旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对非小细胞肺癌A549增殖的影响

目的:观察旋毛虫(T.spiralis)肌幼虫(ML)排泄分泌蛋白(ESPs)对非小细胞肺癌A549增殖的影响。方法:将A549细胞进行分组,旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白为实验组,顺铂(DDP)为阳性对照组和不加处理的细胞为阴性对照组,通过MTT比色法检测ESPs和DDP对A549细胞增殖活性的影响。结果:MTT检测结果显示,随着ESPs浓度的增加及作用于A549细胞时间的延长,A549细胞的增殖活力逐渐减弱,ESPs对A549细胞具有明显的抑制作用,呈剂量—时间效应。结论:旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对A549细胞的增殖具有抑制作用。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对脓毒症诱发的小鼠心肌损伤有保护作用

目的 观察旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白（Ts-MES）对脓毒症诱发的小鼠心肌损伤的保护作用。方法 80只雄性BALB/c小鼠随机分为4组,各组20只,分别为假手术组（A组）、心肌损伤模型组（B组）、Ts-MES治疗组（C组）和地塞米松对照组（D组）。B、C、D组采取盲肠结扎穿孔术构建脓毒症诱发的心肌损伤小鼠模型,A组只行开腹探寻,不结扎和穿刺盲肠。术后40 min,A、 B组腹腔注射150 μL PBS,C组腹腔注射含20 μg Ts-MES的等量PBS,D组腹腔注射含地塞米松（0.3 mg/kg）的等量PBS。术后12 h,每组随机抽取6只小鼠进行超声心动图检测,另抽取8只用于观察72 h生存率。剩余的6只小鼠通过HE染色评价心肌病理变化,ELISA法检测血清中NTPro-BNP和cTnI水平,ELISA法和qRT-PCR法分别检测血清和心肌组织中TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-β的表达。结果 B组小鼠的心功能指标（LVEF、LVFS、E/A）及72 h生存率较A组显著下降（P<0.001）,心肌病理损伤评分及血清中NTPro-BNP和cTnI水平明显升高（P<0.01）;与B组相比,C、D两组小鼠的心功能指标和72 h生存率明显回升（P<0.05）,心肌病理损伤评分及血清中NTPro-BNP和cTnI水平明显降低（P<0.05）。小鼠血清和心肌组织中TNF-α和IL-6水平比较：B组小鼠血清和心肌组织中TNF-α和IL-6水平较A组显著升高（P<0.001）,C、D两组较B组显著下降（P<0.05）;IL-10和TGF-β水平：C组较B组显著升高（P<0.05）,D组较B组虽有增高但无统计学差异。结论 Ts-MES可抑制促炎细胞因子的表达并促进调节性细胞因子的表达,进而保护脓毒症诱发的小鼠心肌损伤。     

不同培养条件对旋毛虫肌幼虫产生排泄分泌抗原的影响

目的对比在常规1640培养基中和在模拟宿主生理环境的培养液的刺激下旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原产量及成分的变化,同时观察在感染初期ES抗原的不同组分在小鼠体内诱导产生主要抗体的时间,以寻找获得更高产量的肌幼虫ES抗原的制备方法。方法在虫数、培养液体积、培养时间、温度、ES抗原体积浓缩倍数等条件相同的情况下,按培养液中小鼠血清超滤液(简称血超)、还原型谷胱甘肽(简称谷胱甘肽)和胆汁粉的不同组合分组,分别培养肌幼虫并收集ES抗原,再以相同上样体积作SDS-PAGE电泳,Odyssey双色红外激光成像系统扫描凝胶并测定条带信号强度进行定量比较。用Western blotting对比观察不同组ES抗原的活性及成分变化。以旋毛虫人工感染小鼠不同时期收集的血清(感染后15、18、20、21、22、24、27、30、40、50 d)作为一抗进行Western blotting,观察ES抗原主要成分在小鼠体内产生抗体的先后顺序。结果S DS-PAGE电泳凝胶定量分析结果显示,血超+谷胱甘肽组、胆汁组和胆汁+血超组的抗原产量明显高于1640培养基组,其中胆汁+血超组的抗原产量最高。Western blotting结果显示,各组抗原均能被感染血清(感染后40 d)识别产生多个条带,其中血超+谷胱甘肽组的条带中相对分子质量约为87 000的条带荧光信号明显强于其他组;感染初期ES抗原不同组分在小鼠体内产生抗体的先后顺序为:45 000、53 000、41 000,其抗体可被检测到的最早时间分别为感染后15、21、24 d。结论培养液中添加胆汁粉可大大提高旋毛虫肌幼虫ES抗原产量,胆汁粉与血超共用后ES抗原的增产效果更佳;感染初期肌幼虫ES抗原的不同组分诱导小鼠产生抗体的时间不同。此研究将为改进ES抗原制备方法,寻找旋毛虫病早期诊断抗原提供实验依据。     

食盐腌制法对旋毛虫肌幼虫感染性的影响

目的观察食盐腌制法对旋毛虫肌幼虫感染性的影响。方法 20只昆明小鼠被随机分为对照组和实验组,实验组分为3组,共4组,每组5只。对照组每鼠经口感染300条收集的肌幼虫。实验组的3组分为阳性鼠肉食盐腌制24h组、阳性鼠肉食盐腌制48h组和阳性鼠肉食盐腌制72h组;将3组小鼠每鼠经口感染300条处理的肌幼虫,感染后28d处死小鼠,取膈肌压片镜检,并将全部肌肉人工消化后计数肌幼虫数。结果阳性鼠肉食盐腌制24h组、阳性鼠肉食盐腌制48h组压片法和人工消化法镜检,感染小鼠的肌幼虫检出率均为100%,2组的肌幼虫均数显著低于对照组(P<0.01);阳性鼠肉食盐腌制48h组的肌幼虫均数显著低于阳性鼠肉食盐腌制24h组,(P<0.01);阳性鼠肉食盐腌制72h组经2种方法镜检,感染小鼠均未检出肌幼虫。结论食盐对旋毛虫具有杀伤作用,囊内幼虫随着腌制时间的延长,感染性逐渐下降直至完全消失。     

旋毛虫肌幼虫活性鉴别的探讨

目的通过调节温度鉴别旋毛虫肌幼虫的活性。方法人工消化法收集纯净的肌幼虫,将肌幼虫分别置于3种温度下,观察肌幼虫的形态特点。结果 4℃时,活肌幼虫虫体蜷曲呈螺旋状,活动力弱;37℃时,活肌幼虫虫体呈屈曲样运动,运动活泼;将肌幼虫置100℃温度时,幼虫致死,幼虫虫体呈C字形或虫体内部结构崩解。结论旋毛虫肌幼虫的活虫在4℃时虫体蜷曲,37℃时虫体运动活泼;死亡虫体呈C字形或虫体内部结构崩解。     

热疗联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖和VEGF mRNA表达的影响

目的:观察热疗联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖作用以及VEGF mRNA表达的影响。方法:将NCI-H446细胞分组,Ⅰ热疗组(43℃加热90 min);Ⅱ紫杉醇组;Ⅲ热疗联合紫杉醇组;Ⅳ对照组(常规培养细胞)。分别在处理72 h后用MTT法检测4组细胞增殖情况;RT-PCR检测各组细胞中VEGF mRNA的表达量。结果:加热抑制了NCI-H446细胞的增殖;单独应用紫杉醇随着药物浓度的倍比增大,增殖抑制率逐渐增大;加热联合紫杉醇与对应浓度单独使用比较差异有统计学意义(P<0.05)。加热降低了NCI-H446细胞中VEGF mRNA的表达;加热联合紫杉醇组中NCI-H446细胞中VEGF mRNA的表达量明显减少,与对应浓度紫杉醇组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:43℃加热90 min联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖有抑制作用,并降低了VEGF mRNA的表达量。     

烹饪方式(烧烤)对旋毛虫肌幼虫感染性的影响

目的观察烹饪方式(烧烤)对旋毛虫肌幼虫感染性的影响。方法 25只雌性昆明小鼠被随机分为对照组和实验组,实验组分4组,共5组,每组5只。对照组每鼠经口感染250条肌幼虫。实验组①组(烧烤2min组):小鼠肉样置于炭火上烧烤2min;②组(烧烤4min组):小鼠肉样置于炭火上烧烤4min;③组(烧烤6min组):小鼠肉样置于炭火上烧烤6min;④组(烧烤8min组):小鼠肉样置于炭火上烧烤8min;经烧烤处理的4组鼠肉取出后,磁力搅拌法(消化2h)收集肌幼虫。然后分别人工灌胃小鼠,每鼠经口感染250条肌幼虫。所有小鼠感染后28d剖杀,取膈肌压片镜检,并用磁力搅拌法收集肌幼虫、计数。结果对照组、①组、②组、③组、④组的肌幼虫均数分别为:8 588.40、3 467.00、1 903.40、713.20、0;①组、②组、③组3个组的肌幼虫均数均显著低于对照组(P<0.01);③组的肌幼虫均数显著低于②组(P<0.01);②组的肌幼虫均数显著低于①组(P<0.01)。结论烧烤对旋毛虫肌幼虫的杀灭效果与烧烤时间、肉样大小、肉样厚薄、炭火温度等诸多因素均有直接关系;食用烧烤的肉类,存在感染旋毛虫病的可能性,且风险较大。     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物及其46—58KD蛋白的保护性免疫作用的比较研究

目的：观察旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴｓＬ１－ＥＳ）及其４６－５８ＫＤ蛋白的保护性免疫作用。并作比较研究。方法：通过无血甭的ＲＰＭＩ１６４０培养基培养旋毛虫肌肉期幼虫,获得ＴｓＬ１－ＥＳ;再以常规ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电洗脱技术相结合纯化ＴｓＬ１－ＥＳ中４６－５８ＫＤ蛋白,用ＴｓＬ１－ＥＳ及其４６－５８ＫＤ蛋白加福氏完全佐剂（ＦＣＡ）腹腔注射免疫昆明小鼠３次,每鼠再以旋毛虫３００条感染攻击,观察感染后第７天鼠肠道成虫数、第３０天肌肉幼虫数及血清抗体滴度。结果：４６－５８ＫＤ免疫组鼠的肠道成虫减虫接近（４８．３％、５０．２％及３４５８．６）;明显高于佐剂对照组（４．８％、８．２％及７４８．５）。结论：ＴｓＬ１－ＥＳ及其４６－５８ＫＤ蛋白均可产生明显的保护性免疫,且保护性免疫水平相近。     

旋毛虫肌幼虫培养细胞的扫描电镜观察

目的:观察旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)肌幼虫培养细胞的超微结构.方法:分离旋毛虫肌幼虫细胞,进行体外传代培养.利用简单重复序列区间扩增(ISSR-PCR)标准引物对第3代培养细胞及肌幼虫基因组进行扩增,利用扫描电镜观察贴壁细胞的形态特征.结果和结论:旋毛虫肌幼虫第3代培养细胞和旋毛虫肌幼虫DNA的ISSR-PCR扩增产物均在1 000 bp和750 bp处出现相同条带.扫描电镜下旋毛虫培养细胞的彤态有多种类型,可分为圆颗粒形、多角形、三角扇形、蜂窝型、似分裂型及褶皱型等.其中以圆颗粒形细胞占多数.     

热疗与紫杉醇联合应用对H446细胞生长和MMP-2 mRNA表达的影响

目的：探讨单纯热疗、单纯化疗以及热化疗联合应用对H446细胞生长及MMP-2mRNA表达的影响。方法：以不同温度（39℃、40℃、41℃、42℃、43℃和44℃）、不同剂量紫杉醇（30μg／L、60μg／L、120μg／L、240μg／L和480μg／L）及热化疗联合的方法处理H446细胞，同时设对照组（0μg／L紫杉醇，37℃），每组又分为3个热疗时间（30min、60min和90min），观察热疗、化疗和热化疗联合对H446细胞生长抑制率的影响；另取H446细胞，分为单纯热疗组（43℃，90min），单纯紫杉醇化疗组（60μg／L、120μg／L和240μg／L），43℃热疗90min联合紫杉醇组（60μg／L、120μg／L和240μg／L），对照组（0μg／L、37℃），采用RT—PCR检测各组细胞MMP-2mRNA的表达。结果与结论：单纯热疗与紫杉醇均可抑制H446细胞的生长，热疗不同程度地增强了紫杉醇对H446细胞的增殖抑制率，热化疗联合对H446细胞生长抑制的最优组合是43℃热疗90min联合120μg／L紫杉醇化疗，在此条件下，H446细胞MMP-2mRNA的表达明显降低，提示热化疗联合对H446细胞增殖的抑制作用可能是通过降低MMP-2mRNA的表达，从而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移而实现。     

和厚朴酚对人肺小细胞癌N446细胞增殖与凋亡的影响

目的在体外培养条件下,研究不同浓度的和厚朴酚对人肺小细胞癌N446细胞的影响,探讨和厚朴酚对增殖与凋亡的作用,评价和厚朴酚的抗肿瘤作用。方法应用MTI＇法检测不同浓度的和厚朴酚对N446细胞增殖的影响,用流式细胞仪测定和厚朴酚对N446细胞凋亡率的影响。结果各种浓度的和厚朴酚均可抑制N446细胞增殖,且抑制作用随浓度的增加和时间的延长呈明显增强趋势。3种不同浓度的和厚朴酚（5、10、20μg/ml）培养48h均可使N446细胞凋亡率升高,与对照组比较有统计学意义。结论和厚朴酚可抑制N446细胞的增殖,并诱导N446细胞的细胞凋亡。     

川陈皮素对肺癌的增殖抑制作用及其机制

目的 观察川陈皮素对肺癌的体内外抑瘤作用并初步探讨其机制.方法 应用MTT法检测不同浓度川陈皮素作用对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用.Western blot检测川陈皮素处理后A549细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.彗星电泳检测川陈皮素作用后A549细胞DNA损伤情况.通过C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型进行体内抗瘤实验,TUNEL法观察药物作用后的肿瘤细胞凋亡情况,并用免疫组化法检测瘤组织中Bax、Bcl-2和Caspase-9蛋白表达情况.结果 体外实验显示,川陈皮素作用对A549细胞有明显的增殖抑制作用,并且抑制效应随浓度增加而增强;川陈皮素作用A549细胞24 h后,随着作用剂量的加大,Bcl-2蛋白表达下调,而Bax蛋白则表达上调;对细胞DNA具有损伤作用,当达到一定作用剂量和作用时间时可以使A549细胞发生凋亡.体内抑瘤实验表明,川陈皮素高(300 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)浓度组对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率分别为43.70%、27.59%和20.14%,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);川陈皮素能使Lewis肺癌细胞发生凋亡;使Lewis肺癌组织内Bax和Caspase-9表达上调,Bcl-2表达下调.结论 川陈皮素在体内外均有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制可能与改变Bcl-2/Bax的比值,启动Caspase级联反应相关.     

花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用体外培养,细胞毒（MTT法）实验、荧光显微镜观察细胞形态变化、DNA琼脂糖凝胶电泳测定DNA ladder及流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化.结果 花边莲提取液能够抑制SPC-A-1细胞增殖,且呈剂量依赖性;观察到凋亡细胞典型的形态和生化特征,花边莲提取液作用48 h,SPC-A-1细胞均呈现凋亡细胞所特有的亚二倍体峰（sub-G1）,凋亡率随药物浓度增加而增高,并使细胞生长停滞在S期,从而阻滞细胞周期的进行.结论 花边莲提取液对SPC-A-1细胞具有增殖抑制作用,并可诱导SPC-A-1细胞凋亡,其机制可能与细胞周期的S期阻滞有关.     

人参瓜蒌莪术汤对小鼠lewis肺癌细胞增殖的影响

目的 探讨人参瓜萎莪术汤对lewis肺癌模型小鼠的治疗作用及机制.方法 建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,分为模型对照组、环磷酰胺对照组和人参瓜萎莪术汤高、低剂量组.在计算抑瘤率的基础上,运用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测瘤组织细胞核抗原(PcNA)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达.结果 人参瓜萎莪术汤对小鼠Lewis肺癌表现出明显的抑制作用,以中剂量组效果最为明显,抑瘤率可达47.88%;人参瓜萎莪术汤低、中、高剂量组均能明显降低瘤组织细胞PCNA的表达(P＜0.01),中、高剂量组的抑制作用显著强于低剂量组(P＜0.01);同时,人参瓜萎莪术汤低、中、高剂量组均能明显降低瘤组织细胞CyclinD1的表达(P＜0.05),中剂量组效果最为显著,并明显强于环磷酰胺阳性对照组(P＜0.01).结论 人参瓜萎莪术汤具有抑制小鼠Lewis肺癌生长的作用,其作用机制可能与降低肿瘤组织Cyclin D1的表达,抑制瘤细胞的增殖有关.     

感染旋毛虫小鼠外周血有核细胞及抗体水平的动态观察

目的 :探讨旋毛虫感染过程中血清抗体和有核细胞变化的规律。方法 :采用ELISA检测血清IgG抗体 ,血涂片瑞氏染色计数各类有核细胞百分数。结果 :旋毛虫感染小鼠血清IgG抗体水平逐渐升高 ,感染后42d达观察期间的最高值 ;嗜酸性粒细胞和中性粒细胞比例高于感染前 ,单核细胞和淋巴细胞比例则低于感染前。结论 :提示嗜酸性粒细胞是旋毛虫感染免疫中起主要作用的细胞 ,抗旋毛虫感染免疫是体液免疫和细胞免疫协同作用的     

迷迭香醇提取物对肺腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 研究迷迭香醇提取物 (RE) 对人肺腺癌细胞株 (AGZY) 增殖的影响及其机制.方法 采用改良MTT法、集落形成试验检测 RE 对 AGZY 生长增殖的影响;采用流式细胞术检测 RE 对 AGZY 细胞增殖周期的影响.结果 RE 为12.5、25、50 μg/mL和100μg/mL浓度作用5 d对AGZY的抑制率分别为47%、35%、86%和98%,半数抑制浓度IC50为17.8μg/mL;RE为25μg/mL作用AGZY 15 d,细胞集落形成明显减少,与溶媒对照比较差异有高度显著性;RE在50 μg/mL浓度作用细胞5 d,流式细胞仪检测到凋亡峰,100μg/mL有明显的凋亡峰出现.结论 RE体外明显抑制人肺腺癌细胞株(AGZY)的生长增殖,其财细胞增殖周期的阻滞可能是其抑制细胞增殖的机制之一.     

miR-21对肺癌干细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-21对肺癌干细胞增殖、侵袭能力,以及对化疗药物敏感性的影响。方法采用流式细胞边缘群分选技术从人肺癌细胞系A549中分离出肺癌干细胞。应用脂质体分别介导成熟miR-21的阻遏物(inhibitors)和模拟物(mimics)来抑制和增强肺癌干细胞miR-21的表达;实时荧光定量PCR检测肺癌干细胞中miR-21表达水平的变化;噻唑蓝(MTT)法检测转染干预前后肺癌干细胞的增殖情况和对化疗药物的敏感性;Transwell小室检测肺癌干细胞迁移能力。结果抑制组肺癌干细胞miR-21表达水平明显低于非转染组和阴性对照组,而增强组肺癌干细胞miR-21表达水平则显著高于非转染组和阴性对照组(P<0.05);抑制组肺癌干细胞转染后各时间点增殖率较非转染组和阴性对照组明显降低,而增强组肺癌干细胞转染后各时间点增殖率较非转染组和阴性对照组显著升高(P<0.05);Transwell实验显示抑制组转染后48 h穿过人工基底膜的细胞数为(29.55±5.48)个,明显少于非转染组和阴性对照组,而增强组转染后48 h穿过人工基底膜的细胞数为(74.47±8.63)个,明显多于非转染组和阴性对照组(P<0.05);顺铂(DDP)和吉西他滨(GEM)对抑制组转染后48 h肺癌干细胞的IC₅₀值明显低于非转染组和阴性对照组(P<0.05);DDP和GEM对增强组转染后48 h肺癌干细胞的IC₅₀值则明显高于非转染组和阴性对照组(P<0.05)。结论下调miR-21的表达可以抑制肺癌干细胞的增殖和侵袭能力,增强其对化疗药物的敏感性。     

PI3K信号通路通过SKP2、p27调控肺癌细胞H446,A549增殖

目的 探讨PI3K信号通路调控肺癌细胞增殖机制.方法 培养肺癌细胞系H446和A549,LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;Western blot法检测PI3K信号下游蛋白SKP2、p27表达变化;FCM分析细胞周期变化.结果 与对照组相比,处理组细胞生长速率受到抑制;Western blot结果显示H446、A549细胞中的SKP2蛋白表达水平降低,而p27蛋白表达水平升高;FCM结果表明抑制剂处理后肿瘤细胞阻滞于G1期.结论 结果提示肺癌细胞中PI3K信号通路参与SKP2蛋白的表达调控,从而影响p27蛋白的降解,促进细胞周期,加速细胞增殖.     

大麻受体激动剂对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响

目的研究大麻受体激动剂(delta9-tetrahydrocannabinol,THC)对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响。方法 MTT法测定THC对A549细胞增殖的影响;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察细胞的形态学变化;Western blot法分析大麻受体CB1、CB2的蛋白表达;DNA梯度电泳检测A549细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化。结果 THC预处理后,MTT检测表明THC对A549细胞增殖有明显抑制作用,随着药物浓度增大,抑制作用更加明显;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察显示:肺癌A549细胞有典型的细胞凋亡形态;Western blot检测显示:A549细胞大麻受体CB1、CB2水平较正常气道上皮细胞株16HBE升高;DNA梯度电泳法及流式细胞仪检测显示:THC能抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,并具有剂量依赖性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肺癌细胞的增殖,并诱导肺癌细胞凋亡,此效应可能与大麻受体CB1、CB2作用有关。