肺泡巨噬细胞培养上清液对肺成纤维细胞的作用

肺泡巨噬细胞培养上清液对肺成纤维细胞的作用张尚明罗玲户万秘曹兆丰徐建余矽肺患者易合并肺结核病可能与肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）过多耗损、补体功能降低、肺部淋巴管网堵塞及矽肺利于结核菌繁殖有关［１］。矽肺合并肺结核后，结核又反过来促进矽肺的发展和恶化，其机制...     

煤尘刺激肺泡巨噬细胞对人胚肺成纤维细胞的作用

目的了解煤尘对肺成纤维细胞增殖的影响。方法采用不同浓度煤尘刺激兔肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）,观察其上清液对体外培养的人胚肺成纤维细胞（ＨＥＬＦ）的作用,测定ＨＥＬＦ的增殖程度、培养液上清中羟脯氨酸（Ｈｙｐ）含量,了解胶原合成能力。结果空白对照、ＰＡＭ、煤尘组和阳性对照组（二氧化硅）ＨＥＬＦ的增殖程度均数分别为０．２８５、０．３６８、０．３９８、０．７６８,Ｆ＝９３．９２,Ｐ＜０．０１。其中２００ｍｇ／Ｌ煤尘作用于ＰＡＭ后,其上清液对ＨＥＬＦ有显著刺激增殖作用（Ｐ＜０．０１）;１００、２００ｍｇ／Ｌ煤尘对ＨＥＬＦ的增殖率分别为９．７４％、１７．００％。１００ｍｇ／Ｌ组Ｈｙｐ含量为（３０．３９±０．２７）ｍｇ／Ｌ,明显高于ＰＡＭ对照组［（２７．５８±１．４６）ｍｇ／Ｌ］,Ｐ＜０．０５。结论一定浓度煤尘体外作用于ＰＡＭ,可刺激成纤维细胞增殖,同时伴有胶原合成能力的增加。     

经SiO2粉尘刺激的矽肺患者肺泡巨噬细胞中CTGF的表达及意义

[目的]通过矽肺病人肺灌洗液中巨噬细胞经SiO2粉尘刺激后,巨噬细胞及培养上清中CTGF的表达,探讨CTGF在矽肺纤维化过程中的作用。[方法]应用免疫细胞化学方法和酶联免疫吸附法检测巨噬细胞及培养上清的CTGF的表达。[结果]处理组不同时间点SiO2刺激的矽肺患者AM和培养上清中CTGF表达不断增高,并在18h表达最高,与同期对照组相比差异显著。[结论]SiO2可促进矽肺病人AM高表达CTGF,提示CTGF在肺纤维化的形成与发展中其重要作用,推测CTGF的表达与肺纤维化形成有关。     

过氯酸铵对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞影响的研究

目的通过探讨过氯酸铵(AP)对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)损伤及对肺成纤维细胞(FB)增殖的影响,研究AP的致肺纤维化作用。方法用AP浓度分别为0.5,1.0,2.0 mg/ml和SiO2浓度为0.1 mg/ml 的培养液培养AM,对照组采用RPMI1640培养液培养,24 h 后收集培养上清液,分别检测AM内MDA含量、GSH-Px活力以及上清液中LDH活力。并用AM上清液培养FB,检测FB增殖活力和FB内羟脯氨酸含量.结果 1.0,2.0 mg/ml AP组及SiO2组MDA含量(2.21,2.58,2.32 nmol/ml)均比对照组(1.97 nmol/ml)增加,差异有显著性或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01); 2.0 mg/ml AP组及SiO2组GSH-Px活力(29.47,30.79 U/106 AM)比对照组(26.70 U/106 AM)明显增强,差异有显著或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01); 0.5,1.0,2.0 mg/ml AP组和SiO2组LDH活力(151.03,252.31,446.50,583.88U/106 AM)均明显高于对照组(77.06U/106 AM,P＜0.05或P＜0.01), 且随AP染毒剂量的增加而升高。SiO2组AM上清液使FB羟脯氨酸含量(0.900 μg/ml)及增殖活力(0.165)明显高于对照组(0.379 μg/ml,0.138,P＜0.05或P＜0.01)。结论 AP对肺泡巨噬细胞具有一定的细胞毒作用,而AP染毒的AM上清液未发现有促进FB的增殖和胶原合成的作用。     

青石棉处理的肺泡巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞？…

为了探讨青石棉对肺损伤的机理,用兔肺泡巨噬细胞（ＡＭ）和人胚肺成纤维细胞（ＨＥＰＦ）组成体外模型,采用ＭＴＴ颜色反映法测定青石棉处理兔ＡＭ２４ｈ后的培养上清液刺激ＨＥＰＦ细胞增殖情况,同时用标准石英作为阳性对照,二氧化钛作为阴性对照,以不同粉尘处理的ＡＭ培养上清液作为正常对照。结果发现青石棉能明显刺激ＨＥＰＦ增殖,呈剂量－效应关系（Ｐ〈０．０１）。青石棉浓度在１００μｇ／ｍｌ时,青石棉组ＨＥＰＦ的     

染煤尘肺泡巨噬细胞上清液对成纤维细胞磷酸肌醇的影响

目的探讨染不同浓度煤尘的肺泡巨噬细胞(染煤尘-AM)上清液作用成纤维细胞不同时点对肌醇-1,4-二磷酸(IP2)和肌醇-1,4,5-三磷酸(IP3)信号物质的影响.方法应用细胞培养技术,用小鼠胸腺细胞增殖法和放射免疫分析法,分别测定染煤尘-AM上清液中白细胞介素1(IL-1)、前列腺素E2(PGE2)的含量;用Dowex-1×8阴离子交换柱层析法,分析染煤尘-AM上清液作用于3H-肌醇标记成纤维细胞后IP2和IP3的液闪计数值(cpm).结果 AM培养上清液中IL-1,PGE2含量随染煤尘浓度的增加而增高,与对照组比较差异有显著性.用这种含细胞因子的染煤尘-AM上清液作用成纤维细胞,在不同的作用时点,对IP2的影响不同,在10,20 s 时点,上清液中IL-1和PGE2对IP2显示有上调作用,随着作用时间的延长,IP2出现了下调现象.对IP3的影响表现为,在不同的作用时点均随上清液中细胞因子的增加IP3呈现增加趋势.煤尘组与对照组比较,在不同的观察时点显示有不同的差异显著性.结论染煤尘-AM培养上清液中含有高于对照组的IL-1和PGE2细胞因子,用这种上清液作用于成纤维细胞后,可影响成纤维细胞中磷酸肌醇信号物质的含量,影响程度与细胞因子的浓度和作用时间有关.     

青石棉处理的肺泡巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞的作用

为了探讨青石棉对肺损伤的机理,用兔肺泡巨噬细胞(AM)和人胚肺成纤维细胞(HEPF)组成体外模型,采用MTT颜色反映法测定青石棉处理兔AM24h后的培养上清液刺激HEPF细胞增殖情况,同时用标准石英作为阳性对照,二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照.结果发现青石棉能明显刺激HEPF增殖,呈剂量效应关系(P<0.01).青石棉浓度在100μg/ml时,青石棉组HEPF的净增殖率达60.91%,是正常对照组的348倍,高于阳性对照和阴性对照100μg/ml青石棉处理兔AM的培养上清液的不同稀释度对HEPF增殖的影响不同,随稀释度的加大,其促细胞增殖的能力越弱,以1:2稀释度作用最强,明显高于阳性对照和阴性对照(P<0.01).提示青石棉处理肺泡巨噬细胞的培养上清液中存在有促进肺成纤维细胞增殖的生物活性物质,若能阻止这些生物活性物质的合成和分泌将对石棉相关疾病的预防和治疗具有重要意义.     

BCG刺激的肺泡巨噬细胞培养上清液对肺成纤维细胞影响

７．５～６０ｍｇ／Ｌ卡介苗（ＢＣＧ）刺激的肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）培养上清液能显著促进肺成纤维细胞（ＰＦＢ）增殖和胶原合成。发现该上清液中含较高水平的肿瘤坏死因子（ＴＮＰ），且其促ＰＦＢ增殖作用与ＴＮＦ水平成正相关，提示ＢＣＧ在体外能刺激ＰＡＭ产生ＴＮＦ，ＴＮＦ为该上清液促ＰＦＢ增殖的主要因素；５０ｍｇ／ＬＳｉＯ２刺激的ＰＡＭ上清液亦能促进ＰＦＢ增殖和胶原合成，但上清液中几乎检测不到ＴＮＦ，说明其促ＰＦＢ增殖和胶原合成的成分是不同于ＴＮＦ的其它物质；ＴＮＦ能协同该物质促ＰＦＢ增殖和胶原合成。上述结果提示，结核菌刺激ＰＡＭ产生ＴＮＰ可能是矽肺结核病较单纯矽肺发展迅速的一个重要原因。     

矽肺患者肺泡巨噬细胞培养上清对人胚肺成纤维细胞c-myc基因表达的影响

目的 探讨矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)培养上清对人胚肺成纤维细胞(HEFB)c-myc基因表达的影响.方法 AM分为加尘组(SiO2,30μg/ml)和对照组,培养1、2、6、12、24和36 h,收集培养上清.Ⅲ代HEFB用质量分数为0.5%的血清培养液培养48 h使大部分细胞处于静止期后,加人SiO2刺激6 h的AM培养上清(S6组),用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法观察c-mycmRNA和蛋白的时程变化.然后将各组AM上清与静止状态的HEFB孵育2和7 h,观察c-myc mRNA和蛋白表达的变化.结果 HEFB在静止状态时c-myc mRNA和蛋白的表达为0,在对照组中,培养不同时间的AM上清刺激了c-myc mRNA及蛋白的表达,以AM培养12 h的卜清作用最明显,比值分别为0.749±0.088和0.759±0.101.加尘组中各上清也刺激了c-myc mRNA和蛋白的表达,但作用高峰提前,以SiO2刺激6 h的上清作用最明显,比值分别0.982±0.147和0.978±0.141.与同期对照相比,SiO2刺激1、2和6 h的AM上清诱导mRNA和蛋白表达增多,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 SiO2激活的AM培养上清可促进HEFB c-myc基因的表达.     

p53基因抑制染尘AM作用下2BS增殖活性和功能研究

研究野生型Ｐ５３基因对染石英尘肺泡巨噬细胞培养上清导 成纤维细胞非正常增殖和功能的影响,将体内,体外染尘ＡＭ上清加入人胚成纤维细胞中培养２４小时后,应用胆质体介导转染将野生型Ｐ５３基因导入继续培养２４小时。结果,转染Ｐ５３基因组２ＢＳ细胞增殖和胶原合成较未转染组受到抑制。     

染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞胰岛素样生长因子的研究

本文通过高压液相技术对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞上清中的促纤维母细胞生长活性物质进行了初步分离纯化。结果表明,SiO_2诱发的矽肺大鼠肺泡巨噬细胞上清中,出现一异常增高的蛋白洗脱峰,分子量范围在6-9KD之间,能明显促进同糸大鼠肺纤维母细胞的生长,放射免疫分析表明,这一洗脱峰具有较强的胰岛素样生长因子-1(IGF-Ⅰ)的免疫反应性。其次,对矽肺大鼠支气管肺泡灌洗液及血清的分析表明,灌洗液中IGF-Ⅰ升高明显,但血清IGF-Ⅰ水平无变化。     

镉化物对人胚肺成纤维细胞转化作用的研究

本文应用人胚肺成纤维细胞转化试验,对氯化镉的致癌性进行研究。结果表明:氯化镉在浓度0.004～0.04μM/ml范围之内,可使人胚肺细胞形态发生改变,出现明显的转化灶,细胞与刀豆蛋白A的凝集作用加强,细胞失去接触抑制特性,获得在软琼脂培养基中生长能力及细胞在软琼脂中集落形成率增高,细胞的染色体数目出现变化,增多或减少,及结构的畸变、断裂、断片等。细胞的寿命明显延长。本文通过分析各种指标,较完整的反映了氯化镉使细胞恶性转化的多阶段的转化过程,证实了体外培养的细胞转化和肿瘤的演化,与它在体内的类似物的作用一样,是一个具有多步骤的变化过程。通过实验,初步建立了氯化镉致恶性转化体外培养的实验模型、为进一步研究癌变的分子基础提供条件。     

六种生物膜稳定剂抑制石英对巨噬细胞膜破坏作用的体外实验

本文观察了六种生物膜稳定剂抑制石英对肺泡巨噬细胞膜的破坏作用。将家兔麻醉,无菌操作,行肺灌洗获取健康家兔的肺泡巨噬细胞。将细胞配制成10×10~5cells/ml悬液,置于CO_2孵育箱中培养。与临床治疗矽肺的药物(矽肺宁)作对比。通过测定细胞内外酸性磷酸酶(ACPase)含量变化,筛选五种试剂对膜具有最大稳定的浓度。分析结果表明,膜保护作用由强到弱的排列顺序是Zn~(++),Se,矽肺宁,VE,Mg~(++),Ca~(++)。本文结果提示,石英直接损伤肺泡巨噬细胞的生物膜,故任何能保护生物膜的试剂,对煤工矽肺的防治均可能有意义。     

SiO2对人肺泡巨噬细胞及肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响

[目的]探讨SiO2是否通过影响矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)和肺成纤维细胞(FB)基质金属蛋白酶(MMPs)/金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)系统参与矽肺纤维化的发生发展.[方法]收集矽肺患者的AM,在体外以SiO2(50 μg/ml)和不加血清的DMEM培养基培养2、6、12、18、24、36 h,用免疫细胞化学的方法检测AM中MMP-9和TIMP-1的表达.收集矽肺患者AM培养上清,与人胚肺FB共同孵育6、12、18、24、36、48 h,用免疫细胞化学的方法检测FB中MMP-1和TIMP-1的表达.[结果]经SiO2刺激的AM MMP-9表达明显上调,且随刺激时问不同表达量也不同,于18 h达高峰(平均光密度值为0.440±0.021),与同期对照纽AM(0.390±0.011)相比,差异有统计学意义(P<0.05);而TIMP-1的表达与对照组(平均光密度值分别为0.175±0.019、0.162±0.044)的差异无统计学意义(P>0.05).未经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清作用于FB 24 h,FB中MMP-1的表达较空白对照组减少(平均光密度值分别为0.103±0.014、0.133±0.023,P<0.01),TIMP-1的表达增多(平均光密度值分别为0.108±0.012、0.065±0.006,P<0.01);经SiO2刺激24 h的矽肺患者AM培养上清作用于FB后,FB中MMP-1的表达量进一步减少(平均光密度值分别为0.062±0.008、0.133±0.023,P<0.01),而TIMP-1的表达量进一步增加(平均光密度值分别为0.143±0.015、0.065±0.006,P<0.01).[结论]SiO2上调AM中MMP-9的表达,可能与肺脏损伤早期,降解基底膜,导致包括成纤维细胞在内的多种细胞迁移有关.通过肺泡巨噬细胞的介导,SiO2影响了FB中MMP/11MP系统的平衡,参与了矽肺纤维化的发生发展.     

温石棉对细胞膜脂质流动性及通透性的影响

用荧光探针ＤＰＨ标记肺泡巨噬细胞，观察到随温石棉剂量增加，茫棉及涞棉均可增加细胞膜脂质的流动性，表现为膜脂质荧光偏振度及脂区徽粘度的降低。茫棉及涞棉亦可增加膜通透性，使胞内Ｋ＋含量下降，该作用存在剂量一效应关系。茫棉及涞棉所致膜脂质流动性改变与膜通透性改变存在明显相关关系。因此，两种温石棉所致的膜脂质流动性增加可能与膜通透性增加一样与细胞受损有关。     

石棉诱导AM因子对成纤维细胞作用的研究

不同浓度的石棉纤维与ＡＭ共同培养２４ｈ后，取上清液加入ＷＩ－３８细胞培养，分别用＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法和＾１４Ｃ－羟脯氨酸（＾１４－Ｐｒｏ）掺入法观察ＡＭ上清液对ＷＩ－３８细胞增殖和胶合原成的影响，并用氯胺－Ｔ法测定成纤维细胞总羟脯氨酸含量。结果显示，石棉诱导的ＡＭ上清液能显著增加ＷＩ－３８细胞增殖和胶原合成。＾３ＨＴｄＲ掺入的ｃｐｍ达５２０５，＾１４Ｃ－Ｐｒｏ掺入的ｃｐｍ为７８     

大鼠矽肺支气管肺泡灌洗液和肺组织磷脂谱的研究

本文报告了大鼠矽肺支气管肺泡灌洗液和肺组织磷脂谱间变化的关系。实验分为正常对照组和石英组，在染尘后１５、４５、９０、１８０和２７０天分批剖检，测定其灌洗液和肺组织中总磷脂、ＤＰＰＣ、ＰＧ、ＰＥ含量。结果表明在实验期间石英组灌洗液和肺组织中总磷脂、ＤＰＰＣ、ＰＧ和ＰＥ含量呈升高趋势，且早期变化明显，但二者并不是呈简单的对应关系。推测影响灌洗液和肺组织磷脂谱含量和比值变化的因素有所不同。     

柠檬酸铝对矽肺大鼠肺冲洗液中脂质含量的影响

本文报告了柠檬酸铝对矽肺大鼠肺冲洗液中脂质含量的影响。实验分为正常对照、矽肺及柠铝治疗组,疗程180天。实验结果表明,柠铝治疗组大鼠肺冲洗液中脂质含量明显低于矽肺组。本文还对实验结果做了讨论阐述。