金雀异黄素对胶质瘤细胞株细胞生长周期影响

目的 研究金雀异黄素(genistein)对人胶质瘤U251MG细胞生长和细胞周期的影响.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度genistein在不同作用时间下对U251MG细胞生长的影响,用流式细胞仪分析细胞周期分布,蛋白免疫印迹( western blotting)技术检测细胞周期素Bl(cyclinBl)和细胞周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)蛋白表达.结果Genistein对胶质瘤细胞生长有明显抑制作用,使细胞生长停滞于G2/M期,并使细胞cyclin B1、CDK1蛋白表达下降(均P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论Genistein对U251 MG细胞生长有明显抑制作用,诱导G2/M期阻滞可能与下调cyclinB1和CDK1蛋白表达有关.     

检测肿瘤凋亡和p53再生化合物对不同p53状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用

目的探讨p53靶向小分子RITA对不同p53状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用。方法基因测序确定实验所用U251和U87细胞中p53基因状态;MTS法检测0μmol/L、1μmol/L、4μmol/L、10μmol/L RITA作用于U251和U87细胞0 h、24 h、72 h、120 h、168 h的增殖情况;qRT-PCR法和Western blot法分别检测抑癌基因p53、p21的mRNA和蛋白质表达水平;计算抑制率和IC50。结果基因测序结果表明实验所用U251细胞表达突变型p53基因而U87表达野生型;RITA对2种细胞的增殖均有显著抑制作用,且对U251的抑制作用更强;5μmol/L RITA作用下,U251中p53、p21表达均显著增加,U87中p21表达增加,p53 mRNA表达变化不明显,但p53蛋白累积显著增加;RITA作用于U251、U87细胞24 h和120 h的IC50分别为123.870μmol/L、776.682μmol/L和2.817μmol/L、7.147μmol/L。结论RITA能有效促进人脑胶质瘤细胞U251和U87中p53和p21基因表达,发挥高效生长抑制作用,且含突变型p53的U251比含野生型p53的U87效果显著。     

p53基因降低肺成纤维细胞对亚砷酸钠敏感性

[目的]探讨p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞毒性中的作用。[方法]利用RNA干扰技术建立p53基因低表达细胞,用RT-PCR法及免疫组织化学SABC法分别从mRNA水平和蛋白水平验证其p53基因表达降低;MTT法测亚砷酸钠染毒24h的不同组细胞(p53低表达组、PC质粒对照组、正常细胞组)的IC50。[结果]①p53低表达组的p53基因mRNA和蛋白表达水平均较PC质粒对照组及正常细胞组明显降低(P﹤0.05),表达量约是正常细胞的50%;PC质粒对照组与正常细胞组p53基因mRNA表达间无差异(P﹥0.05)。②p53低表达组、PC质粒对照组、正常细胞组细胞的IC50分别为:28.80±0.68、43.10±1.33、43.43±1.49(mM),p53低表达组与其他两组均有差异(P﹤0.05),PC质粒对照组与正常组间无差异(P﹥0.05)。[结论]p53基因是降低人胚肺成纤维细胞对亚砷酸钠毒性的敏感性的因子,其机制可能是通过调整细胞周期、减少细胞凋亡实现的。     

五溴联苯醚对MCF-7细胞c-myc和p53 mRNA及蛋白表达的影响

[目的]观察五溴联苯醚(5-BDEs)对乳腺癌细胞MCF-7c-myc和p53 mRNA及蛋白表达的影响,以探讨5-BDEs雌激素活性的分子生物学作用机制.[方法]将MCF-7细胞在DMEM培养液中进行常规传代培养.采用MTT比色法观察5-BDEs对MCF-7细胞增殖的影响,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫组化方法检测5-BDEs对c-myc原癌基因和p53抑癌基因表达的影响.[结果]与溶剂对照组相比,在1×(10-4～10-8)mol/L浓度范围内,5-BDEs与1×10-8mol/L雌二醇作用类似可显著促进MCF-7细胞增殖(P<0.05),并表现出良好的剂量-效应和时间-效应关系.RT-PCR及免疫组化结果显示,1×(10-4～10-8)mol/L的5-BDEs可促进MCF-7 c-myc和抑制p53 mRNA及蛋白表达.[结论]5-BDEs具有雌激素样生物活性,可促进雌激素反应性肿瘤细胞MCF-7增殖,这一效应主要是通过影响c-myc mRNA和蛋白质的表达而实现的.     

肌醇六磷酸对人结肠细胞系HT-29细胞周期的影响

目的:研究肌醇六磷酸(IP6)对HT-29细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法:应用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT法)观察IP6对HT-29细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度IP6作用72h对HT-29细胞周期的影响;应用免疫细胞化学法检测IP6对HT-29细胞内突变型p53、细胞周期抑制蛋白p21表达的影响。结果:IP6对结肠癌细胞株的生长具有抑制作用,且具有浓度依赖和时间依赖关系。经IP6作用处理的HT-29细胞的细胞周期发生G1期阻滞。与对照组比,各IP6浓度组均能抑制突变型p53蛋白的表达(P<0.05),上调p21蛋白的表达(P<0.05)。结论:IP6对HT-29细胞的生长具有明显的抑制作用。其机制可能是IP6降低p53蛋白的异常表达,刺激p21蛋白的表达,使细胞周期发生G1期阻滞,从而起到抑制细胞增殖的作用。     

植酸对人肝癌细胞株HepG_2细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法以体外培养人肝癌细胞株HepG2为研究对象,应用流式细胞仪检测不同浓度IP6作用24h后对HepG2周期的影响;以免疫细胞化学法检测IP6对细胞周期相关蛋白cyclinD1、Rb、P27表达的影响;RT-PCR法检测IP6对HepG2细胞cyclinD1、CDK4 mRNA表达的影响。结果经IP6作用处理的HepG2细胞的细胞周期发生G1期阻滞。免疫细胞化学结果显示:与对照组比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1蛋白的表达(F=225.02,q=15.20-25.35,P<0.05),上调Rb(F=63.31,q=2.77-13.06,P<0.05)、P27蛋白的表达(F=254.75,q=4.71-25.71,P<0.05);RT-PCR结果显示,与对照组相比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1(F=672.34,q=16.41-41.99,P<0.05)和CDK4 mRNA(F=108.35,q=5.32-16.27,P<0.05)的表达。结论 IP6对HepG2细胞生长具有明显的抑制作用。其机制可能是IP6降低cyclinD1、CDK4水平,上调Rb、P27蛋白的水平而作用于G1-S限制点,使HepG2细胞周期发生G1期阻滞,从而起到抑制细胞增殖的作用。     

TSA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及对FHIT表达的影响

[目的]研究去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人肝癌HepG2细胞的作用及其FHIT表达的影响。[方法]培养的人肝癌HepG2细胞随机分为两组:对照组给予等量DMSO,实验组给予终浓度分别为125、250、500、1 000、2 000nmol/L的TSA,培养24 h后收集细胞,MTT比色法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学检测FHIT的mRNA和蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,经TSA处理的细胞增殖速度明显减慢,TUNEL阳性细胞百分率随TSA浓度的升高呈剂量依赖性增高(P﹤0.01),细胞FHIT mRNA表达增强(P﹤0.01),FHIT蛋白表达差异具有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]TSA可能通过抑制HDACs的活性,上调FHIT表达,诱导细胞凋亡而抑制肝癌细胞生长。     

血管内皮细胞生长因子与P53在卵巢上皮性肿瘤中表达的定量分析

[目的]定量比较血管内皮细胞生长因子(VEGF)与P53蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达的差别和关系。[方法]用细胞图象分析技术和免疫组化法分别检测VEGF和P53蛋白在61例上皮性卵巢良恶性肿瘤组织中表达的积分吸光度(IA)和平均吸光度(MA)。[结果]良性、交界性及恶性肿瘤组织中VEGF和P53蛋白表达的IA与MA值依次增大,良性肿瘤、交界性肿瘤和恶性肿瘤分别两两相比,其IA和MA值差异有统计学意义(P﹤0.01)。VEGF表达与P53蛋白表达结果相互间有联系(P﹤0.05)。[结论]VEGF和P53蛋白在上皮性卵巢肿瘤的形成和发展中有重要影响,可以作为卵巢肿瘤生物学行为恶化的一项指标。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝癌细胞c—myc和p53蛋白表达的影响

目的 探讨丙型肝炎病毒非结构蛋白4B（HCV-NS4B）对c-myc和p53蛋白在肝癌细胞表达的影响.方法 采用构建好的HCV-NS4B表达载体,以脂质体转染法转染HepG2细胞.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）,琼脂糖凝胶电泳证实HCV-NS4B在HepG2细胞稳定表达.随后采用细胞免疫化学法半定量分析c-myc和p53蛋白在HepG2细胞的表达.结果 转染HCV-NS4B后,NS4B转染组c-myc平均光密度值为0.53±0.17,较空白对照组及空白载体组显著升高（P＜0.05）.NS4B转染组p53蛋白平均光密度值为0.28 ±0.13,较空白对照组及空白载体组显著下降（P＜0.05）.结论 HCV-NS4B可诱导肝癌细胞中c-myc/p53失衡,促进细胞增殖,与肝癌发生有关.     

硒化壳聚糖对NB4细胞增殖的影响及其与PML-RARα融合蛋白激活的Ras信号途径的关系

[目的]研究硒化壳聚糖(Sc)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4增殖的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白及其激活的Ras信号途径的关系。[方法]NB4为表达PML-RARα融合蛋白阳性的细胞株,K562为表达PML-RARα融合蛋白阴性的细胞株,应用MTT法检测Sc对两种细胞株增殖的影响,应用流式细胞术和Western blot法检测两种细胞株蛋白含量的变化。[结果]Sc对两种细胞株均可产生剂量和时间依赖性的抑制作用,相比之下,对K562细胞的抑制作用明显较弱(P﹤0.05)。Sc处理后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白和c-Jun信号蛋白含量明显减少,而K562细胞c-Jun信号蛋白含量则轻微减少。[结论]Sc可特异性地减少PML-RARα融合蛋白含量从而下调其激活的Ras信号途径,最终抑制NB4细胞增殖。     

GSK-3β抑制剂对U251胶质瘤细胞的增殖抑制

目的探讨GSK-3β抑制剂(LiCl)对人脑胶质瘤U251细胞株增殖作用,为下一步治疗脑胶质瘤提供临床治疗靶点。方法应用MTT法,HE染色法以及免疫组化方法来观察LiCL对人胶质细胞瘤株U-251增值的抑制作用、量效关系。结果LiCL对人胶质瘤细胞有明显的抑制作用,其药物作用时间为24、48h的IC50分别为138.98mg/ml、53.15mg/ml,且呈良好的量效关系,抑制作用与浓度呈正相关。结论LiCL是有效的、能抑制胶质瘤细胞生长的药物。     

新靶点CyclinE干扰RNA对人脑胶质瘤增殖的影响

目的构建人CyclinE建新靶点的干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤U251细胞,观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的增殖能力的变化,为进一步研究CyclinE表达受抑制后对人脑胶质瘤细胞质和细胞核蛋白组学的影响及人脑胶质瘤发生、发展、诊断与治疗提供有价值的资料。方法①构建4个新靶点Cyclin E干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否。②用Lipofectamine 2000转染4个成功构建的载体到胶质瘤U251细胞株,通过RT-PCR的结果检测转染后CyclinEmRNA表达量,选出干扰效果最好的1个。③用塞唑蓝（MTT）法检测CyclinE沉默后细胞增殖能力的变化。结果①成功构建了4个新靶点的CyclinE干扰RNA真核表达载体,即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4。②CyclinE mRNA表达明显受到抑制,并获得效果最好的CyclinE干扰RNA真核表达载体。③PCyclinE-1-U251组细胞与两对照组相比增殖能力减弱。结论成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,与对照组比增殖能力削弱。     

植物雌激素对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 :　探讨植物雌激素大豆异黄酮 (genistein,GS)和玉米赤霉烯酮 (zearalenone,ZEA)对乳腺癌细胞株 MCF- 7增殖的影响。方法 :　雌激素依赖性 MCF- 7细胞在 DMEM培养液(含小牛血清 1 0 % )中采用开放式单层贴壁培养 ,于加受试物前 5 d将细胞用 PBS洗涤后改为无酚红高糖 DMEM(含 5 %经活性碳 -葡聚糖苷处理的胎牛血清 ,CDT- FBS)培养 ,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及两种受试物各四个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3H- Td R掺入法及流式细胞术对 MCF- 7细胞的增殖情况进行分析。结果 :　与溶剂对照组相比较 ,GS(96μmol/ L,2 4h)可明显抑制 MCF- 7细胞增殖和细胞 DNA合成 ,并将细胞周期阻滞在 G2 / M;8μmol/ L GS处理96 h也能产生类似的抑制效果。 96 nmol/ L ZEA处理 2 4 h可明显促进 MCF- 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并将细胞周期由 G0 / G1向 S期推进 ,提高细胞分裂增殖指数。结论 :　ZEA和 GS均属环境雌激素 ,但对乳腺癌细胞 MCF- 7增殖产生的影响不同 ,ZEA可促进 MCF- 7增殖 ,而 GS能够抑制 MCF- 7细胞的增殖 ,即 GS具有用于癌症预防及有关保健食品开发的价值     

白藜芦醇联合硫化氢体外诱导U251脑胶质瘤细胞凋亡作用研究

目的探讨白藜芦醇联合体外诱导U251脑胶质瘤细胞凋亡作用。方法采用四甲基偶氮唑兰（MTT）还原检测法检测白藜芦醇联合硫化氢对u251脑胶质瘤细胞生长。结果用白藜芦醇联合处理细胞24小时后,诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,凋亡率与对照组比较明显升高（P〈O．05）。结论白藜芦醇联合硫化氢能抑U251脑胶质瘤细胞生长,其机制可能是通过诱导凋亡来发挥作用的。     

染料木黄酮对人胃癌细胞生长抑制作用研究

目的 :　探讨染料木黄酮对体外培养的人胃癌 SGC- 790 1细胞的抑制和诱导细胞发生凋亡的作用。方法 :　用 MTT法、集落形成实验、透射电镜及流式细胞仪的方法 ,观察染料木黄酮处理 SGC- 790 1后细胞生长和细胞凋亡。结果 :　 (1 ) MTT法和集落形成实验证实染料木黄酮对 SGC- 790 1细胞生长有抑制作用 ,抑制作用呈剂量 -效应关系 ;　 (2 )透射电镜可见 SGC- 790 1细胞在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂等凋亡细胞的形态学改变 ;　 (3)流式细胞仪检测到凋亡峰。结论 :　染料木黄酮对 SGC- 790 1细胞有抑制作用 ,而这一作用的机制之一是通过诱导人胃癌细胞发生凋亡 ,即诱导肿瘤细胞发生凋亡是染料木黄酮抑制肿瘤细胞生长的重要机制之一     

异甘草素对小儿脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及相关机制研究

目的 研究异甘草素对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其相关分子机制.方法 取对数生长期人脑胶质瘤U251细胞,用不同浓度(0、10、20、40、60、80μmol/L)异甘草素处理,每个浓度设5个复孔.异甘草素处理24h、48h、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FoxM1 mRNA的表达水平.结果 U251细胞经过浓度为0、10、20、40、60、80μmol/L的异甘草素处理24h、48h及72h后,细胞增殖均不同程度地受到抑制.在相同作用时间,不同浓度之间细胞增殖情况比较差异有统计学意义(F值分别为38.5、98.9、108.1,均P＜0.05);在相同异甘草素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h)细胞增殖情况比较差异均有统计学意义(F值分别为11.4、20.8、43.1、53.9、30.4,均P＜0.05).不同浓度异甘草素作用于U251细胞24h后,随着异甘草素浓度的增加,细胞凋亡率增加(F=120.3,P＜0.05).不同浓度异甘草素处理U251细胞48h后,FoxM1 mRNA相对表达量分别为(71.2±5.1)％、(54.6±3.3)％、(35.4±4.1)％、(20.8±4.0)％,比较差异有统计学意义(F=83.5,P＜0.05).结论 异甘草素体外可有效抑制U251细胞的增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与下FoxM1基因的表达有关.     

Genistein modulates immune responses and increases host resistance to B16F10 tumor in adult female B6C3F1 mice.

The isoflavone genistein (4,7,4'-trihydroxyisoflavone) is a phytoestrogen found in high levels in soy products that has been associated with decreased incidences of breast and prostate cancers. The potential effects of genistein on the immune system were evaluated in adult female B6C3F1 mice. Groups of mice were exposed to vehicle or genistein by gavage for 28 d. The doses of genistein used were 2, 6 and 20 mg/kg body. Consistent with the chemopreventive effect of genistein, exposure to this compound significantly increased host resistance to B16F10 tumor as reflected by a decrease in the number of lung tumor nodules after tumor cell injection at the middle and high dose levels. Inhibition of B16F10 tumor formation was not due to a direct effect of serum genistein and/or its metabolites on the proliferation of B16F10 tumor cells. When innate and acquired immune responses were evaluated, a dose-related increase of cytotoxic T-cell activity was observed in genistein-treated mice with significant changes observed at the middle and high dose levels. Furthermore, in vitro interleukin (IL)-2-stimulated natural killer (NK) cell activity was significantly enhanced in the high genistein dose group, although the basal NK cell activity was not affected. Although no affect on the mixed lymphocyte responses and anti-CD3 antibody-mediated splenocyte proliferation was observed, exposure to genistein significantly increased basal splenocyte proliferation. Exposure to genistein did not alter the activity of the mononuclear phagocyte system and the cytotoxic/cytostatic function of thioglycollate-recruited peritoneal cells on B16F10 tumor cells. Finally, exposure to genistein did not produce biologically meaningful changes in spleen immunoglobulin (Ig)M and IgG antibody-forming cell responses. In conclusion, genistein enhanced host resistance as evaluated in the B16F10 tumor model, which may be related to the increases in the activities of cytotoxic T cells and NK cells.     

德阳市MSM人群HIV、HCV和梅毒感染现状及性行为特征研究

[目的]了解四川省德阳市男男性行为人群(MSM)的艾滋病病毒(HIV/AIDS)、丙型肝炎病毒(HCV)和梅毒螺旋体(梅毒)感染状况及性行为特征。[方法]2010年4～8月,对德阳市251名MSM进行问卷调查及血液样品收集,分别用联免疫吸附试验、蛋白印迹实验、快速血浆反应素环状卡片试验检测HIV、HCV梅毒感染情况。[结果]被调查对象中,HIV,HCV和梅毒的阳性率分别为16.33%(41/251),0.8%(2/251),14.34%(36/251);HIV和梅毒均阳性人员占4.4%(11/251),占感染HIV人数的25%(11/41);HCV和梅毒均阳性的人员占0.4%(1/251);距调查结束前6个月,与男性、女性均发生过性行为的MSM较多,在与女性发生性行为时安全套使用率为76.08%(35/46),低于其同男性发生性行为时安全套使用率91.3%(42/46)(χ2=3.903,P﹤0.05)。[结论]该市MSM人群3种病原体感染不容忽视,其高危性行为普遍存在,需要进一步加强艾滋病/性病宣传教育,预防二代传染。     

转化生长因子β在大豆异黄酮抑制乳腺癌细胞增殖中的作用

目的 :　探讨大豆异黄酮抑制 BCa P- 37乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法 :　选择二羟异黄酮、三羟异黄酮处理 BCa P- 37细胞 ,采用生长曲线3H- Td R掺入试验及流式细胞分析等实验方法 ,观察大豆异黄酮对乳腺癌细胞 BCa P- 37增殖的抑制作用 ,同时用转化生长因子 (TGP) β拮抗试验、Western blot分析 ,检测 TGFβ1、TGFβ2 及受体的表达变化情况。结果 :　 (1～ 9)× 1 0 -5mol/L三羟异黄酮作用 3～ 4d可抑制 BCa P- 37细胞增殖 ,细胞受阻于 G1期 ,且 BCa P- 37细胞的TGFβ1、TGFβ2 及受体表达呈时间剂量依赖性增加。而二羟异黄酮处理组不明显。结论 :　三羟异黄酮抑制 BCa P- 37细胞增殖能力强于二羟异黄酮 ,三羟异黄酮可能通过诱导 TGF-β和 TGF-β受体表达的增加而抑制人乳腺癌细胞 BCa P- 37增殖