子宫内膜胚泡黏附时着床点与着床旁组织的分离

目的：分离小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁组织，以利于对着床机制及生育调控的研究。方法：取妊娠第5天(D5)小鼠，尾静脉注射0．4％台盼蓝(Trypan blue)，10min后脱颈处死，取小鼠子宫，用处理的4号针头滑动挤压子宫角。结果：取得的子宫内膜完整，着床点染成蓝色，与着床旁组织区别明显，易于分离。结论：用简便易行的方法，分离小鼠胚泡着床点和着床旁组织，为胚泡着床机制的研究提供有意义的物质材料。     

小鼠胚泡黏附时已黏附侧与未黏附侧子宫内膜蛋白质组差异的研究

目的:用蛋白质组相关技术分析小鼠胚泡黏附时已粘附侧与未黏附侧子宫内膜蛋白质组的差异,探讨小鼠胚泡在双侧子宫黏附不同步现象发生的可能机制.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE)分别分离妊娠五天(D5)小鼠胚泡已黏附侧与未黏附侧子宫内膜的蛋白质组.银染显色,PDQuest 2DE软件分析.结果:图像分析测得两种胶的匹配率达82.5%,在等电点pI4～7、分子量14.0～75.4kD范围内分离得胚泡黏附侧小鼠子宫内膜蛋白点大约760个,胚泡未黏附侧小鼠子宫内膜蛋白点大约720个,其中至少60个蛋白点在两种子宫内膜间有2倍以上的量变.结论:小鼠双侧子宫内膜蛋白质的差异表达,是造成两侧子宫内膜胚泡附着不同步的一个可能原因.     

PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究

目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluores-cence quantitativePCR,FQ-PCR)分别检测未孕及孕1、3、4、5、7d(分别记为d0、d1、d3、d4、d5、d7)小鼠子宫内膜PTEN基因mRNA的表达和子宫角注射反义寡核苷酸观察胚泡着床数。结果FQ-PCR测得妊娠的子宫内膜组织PTEN的表达高于未妊娠的子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增加的趋势,到妊娠第5天达到最高。子宫角注射PTEN反义寡核苷酸后胚泡着床数明显减少。结论PTEN在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡着床。     

GRB7基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的：研究生长因子结合受体7（growth factor receptor bound 7,GRB7）在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨其在胚胎着床过程中的作用。方法：分别应用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot方法检测未妊娠及妊娠早期d1～7小鼠子宫内膜GRB7基因及蛋白的表达;孕3 d下午8点子宫角注射GRB7反义寡核苷酸,孕7 d观察胚泡着床数较正常组有无变化。结果：实时荧光定量PCR测得未妊娠（d0）和妊娠早期（d1～7）小鼠子宫内膜组织均有GRB7 mRNA表达,并在孕5 d达到峰值;免疫组化及Western blot分析显示GRB7蛋白在子宫内膜的表达规律与实时荧光定量PCR基本一致,孕1 d到孕4 d,GRB7蛋白主要表达部位为腔上皮、腺上皮,基质细胞少量表达,孕5 d、孕6 d,GRB7蛋白表达较之前增强,并且在基质细胞开始明显表达,孕5 d最强;孕6 d着床点GRB7蛋白高表达于初级蜕膜区,着床旁GRB7蛋白高表达于基质细胞;子宫角注射GRB7反义寡核苷酸后胚泡着床数较正常组明显减少。结论：GRB7在早孕小鼠子宫内膜中呈动态表达,提示它参与了胚胎着床的发育过程。     

PCNA在小鼠胚胎着床过程中的作用

目的:探讨增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在小鼠胚胎着床过程中的作用.方法:实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time Fluorescence Quantitative PCR,Real-time FQ-PCR)技术检测未孕及孕2、3、4、5、6、7 d(分别记为d0、d2、d3、d4、d5、d6、d7)小鼠子宫内膜PCNA mRNA的表达;子宫角注射PCNA单克隆抗体观察胚泡着床数.结果:FQ-PCR测得随着小鼠妊娠天数的增加,PCNA mRNA表达量也逐渐增高,在孕d4、d5达到峰值,孕d6、d7逐渐下降.子宫角注射PCNA单克隆抗体后胚泡着床数明显减少.结论:PCNA在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡着床.     

着床期小鼠子宫内膜Trophinin基因表达研究

目的:研究细胞粘附分子Trophinin在着床期小鼠子宫内膜的表达.方法:收集孕1～6天的小鼠子宫内膜,采用RT-PCR技术测定Trophinin mRNA的表达水平.结果:未孕鼠及孕D1、D2未检测到其表达,孕D3、D4、D5大量表达,D6仅有少量表达或不表达.结论:Trophinin mRNA在小鼠子宫内膜的表达时间与胚泡着床时间一致,提示Trophinin可能参与了胚泡对子宫内膜的粘附.     

补肾填精中药对妊娠期小鼠子宫内膜容受性影响的研究

目的观察补肾填精中药对妊娠小鼠子宫内膜容受性的影响。方法 120雌性小鼠随机分为治疗组和对照组,治疗组予调经助孕胶囊,对照组予六味地黄丸灌胃2周,动情期小鼠按雌雄2∶1比例合笼,次晨阴道查有阴栓为妊娠第1天。两组分别于妊娠第3、5、7天,取每组20只妊娠小鼠处死,取出子宫,刮取内膜。测定内膜αvβ3 mRNA及蛋白的表达。观察第5天妊娠小鼠胚泡着床数。结果整合素β3在治疗组和对照组早孕小鼠子宫内膜中的表达随妊娠天数呈规律变化,在治疗组的表达高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。妊娠第5天治疗组孕鼠胚泡着床数目明显多于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论补肾填精中药通过增加小鼠子宫内膜整合素β3的表达,提高胚泡着床数目,而改善子宫内膜容受性,提高妊娠率。     

妊娠小鼠子宫GMG细胞中活性蛋白与胚泡植入关系的研究

取孕 1 3～ 1 4d小鼠的子宫腺细胞区 ,经细胞分离和蛋白提取获得颗粒子宫腺细胞 (GMG细胞 )中的活性蛋白。将注入活性蛋白的 1 0只孕 3d小鼠作为实验组 ;对照组 1 0只小鼠给予PBS。注射后 5d取子宫观察胚胎着床情况并计算孕胚数。结果 :实验组有 9只可见胚胎 ,胚胎数为 1 1 2个 ;对照组有 7只可见胚胎 ,胚胎数为 87个。提示 :GMG细胞中的活性蛋白对胚泡着床可能有一定促进作用     

免疫学

001118小鼠子宫内膜着床期碱性成纤维细胞生长因子及其受体免疫组织化学观察郴晶…//生殖与避孕一2《X用,20(4)一320一233 为进一步阐明碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growth factor,bFGF)在胚泡着床中的生物学作用,采用免疫组织化学的方法检测了bFGF及其受体在小鼠早期妊娠子宫中的分布状况。结果显示:bFGF及其受体广泛分布于子宫内膜各种细胞中,其分布呈现出明显的阶段性变化。受精后4一5d,bFGF及其受体在子宫内膜上皮和腺上皮中呈阳性反应。随胚泡植人的进行,bFGF及其受体在蜕膜细胞中的表达逐渐增加,到受精后d8达到高…     

期刊文摘

补肾益气和血方中药对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响　　 [黄冬梅 ,黄光英 ,陆付耳 .中华妇产科杂志 ,2 0 0 4 ,39(4 ) :2 30～ 2 33]　　为观察补肾益气和血方中药对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响 ,选择 8～ 12周龄昆明小鼠 ,于妊娠第 4天 (P     

补肾益气中药对小鼠围着床期子宫内膜形态结构及PR表达的影响

[目的]探讨补肾益气中药改善胚泡着床障碍小鼠着床期子宫内膜微环境的机制。[方法]于妊娠第4天9:00利用米非司嗣建立胚泡着床障碍小鼠模型,予补肾益气中药进行干预,于妊娠第4天21:00处死小鼠,观察子宫内膜形态学变化,采用免疫组化技术及Western blot技术检测子宫PR的表达。[结果]与正常组相比,模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;中药组子宫内膜腺体、间质、腔上皮细胞PR表达范围和强度及PR蛋白的表达均较模型组显著增高,子宫PR蛋白的表达较模型组显著增高,与正常组无显著差异;[结论]补肾益气中药通过改善子宫内膜发育,调节胚泡着床障碍小鼠子宫组织PR蛋白的表达,改善子宫内膜着床微环境,利于胚泡着床。     

TACE在着床窗口期小鼠子宫内膜上皮细胞中的表达及其抗体对胚泡粘附的影响

目的:通过检测肿瘤坏死因子α转换酶(Tumor necrosis factor α convening enzyme,TACE)在小鼠子宫内膜上皮细胞中的表达及其在体外着床模型中对胚泡粘附的影响,初步探讨TACE在小鼠生殖中的作用以及其与胚胎着床的关系.方法:体外培养孕4d(d4)小鼠子宫内膜上皮细胞和胚泡,构建胚泡体外着床模型;通过细胞免疫组化鉴定小鼠子宫内膜上皮细胞;运用RT-PCR和细胞免疫组化分别检测小鼠子宫内膜上皮细胞中TACE mRNA和蛋白的表达;向体外着床模型中添加不同浓度的TACE抗体,观察对胚泡体外着床的影响,并用细胞免疫化学检测抗体干预后各培养体系中TACE蛋白质的表达情况.结果:原代培养小鼠子宫内膜上皮细胞生长旺盛,鉴定结果显示:上皮细胞对角蛋白抗体有棕黄色阳性表达,对波形蛋白抗体为阴性表达.PCR结果显示TACE mRNA在共培养体系中有高表达,免疫组化结果与RT-PCR结果相一致;小鼠胚泡体外共培养具有较高的粘附率,添加TACE抗体后胚泡帖附率均显著低于对照组帖附率(P<0.05),且随着抗体浓度的降低胚泡粘附率随之升高,免疫化学检测结果也显示随着抗体浓度的降低TACE的表达量随之升高.结论:TACE可能参与了胚泡着床过程,有利于小鼠胚胎粘附、扩展,为胚胎的着床做准备.     

趋化因子受体-1在妊娠早期小鼠子宫内膜腔上皮的表达

目的:研究妊娠早期小鼠子宫内膜腔上皮趋化因子受体-1(CXCR-1)的表达。方法:用免疫组织化学染色法及图像分析技术,对CXCR-1在妊娠1 d、4 d、5 d、6 d小鼠子宫内膜腔上皮的表达进行定位和半定量分析。结果:CXCR-1主要定位表达于妊娠早期小鼠子宫内膜腔上皮细胞的游离面,其表达呈一定的规律性,妊娠4 d时表达最强,妊娠6 d时降至妊娠1 d水平。结论:CXCR1可能与小鼠胚泡着床时子宫内膜的接受性有关。     

小鼠胚泡着床前后子宫内膜细胞间粘附分子-1 mRNA表达水平的变化

目的　研究小鼠胚泡着床前后子宫内膜细胞间粘附分子1(ICAM1)在转录水平的表达变化。方法　小鼠雌雄合笼后建立小鼠早孕模型,用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR),测定ICAM1mRNA的表达。结果　小鼠正常动情期子宫内膜有一定ICAM1mRNA的表达,着床前后其表达显著升高,并在着床前一天即孕3d达到高峰,着床后逐渐出现下降趋势。结论　ICAM1在胚泡着床前后明显上调,和胚泡着床密切相关。     

瘦素及其受体系统在小鼠胚泡着床过程中子宫内膜的表达

目的:探讨瘦素(leptin)及其受体(Ob-Rb)在小鼠胚泡着床过程中子宫内膜的表达规律,以明确其在胚泡着床过程中的可能作用.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测小鼠胚泡着床过程中子宫内膜leptin及其受体(Ob-Rb)的表达.结果:leptin在胚泡着床过程中在小鼠子宫内膜也都有表达,各时期的表达水平差异不明显(P＞0.05);Ob-Rb在胚泡着床过程中在小鼠子宫内膜也都有表达,各时期的表达水平差异(P＜0.01),且在孕期第4天表达水平最高,在5到7天仍然维持在一定水平.结论:瘦素及其受体(Ob-Rb)可能在胚泡着床过程中发挥作用,同时也可能参与着床后胚胎的生长发育.     

小鼠子宫角注射层粘连蛋白及其抗血清对胚泡着床的影响

目的：研究层粘连蛋白及其特异性抗血清对胚泡着床的影响。方法：在小鼠子宫角内注射层粘连蛋白及其特异性抗血清，并对胚胎着床率与子宫内膜变化进行组织学观察。结果：提示外源性层粘连蛋白在小鼠体内有促进胚泡粘附、植入子宫内膜的趋势，但作用不明显；而层粘连蛋白抗血清则有显著抑制小鼠胚泡着床的效应。结论：小鼠体内的层粘连蛋白对胚胎粘附、着床起重要作用。     

小鼠子宫内膜胚泡着床点及旁组织白血病抑制因子基因表达研究

目的:探讨白血病抑制因子(LIF)基因在小鼠胚泡着床窗口期了宫内膜表达的特定部位.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),对20只孕期第4天的小鼠子宫内膜着床点和旁组织的LIF mRNA进行检测.结果:20只孕期第4天的小鼠着床点LIF mRNA表达平均水平为0.5316,旁组织LIF mRNA表达平均水平为0.3711.统计处理t检验差异具有显著性(P＜0.05).结论:在胚泡着床窗口期,小鼠子宫内膜胚泡着床点和旁组织LIF基因表达存在差异.     

着床前小鼠子宫内膜及胚泡中IL-8RB蛋白的定位表达及意义

目的:研究着床前小鼠子宫内膜及胚泡中白细胞介素-8B型受体(Interleukin-8 receptor B,IL-8RB)的表达情况.方法:应用免疫组织化学技术,观察IL-8RB蛋白在妊娠4d小鼠子宫内膜及胚泡的表达部位;HE染色后光镜下观察子宫内膜的形态结构特点. 结果:IL-8RB表达于妊娠4d小鼠子宫内膜的腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质中;胚泡的内细胞团和滋养层细胞亦有阳性表达.HE染色可见妊娠4d基质中有大量中性粒细胞浸润,而腔上皮中未见中性粒细胞.结论:IL-8RB可能通过与其配体IL-8结合而参与胚泡滋养层细胞与子宫内膜上皮细胞之间的相互作用.     

抗骨桥蛋白(OPN)和整合素β3抗体中和OPN、整合素β3对小鼠胚泡种植的影响

目的研究骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体对小鼠胚泡着床的影响。方法取20只孕4d小鼠,分别在两侧子宫角内注射骨桥蛋白抗体、整合素β3抗体,对照组注射生理盐水,正常妊娠空白对照组未行任何处理,于孕8d处死小鼠,统计胚泡着床数及妊娠率,取子宫观察内膜的组织学变化。结果结果显示骨桥蛋白抗体组小鼠妊娠率为60%,平均胚胎着床数为1.6±1.19,整合素β3抗体组妊娠率为70%,平均胚胎着床数为1.7±1.28,明显低于生理盐水组及空白对照组(90%,10.0±1.63及100%,10.5±1.58),提示骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡着床。结论骨桥蛋白和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡的着床并导致子宫内膜的形态学变化,这提示骨桥蛋白和整合素β3与子宫内膜容受性获得有关。骨桥蛋白和整合素β3参与了小鼠胚泡的着床。     

健胎液对模型小鼠着床期子宫内膜容受性的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫内膜容受性的影响。方法:于妊娠第4天9∶00利用米非司酮建立胚泡着床障碍小鼠模型,予健胎液进行干预,于妊娠第4天21∶00处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,采用放免法检测血清及子宫组织雌二醇、孕酮的含量,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测子宫ERmRNA、PRmRNA表达。结果:与模型组相比,中药组着床率和平均着床胚胎数均显著升高,与对照组无显著差异;模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;3组血清及子宫组织的雌二醇和孕酮的含量无显著改变;中药组子宫ER mRNA、PR mRNA表达均较模型组显著提高,与正常组比较差异无显著性。结论:健胎液通过促进子宫内膜发育,调节胚泡着床障碍小鼠子宫组织ER、PR基因的表达,改善子宫内膜容受性,利于胚泡着床。