人细胞色素P450 3A活性测定

目的:建立测定人细胞色素P4503A酶活性的方法。方法:收集24h尿液,以HPLC法测定尿液中氢化可的松(HC)与6β-羟基氢化可的松(6β-OHC)的含量,以6β-OHC/HC来评估细胞色素P4503A酶的活性。结果:健康志愿者尿中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的比值为(8.5±3.0),肿瘤患者为(6.2±4.5)。结论:细胞色素P4503A酶的活性可以通过测定6β-OHC与HC的比值进行预测。     

温州地区180名10周岁儿童细胞色素P450 3A酶活性分布

目的:调查温州地区180名10周岁儿童细胞色素P450 3A酶活性(cytochrome P450 3A activity,CA)的分布情况及正常值范围.方法:采用HPLC梯度洗脱法测定尿液中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松浓度,以6β-羟基氢化可的松与氢化可的松的浓度之比来表示CYP3A酶的活性.结果:180名10周岁儿童CA分布不呈正态分布,变异系数为2.96,变异系数的标准误为0.13,偏度系数＞l.受检者CYP3A酶的平均活性为4.8±1.9,其中男孩为4.4±1.6,女孩为5.1±1.9.温州地区10周岁儿童CYP3A酶的活性无性别差别,正常范围值是0.85～21.52.结论:通过对180名10周岁儿童CYP3A酶活性的测定,推断出该年龄正常值范围,可为制定儿童个体化给药方案提供科学依据.     

高效液相色谱法测定尿中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松的含量

目的:建立测定尿液中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松含量的方法.方法:尿样9 mL以5 mL醋酸乙酯-乙醚(4∶1)提取后,有机相以氮气吹干,以甲醇溶解后进样,检测波长为240 nm.结果:6β-羟基氢化可的松和氢化可的松标准曲线方程分别为Y=0.033X-0.007,r=0.998 9和Y=0.067X 0.002,r=0.999 6;两者的回收率分别为98.56%和99.45%;RSD分别为4.47%和3.85%.10例健康志愿者的定时尿中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量分别为(194.1±66.8) μg·L-1和(24.0±9.4) μg·L-1.两者之间的比值为(8.5±2.9).结论:本法灵敏可靠,符合人体尿样中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松测定的要求.     

RP-HPLC法测定健康者尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量

目的建立RP-HPLC法同时检测人尿样中内源性氢化可的松及其代谢产物6β-羟基氢化可的松的含量。方法采用岛津Insertil ODS-3反相色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）进行梯度洗脱,柱温为30℃,流动相为水-乙腈,检测波长240nm。尿样用液-液萃取法处理,萃取剂为乙酸乙酯。结果 6β-羟基氢化可的松和氢化可的松标准曲线分别为y=0.004 l x-0.119 2,r=0.999 0;y=0.0127x-0.050 5,r=0.997 8,两者回收率均>95%,日内、日间RSD均<5%。20名健康志愿者尿中6β-羟基氢化可的松与氢化可的松质量浓度分别为（151.90±94.05）和（26.38±20.07）μg·L^-1,比值为6.32±2.36。结论本方法专属性强、灵敏度高、简单可靠,适用于大样本分析。     

高效液相梯度洗脱法测定尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量

目的:用HPLC法(梯度洗脱)测定尿液中6β-羟基氢化可的松(6β-OHC)和氢化可的松(HC)的含量,计算6β-OHC和HC的比值以反映人体中CYP3A酶的活性,为其研究提供有效的分析手段。方法:采用YMC-PACK-ODS-A色谱柱(250 mm×4．6 mm,5 0μm),流动相为乙腈-0．1％硫酸铵水溶液梯度洗脱,流速:1 ml·min-1,紫外检测波长:240 nm。结果:尿液中6β-OHC在20-800 ng·ml-1浓度范围内(r=0．998 6),HC在10-480 ng·ml-1浓度范围内(r=0．999 9)线性关系良好,6β- OHC和HC的加样回收率分别为(99．8±3．6)％和(101．8±2．9)％,63名正常儿童的尿液中6β-OHC和HC的平均浓度分别为(109．94±57．13)ng·ml-1和(18．87±12．89)ng·ml-1,其比值为8．02±5．28。结论:本法操作简便、快速,准确度较高,适合人体尿样中糖皮质激素含量测定。     

性别与青春期发育对CYP3A酶活性的影响

目的研究性别及青春期发育对人体CYP3A酶活性的影响。方法采用高效液相色谱梯度洗脱法测定并计算569例中小学生尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量，以两者的浓度比值表示CYP3A酶的活性，分析青春期发育前后CYP3A酶活性的变化及性别对CYP3A酶活性的影响。结果性别间的F值为0.734 271，青春期发育前后的F值为22.620 83。不同性别间CYP3A酶的活性差异无显著性，青春期发育后CYP3A酶的活性较发育前明显降低(P＜0.01)。结论性别对CYP3A酶的活性无影响，青春期发育对CYP3A酶的活性有较大影响。学龄期儿童CYP3A酶的活性比青春期学生高。     

高效液相色谱-二极管阵列法同时检测尿中内源性氢化可的松及其代谢产物

目的:建立高效液相色谱-二极管阵列法同时检测尿中内源性氢化可的松及其代谢产物的方法。方法:采用KromasilC18反相色谱柱(250mm×4·6mm,5μm),柱温为40℃,流动相为水-乙腈(78∶22,V/V,用磷酸调pH值至2·8,流速梯度洗脱),检测波长为238nm,尿液用固相萃取法处理。结果:6β-羟基氢化可的松和氢化可的松分别在20~1000、5~100μg/L浓度范围内线性关系良好,最低检测浓度分别为2、3μg/L,萃取回收率均大于80%,日内、日间相对标准差均小于5%。尿中6β-羟基氢化可的松与氢化可的松浓度的平均比值为0·66±0·37。结论:本方法专属性强、灵敏度高、简单可靠,可用于研究体内药物代谢机制及药物相互作用。     

高效液相色谱法测定分析中小学男生CYP3A活性

目的通过高效液相色谱法测定CYP3A酶活性,研究中小学男生CYP3A酶活性变化及其趋势。方法用高效液相色谱法梯度洗脱法测定并计算515名中小学男生尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的比值,以反映CYP3A的活性。通过统计分析,研究CYP3A的活性的变化及其趋势。结果酶的活性在青春期前后都较平稳,但在开始发育时出现酶活性降低,有统计学意义,且发育后酶活性个体差异变大。结论中小学男生年龄跨越大,临床用经CYP3A酶代谢药物时,应根据身体发育情况适当调整。     

上海市中小学女生CYP3A酶活性分析

目的:分析女中小学生CYP3A酶活性及其变化趋势。方法:用HPLC梯度洗脱法测定573名女中小学生尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量,并通过计算其比值分析CYP3A的活性。结果:在青春期开始发育时CYP3A酶的活性降低,且发育后酶活性个体差异变大。结论:中小学女生年龄跨越大,临床使用经CYP3A酶代谢的药物时应根据身体发育情况适当调整。     

6β-OHFC/FC在白血病患儿不同化疗阶段的区别与意义

目的:探讨6β-羟基氢化可的松与氢化可的松比值(6β-OHFC/FC)在白血病患儿不同化疗阶段的区别及意义。方法:采用尿样法,以HPLC法测定并计算6β-OHFC/FC。结果:不同化疗阶段的白血病患儿,6β-OHFC/FC有显著性差异。结论:6β-OHFC/FC对白血病患儿的治疗、预后评估及其危险度分级有一定的参考价值。     

上海学龄儿童细胞色素P450 3A酶活性分布

目的:调查上海地区1 169名6~15岁学龄儿童细胞色素P450 3A酶活性(cytochrome P450 3A activity,CA)的分布情况及正常值范围。方法:采用HPLC梯度洗脱法测定尿液中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松的浓度,以地塞米松为内标,采用HP Hypersil ODS柱(250 mm×4 mm,5μm),流动相A相为CH3CN,B相为7.56 mmol/L(NH4)2SO4溶液,梯度设置:0~6.5 min,A:10%,B:90%;6.5~15 min,A:35%,B:65%,线性变化;15~24 min,A:35%,B:65%;24~28 min,A:10%,B:90%,线性变化;28~42 min,A:10%,B:90%。柱温30℃;流速1.0 mL/min;检测波长240 nm。数据分布形态检测采用Kolmogorov-Smirnov检验,男、女儿童酶活性之间的比较采用两个独立样本的t检验。结果:1 169名学龄儿童CA分布为左偏态分布,偏度系数为2.66,lgCA呈正态分布,偏度系数为0.027。CA正常值范围为1.00~25.47,男女性之间CA无显著性差异(P=0.919)。将未发育期、发育启动期和发育中期分别设为X=1、2、3,与CA平均值(Y)进行线性回归,得到回归方程为Y=0.685X+3.513(r=0.999 9)。结论:确定学龄儿童CA分布情况及其正常值范围,可为制定儿童个体化给药方案和给药剂量提供依据。     

CYP3A酶内源性标志物的研究进展

CYP3A酶主要分布于人体肝脏和小肠,广泛参与各种药物代谢。该酶在介导药物代谢的同时也会受底物影响,其活性被诱导或抑制,从而影响其他经由CYP3A酶代谢的药物体内过程。目前可以通过体外探针药物和内源性生物标志物评价CYP3A酶活性,前者需要口服探针药物,后者只需检测内源性标志物如4β-羟基胆固醇和6β-羟基氢化可的松。文献报道,研究CYP3A酶活性除了有助于阐明不同个体的药物代谢差异,还可以提示药物相互作用情况下合用药物的剂量调整,预测药物疗效和毒性反应,为个体化用药提供理论指导,评估新药潜在的药物相互作用,降低新药上市风险。笔者对上述2种常用的内源性标志物的相关研究和临床应用进行综述。     

液-质联用法测定中年妇科病人咪达唑仑及其代谢物的血药浓度并研究其细胞色素P450 3A4酶活性分布特征

目的 研究中年妇科手术病人应用咪哒唑仑(抗焦虑药)及其CYP3A_4酶活性分布特征.方法 以咪哒唑仑作为探针药物,用液-质联用法测定血桨中咪达唑仑、1'-羟基咪达唑仑的单点药物浓度,以1'-羟基咪达唑仑/咪达唑仑的比值评估CYP3A4酶活性.结果 260例妇科手术病人CYP3A4酶的活性为0.46±0.14,推测中年妇科手术病人CYP3A4酶活性的正常值范围为0.18～0.73.结论 CYP3A4酶活性在中年妇科手术病人中呈正态分布,酶活性的个体差异较小,对术后的个体化药物治疗影响不大.     

尿石素A抗糖脂毒性改善MIN6胰岛β细胞活力机制靶点研究

目的 靶点通路预测及细胞实验验证尿石素A（UA）在糖尿病环境下保护胰岛β细胞的作用机制。方法 用Cytoscape软件分析成分药效靶点,以基因本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集分析信号通路。将MIN6胰岛β细胞分为3组：对照组、高糖脂模型组、给药组(UA,11.5μg·mL^-1),干预24 h。CCK-8法测定细胞活力（光密度值）,蛋白质印迹法检测蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素蛋白（mTOR）及其相应磷酸化蛋白（p-Akt、p-mTOR）表达水平。自噬抑制剂氯喹(CQ,50μmol·L^-1)、AMP依赖的蛋白激酶抑制剂(CC,10μmol·L^-1)进行进一步反证。结果 网络预测发现Akt、mTOR为主要靶点,KEGG分析得到34条信号通路（P<0.05）,Akt-mTOR是其中一条重要通路。对照组、高糖脂模型组、给药组的细胞活力分别为99.92±1.84, 47.40±2.78和67.07±2.95;p-Akt表达分别为1.00±0.02, 0.61±0.01和0.79±0.01;p-m...     

HPLC测定银杏叶制剂中6-羟基犬尿喹啉酸的含量

目的 建立银杏叶制剂中6-羟基犬尿喹啉酸(6-HKA)含量的测定方法。方法 色谱柱为XDB-C₈(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为0.1%磷酸-乙腈-甲醇(94∶5∶1);流速1.0 mL·min^-1;检测波长为350 nm。制剂样品经粉碎后,用50%甲醇溶解,过滤后进样测定。结果 6-HKA在5.025~100.5 μg·mL^-1内线性良好,峰面积与进样量呈良好线性关系,r=1.000 0;平均回收率为99.86%。6批银杏叶片剂中6-HKA的含量为0.22%~0.35%。结论 建立的方法操作简便,结果准确,重复性好。     

紫杉醇对大鼠肝微粒体CYP3A1的作用

目的：考察紫杉醇对Sprague Dawley（SD）大鼠肝微粒体细胞色素P450 3A1（CYP3A1）酶活性的影响效应。为该药临床应用中可能与其他药物产生的相互作用提供依据。方法：将9只雄性SD大鼠随机分为空白对照组（尾静脉注射给予生理盐水．每只1mL，qd，连续3d）、地塞米松诱导组（灌胃给予地塞米松，100mg&#183;kg^-1&#183;d^-1，连续3d）、紫杉醇实验组（尾静脉注射给予紫杉醇，6．7mg&#183;kg^-1&#183;d^-1，连续3d）。采用HPLC法检测以睾酮为探针药物经大鼠肝微粒体温孵后转化的代谢产物6β-羟基睾酮的生成速率来反映大鼠CYP3A1酶的活性。结果：空白对照组、地塞米松诱导组和紫杉醇组6β-羟基睾酮的生成速率分别为（643．1&#177;6．0），（2671．1&#177;225．7），（724．8&#177;36．6）pmol&#183;（mg protein）^-1&#183;min^-1。紫杉醇组6β-羟基睾酮的生成速率与地塞米松诱导组相比差异有极显著性（P〈0．01），与空白对照纽相比差异无显著性（P〉0．05）。结论：紫杉醇对大鼠CYP3A1酶的活性无诱导作用。     

阿尔茨海默病血浆中IL-6、Aβ1-40、M-CSF、IL-1β、TNF-α的临床诊断意义

目的探讨血浆中IL-6、Aβ1-40、M-CSF、IL-1β、TNF-α对阿尔茨海默病(AD)的临床诊断意义。方法选择AD患者组74例,另选取100名健康老年者作为对照组。应用ELISA方法检测血浆Aβ1-40、IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α水平。结果 (1)AD患者血浆Aβ1-40浓度[(108.4±6.5)pg/mL]与对照组[(103.5±7.1)pg/mL]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α浓度分别为(180.9±50.6)pg/mL、(524.6±68.1)pg/mL、(40.45±6.14)pg/mL、(60.52±5.64)pg/mL,与正常对照组[(75.2±45.1)pg/mL、(320.5±80.8)pg/mL、(30.46±7.50)pg/mL、(36.64±15.32)pg/mL]比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论检测AD患者血浆中Aβ1-40浓度对诊断无意义,而IL-6、M-CSF、IL-1β、TNF-α水平的检测可以成为临床辅助诊断AD的生物学指标。     

伊立替康治疗转移性结直肠癌疗效和毒性的决定因素

UGT1A1基因型和氢化可的松／6β-羟基氢化可的松水平联合起来能够帮助决定伊立替康的最佳治疗剂量。     

雷公藤多苷对大鼠与人肝微粒体CYP3A酶活性的体外抑制作用

目的:建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定大鼠和人肝微粒体中1′-羟基咪达唑仑的含量,研究雷公藤多苷对体外大鼠与人肝微粒体细胞色素P45(0CYP)3A酶活性的抑制作用。方法:将不同质量浓度的雷公藤多苷(0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、50.0、100.0μg/ml)分别与大鼠和人肝微粒体(0.4 mg/ml)共同孵育20 min后终止反应,采用LC-MS/MS法测定孵育液中咪达唑仑的代谢产物1′-羟基咪达唑仑的浓度以评价CYP3A酶活性并计算酶活性抑制率,采用Graph Pad Prism 5.0软件进行拟合并计算半数抑制浓度(IC50)。色谱柱为Agilent Eclipse XBD-C18,流动相为水-甲醇(梯度洗脱),流速为0.3 ml/min,柱温为30℃,进样量为2μl。采用电喷雾电离(ESI),定量离子为m/z 342.01→324.1(1′-羟基咪达唑仑)、m/z 383.01→337.2(内标氯雷他定)。结果:1′-羟基咪达唑仑检测浓度在0.01~3μmol/L范围内与其和内标物峰面积比值呈良好线性关系;精密度试验RSD均小于10%,提取回收率为97.92%~101.65%,方法回收率为96.70%~104.10%,稳定性试验RSD均小于10%。雷公藤多苷对大鼠和人微粒体中CYP3A的IC50分别为(48.610±1.32)μg/ml和(4.754±1.12)μg/ml;在0.5~100.0μg/ml范围内雷公藤多苷对CYP3A酶活性有抑制作用,且与质量浓度呈正相关。结论:所建立的LC-MS/MS法可用于检测大鼠和人肝微粒体中1′-羟基咪达唑仑的含量。雷公藤多苷对体外大鼠和人肝微粒体药物代谢酶CYP3A均存在抑制作用,且对人肝微粒体CYP3A的抑制作用明显强于大鼠。