益气化瘀利水方干预兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子1的变化

目的：观察益气化瘀利水方对实验性兔骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子1的影响。 方法：实验于2003-07／12在上海中医药大学脊柱病研究所完成。取雄性6月龄新西兰大白兔20只，随机分为正常组、模型组、益气化瘀利水方组和氨糖美辛组，每组5只。按Colombo法建立家兔膝骨关节炎模型，术后第5～8周给药。益气化瘀利水方组给予益气化瘀利水方（由生黄芪、汉防己、左秦艽、地鳖虫、制苍术、川牛膝、全当归、仙灵脾、生米仁等组成，自制制剂）0．09g,／（kg&;#183;d），氨糖美辛组给予氨糖美辛（非甾体类消炎镇痛药物，批号030401）0．09g,／（kg&;#183;d），均与兔饲料混合均匀，制成定量颗粒饲料，确保其当天吃完。正常组及模型组均未给药。各组于术后第9周取右胫骨平台关节软骨，采用免疫组化方法进行染色，光镜下观察，并利用图像分析测定其胰岛素样生长因子1表达的积分吸光度。 结果：20只新西兰大白兔均进入结果分析。①正常组软骨表面光滑，软骨细胞为圆形呈散在、无序排列。模型组软骨表面广泛碎裂、剥脱，可见软骨细胞簇集。益气化瘀利水方组软骨表面可见小的碎裂，软骨细胞呈散在排列。氨糖美辛组软骨表面粗糙不平，软骨细胞呈散在排列，可见细胞集簇现象。正常组、益气化瘀利水方组、氨糖美辛组软骨细胞及间质中胰岛素样生长因子1染色呈淡黄色。模型组在簇集的软骨细胞的胞浆和细胞核内胰岛素样生长因子1染色呈黄褐色。②各组关节软骨切片胰岛素样生长因子1染色强度的积分吸光度图像分析：模型组明显高于正常组（17．08&;#177;2．27，4．75&;#177;0．88，P＜0．01）；益气化瘀利水方组和氨糖美辛组比较，差异无显著性（10．43&;#177;2．37，9．27&;#177;2．44，P＞0．05）；益气化瘀利水方组和氨糖美辛组明显低于模型组（F=29．71，P＜0．01）。 结论：益气化瘀利水方可抑制骨质增生，其作用可能是通过调控胰岛素样生长因子1而达到的。     

益气化瘀利水方干预后兔膝骨关节炎软骨中转化生长因子β1的变化

目的:观察益气化瘀利水方对实验性兔骨关节炎软骨中转化生长因子β1的影响。方法:实验于2003-07/12在上海中医药大学脊柱病研究所完成。取雄性6月龄新西兰大白兔20只,随机分为正常组、模型组、益气化瘀利水方组、氨糖美辛组。每组5只。按Colombo法建立家兔膝骨关节炎模型,术后第5～8周给药。益气化瘀利水方组给予益气化瘀利水方0.09g/(kg·d),氨糖美辛组给予氨糖美辛0.09g/(kg·d),正常组及模型组均未给药。各组于术后第9周取材,取右胫骨平台关节软骨,采用免疫组织化学方法进行染色,光镜下观察,并利用图象分析测定其转化生长因子β1表达的积分吸光度。结果:20只白兔均进入结果分析。①各组关节软骨光镜观察结果:模型组和氨糖美辛组,关节软骨损伤严重,转化生长因子β1主要在发生簇集的软骨细胞胞膜和胞浆内表达,益气化瘀利水方组软骨损伤较氨糖美辛组明显减轻。②各组关节软骨切片转化生长因子β1染色强度的积分吸光度图像分析:正常组与益气化瘀利水方组无明显差异(6.64±1.59,5.49±3.09,P>0.05);模型组与氨糖美辛组无明显差异(23.16±9.38,20.09±9.17,P>0.05);模型组较正常组和益气化瘀利水方组明显增高(F=8.96,P<0.01)。结论:益气化瘀利水方可抑制骨质增生,其作用机制之一可能是通过调控转化生长因子β1而达到的。     

益气化瘀利水方干预后兔膝骨关节炎软骨中转化生长因子β1的变化

目的：观察益气化瘀利水方对实验性兔骨关节炎软骨中转化生长因子β1的影响。 方法；实验于2003-07／12在上海中医药大学脊柱病研究所完成。取雄性6月龄新西兰大白兔20只，随机分为正常组、模型组、益气化瘀利水方组、氨糖美辛组。每组5只。按Colombo法建立家兔膝骨关节炎模型，术后第5～8周给药。益气化瘀利水方组给予益气化瘀利水方0．09g/（kg&;#183;d），氨糖美辛组给予氨糖美辛O．09g/（kg&;#183;d），正常组及模型组均未给药。各组于术后第9周取材，取右胫骨平台关节软骨，采用免疫组织化学方法进行染色，光镜下观察，并利用图象分析测定其转化生长因子β1表达的积分吸光度。 结果：20只白兔均进入结果分析。①各组关节软骨光镜观察结果：模型组和氨糖美辛组，关节软骨损伤严重，转化生长因子β1主要在发生簇集的软骨细胞胞膜和胞浆内表达，益气化瘀利水方组软骨损伤较氨糖美辛组明显减轻。②各组关节软骨切片转化生长因子β1染色强度的积分吸光度图像分析：正常组与益气化瘀利水方组无明显差异（6．64&;#177;1．59，5．49&;#177;3．09，P〉0．05）；模型组与氨糖美辛组无明显差异（23．16&;#177;9.38，20．09&;#177;9．17，P〉0．05）；模型组较正常组和益气化瘀利水方组明显增高（F=8．96。P〈0．01）。 结论：益气化瘀利水方可抑制骨质增生，其作用机制之一可能是通过调控转化生长因子β1而达到的。     

睾酮干预雄兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子1的表达

背景:睾酮对骨关节炎的作用尚无一致的观点,其调节软骨代谢的作用鲜有文献报道.目的:观察睾酮对膝骨关节炎雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1 表达的影响.方法:24 只雄兔随机分成4 组,采用改良Hulth 法建立右膝骨关节炎模型;假去势组不切除睾丸,其余3 组切除双侧睾丸.第8 周末处死假去势组和去势8 周组兔取材.第9 周开始,激素组肌注生理剂量十一酸睾酮(6 mg/kg,2 周1 次),去势16 周组正常喂养,并于16 周末处死并取材.结果与结论:大体和组织学观察显示各组兔膝关节软骨的病变程度为假去势组优于去势8 周组,激素组优于去势16 周组.免疫组化染色显示胰岛素样生长因子1 在所有兔膝关节软骨中均有表达,阳性细胞个数假去势组高于去势8 周组(P <0.05),激素组高于去势16 周组(P < 0.05),去势8 周组与去势16 周组差异无显著性意义(P > 0.05).说明睾酮可通过上调去势雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1 的表达,延缓软骨退变.     

睾酮干预雄兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子1的表达

背景：睾酮对骨关节炎的作用尚无一致的观点,其调节软骨代谢的作用鲜有文献报道。目的：观察睾酮对膝骨关节炎雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1表达的影响。方法：24只雄兔随机分成4组,采用改良Hulth法建立右膝骨关节炎模型;假去势组不切除睾丸,其余3组切除双侧睾丸。第8周末处死假去势组和去势8周组兔取材。第9周开始,激素组肌注生理剂量十一酸睾酮（6mg/kg,2周1次）,去势16周组正常喂养,并于16周末处死并取材。结果与结论：大体和组织学观察显示各组兔膝关节软骨的病变程度为假去势组优于去势8周组,激素组优于去势16周组。免疫组化染色显示胰岛素样生长因子1在所有兔膝关节软骨中均有表达,阳性细胞个数假去势组高于去势8周组（P〈0.05）,激素组高于去势16周组（P〈0.05）,去势8周组与去势16周组差异无显著性意义（P〉0.05）。说明睾酮可通过上调去势雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1的表达,延缓软骨退变。     

骨关节炎与胰岛素样生长因子

近来发现细胞因子可能在骨关节炎(OA)的发病过程中起重要作用,其中作为合成性因子的胰岛素样生长因子(IGF)及IGF系统和OA的发病有密切关系。就这一问题作文献回顾,并试图揭示OA的发病机理。内容涉及IGF系统与OA的骨组织、软骨组织、滑膜、滑液的关系,血清IGF与OA骨赘的关系,以及以IGF作为治疗方法的一些动态。从中可以发现,IGF虽然有修复软骨的作用,但OA的软骨细胞对之并不敏感,这和IGF系统各成分失平衡有关。骨赘形成也和IGF有关。另外,关节内IGF注射可能对OA或其它软骨损伤性疾病有益。     

牛膝联合超声波治疗对膝骨关节炎实验兔软骨组织中胰岛素样生长因子-1及Ⅱ型胶原蛋白的影响

目的 观察牛膝联合超声波治疗对膝骨关节炎（OA）模型兔膝关节软骨组织中胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及Ⅱ型胶原蛋白的影响,初步探讨其防治OA的作用机制。 方法 采用随机数字表法将新西兰大白兔分为正常组、模型组、牛膝组、超声波组及观察组。参照Hulth造模法将模型组、牛膝组、超声波组及观察组实验兔制成膝关节OA动物模型。于造模1周后牛膝组、超声波组分别给予牛膝、超声波治疗,观察组则给予牛膝及超声波联合治疗。于治疗4周后取材,采用免疫组织化学法分别检测各组实验兔软骨组织中IGF-1和Ⅱ型胶原含量,并通过图像分析系统比较各组间差异。 结果 牛膝组、超声波组及观察组软骨组织中IGF-1表达均较模型组明显增强（P<0.05）;超声波组IGF-1表达与牛膝组间差异无统计学意义（P>0.05）,观察组IGF-1表达较牛膝组、超声波组均明显增强（P<0.05）。牛膝组、超声波组及观察组软骨组织中Ⅱ型胶原表达均较模型组明显增强（P<0.05）;超声波组Ⅱ型胶原表达与牛膝组间差异无统计学意义（P>0.05）,观察组Ⅱ型胶原表达较牛膝组、超声波组均明显增强（P<0.05）。 结论 中药牛膝联合超声波治疗能显著提高OA实验兔软骨组织中IGF-1及Ⅱ型胶原蛋白表达,该联合疗法值得进一步深入探讨。     

胰岛素样生长因子Ⅰ研究现状

胰岛素样生长因子I（IGF—Ⅰ）是70个氨綦酸的单链多肽，生物学活件受IGF—Ⅰ受体及胰岛素结合蛋白的调节，它可促进细胞分化，刺激RNA、DNA的合成和细胞的增殖，促进细胞的有丝分裂及分化后功能的表达，促进脂质和糖原及蛋白质的合成等。临床上可用于生长激素不敏感综合征，糖尿病、极度胰岛素抵抗、分解代谢疾病骨质疏松等。     

非糖尿病巨大儿胰岛素样生长因子1与胰岛素样生长因子结合蛋白3水平探讨

目的：探讨胰岛素样生长因子1（IGF-1）及胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）与非糖尿病巨大儿发病的相关性。方法：选取分娩巨大儿的正常孕妇（非GDM-MS）38例,分娩巨大儿的糖尿病孕妇20例（GDM-MS）、分娩正常体重儿正常孕妇（N）50例,分娩后即抽母血及脐血,分离血清,采用放免法测定。结果：三组母血IGF-1与新生儿体重呈正相关（P〈0.01）;非GDM-MS组及GDM-MS组脐血IGF-1高于正常组（P〈0.01）;3组母血IGFBP-3、IGF-1水平皆高于脐血（P〈0.01）。结论：非糖尿病巨大儿可通过测定母血IGF-1进行预测。     

注射胰岛素样生长因子-1、转化生长因子-β1治疗关节软骨缺损及预防骨关节炎的实验研究

目的探讨关节腔内注射胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)对修复关节软骨缺损及预防骨关节炎的作用。方法 35只雄性成年新西兰大白兔随机分成4组,空白对照组(A组)5只,实验组(B、C、D三组)每组10只,在膝关节滑车处钻孔造成关节软骨全层缺损,以右膝为实验侧,术后向关节腔内注射1mg/ml的IGF-1、TGF-β1、IGF-1+TGF-β1各0.1ml,每周1次;左膝为对照侧,与实验组同一时间注射等量0.9%氯化钠注射溶液。于术后4、8周分别取材进行大体观察,HE和SafraninO染色评分,同时运用免疫组织化学方法观察生长因子及其受体的表达情况。结果各组实验侧软骨缺损处组织的修复情况均优于对照侧,并且实验侧在各组软骨缺损周围的正常软骨未发生明显退变,而对照侧周围软骨在4、8周时发生了不同程度的退变,周围软骨中生长因子的表达实验侧与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05),而对照侧4、8周与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01);受体的表达在各组实验侧和对照侧与正常组比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论关节软骨缺损早期行IGF-1、TGF-β1关节腔内注射可有效促进关节软骨缺损的修复,并延缓周围软骨的退变,两者联合治疗有协同作用。     

藻酸钠凝胶三维培养条件下胰岛素样生长因子Ⅰ对兔关节软骨细胞表型的影响

目的:观察胰岛素样生长因子Ⅰ对藻酸盐凝胶三维培养条件下兔关节软骨细胞表型的影响。方法:实验于2004-10/2006-10在上海长海医院血管外科实验室完成。实验材料:4周龄雄性新西兰兔6只。实验方法:利用机械与酶消化的方法获得均一的兔关节软骨细胞,在单层培养条件下将软骨细胞增殖至P2代;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质,进行三维培养。细胞培养分组:①不含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养。②含50μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养组。③单层培养。实验评估:①三维培养细胞于培养的2,4,6周行冰冻切片苏木精-伊红染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学检测。②单层培养细胞每传代1次行细胞爬片苏木精-伊红染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学检测。结果:①细胞学外观形态变化:两组藻酸盐凝胶三维培养体系中的软骨细胞在6周的培养过程中始终保持了圆形的细胞外观。单层培养软骨细胞在第5代以前,均保持了星形及多角形的正常软骨细胞外观。②免疫组织化学显示结果:培养6周后,含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养软骨细胞特异性Ⅱ型胶原细胞仍呈强阳性染色,表达水平较转入三维体系前未见降低,培养细胞保持了良好的分化表型。单层培养软骨细胞在第5代以前,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色为阳性。第6代以后,大部分细胞呈梭形,向成纤维细胞转化,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色为阴性。结论:胰岛素样生长因子Ⅰ对藻酸盐三维培养条件下的关节软骨细胞表型具有维持作用。     

胰岛素样生长因子1对小鼠成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

背景:胰岛素样生长因子1是骨形成的调节因子,具有促进有丝分裂、促进成骨等作用.由骨细胞所产生的胰岛素样生长因子1在调节成骨细胞和破骨细胞介导的骨骼重建中起着重要的作用.目的:观察胰岛素样生长因子1作用后,小鼠成骨细胞的增殖和碱性磷酸酶的表达.方法:在体外培养的小鼠成骨细胞中分别加入25,50,100及200 μg/L的胰岛素样生长因子1,于培养的第1,2,3,4,5天用Cell Counting Kit-8比色法检测细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞的增殖周期和凋亡率;于培养的第3,6,9天应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶活性.结果与结论:胰岛素样生长因子1质量浓度在25～200 μg/L时,对小鼠成骨细胞的增殖率有明显的促进作用(P＜0.05),且呈明显的浓度依赖效应.当胰岛素样生长因子1质量浓度在200 μg/L时,能明显提高细胞S期所占的比例.说明胰岛素样生长因子1可加速细胞的增殖活动,以保证参与骨改建的成骨细胞数量而促进骨组织再生.同时,胰岛素样生长因子1在25～200 μg/L时,能显著提高细胞内碱性磷酸酶活性(P＜0.05),促进成骨细胞分化.     

胰岛素样生长因子1和成纤维细胞生长因子7与毛乳头细胞的生长

背景:毛乳头细胞凝集性生长与其诱导毛发生长有关.毛乳头细胞分泌的多种生长因子如胰岛素样生长因子1、成纤维细胞生长因子7可能对毛乳头细胞生长具有重要的影响.目的:观察正常人毛乳头细胞的增长与生长方式与胰岛素样生长因子1、成纤维细胞生长因子7的相关性.方法:采用二步酶消化法分离培养毛乳头细胞,免疫组化法和流式细胞仪分别检测两种生长因子在凝集性与非凝集性生长的毛乳头细胞中的表达,MTT法检测2,5～100 μg/L质量浓度胰岛素样生长因子1对人毛乳头细胞增殖的影响.结果与结论:胰岛素样生长因子1与成纤维细胞生长因子7均表达于细胞胞浆,但表达量随时间减弱,其中第3代明显比第9代毛乳头细胞中成纤维细胞生长因子7的表达强烈(P＜0.05).与对照组相比,不同质量浓度胰岛素样生长因子1均有明显促进毛乳头细胞增殖的作用(P＜0.05),其中以2.5 μg/L最为显著.提示毛乳头细胞的凝集性生长状态的改变可能与胰岛素样生长因子1、成纤维细胞生长因子7表达下降有关,胰岛素样生长因子1可明显刺激毛乳头细胞增殖.     

Hypoxia-inducible factor-1-dependent and -independent regulation of insulin-like growth factor-1-stimulated vascular endothelial growth factor secretion

Hypoxia-induced stress plays a central role in retinal vascular disease and cancer. Increased hypoxia-inducible factor-1 alpha (Hif-1 alpha) expression leads to HIF-1 formation and the production of vascular endothelial growth factor (VEGF). Cytokines, including insulin-like growth factor-1 (IGF-1), also stimulate VEGF secretion. In this study, we examined the relationship between IGF-1 signaling, HIF-1 alpha protein turnover and VEGF secretion in the ARPE-19 retinal pigment epithelial cell line. Northern analysis revealed that IGF-1 stimulated Hif-1 alpha message expression, whereas the hypoxia-mimetic CoCl2 did not. CoCl2 treatment increased Hif-1 alpha protein accumulation to a greater extent than IGF-1 treatment. However, IGF-1 stimulated a more significant increase in VEGF secretion. IGF-1-stimulated VEGF promoter activity was phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt/mTOR (mammalian target of rapamycin)-dependent, whereas VEGF secretion was only partially reduced by inhibition of PI3K/Akt/mTOR and HIF-1 activities. Analysis of VEGF promoter truncation mutants indicated that sensitivity to CoCl2 was hypoxia response element (HRE)-dependent with the region upstream of the HRE conferring IGF-1 sensitivity. In conclusion, IGF-1 regulates VEGF expression and secretion via HIF-1-dependent and -independent pathways.     

胰岛素样生长因子-1受体在糖尿病小鼠脑内的分布

目的:观察糖尿病小鼠脑内胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的分布及APP17肽对其分布的影响,为多肽对糖尿病脑病和AD的治疗提供理论依据。方法:雄性昆明小鼠体质量28～32g,鼠龄8周,共18只。随机分为3组,正常对照组(C组)、糖尿病对照组(DM组)和APP17肽治疗组(APP17peptide+DM组)。用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射APP17肽(β-淀粉样肽前体蛋白319～335)给予治疗。4周后取脑组织进行IGF-1R免疫组化染色。结果:糖尿病组IGF-1R阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位,而正常对照组及APP17肽治疗组仅在皮质、海马可见阳性反应细胞,DM组与C组、APP17peptide+DM组海马阳性反应细胞数分别为(22.3±1.7),(14.5±1.4),(15.2±1.1)个/10倍物镜。后两组与DM组比较差异有显著性意义(F=0.1,0.2,P<0.001)。C组与DM+APP17peptide组小鼠海马IGF-1R免疫组化红、绿、蓝像素值分别为86±8,101±6,130±5(F=3.3,0.6,0.5,P<0.01)和84±6,102±6,132±6(F=1.2,6.0,7.0,P<0.01),且着色淡。结论:糖尿病小鼠脑内多个区域存在较多的IGF-1R阳性神经元,而APP17肽能使IGF-1R阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

人胰岛素样生长因子-1基因转染对软骨细胞增殖的影响

背景各种生长因子对体外培养的软骨细胞均有不同程度的促增值作用,但半衰期较短,很难达到软骨缺陷治疗所要求的时效.目的探讨自行构建携带人胰岛素样生长因子腺病毒载体(Ad/CMV-hIGF-1)对软骨细胞增殖的影响.设计设立对照的实验研究.地点和对象实验在中山大学林百欣医学研究中心进行.体外培养人胚胎软骨细胞,采用对数增长期的第3代软骨细胞进行实验.干预自行构建携带hIGF-1基因的重组腺病毒并进行PCR,Western blot 鉴定.采用1,10,100及500不同感染复数单位(multiplicity of infection,MOI)的Ad/CMV-hIGF-1分别转染第3代软骨细胞,用磷酸盐(PBS)做阴性对照,hIGF-1生长因子(100μg/L)做阳性对照.主要观察指标采用四氮甲基唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同时间、不同组别软骨细胞吸光度.结果第2代重组腺病毒上清液中PCR鉴定含有hIGF-1基因,Western blot证实Ad/CMV-hIGF-1表达成熟的hIGF-1生长因子.不同病毒滴度转染对软骨细胞增殖的影响存在量效依赖关系,在1～100 MOI之间,软骨细胞吸光度随着病毒滴度增加逐渐升高,100 MOI软骨细胞吸光度约为PBS组的3倍;500 MOI Ad/CMV-hIGF-1时,软骨细胞吸光度较100 MOI下降,与1 MOI与10 MOI对软骨细胞增殖的影响近似.PBS组随着细胞体外培养时间延长,细胞增殖下降,hIGF-1生长因子、hIGF-1基因对软骨细胞增殖的影响存在时效关系,72 h达到峰值.结论成功构建Ad/CMV-hIGF-1;Ad/CMV-hIGF-1基因转染对软骨细胞增殖的影响存在量效、时效依赖关系.     

胰岛素样生长因子-1对动脉粥样硬化处血管平滑肌细胞的影响

血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移与增殖、分化与凋亡是动脉粥样硬化(AS)发生、发展的重要因素,此过程受年龄、高血压、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、糖尿病及糖耐量异常等因素影响。除此之外,循环中多种生物因子也可对VSMC活动产生影响,尤其是血小板源性生长因子和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)。本文将对IGF-1对VSMC的迁移与增殖、分化与凋亡的影响及相关机制进行综述。