用的研究

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞的作用机制。方法采用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度的DADS对MGC803细胞的生长抑制作用和细胞周期分布影响。结果随着DADS浓度的增加,MGC803细胞的生长抑制率逐渐上升;细胞的G0/G1期比率下降,G2/M期比率逐渐上升。结论抑制癌细胞生长和诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期是DADS的抗肿瘤机制之一。     

大蒜油固体脂质纳米粒大鼠体内药动学的研究

目的 研究大蒜油的血药浓度测定方法及其在大鼠体内的药动学.方法 12只健康大鼠,单剂量(含大蒜油每只10mg)颈静脉注射给大蒜油固体脂质纳米粒和大蒜油注射液,在设计的时间点从颈静脉取血,采用气相电子捕获法同时测定大蒜油中指标性成分二烯丙基三硫化合物和二烯丙基二硫化合物在全血中药物浓度,药动学参数采用DAS2.0程序进行统计矩处理.结果 大鼠颈静脉注射给药后,大蒜油的指标性成分DATS首先快速转化成DADS,然后继续降解;大蒜油固体脂质纳米粒中的DATS和DADS的MRTo-t分别为7.3和16.9 min,ρmax分别为3 574.3和21 416.7 μg&#183;L-1;大蒜油注射液的DATS和DADS的MRT0-t分别为19.4和19.5,ρmax分别为3 692.8和9 335.8 μg&#183;L-1.tmax均为1 min.结论本方法简单、快速,灵敏度和准确度较高,适合药动学研究.静注给药后大蒜油在大鼠体内表现为快速分布和消除,而大蒜油固体脂质纳米粒因被动靶向的关系消除比大蒜油注射液快.     

二烯丙基二硫下调PCNA抑制人宫颈癌移植瘤生长

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对宫颈癌HeLa细胞裸鼠致瘤的影响.方法 裸鼠皮下注入人宫颈癌HeLa细胞建立人宫颈癌裸鼠异种移植模型,观察DADS对宫颈癌移植瘤在裸鼠体内生长情况的影响,HE染色观察DADS对移植瘤组织形态的影响,免疫细胞化学检测DADS对移植瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 DADS可明显抑制人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的生长,具有杀伤人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞作用.PCNA蛋白在人宫颈癌移植瘤组织中高表达,DADS作用后PCNA蛋白表达明显下调.结论 DADS可明显降低人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖的PCNA蛋白表达有关.     

RP-HPLC法测定血脂宁口服液中二苯乙烯苷的含量

制何首乌为防老抗衰、防治动脉粥样硬化等症的常用中药 ,复方制剂血脂宁口服液由制何首乌、荷叶、山楂等 6味中药组成 ,具有滋补肝肾 ,活血化瘀 ,调节血脂的功能 ,适用于高血脂症的康复治疗 ,对头晕、肢麻、胸闷有较好的改善作用。据文献报道 [1] ,何首乌中的有效成分为二苯乙烯苷 ,是抗衰老、降血脂药理药效的活性成分 ,且含量较高。本实验采用 RP-HPLC法对制剂中二苯乙烯苷进行了定量测定 ,建立了该制剂的含量测定方法 ,并考察了不同产地的何首乌对其制剂质量的影响 ,为制剂的质量控制提供理论依据。1　仪器和试药美国 SSI高效液相色…     

二烯丙基二硫抑制HL-60细胞增殖及对c-myc基因表达调控

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖及对c-myc基因表达的影响。方法采用MTT和细胞记数法分析DADS对细胞生长的影响、蛋白印迹法检测细胞内c-myc蛋白表达水平。结果 DADS能抑制HL-60细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05),DADS(20μmol/L)作用12 h后能下调c-myc蛋白的表达水平。结论 DADS抑制HL-60细胞增殖,其机制可能与下调c-myc表达水平密切相关。     

二烯丙基二硫对结肠癌SW480细胞系生长影响的研究

目的观察二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌SW480细胞系生长的抑制作用。方法体外细胞培养,用MTT法、集落形成试验进行观察,体内移植瘤抑制试验采用裸鼠移植瘤模型。结果用不同浓度DADS(30μg/mL,40μg/mL,50μg/mL,60μg/mL,70μg/mL)处理SW480细胞48小时后,测得细胞生长抑制率为23．8％、43．7％、49．7％、60．9％、66．0％,该药的I％约为50μg/mL;用不同浓度DADS(20μg/mL,30μg/mL,40μg/mL,50μg/mL)处理SW480细胞lO天后,集落形成抑制率为48．7％、56．5％、61．6％、76．2％,IC50为20—30μg/mL之间;以30mg／kgDADS对SW480细胞裸鼠移植瘤进行实验,测得瘤重抑制率为62．86％,电镜检查可见结肠癌SW480细胞有早期凋亡改变。结论DADS对结肠癌SW480细胞系生长具有明显抑制作用。     

二烯丙基二硫对K562细胞生长抑制和促凋亡的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人白血病K562细胞增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响。方法采用CCK-8技术检测细胞存活率,进行细胞形态学观察,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测DADS对细胞凋亡及周期的影响。结果 DADS能有效地抑制人白血病K562细胞增殖,15、30、60、120和240μmol/L DADS作用于K562细胞48h后,抑制率分别为26.3%、58.2%、44.7%、62.6%和75.6%。Hoechst形态学观察呈现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现出凋亡特征性的梯状条带,流式细胞仪检测可见亚二倍体峰并阻滞细胞于G2/M期,30、60和120μmol/L DADS作用于K562细胞12h后,Annexin V/PI双标记法检测早期凋亡细胞率分别为18.59%±0.81%、20.85%±0.65%、23.5%±1.1%（P〈0.05）。结论 DADS呈浓度依赖性抑制K562细胞生长,其机制与诱导细胞凋亡并阻滞细胞于G2/M期有关。     

二烯丙基二硫下调uPA和MMP9抑制乳腺癌细胞侵袭迁移

目的 研究大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞侵袭迁移的作用。方法采用不同浓度(0,0,200,0 μmol/L)DADS处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验观察DADS对细胞迁移能力的改变;western blot检测两种细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果Transwell实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7和MDA-MB-231两种乳腺癌细胞的侵袭,划痕愈合实验则发现DADS呈浓度依赖性抑制两种乳腺癌细胞的迁移。与此同时,Western blot结果显示DADS可浓度依赖性下调侵袭迁移相关蛋白uPA和MMP9的表达。结论DADS可下调uPA和MMP9表达,抑制乳腺癌细胞侵袭迁移。     

二烯丙基三硫对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠肺组织TNF-α和IL-1β的影响

目的 探讨二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠肺组织肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)表达的影响.方法 复制LPS致ALI小鼠模型.实验动物随机分为生理盐水对照组、ALI组、DATS预防组、DATS治疗组、DATS组.用酶联免疫吸附法测定各组2、6 h肺组织匀浆上清中TNF-α及IL-1β浓度.反转录PCR检测各组TNF-α及IL-1β mRNA表达.结果 ALI组2 h肺组织中TNF-α及IL-1β含量均明显升高(P＜0.01),6 h有所降低,但仍高于对照组(P＜0.01);DATS预防组可明显降低肺组织中TNF-α及IL-1β的含量,DATS治疗组无明显效果.对照组及DATS组肺组织中未检测到TNF-α及IL-1β mRNA表达;ALI组2 h时肺组织中TNF-α及IL-1β mRNA表达明显高于对照组(P＜0.01);DATS预防组与ALI组相比,肺组织中TNF-α及IL-1β mRNA表达显著降低(P＜0.05),DATS治疗组与ALI组相比无明显差异.结论 预先给予DATS对LPS诱导的ALI小鼠肺组织中TNF-α、IL-1β的生成及mRNA表达具有抑制作用.     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠血清细胞因子IL-18,IL-10的影响

目的 探讨二烯丙基三硫(DATS)对急性肺损伤小鼠血清IL-18,IL-10的影响.方法 90只健康昆明小鼠,随机分为5组:①急性肺损伤组:腹腔注射大肠杆菌脂多糖(LPS);②预防组:腹腔注射DATS 7 d后注射LPS;③治疗组:腹腔注射LPS后30 min注射DATS;④DATS组:腹腔注射DATS 7 d;⑤对照组:腹腔注射等量生理盐水.光镜观察12h点肺组织形态学改变.测定血清中IL-18及IL-10在2h和6h含量.结果 DATS预防组肺泡间渗出及炎性细胞浸润较ALI组明显减轻.其血清中IL-18含量均明显低于ALI组(P<0.01),IL-10含量均明显高于ALI组(P<0.01).结论 预防性应用DATS可减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织炎症反应.并能抑制LPS诱导的小鼠血清中炎性细胞因子IL-18的生成,而促进抗炎性细胞因子IL-10的生成.     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞JNK、ATR、cyclinB1的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)调节JNK和ATR活性、cyclinB1表达与人胃癌MGC803细胞增殖的关系. 方法 实验分为两组:未处理组和30 mg/L DADS处理组,采用Western blot、免疫细胞化学及图像分析等方法,观察DADS对人胃癌MGC803细胞的JNK、ATR、cyclinB1的影响. 结果 Western blot结果显示:30 mg/L DADS刺激了MGC803细胞中JNK1的活化,刺激后10～20 min作用效果最强,30 min恢复正常(P<0.05);磷酸化ATR在MGC803细胞中DADS处理15 min后被激活,并呈时间依赖性(P<0.05),而ATR总蛋白表达均无改变.免疫细胞化学及图像分析结果显示,未处理组cyclinB1表达呈弱阳性,而DADS处理组表达呈强阳性,阳性率明显高于未处理组,且DADS处理组光密度值显著高于未处理组(P<0.05). 结论 JNK1与ATR活化及cyclinB1表达增强与DADS抗人胃癌MGC803细胞增殖有关.     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。