GeneXpert MTB/RIF在结核病诊断及利福平耐药检测中的应用分析

目的探讨分析GeneXpert MTB/RIF在结核病诊断及利福平耐药检测中的应用。方法选取2017年9月～2019年3月我院收治的肺结核患者123例,采集所有患者的痰标本,分别进行GeneXpert MTB/RIF系统检测、结核分枝杆菌分离培养及涂片镜检检测,同时在使用GeneXpert MTB/RIF系统及结核分枝杆菌比例法药敏实验进行利福平耐药检测。观察比较MTB/RIF系统与涂片镜检间的检测阳性率差异;比较在利福平耐药检测中MTB/RIF系统与比例法药敏实验检测的差异。结果 GeneXpert MTB/RIF系统在结核分枝杆菌的检测阳性率显著高于涂片镜检,差异有统计学意义(χ~2=6.492,P=0.019),略高于结核分枝杆菌分离培养,但差异无统计学意义(χ~2=1.087,P=0.274)。Gene Xpert MTB/RIF系统检测结果出现利福平耐药的患者13例,比例法药敏实验检测结果出现利福平耐药的患者为14例,两者差异无统计学意义(χ~2=1.198,P 0.05)。结论使用GeneXpert MTB/RIF系统能够更加快速、简便的对结核病进行临床诊断,同时有效的检测利福平的耐药情况,值得应用。     

Gene Xpert结核分枝杆菌/利福平检测技术在肺结核诊断中的应用价值

<正>临床上不明原因发热(FUO)患者病因诊断主要是感染性疾病,其中细菌/真菌感染占比最高,结核病居第2位[1]。结核患者痰中排菌称为传染性肺结核,是结核病的主要传染源,而抗酸染色涂片镜检在发现结核病传染源,选择治疗方案和评价防治效果等方面,起到了至关重要的作用。但其阳性率低,容易漏诊,无法满足临床需求。近年来,由美国Cepheid公司研发生产的Xpert结核分枝杆菌     

结核分枝杆菌对利福平耐药的分子机制

本世纪中叶有效化疗时代的开始,以及生活状况的改善,使结核病受到很大程度的控制,尤其是工业发达国家结核病发病率迅速下降.但结核病仍是一个世界性问题,每年有300万人因之死亡.1985年以来,艾滋病的流行和结核感染者的涌入使美国等欧美发达国家结核病发病率呈回升趋势.1992年美国发生了几起多重耐药结核病的爆发流行,不仅耐药菌传播快,而且病情发展迅速,从诊断到死亡平均4～6周,尤其在AIDS患者中病死率高达72%～89%,已被视为AIDS以外的第二种流行病.由于常规药敏试验需1～2月时间,根据经验治疗,药物治疗无效的病人仍有传染性,有些病人在药敏结果出来前已死亡,耐药菌不仅在AIDS病人中播散,而且传染给医护人员和其它与AIDS患者接触者.对一线抗结核药物耐药的大多数病人,采用目前标准的结核化疗方案治疗无效.控制这种流行病,是对我们结核防治工作者的一个新的严峻的考验.采用分子遗传学方法进一步了解抗结核药物作用的分子机制,阐明耐药的分子基础,有助于建立快速检测耐药结核菌的诊断试验,开发新的抗结核药物,开展更有效的化疗.     

结核分枝杆菌利福平敏感性测定在耐多药结核病诊断中的价值

目的 评价结核分枝杆菌利福平敏感性测定在耐多药结核病(MDR-TB)诊断中的价值.方法 对1994～2003年广州市老城区结核专科门诊肺结核病人药物敏感性测定资料和2000年全国结核病流行病学抽样调查结核分枝杆菌耐药情况调查资料进行分析,应用诊断性试验指标评价利福平敏感性测定作为MDR-TB诊断依据的科学性.结果 若以至少同时耐利福平与异烟肼作为诊断MDR-TB的参照标准,以利福平敏感性测定作为MDR-TB诊断方法的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为:100%、98.7%、98.8%、88.7%、100%、77.1、0;若以同时耐H、R或同时耐3种及以上主要抗结核药物作为诊断MDR-TB的参照标准,其敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为:97.0%、98.8%、98.6%、89.7%、99.7%、81.9、0.03.结论 利福平敏感性测定是一种诊断水平高、成本-效益好的MDR-TB诊断方法.     

结核分枝杆菌对异烟肼和利福平耐药的研究进展

结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis)引起的世界性传染病,尽管药物等抗结核的有效治疗已经有50多年.结核病仍然是单一致病菌感染导致死亡率最高的感染性疾病.     

结核生物蛋白芯片在结核病早期诊断中的应用

目的通过分析结核分枝杆菌LAM、16KD、38KD抗原的IgG抗体说明其检出率和早期诊断意义。方法对2013年1月至2013年5月来白城市传染病医院门诊和住院的就诊229例患者分别应用蛋白芯片法进行定性检测,随机抽取其中96例阳性者进行痰涂片抗酸染色法定性检测。结果在229例血清检测标本中,结核抗体阴性标本者114例,结核抗体阳性者115例,检出的阳性率为50.22%。随机选择96例蛋白芯片法检测阳性者做痰涂片抗酸染色法定性检测,痰涂片阳性者仅为17例,阳性率仅为17.71%。结论作者认为采用生物蛋白芯片技术联合检测3种结核抗体,可提高其诊断结核病的敏感性和特异性,并作为结核病的血清学早期诊断方法之一。     

研究GeneXpert检测在结核分支杆菌及其利福平耐药性检测中的应用

目的分析Gene Xpert检测在结核分枝杆菌及其利福平耐药性检测中的应用效果。方法选取2017年7月～2019年6月本院接收的涂片阳性肺结核患者80例痰液标本,利用Gene Xpert检测痰液标本中的结核分枝杆菌和利福平耐药性,并对比Gene Xpert检测与传统罗氏培养结果。结果液标本80份检测标本中,74份符合,符合率为92.50%。基因芯片实验未检出标本与传统培养的快速生长菌株相吻合,具有较高的准确率;74株结核分枝杆菌分离株,通过传统罗氏培养与Gene Xpert检测结核分枝杆菌对利福平耐药性,Gene Xpert检测5例耐药,传统罗氏培养检测4例,符合率为80.00%。结论 Gene Xpert检测在结核分枝杆菌及其利福平耐药性检测中应用效果明显,其不仅可以快速、准确检出疾病,同时也为临床结核疾病的诊治提供了重要数据参考,值得推广。     

结核分枝杆菌DNA及RNA检测在结核病中的诊断价值

目的 分析结核分枝杆菌DNA和RNA联合检测在结核病诊断中的意义。方法 对1168例用实时荧光定量PCR法检测结核菌DNA为阳性的标本继续用恒温扩增技术检测结核菌RNA。结果 1168例研究对象中,DNA检测阳性601例,阳性率51.46%;其中男性377例,阳性率49.22%,女性224例,阳性率55.72%;RNA检测阳性297例,阳性率25.43%;其中男性188例,阳性率29.06%,女性109例,阳性率20.92%。不同性别的DNA和RNA检测阳性率差异有统计学意义(χ²=4.466、10.07,P<0.05)。各类标本中痰液DNA和RNA及DNA+RNA检测阳性最高,分别为335例、170例、142例,阳性率分别为55.74%、57.24%、60.43%,脑脊液DNA和RNA及DNA+RNA检测阳性最低。不同年龄组中,21～30岁组DNA检测阳性最高,为133例,阳性率22.13%。41～50岁组RNA及DNA+RNA检测阳性最高,分别为67例、62例,阳性率分别为22.56%、25.96%;10≤岁组DNA和RNA及DNA+RNA检测阳性最低。...     

用Xpert MTB/RIF技术快速诊断患者结核分枝杆菌感染及其对利福平耐药的临床价值

目的：探究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）/利福平耐药的实时荧光定量核酸扩增检测（Xpert MTB/RIF）技术对MTB快速诊断与其对利福平耐药的临床价值。方法：选取2020年1月—2021年4月开封市结核病防治所收治的90例疑似肺结核患者的病例资料,统计其患者接受痰液细菌培养、Xpert MTB/RIF检测和药敏试验结果,参照痰液细菌培养结果为金标准,分析Xpert MTB/RIF法诊断MTB感染及其对利福平耐药的敏感度、特异度、准确率与Kappa一致性。结果：90例疑似肺结核患者的痰液细菌培养检测发现,75例患者（占83.33%）被确诊为肺结核,15例患者（占16.67%）为非肺结核;用Xpert MTB/RIF法诊断MTB感染的灵敏度为96.00%、特异度为93.33%、准确率为95.56%(Kappa=0.848);75例肺结核患者痰液细菌培养呈阳性的标本中分离出耐药菌株75株,药敏试验结果显示29株（占38.67%）对利福平耐药,46株（占61.33%）对利福平敏感;用Xpert MTB/RIF法检测利福平耐药的灵敏度为89.65...     

Xpert Mtb/RIF技术在结核病诊断及耐药检测中的应用

目的：评价Xpert Mtb/RIF检测技术在检测临床标本诊断结核病及利福平耐药检测中的应用价值。方法对1128例初诊肺结核可疑患者痰标本进行涂片镜检,改良罗氏培养和Xpert Mtb/RIF检测,评价各种方法结核杆菌检测灵敏度、传统药敏方法和Xpert Mtb/RIF检测利福平耐药性的对比分析。结果临床诊断结果作为最终标准,涂片镜检的阳性率为24.0%、改良罗氏培养方法的阳性率为42.6%、Xpert Mtb/RIF技术的阳性率为49.4%;以传统药敏方法为标准, Xpert Mtb/RIF检测利福平耐药性的灵敏度为89.5%、特异性为97.6%。结论 Xpert Mtb/RIF技术检测结核杆菌有较高的灵敏度,同时还可以检测结核杆菌对利福平的药敏结果,方法简单、操作便捷、安全,在基层结核病防治机构具有较高的应用价值。     

线性探针技术在耐药结核病诊断中的应用

目的应用线性探针技术(LiPA)检测结核病的耐药情况。方法连续纳入安徽省胸科医院 2018年 9—12月结核病疑似病人 479例,同时用 LiPA和传统 BACTECTM MGIT 960快速液体法(以下简称为 “MGIT 960法”)进行结核分枝杆菌复合群(MTBC)检测和利福平、异烟肼药敏试验,评价其检测效能。结果以 MGIT 960法为标准, LiPA检出 MTBC的灵敏度、特异度分别为 96.82%和 97.45%,两者差异无统计学意义(χ2＝0.64,P＝0.424);检测利福平耐药的灵敏度、特异度为 95.18%和 96.34%,检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度为 81.61%和 95.72％,两者均差异无统计学意义(利福平: χ2＝0.36,P＝0.549;异烟肼: χ2＝2.04,P＝0.152)。此外, LiPA检测利福平耐药株突变率最高的是 S531L位点,占 62.791%(54/86),异烟肼耐药株突变率最高的是单独 KatG基因突变,占 84.810%(67/79)。结论以 MGIT 960法为标准,线性探针技术诊断耐药结核病具有灵敏度高、特异度强、快速准确的特点,能为耐药结核病的早期发现和治疗提供诊断依据。     

血清结核分枝杆菌TB-SA抗体在结核病诊断中的临床价值

目的 研究血清结核分枝杆菌(TB-SA)抗体检测在结核病诊断中的临床价值.方法 对472例结核病、非结核呼吸系疾患患者、健康志愿者同时进行结核分枝杆菌涂片、培养、PPD皮试、TB-SA抗体检测.结果 TB-SA抗体检测菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺外结核的敏感性分别为77.6%、72.2%、79.7%,诊断结核病的敏感性为76.3%,特异性为84.2%.TB-SA抗体阳性检出率对初、复治结核病患者无显著性差异. TB-SA抗体检测A405与PPD不成线性关系,不受结核病患者卡介苗反应的影响.结论 TB-SA抗体检测诊断结核病有较好的敏感性和特异性,对菌阴肺结核、肺外结核特别有价值.     

结核分枝杆菌效应T细胞斑点试验在临床快速诊断结核病中的应用研究

目的探讨结核分枝杆菌效应T细胞斑点试验(ELISPOT-TB)在临床快速诊断结核病中的应用价值。方法利用ELISPOT-TB方法检测外周血中结核分枝杆菌效应T细胞的频率,同时与涂片抗酸染色及BACT/ALERT3D结核菌培养做比对。结果 200例结核病患者中,165例ELISPOT-TB阳性,提示方法敏感度为82.5%(165/200),显著高于其他方法。70例非结核其他呼吸道疾病组中有10例阳性,80名健康对照组中有10例阳性,方法的特异度为86.7%(130/150)。结论 ELISPOT-TB方法的敏感度和特异度均很高,在结核病的快速诊断中,尤其是菌阴患者的诊断中,有重要的临床价值。     

Xpert MTB/RIF试剂盒检测痰标本结核分枝杆菌和利福平耐药的应用评价

目的评价Xpert MTB/RIF试剂盒检测结核分枝杆菌及利福平耐药情况效果。结论采用Xpert MTB/RIF试剂盒检测108份痰标本中的结核分枝杆菌复合群DNA和利福平耐药相关的rpo B基因突变,并与痰涂片抗酸染色、罗氏培养结果、菌种鉴定及比例法药敏结果进行对比研究。结论 Xpert检测与痰涂片检测的符合率为83.3%(79/108);Xper检测与罗氏培养符合率为86.1%(93/108);Xper检测与罗氏培养+菌种鉴定符合率为100%(43/43);Xpert MTB/RIF检测与比例法药敏利福平耐药结果符合率为100%(41/41)。结论 Xpert MTB/RIF试剂盒检测MTB及利福平耐药具有快速,高特异性,高敏感性的优点。     

广东地区结核分枝杆菌利福平耐药与基因rpoB突变关系分析

目的 为了解广东地区结核分枝杆菌rpoB基因突变特点,并探讨其与利福平耐药之间的关系.方法 本研究根据结核病诊断细菌学检验规程从临床结核病疑似患者痰液中分离鉴定结核分枝杆菌,采用绝对浓度法对其进行药敏试验,并用PCR-DNA直接测序法对结核分枝杆菌rpoB基因进行序列分析.结果 结果分离得到利福平耐药株27株,其中低浓度耐药8株,高浓度耐药19株.经测序分析,所有利福平敏感株rpoB基因均未发生氨基酸突变 利福平耐药株rpoB基因的突变率为81.5%（22/27）,突变均发生在利福平耐药决定区内,突变位点为526、531及533,以Ser531Leu突变最为常见（55.6%,15/27）,并且高浓度耐药株的突变率明显高于低浓度耐药株.结论 结果表明广东省结核分枝杆菌rpoB基因突变是结核分枝杆菌利福平耐药性产生的主要分子机制,突变位点同国内外研究基本一致,但各位点突变形式所占比例有自身特点.     

新疆部分地区结核分枝杆菌rpoB基因突变与对利福平耐药相关性检测

目的：了解新疆部分地区结核分枝杆菌rpoB基因的突变与对利福平耐药呈水平的关系。方法：采用基因芯片对耐利福平菌株rpoB基因进行检测。结果：36株结核分枝杆菌利福平初始耐药分离株,对利福平高度耐药25株,低度耐药11株。基因芯片检测显示33株存在突变,低度耐药株突变主要在526位,少数在531位;高度耐药株突变主要在526位、531位,其中3株未见突变,3株为526和516位联合突变。结论：本地区结核分枝杆菌对RFP的低度耐药表现为rpoB基因的点突变,而高度耐药则表现为rpoB基因的526位、531位点突变及联合突变形式。     

新疆部分地区结核分枝杆菌rpoB基因突变与对利福平耐药相关性检测

目的：了解新疆部分地区结核分枝杆菌对利福平耐药株rpoB基因的突变情况。方法：通过基因测序对新疆部分地区结核分枝杆菌耐利福平菌株rpoB基因进行检测。结果：从380份痰样本中获得62株结核分枝杆菌初始耐药分离株,利福平耐药株14株,经测序,8株发生在531位的丝氨酸（Ser）转变为亮氨酸（Leu）,编码核苷酸序列由TCG到TTG改变;2株是在516位的天冬氨酸（Asp）转变为甘氨酸（Gly）,编码核苷酸序列由GAC到GGC改变;1株是在526位的组氨酸（His）转变为天冬氨酸（Asp）,编码核苷酸序列由CAC到GAC改变;其余未见变化。结论：本地区结核分枝杆菌对RFP的耐药与rpoB基因的点突变有关,主要为531、526、516位氨基酸的改变,其中531位是最常见的突变位点。     

结核PCR定量测定在结核病诊断中的应用

目的:评价荧光定量PCR技术在结核病诊断中的应用价值。方法:采用荧光定量PCR(FQ-PCR)、涂片法和培养法同时检测580例结核患者、疑似结核患者的痰、胸腹水、脑脊液标本,对检测结果进行比较。结果:荧光定量PCR检测阳性率要高于涂片法和培养法的阳性率,统计分析有显著性(P<0.01)。结论:应用荧光定量PCR方法检测结核杆菌,具有特异、灵敏、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的常规方法。     

基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的研究

目的探讨基因芯片技术在检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的应用。方法收集21例临床诊断结核病患者体液标本经培养得到的分离菌液,进行基因芯片检测,包括利福平的rpoB基因位点和异烟肼的KatG和inhA基因位点,从而判断其耐药性。结果 21例样本中,利福平rpoB基因有10例突变,总突变率为47.6%,其中9例为531位点的（C-T）突变,1例526位点的（C-G）突变。与药敏试验的符合率为81.0%。异烟肼基因突变有6例,总突变率为28.6%,其中4例为KatG 315（G-C）突变,2例为inhA-15（C-T）突变。与药敏试验的符合率为90.5%。利福平的11例耐药株中,基因芯片检测8例为突变型,突变率为72.7%,在利福平的10例敏感株中,基因芯片检测2例为突变型,突变率为20.0%。在异烟肼的6例耐药株中,基因芯片检测5例为突变型,突变率为83.3%,在异烟肼的15例敏感株中,基因芯片检测1例为突变型,突变率为6.7%。结论基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性具有较高的特异性和敏感性,快速准确,可以应用于结核分枝杆菌耐药性的检测。