大鼠脑缺血再灌注后脑组织C—fos原癌基因表达水平的变化

本文采用核酸分子斑点杂交技术制作脑缺血模型，观察脑缺血１０分钟及再灌注后不同时间脑组织Ｃ－ｇｏｓ原癌基因的变化。结果发现：与对照组比较，脑缺血１０分钟，Ｃ－ｆｏｓ ｍＲ－ＮＡ即增加。缺血后再灌注４５分钟Ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ达到峰值，１５０分钟降至对照组水平，提示脑缺血后再灌注可诱导脑组织Ｃ－ｆｏｓ原部基因－过性增高。     

脑缺血再灌注后脑组织c-fos基因表达与丹参的影响

采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，用地高辛精标记ｃ－ｆｏｓ探针进行原位杂交。结果示缺血再灌注鼠栓塞侧皮层及海马ｃ－ｆｏｓ基因表达显著增多，图像分析灰阶值为１１８．６±５．１，对侧为１５９．６±３．１（Ｐ＜０．００１）。丹参组栓塞侧皮层及海马ｃ－ｆｏｓ基因表达亦增多，灰阶为１３５．００±２．０５，对侧为１６７．００±２．００（Ｐ＜０．００１）。丹参组与缺血再灌注组比较，栓塞侧丹参组ｃ－ｆｏｓ基因表达显著低于缺血再灌组（Ｐ＜０．０５），而两组栓塞对侧比较无显著差异。本实验表明，脑缺血再灌注后脑组织ｃ－ｆｏｓ基因表达显著增多，丹参能部分抑制缺血后ｃ－ｆｏｓ基因的表达，这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一。     

脑缺血选择性海马CA1区神经元损害的实验研究

采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｉ－Ｂｒｉｅｒｌｅｙ４血管阻塞脑缺血模型观察了大鼠全脑缺血２０ｍｉｎ再灌流８ｈ，ｃ－ｆｏｓ基因表达及再灌流７ｄ海马ＣＡ１区迟发性神经元损害。在缺血再灌流早期（８ｈ）海马ＣＡ１区极少ｃ－ｆｏｓ表达，而齿状回、海马ＣＡ３区、杏仁核大量ｃ－ｆｏｓ表达。缺血再灌流晚期（７ｄ）镀银染色显示海马ＣＡ１区神经元及其突触终末带呈黑色溃变相，而齿状回、海马ＣＡ３区、杏仁核呈金黄色正常相。相邻切片ＨＥ染色示缺血组海马ＣＡ１区核完整的锥体细胞数（５±２．６个／２００μｍ）与对照组（４０±２．９个／μｍ）比较差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。脑缺血诱导的ｃ－ｆｏｓ基因表达对于缺血易损海马ＣＡ１区迟发性神经元坏死可能起直接的调控作用。     

谷氨酸对急性脑缺血再灌注大鼠皮层乙酰胆碱活性影响的在体动态电化学研究

为了研究脑缺血时兴奋性氨基酸与胆碱能神经的关系，采用双侧颈总动脉夹闭（ＣＣＡＯ）的脑缺血动物模型，用乙酰胆碱离子选择性微电极（ＡＣｈ－ＩＳＭｓ）检测皮层ＡＣｈ释放量，观察脑缺血再灌注时谷氨酸对大鼠皮层ＡＣｈ释放量的影响。结果表明：１０－１ｍｏｌ／ＬＧｌｕ对ＡＣｈ－ＩＳＭｓ无干扰作用，在生理状态下不能显著地促进皮层ＡＣｈ的释放，但可使脑缺血３ｍｉｎ时皮层ＡＣｈ释放量较未加Ｇｌｕ组增加５８．１％（Ｐ＜０．０１），再灌注后皮层ＡＣｈ活性恢复减慢。结果提示：Ｇｌｕ协同ＡＣｈ释放的效应在脑缺血时明显放大，推测Ｇｌｕ和ＡＣｈ可能在缺血性脑损伤中有放大的协同作用。     

脑局部缺血后C—fos基因表达的意义及机理研究

目的：探讨脑局部缺血后神经元损伤的分子机制。方法：经颞骨开窗结扎大鼠大脑中动脉，制成脑局部缺血模型，采用地高辛标记Ｃ－ｆｏｓ探针原位杂交法，观察脑缺血后大脑皮层及海马等区域Ｃ－ｆｏｓ基因的表达状况，用Ｃ－ｆｏｓ阳性细胞密度作定量研究指标。结果：脑缺血组、氯胺酮组和对照组，在大脑皮层及海马区域Ｃ－ｆｏｓ阳性细胞分别呈高密度、低密度和散在分布，三组间相差显著（Ｐ＜０．０１）。在脑的其余部位，包括丘脑、脑干、小脑等区域，三组Ｃ－ｆｏｓ阳性细胞均呈散在分布，无组间差异。结论：脑局部缺血可诱发大脑皮层及海马Ｃ－ｆｏｓ基因表达，Ｃ－ｆｏｓ基因表达可能是缺血致神经元损伤的分子机制之一；氯胺酮对脑缺血后Ｃ－ｆｏｓ基因表达有部分抑制作用；ＮＭＤＡ受体激活可能参与了缺血后Ｃ－ｆｏｓ基因表达过程     

急性脑缺血再灌流后脑组织钙依赖性中性蛋白酶的变化

采用大鼠全脑缺血模型，观测脑缺血再灌流脑组织钙依赖性中性蛋白酶（ｃａｌｃｉｕｍ－ａｃｔｉｚａｔｅｄｍｅｕｔｕａｌｐｒｏｔｅｉｍａｓｅ，ｃａｌｐａｉｎ）活性的变化及海马ＣＡ１区神经元损害改变。结果显示脑缺血再灌流脑组织ｃａｌｐａｉｎⅠ和ｃａｌｐａｉｎⅡ活性都明显升高（Ｐ＜０．０１），ＣＡ１区神经元密度相应下降，提示ｃａｌｐａｉｎｓ在脑缺血损害过程中可能起一定作用。     

脑缺血抗细胞间粘附分子—1抗体作用的实验研究

目的探讨抗细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）抗体保护神经元缺血性损伤的作用机制。方法分离培养鼠脑毛细血管内皮细胞（ＣＣＥＣ）和多形核白细胞（ＰＭＮ），利用微管吸吮技术，观察ＰＭＮ与ＣＣＥＣ间粘附力学特性的变化。结果脑缺血－再灌注后各时间点，ＰＭＮ与ＣＣＥＣ的粘附力和粘附应力均明显高于正常对照组和伪手术组（Ｐ＜０．０１）；加抗ＩＣＡＭ－１抗体后，细胞粘附力和粘附应力均明显下降（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论脑缺血－再灌注损伤后抗ＩＣＡＭ－１抗体使ＰＭＮ与ＣＣＥＣ粘附力减小，粘附应力下降；抗粘附分子抗体将可能成为治疗缺血性脑血管疾病的一条新的有效途径     

NO代谢变化对缺血性脑组织内皮素产生的影响

在兔大脑中动脉阻断（ＭＣＡｏ）型局灶脑缺血前后分别应用外源性一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）抑制剂Ｌ－ＮＮＡ和ＮＯ合成底物Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ，观察缺血４小时后脑组织内皮素（ＥＴ）含量的变化。结果发现Ｌ－ＮＮＡ组较缺血对照组脑组织ＥＴ含量明显增多（１２６２．９±３８７．６ｖｓ７８９．３±１８８．４ｐｇ／ｍｇ·ｐｒｏ，Ｐ值＜０．０１），脑水肿显著；而Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ用药组脑组织ＥＴ含量较缺血对照组明显减少（Ｐ值＜０．０５），且脑水肿减轻。本研究提示ＮＯ能抑制缺血脑组织ＥＴ的产生。ＮＯ对脑缺血影响可能与此途径有关。     

脑缺血—再灌注损伤中兴奋性氨基酸的变化

目的：为观察了解谷氨酸（Ｇｌｕ）和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）在发生脑缺血－再灌注损伤时的变化规律。方法：采用Ｌｏｎｇａ＇ｓ方法建立鼠大脑中动脉脑缺血－再灌注模型，观察了正常对照组，单纯缺血２小时，单纯缺血３小时，缺血２小时－再灌注１小时，缺血３小时－再灌注１小时，Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ的变化及二者之间的关系。结果：发生再灌注损伤时，Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ的比例与正常对照组有显著差异（Ｐ＜０．０１）。结论：在缺血－再灌注损伤发生过程中，脑组织内不仅是Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ含量发生变化，而且二者比例严重失调，以上两个方面在脑缺血－再灌注损伤中可能起一定作用。     

人工合成E-选择素治疗鼠局灶脑缺血再灌注损伤的探讨

目的 探讨新的药物有效地治疗急性期脑缺血再灌注损伤。方法 用人工合成Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ Ｌｅｃｔｉｎ Ｄｏｍａｉｎ（以下Ｅ－选择素）Ｎ－末端２３－３０氨基酸残基合成的寡肽（Ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅ）２ｍｇ／ｋｇ或１０ｍｇ／ｋｇ溶解于生理盐水中,静脉注入自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）永久性大脑中动脉／颈总动脉硬化（ＭＣＡ／ＣＣＡ）闭塞或ＭＣＡ／ＣＣＡ闭塞２小时后ＣＣＡ再灌注的模型中。２４小时后,脑梗死体积用计算机扫描计算。结果 在永久性ＭＣＡ／ＣＣＡ闭塞组中脑梗死体积没有差别,在ＭＣＡ／ＣＣＡ闭塞后ＣＣＡ再灌注组中脑梗死体积显著缩小（Ｐ〈０．０１）。结论 Ｅ－选择素能够有效地减少大鼠脑缺血再灌注损伤。     

人工合成E-选择素治疗大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的探讨

目的：探讨新的药物治疗脑缺血再灌注损伤。方法：用人工合成 Ｅ－选择素 ２ｍｇ·ｋｇ－１或 １０ ｍｇ·ｋｇ－１溶解于生理盐水中,静脉注入自发性高血压大鼠永久左侧大脑中动脉／颈总动脉（ＭＣＡ／ＣＣＡ）闭塞或ＭＣＡ／ＣＣＡ闭塞２ｈ后ＣＣＡ再灌注模型中。２４ｈ后,脑梗死体积用计算机扫描计算。结果：在永久性ＭＣＡ／ＣＣＡ闭死组中脑梗死体积没有差别,在ＭＣＡ／ＣＣＡ闭死后ＣＣＡ再灌注组中脑梗死体积有意义地缩小（Ｐ＜０．０１）。结论：Ｅ－选择素能够有效地减少大鼠脑缺血再灌注损伤。     

脑缺血和再灌注后脑组织内皮素－1基因表达及丹参的影响

为研究脑缺血和再灌注后脑组织内皮素－１（ＥＴ－１）基因表达的变化以及丹参对它的影响，采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血和再灌注模型，并用地高辛精标记ＥＴ－１基因进行原位杂交。结果显示，缺血组（缺血２４ｈ）和再灌注组（缺血１．５ｈ再灌注２４ｈ）缺血侧皮层及尾壳核ＥＴ－１基因表达均显著高于健侧相应的脑区（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），经丹参治疗后缺血或再灌注鼠缺血侧皮层及尾壳核ＥＴ－１基因表达均显著低于生理盐水（ＮＳ）对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），但仍比健侧脑区显著增高。本实验表明，缺血和再灌注均可诱导脑组织ＥＴ－１基因的异常表达，进一步加重缺血和再灌注引起的脑损伤，丹参对缺血诱导的ＥＴ－１基因表达有部分抑制作用，这可能是丹参防治缺血性脑血管病的分子机理之一。     

兔MCAO后脑组织和血浆内皮素的变化

建立兔ＭＣＡＯ脑缺血模型。兔４８只随机分成４组：对照组Ｃ、脑缺血后２ｈ、４ｈ、２４ｈ组。用放免法测兔脑组织和血浆的内皮素含量。发现脑缺血后，缺血侧脑组织和血浆内皮素含量均显著高于对照组（Ｐ＜０．００１），且随缺血后时间的延长而递增（Ｐ＜０．０１）。内皮素与脑水含量之间呈显著正相关（Ｐ＜０．０５）。提示内皮素可能参与缺血脑损害并加重缺血后脑水肿。     

局灶性脑缺血后脑内髓过氧化物酶活性观察

目的　探讨局灶性脑缺血后脑组织髓过氧化物酶（ＭＰＯ） 活性的测定方法,以及与缺血性损害的关系。方法　采用新型小鼠大脑中动脉线栓模型,检测不同缺血时间组梗塞体积及ＭＰＯ活性。结果　缺血１ ｈ 后再灌注２３ ｈ 组（ｔＭＣＡＯ）缺血灶体积明显小于缺血２４ ｈ 组（ｐＭＣＡＯ）;ＭＰＯ活性在各缺血组缺血侧明显高于对照侧和对照组（ Ｐ＜ ０－０５）,ｐＭＣＡＯ 组缺血侧基底节区ＭＰＯ 活性显著高于ｔＭＣＡＯ 组（ Ｐ＜ ０－０５） ,而两组缺血皮质区ＭＰＯ 活性则无显著差异。结论　本研究建立了局灶性脑缺血的ＭＰＯ活性测定方法,证明ＭＰＯ活性与缺血损伤间具有一定关系。     

E—选择素对局灶缺血性脑皮质血流的影响

目的探讨Ｅ－选择素对局灶缺血性脑皮质血流的影响。方法用Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎＬｅｃｔｉｎＤｏ－ｍａｉｎ（以下Ｅ－选择素）Ｎ－末端２３－３０氨基酸残基合成的寡肽（Ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅ）１０ｍｇ／ｋｇ，或伪Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ或等量生理盐水，在ＳＨＲ（自发高血压性大鼠）ＭＣＡ／ＣＣＡ（大脑中动脉／颈总动脉）闭塞２ｈ后ＣＣＡ再灌注的模型中，静脉内缓慢注入，用激光多普勒血流测定仪从ＳＨＲ缺血前１０ｍｉｎ起至ＭＣＡ／ＣＣＡ闭塞２ｈ、ＣＣＡ再灌注后３０ｍｉｎ止，在大脑皮质背侧测定脑血流的变化。结果生理盐水组、伪Ｅ－选择素和Ｅ－选择素组的局部脑血流分别是２３％、２９％和５４％，有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论Ｅ－选择素能够有效地增加ＳＨＲ缺血再灌注后脑皮质的血流     

内皮素和自由基在脑缺血中的相互作用

本文在建立兔ＭＣＡＯ模型的基础上，用放免法测脑组织和血浆中内皮素（ＥＴ）的含量，同时用ＴＢＡ法测定脑组织中过氧化脂质（ＬＰＯ）含量。兔３６只，随机分三组，对照组（假手术），脑缺血后４ｈ，２４ｈ组，每组１２只。结果发现脑缺血后ＥＴ和ＬＰＯ之间呈明显的正相关（Ｐ＜０．００１），且随缺血后时间的延长而递增（Ｐ＜０．０１），用相关回归分析发现，脑组织ＥＴ和ＬＰＯ均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），结果说明脑     

脑缺血再灌注脑内纹状体区细胞外液谷胱甘肽的动态变化及丹参的影响

采用脑内微透析技术，应用高压液相色谱电化学检测方法（ＨＰＬＣ－ＥＤ），活体动态观察沙土鼠全脑缺血３０分钟，再灌注１２０分钟的细胞外液中的谷胱甘肽（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）的变化及丹参对它的影响。结果显示：全脑缺血后，细胞外液ＧＳＨ水平迅速升高（Ｐ＜０．０１），缺血３０分钟达高峰为缺血前的５。８２倍。再灌注后ＧＳＨ水平明显降低，于３０分钟趋于正常。脑缺血前３０分钟给予丹参注射液不影响细胞外液ＧＳＨ水平。表明脑缺血及再灌注期，ＧＳＨ反应性增高。ＧＳＨ作为内源性抗氧化剂及ＮＭＤＡ受体拮抗剂在脑缺血损伤中起重要作用。     

中脑导水管周围灰质和海马在ACTH镇痛中的相互关系

以往工作发现，中脑导水管周围灰质（ＰＡＧ）和海马在非阿片肽ＡＣＴＨ痛觉调制中占有重要地位。但它们之间的相互影响在ＡＣＴＨ痛觉调制中的作用，尚未阐明。本工作利用免疫组织化学和病阈测定方法，进一步观察大鼠ＰＡＧ和海马在ＡＣＴＨ镇痛时的相互关系，并与吗啡镇痛作用相比较。结果如下：（１）海马内注射ＡＣＩＨ（０．５ｕ／４μｌ）或吗啡（５μｇ／４μｌ），痛阈明显升高（１１９．３±４．７％，１２２．７±２６．８％）与对照组比较有显著差异（Ｐ＜０．０１），该明显效应均可被ＰＡＧ内注射阿片受体拮抗剂纳络酮所阻断；（２）ＰＡＧ内注射吗啡或ＡＣＴＨ后病阈提高更显著（１８０．９±５０．３％，２１９．８±７７．０％，Ｐ＜０．０１），但海马内注射纳络酮可阻断前者的效应（Ｐ＜０．０５）而对后者却无影响（Ｐ＞０．０５）；（３）伤害性刺激福尔马林（Ｆ）可诱发大鼠脊髓腰膨大背角原癌基因ｃ－ｆｏｓ显著表达，以Ⅰ、Ⅱ层较显著，海马或ＰＡＧ内注射ＡＣＴＨ均可抑制其背角ｃ－ｆｏｓ表达。结果提示：ＰＡＧ、海马均参与ＡＣＴＨ和阿片系统对脊髓痛信息传递的调制作用，在ＡＣＴＨ痛觉调制作用中，表明ＰＡＧ、海马之间的相互影响是复杂的。     

脑缺血再灌注时红细胞免疫功能变化及中性粘多糖对其的影响

本文采用脑缺血再灌注模型，观察沙土鼠红细胞免疫粘附（ＲＣＩＡ）功能变化，红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ）、红细胞免疫复合物花环率（ＲＢＣ－ＩＣＲ），和中性粘多糖（ＮＭ）对沙土鼠红细胞免疫功能的影响。结果表明：（１）缺血时ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ下降不明显（Ｐ〉０．０５），再灌注时明显下降（Ｐ〈０．００１）；（２）缺血和再灌注时ＲＢＣ－ＩＣＲ均升高（Ｐ〈０．００１）；３．提前用ＮＭ可提高再灌注     

用逆转录-多聚酶链反应检测局灶脑缺血及再灌注后c-fos和c-jun基因表达

本研究应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测大鼠局灶脑缺血模型中即早基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的表达。结果发现缺血１５ｍｉｎ时可见到ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ表达缺血３０ｍｉｎ时引起轻微左侧局灶脑缺血改变，可诱导左侧局灶脑缺血区ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ广泛的表达；缺血９０ｍｉｎ后，导致大面积局灶脑缺血改变，诱导上述两种基因在同侧缺血区与同侧非大脑中动脉（ＭＣＡ）供血区的海马中表达。后者有相当轻的缺血症状。再灌流６０ｍｉｎ后诱导两种基因的共同表达立即达高峰。我们采用标准化的大鼠局灶脑缺血及再灌注模型，在分子水平上动态观察缺血／再灌注后基因变化特征，为缺血性脑损害的防治提供实验依据。