细胞色素氧化酶的DAB法与Nadi反应的比较

过去常用经典的 Nadi反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位 ,现在广泛使用 DAB法。我们对这两种方法进行了比较。方法如下 :取 Wistar大鼠的心、肝、肾组织 ,用液氮骤冷 ,恒冷箱切片 (厚 7μm) ,进行以下实验 :Nadi反应 :切片入孵育液 ( N-苯基 -对 -苯二胺 3mg、1 -羟基 - 2 -萘酸 3mg溶于二甲基亚砜 0 .1 ml,0 .0 5 M的磷酸缓冲液 p H7.21 0 ml,混匀后过滤 )室温 30 min。入 Lugol碘液 2 min,入 5 %硫代硫酸钠 4min,入 1 %醋酸钴 6 0 min,蒸馏水洗 ,甘油明胶封固。DAB法 :切片入孵育液 ( 0 .0 5 M磷酸缓冲液 p H7.2 1 0 ml…     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶 (ATPase)和 Ach E是研究中常用的两种酶 ,将两种酶同时显示在一张切片上 ,收到良好效果 ,特介绍如下。材料和方法 :取新鲜的动物肌组织 ,平铺于滤纸上 ,在冰冻切片机上 ,进行纵行切片 ,厚度 10～ 30μm。也可用 4%中性甲醛固定保存在 0～ 4℃的冰箱内 ,时间不宜过长 ,2 4～48小时内 ,仍可收到良好效果。 ATPace显色 :将切片放在下列的孵育液内。孵育液为 :0 .1巴比妥钠 2 0 m l,0 .18M氯化钙 10 m l,双蒸馏水 30 ml,ATP钠盐 15 2 mg,用 0 .1M Na OH调至 9.4,再加蒸馏水至 10 0 m l,每配一次可使用 1周左右。在孵育液内 …     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶(ATPase)和AchE是在科学研究中常用的两种酶,在科学研究中为了同时观察肌肉和神经中两种酶的分布和酶的活性,经实验研究,将两种酶是时显示在一张切片上,收到良好效果,特介绍如下。1　材料和方法1.1　组织的制备,取新鲜的动物肌组织,平铺于滤纸上,用冰冻切片机上,行纵行切片,厚度可切10～30μm,用4%中性甲醛固定保存在0～4℃的冰箱内,时间不宜过长,如固定24～48小时内,仍可收到良好效果。1.2　结合染色程序(1)ATPase显色,将切片放在下列的孵育液内。孵育液为:0.1巴比妥纳20ml,0.1gM氯化钙10ml,双蒸溜水30ml,ATP钠盐152mg。…     

一种快速检测杂交瘤上清中免疫球蛋白的新方法

按照Fauci等方法,取100微升压积红细胞加入1毫升现配的三氯化铬(100微克/ml盐水)和100微升葡萄球菌蛋白A(1.25毫升/ml)中。在30℃孵育40分钟后用盐水离心细胞洗涤两次。用含1毫克/ml牛血清白蛋白的PBS配制成2.25×10~8/ml的葡萄球菌蛋白A致敏羊红细胞悬液(E-SPA)。在微量滴定板上,用含10％胎牛血清(FCS)的RPMI 2倍稀释从正常小鼠血清提取的免疫球蛋白(IgG和     

一种显示网状纤维的方法

网状纤维是一种嗜银纤维 ,如用一般的银浸染 ,纤维难于分辨 ,而采用碳酸铵银法染色网状纤维的结构则显示得异常清晰。因而 ,碳酸铵银法是一种较理想的显示网状纤维的方法 ,现将该方法介绍如下 :1 .用岑克液或 1 0 %福尔马林固定脾、肝标本。 2 .切片脱蜡后蒸馏水洗数次。 3.将切片放入 0 .3%高锰酸钾内 5 min。 4.切片经水洗后入 5 %草酸漂白 ,至切片上的组织呈现为白色为止。 5 .蒸馏水洗数次后 ,置切片于碳酸铵银内 ( 5 0℃ ) 30 min。铵银液配方 :1 0 %硝酸银 1 0 ml,磷酸钾饱和液 1 0 ml,上述二液混合后产生沉淀 ,倾去上层液体 ,将沉淀…     

大鼠中央杏仁核内亮氨酸脑啡肽的分布

雄性Wistar大鼠6只,复合麻醉剂(Chloroper t)腹腔注射麻醉(3ml/kg),经左心室-升主动脉插管快速灌入生理盐水50m1,随后灌注1%多聚甲醛、0.2%苦味酸、0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4,4℃)300ml,30min灌完。立即取脑,入同样固定液后固定2h(4℃),置入含30%蔗糖的0.1mol/L磷酸缓冲液内(4℃)24h。恒冷箱连续冠状切片(厚48μm)。0.01mol/L PBS接片。第1抗体为兔抗L-ENK血清(INC产品),用ABC(Vector产品)程序孵育切片,DAB法呈色。对照实验采用替换实验和吸收实验,结果为阴性。     

PAS—M／PASM—M显示肾小球基膜,红细胞和细胞核的复合染色方法

多年来为了进一步提高肾小球的组化染色效果,我们进行了反复实验,根据染色机理和目的,重新组合PAS-M和PASM-M的二种染色方法,能够较好的显示肾小球毛细血管基膜、红细胞和细胞核的分布及病变程度,对于肾组织的疾病诊断和研究预后效果,具有一定的实用意义.1 材料和方法1.1 PAS—M法的试剂配制和染色方法 (1)试剂配制 ①Periodic acid (过碘酸)氧化液,过碘酸0.5g,蒸馏水98ml.②Martius yellow(马休黄)对比染色液:马休黄 0.5g,无水酒精 98ml,磷钨酸0.2g.③Schiff’s染色液:碱性复红2g,1M盐酸40ml,重亚硫酸钠4g,重蒸馏水400ml.先将蒸馏水煮沸,小火焰后加入碱性复红,再煮沸1分钟,冷却到50℃时加入盐酸,待35℃时加入重亚硫酸钠.将试剂盛棕色瓶中,冷却后入冰箱内备用.(2)染色方法 ①组织切片脱蜡至水.②过碘     

组织化学法对人周围神经内神经束定性和定位的研究

周围神经显微外科技术的应用,对神经束性质的鉴别提出了更高的要求。作者用Karnovsky乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学方法,对成人上肢主要神经干及其分支和部分下肢神经肌支和皮支、脊神经前后根及灰交通支内AChE分布,进行了全面的观察。材料均从死亡后三小时内的成人尸体上获得,按神经在体内的自然位置,以印度墨汁在神经外膜上标记方位。取材后,用6％的中性甲醛固定1h,磷酸缓冲液冲洗,明胶包埋(45°～50℃、1h)。冷凝后冰冻切片(15～20μm)。贴片后入Karnovsky标准孵育液内孵育(4℃,20h)。孵育对照:1.不加     

增强免疫金银法敏感性的探讨

试剂:兔抗5-HT抗体,为INC产品。胶体金标记的羊抗兔抗体,为陕西中医研究院病理室产品。材料:豚鼠小肠段经Bouin氏液浸泡固定后,制成6μm厚的小肠卷石醋切片。免疫金银法的程序:石醋切片按常规脱蜡到蒸馏水。入0.05 M TBS pH 7.45分钟×2。滴加3%正常牛血清(用0.05 M TBS pH 7.4配制)10分钟。滴加5-HT抗体(1:1000～1:90000)在不同温度(4℃～37℃)孵育不同时间(3小时～24小时)。于0.05 M TBS pH 7.4洗5分钟×3。于0.02 M TBS pH 8.2配制)10分钟。滴加胶体金标记的羊抗兔抗(1:30稀释)于室温孵育60分钟。入0.02 M TBS pH 8.2洗5分钟×2。入0.05M TBS pH 7.4小船坞钟×2。入蒸馏水洗4分钟×3。入银显色     

介绍一种冷冻切片快速染色方法

制作优质的冷冻切片,以缩短染色时间、提高染色细胞的核浆清晰度最为重要。我们试将苏木精。伊红按比例配成混合液使整个染色过程在1min内完成,且不必经过盐酸乙醇分化,染色鲜艳而稳定,现介绍如下。1材料和方法1．1染液配制（1）冷冻固定液：85％乙醇85ml,4％甲醛10ml,冰醋酸5ml。（2）苏木精伊红混合染色液：沉淀酸化伊红Y乙醇应用液1份,哈雷苏木精液3份混合供染色用。1．2切片制作取手术新鲜组织置恒冷式切片机载物台上,－20℃冷冻后6μm切片,玻片附贴切片后即刻用冷冻固定液固定10S,水稍洗,滴加苏木精伊红混合染色液至液体覆…     

介绍一种骨髓组织脱钙新方法

骨髓组织活检标本来之不易 ,在制片过程中若处理不当 ,会给诊断造成极大的困难。如何既快又好地制作高质量的骨髓病理组织切片对正确诊断尤为重要。笔者通过 2年的反复实践 ,摸索出一种骨髓组织脱钙后的常规制片方法(简称“新法”) ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　标本　中南大学湘雅医院骨髓穿刺的活检组织 4 0例。1.2　试剂　脱钙液 :2 %硝酸 ,即浓硝酸 2ml加 98ml自来水 ;固定液 :10 %福尔马林液 ;染色液 :Gill苏木精 ,沉淀酸化伊红Y乙醇液。1.3　方法　穿刺活检组织入 10 %福尔马林液中固定 30min ;入 2 %硝酸脱钙液 ,室温下脱钙。在…     

前列腺素合成酶的酶组织化学反应和定量化探讨

在组织切片上显示前列腺素合成酶的原理是该酶可催化底物花生四烯酸而氧化成前列腺素 ,反应中所形成的活泼氧原子又使 3,3′-二氨基联苯胺形成棕色沉淀 ,以间接证实前列腺素合成酶的存在。正常 Wistar大鼠和昆明小鼠 ,体重分别为 2 0 0 g和 2 0 g左右。取其肾和胃行 6 μm厚冰冻切片。用 Janszen显示法 :花生四烯酸 0 .4mg,DAB 2 mg,KCN 0 .6 5 mg和 0 .2 M Tris- HCl缓冲液 ( p H8.0 ) 1 0 ml,35℃孵育 3h。孵育后标本用蒸馏水洗 ,分别以甘油明胶和中性树胶封固。经 Leica Q5 0 0 MC图像分析仪进行平均灰度值 ( Mean Grey,MG)的测…     

阿魏酸钠对肿瘤坏死因子诱导人脐静脉内皮细胞NOS基因表达的影响

目的 :探讨阿魏酸钠 (SF)在人脐静脉内皮细胞中对内皮型一氧化氮合酶 (ecNOS)和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达的影响。方法 :常规培养人脐静脉内皮细胞 (ECV3 0 4) ,分成 5组 :①正常对照组 ,常规培养 ;②肿瘤坏死因子 α(TNF α)Ⅰ组 ,培养液中加入TNF α10 0 0u/ml作用 30min ;③TNF αⅡ组 ,培养液中加入TNF α 10 0 0u/ml作用 6h ;④SF +TNF αⅠ组 ,培养液中先加入SF 1mg/ml孵育 1h ,再加入TNF α 10 0 0u/ml作用 30min ;⑤SF +TNF αⅡ组 ,培养液中先加入SF 1mg/ml孵育 1h ,再加入TNF α 10 0 0u/ml作用 6h。采用原位杂交法检测iNOS和ecNOS的mRNA表达 ,扫描电镜观察细胞形态变化。结果 :①TNF α使内皮细胞iNOSmRNA表达增高而ecNOSmRNA表达降低 ;电镜下内皮细胞破坏较明显 ,细胞皱缩 ,微绒毛断裂 ,分布不规则。以上改变又以 6h为著。②将SF与TNF α共同作用于内皮细胞使内皮细胞iNOSmRNA表达下降 ,ecNOSmRNA表达增高 ;电镜下内皮细胞破坏轻微。结论 :TNF α诱导内皮细胞iNOSmRNA表达增高 ,ecNOSmRNA表达抑制。而SF使内皮细胞iNOSmRNA表达下降 ,ecNOSmRNA表达增高 ,这可能是SF抗动脉粥样硬化 ,抗炎症损伤的机理之一     

扬子鳄消化管壁内粘膜下神经丛的形态学观察

消化管神经丛的分布及其生理活动的研究甚多,但对低等脊椎动物的研究报道较少.扬子鳄是我国特有的世界珍稀动物,本文用Karnovsky-Roots乙酰胆碱酯酸(AChE)组化法研究扬子鳄消化管粘膜下神经丛的分布,为肠神经丛的比较解剖学研究提供一些形态学资料.1 材料和方法 扬子鳄2条(雌雄各1),2%戊巴比妥钠10～15ml腔内注射麻醉,打开胸腹腔,从左心室灌注生理盐水,继而灌流4%多聚甲醛固定,取食管下段、胃体、十二指肠、空肠、回肠和大肠,置4%多聚甲醛固定6h,继入合20%蔗糖的0.1mol·L~(-1)PB液中,4℃过夜.制备厚25μm的冷冻切片.以亚铁氰化铜法显示AChE,孵育液内加四异丙基焦磷酰胺(iso-OMPA)非特异性胆碱酯酶抑制剂和免去底物为对照.     

松果体胆硷酯酶阳性神经的分布

<正> 用大白鼠22只,体重200克左右,10％福尔马林生理盐水灌注,取松果体浸泡于30％蔗糖缓冲液中过夜,然后分三组实验。第一组动物12只,将松果体冰冻切片,厚40微米,然后入下述孵化液2小时(37℃),显示胆硷酯酶。即乙酰硫代胆硷7mg,蒸馏水1ml,0.1M磷酸氢二钠4.5ml,0.1M磷     

654-2对Fe~(2+)所致红细胞膜损伤的保护作用

本实验探讨654-2对Fe~(2+)所致红细胞膜损伤的保护作用。取正常大白鼠红细胞,生理盐水制成红细胞悬液(8×10~(?)个细胞/ml)。取0.2ml悬液,分别加入下列药物37℃孵育120分钟,观察红细胞形态变化,TBARs产生及红细胞内血红蛋白释出情况。实验分为五组:1.对照组(红细胞+生理盐水);2.红细胞+Fe~(2+)(FeSO_4     

光镜酶组织化学方法中两点技术小改进

光镜酶组织化学方法广泛用于病理、科研及药物毒性检验。冰冻切片法是光镜酶组织化学方法中最常用的重要技术,本人在实验过程中有如下两点技术小改进。(1)组织切片要求有一定的厚度才能有效地进行酶反应,厚片在孵育液中常从玻片上脱落下来。解决的办法是使用电吹风的冷风将切片立即吹干,然后再放入孵育液中孵育,这样切片就不会从玻片上脱落了。切片吹干切忌用热风,温度超过60℃,酶将失活;切记勿将切片长时间置于室温中晾干,南方空气湿润,切片置于室温中不易干而且易污染。室温高时也不宜保持酶的稳定性,易产生赝象。(2)     

几种阿片肽对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

本实验观察了几种阿片肽及氢化考的松对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬染料中性红能力的影响。 18-20克雄性LACA小鼠断颈髓处死后用Hanks＇液洗出腹腔巨噬细胞。用含10％小牛血清的RpMI_1,640液将细胞制成悬液(2×10~6细胞/ml)。在40孔细胞培养板中,每孔加入100μl细胞悬液。药物用RpMI_1,640液稀释成10~(-5)、10~(-7)、10~(-9)、10~(-11)M,分别加入细胞悬液中(每孔容量10μl),药物最终浓度分别为10~(-6)、10~(-8)、10~(-10)、10~(-12)M,同一浓度加入10孔中,即为10复管。细胞经37℃、24小时孵育后,弃去培养液,每孔加入     

脊髓胆硷酯酶阳性神经元的分布

<正> 用体重200克左右的大鼠20只,每例于处死前6—8小时肌注DFP(氟二磷酸异戊丙酯)1.5—2mg/kg。然后用10％福尔马林生理盐水灌注,取脊髓及脊神经节,浸泡于含30％蔗糖缓冲液中过夜。冰冻切片,厚40微米,切片入下液孵化2小时(37℃)以显示胆硷酯酶:乙酰硫代胆硷碘化物14mg,     

介绍一种制备兔抗大白鼠IgG的新方法

<正> 最近因科研需要我们摸索用葡萄球菌A蛋白(SPA)吸附大白鼠血清IgG获得成功,并制备了高效价兔抗大白鼠IgG血清。现介绍如下。 取10％冻干葡萄球菌A蛋白固体试剂(SPA)、(上海生物制品所批号8901)5支用无菌生理盐水洗3次后,加至15ml新鲜的混合SD系大白鼠血清中混匀,37℃水浴1h,其间每10min混匀1次,1h后3000 r/min离心20min,沉淀用无菌生理盐水洗6次后用生理盐水10ml配成悬液,分装置-20℃冻存备用。