绞股蓝皂苷A调控lncRNA TTTY15/miR-335-5p通路对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及机制

目的 探讨绞股蓝皂苷A(GpA)对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其对lncRNA TTTY15/miR-335-5p通路的调控作用.方法 采用白介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞建立骨关节炎软骨细胞损伤模型,用不同剂量的GpA处理细胞,pcDNA、pcDNA-TTTY15分别转染入软骨细胞后用GpA与IL-1β共同处理...     

大黄素对膝骨关节炎大鼠软骨细胞铁死亡的影响及机制研究

目的 探讨大黄素对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞铁死亡的影响及其机制。方法 96只SD大鼠分为假手术(Sham)组、KOA组、大黄素(EMO)组、大黄素+Nrf2抑制剂(EMO+ML385)组,每组24只,除Sham组外,其余组均采用改良Hulth法构建KOA模型。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)水平;肉眼观察膝关节大体形态;番红O-固绿染色观察膝关节软骨组织病理形态学;原位末端标记(TUNEL)染色检测膝关节软骨细胞凋亡率;生化试剂盒检测膝关节软骨组织中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、亚铁离子(Fe²⁺)水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹或免疫组化检测膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA或蛋白表达。结果 ...     

黄精多糖联合miR-204调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

目的:探讨黄精多糖(PSP)联合微小RNA(miR)-204对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法:分离培养大鼠关节软骨细胞,利用白细胞介素1β(IL-1β)诱导软骨细胞构建骨关节炎软骨细胞模型,用不同浓度(30,120,480 mg·L-1)的PSP干预IL-1β诱导的软骨细胞,分别将miR-204 mimics转...     

山奈酚通过调控miR-21/SOX9对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨山奈酚(KAE)对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:将C28/I2细胞分为对照组(正常培养的C28/I2细胞)、模型组(100 ng·ml^-1 LPS)、山奈酚低(KAE-L组,25μmol·L^-1 KAE+100 ng·ml^-1 LPS)、中(KAE-M组,50μmol·L^-1 KAE+100 ng·ml^-1 LPS)、高(KAE-H组,100μmol·L^-1 KAE+100 ng·ml^-1 LPS)剂量组。利用Lipofectamine^TM2000转染试剂盒对C28/I2细胞进行转染,并分为：mimics NC组(转染mimics NC+100 ng·ml^-1 LPS)、miR-21 mimics组(转染miR-21 mimics+100 ng·ml^-1 LPS)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC+100 ng·m...     

低强度脉冲声波对大鼠骨关节炎软骨细胞凋亡的作用及机制研究

目的探讨低强度脉冲声波(low intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)中软骨细胞凋亡的作用及作用机制。方法健康雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为4组(各10只):假手术组(Sham)、模型组(OA)、30 mW/cm²组、60 mW/cm²组。Sham组仅切开关节囊;OA组接受右侧后肢内侧半月板撕裂(MMT)处理;30 mW/cm²组及60 mW/cm²组接受与OA组同样手术处理,术后3 d接受低强度脉冲声波治疗,除治疗强度不同外,其他治疗参数均一致。治疗4周后,处死实验大鼠,取右后肢胫骨平台。Elisa检测各组软骨组织中IL-1β、IL-6及TNF-α水平;番红固绿染色评估各组胫骨平台关节软骨病理学改变;TUNEL染色检测各组软骨组织凋亡水平;RT-PCR及免疫组化检测各组软骨组织Bax、Caspase-3表达水平;Western blot法检测各组软骨组织p53蛋白表达水平。结果番红固绿染色表明,行MTT法处理后...     

艾瑞昔布对离体培养膝骨关节炎软骨细胞的作用及机制

目的 探讨艾瑞昔布对离体培养膝骨关节炎(KOA)关节软骨细胞活力、Ⅱ型胶原合成及细胞凋亡的影响。方法 离体分离人KOA关节软骨细胞,分为对照组、模型组和实验组。对照组不作任何干预,模型组使用含5μg·L^-1白细胞介素-1β(IL-1β)的完全培养基进行干预、实验组在模型组的基础上使用10μmol·L^-1艾瑞昔布进行干预。培养1,3和7 d后用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活力,培养7 d后用流式细胞术检测细胞凋亡率,用免疫细胞化学法检测Ⅱ型胶原表达量,用蛋白质印迹法检测细胞中环氧化酶2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)、前列腺素E受体蛋白4(EP4)蛋白的表达水平。结果 培养7 d后,对照组、模型组和实验组的MTT实验光密度值分别为0.41±0.05,0.33±0.05和0.47±0.05,细胞凋亡率分别为(5.70±1.23)%,(40.26±3.12)%和(17.12±2.06)%,Ⅱ型胶原平均灰度值分别为140.34±8.70,121.00±10.21和152.16±9.35,COX-2蛋白相对表达水平分别为0.45±0.04...     

加减右归饮对实验性兔膝关节骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的 探讨加减右归饮对兔膝关节骨关节炎软骨细胞凋亡的影响.方法 24只青紫蓝兔完全随机分为正常组、模型组、中医组和阳性对照组,按兔膝关节制动引起关节软骨退变的方法造模,8周后处死动物制备标本,光镜、透射电镜观察关节软骨形态学变化,流式细胞术检测软骨细胞凋亡率.结果 中药组细胞凋亡率明显低于模型组及阳性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 加减右归饮具有抑制软骨细胞凋亡的作用.     

丹参酮ⅡA抑制软骨细胞炎症、软骨基质降解的机制及对大鼠骨关节炎的影响

目的 探究丹参酮ⅡA(TanⅡA)通过调节β-arrestin2表达对软骨细胞炎症及软骨基质降解的机制,以及对大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)的影响.方法 白细胞介素-1β(IL-1β)诱导大鼠关节软骨细胞制备关节炎体外模型.24只SD大鼠随机分为对照组、模型组和TanⅡA组,每组8只.模型组和Tan...     

Eg5基因在神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡中的作用

目的 探讨Eg5基因对神经母细胞瘤（NB）细胞增殖和凋亡的影响。方法 取2株NB细胞株SHSY-5Y和NBL-S,分别转染针对Eg5基因的小干扰RNA （siRNA）,分为细胞对照组（用等体积的水代替siRNA,只含有脂质体,未转染细胞）、siRNA对照组（转染siRNA对照）和siRNA干扰组（转染Eg5 siRNA）,每组6孔,每孔1×10⁶个细胞。使用实时定量聚合酶链式反应（real-time PCR）检测Eg5 mRNA表达水平的变化;使用5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EdU）掺入实验和克隆形成实验检测下调Eg5表达对NB细胞增殖的影响;使用流式细胞术检测下调Eg5表达对NB细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 荧光定量PCR检测结果显示,siRNA干扰组Eg5 mRNA表达水平与细胞对照组和siRNA对照组相比显著减少,差异有统计学意义（P < 0.05）;EdU掺入实验和克隆形成结果表明,siRNA干扰组细胞中DNA的合成量和细胞克隆数量低于细胞对照和siRNA对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）;流式细胞术检测结果显示,细胞对照组和siRNA对照组细胞的凋亡比率低于siRNA干扰组细胞的凋亡比率,差异有统计学意义（P < 0.05）;细胞周期的检测结果显示,细胞对照组和siRNA对照组细胞中G0/G1期所占比率< 50%,而siRNA干扰组细胞中G0/G1期所占比率>70%,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 在NB细胞中使用siRNA下调Eg5表达,能够抑制NB细胞增殖,促进细胞凋亡。     

重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin的构建及其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的构建重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin并探讨其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同病毒感染复数（MOI）LV-hTERT-tumstatin感染肝癌细胞HepG2及正常肝细胞L02,荧光显微镜下观察转染情况,MTT法检测两种细胞增殖情况,流式细胞术检测两种细胞凋亡情况。结果重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin转染后在肝癌HepG2细胞中特异表达,在L02细胞中无表达。肝癌细胞HepG2的生长抑制率随MOI增加而逐渐增加,L02细胞生长无明显变化。慢病毒治疗组HepG2细胞凋亡率达（48.39±3.32）%,明显高于空白对照组（3.96±0.94）%（P〈0.05）,而对L02细胞作用不明显（P〉0.05）。结论重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin可靶向抑制肝癌HepG2细胞增殖和促进HepG2细胞凋亡。     

5-甲氧基色醇对急性髓细胞性白血病 U937细胞增殖和迁移的影响及其机制研究

目的 研究不同浓度5-甲氧基色醇对急性髓细胞性白血病U937细胞增殖和迁移的影响并初步探讨其作用机制.方法 采用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法,检测不同浓度(8、16、32、64μmol/L)的5-甲氧基色醇对急性髓细胞性白血病U937细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测U937细胞各处理组的凋亡比例;Transwell实验检测不同浓度5-甲氧基色醇对细胞U937迁移能力的影响;基于5-甲氧基色醇的药效团,应用生物信息学技术预测5-甲氧基色醇作用的蛋白靶点,并对蛋白靶点做通路富集分析;蛋白质印迹法检测不同浓度5-甲氧基色醇对显著富集通路中的蛋白靶点磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和Akt激酶(AKT)的蛋白表达水平影响.结果 CCK-8结果显示,8、16、32、64μmol/L 5-甲氧基色醇以时间和浓度依赖方式抑制U937细胞的增殖[增殖抑制率24 h:(17.4±1.2)％、(31.6±2.6)％、(43.5±3.2)％、(58.28±4.5)％,72 h:(21.5±1.8)％、(43.4±2.4)％、(67.4±6.1)％、(85.6±3.9)％;均P<0.05];流式细胞术实验结果显示,与对照组凋亡率(3.93±0.19)％相比,5-甲氧基色醇明显促进细胞U937的凋亡[(7.5±0.33)％、(8.99±0.20)％、(13.71±0.39)％];Transwell实验结果显示,与对照组每视野下迁移细胞数(205±14)个相比,8、16、32、64μmol/L 5-甲氧基色醇明显抑制细胞U937的迁移能力[(152±18)个、(124±9)个、(78±22)个](P<0.05);生物信息学及通路富集结果显示,5-甲氧基色醇存在100个作用的蛋白靶点,这些蛋白靶点显著富集在包括PI3K-AKT信号通路等;对PI3K-AKT信号通路相关蛋白进行蛋白质印迹法检测其表达,结果显示,5-甲氧基色醇处理可明显减少U937细胞中PI3K和AKT蛋白的磷酸化水平(均P<0.05).结论 5-甲氧基色醇抑制PI3K-AKT信号通路的蛋白表达水平,进而抑制急性髓细胞性白血病U937细胞的增殖和迁移,促进U937的凋亡.     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

微小RNA-588靶向调控脾酪氨酸激酶的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的作用

目的 探讨微小RNA-588(miR-588)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响以及潜在的作用机制.方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-588的表达水平;将胃癌细胞SGC-7901、BGC-823分为anti-miR-NC组...     

胞外酸化对体外培养大鼠关节软骨细胞增殖与凋亡及组织蛋白酶K mRNA表达的影响

目的:探讨不同胞外pH环境对体外培养的大鼠关节软骨细胞增殖、凋亡的影响,以及大鼠关节软骨细胞中组织蛋白酶K的表达与胞外酸化的关系。方法:Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠关节软骨中分离软骨细胞;细胞传代培养后分为4组分别在pH 7.4、pH 6.5、pH 6.0、pH 5.5不同的胞外酸化环境下培养3h,MTT法检测软骨细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态,Annexin-V/PI双染法检测软骨细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR检测组织蛋白酶K基因的表达。结果:与pH 7.4组比较其他各组软骨细胞增殖均受到抑制,其中pH 5.5、pH 6.0与pH 7.4相比差异有重要的统计学意义(P<0.01),pH5.5和pH 6.0组可见较多的凋亡细胞,且流式细胞仪检测的凋亡率明显高于pH 7.4组(P<0.01);组织蛋白酶K的表达与酸性程度成正相关。结论:胞外酸化环境下能明显抑制体外培养软骨细胞增殖、促进软骨细胞凋亡,并且酸性环境能增加组织蛋白酶K的表达,这为类风湿关节炎中关节软骨的破坏发生机制提供了实验依据。     

螺内酯对心肌梗死后心肌细胞凋亡和增殖的影响

目的 探讨螺内酯对心肌梗死后细胞凋亡和增殖的影响.方法 45只SD大鼠随机分为3组：假手术（SHAM）组、心肌梗死（Myocardial infarction,MI）组和心肌梗死后螺内酯（Spironolactone,SPI）干预组.测量左心室功能,光镜观察标本病理形态改变,缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡程度,免疫组化观察细胞增殖核抗原（PCNA）表达.结果 MI组心功能较SHAM组明显下降,SPI组较MI组改善;SHAM组心肌结构完整,MI组心肌结构损害严重,SPI组心肌结构损害较轻;与SHAM组相比,MI组凋亡细胞数显著增加;与MI组相比,SPI组心肌细胞凋亡数显著减少（P＜0.01）.与SHAM组相比,MI组PCNA表达显著增加;与MI组相比,SPI组PCNA表达无明显差异 结论 螺内酯改善心室重构和心力衰竭主要通过抑制细胞凋亡而非心肌细胞的增殖.     

化纤灵方药物血清对肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨化纤灵方药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖及凋亡的影响.方法:传代培养的大鼠HSC系HSC-T6与中药复方化纤灵方药物血清(5%、10%、20%)共同培养48 h后,应用MTT法检测HSC-T6细胞增殖,琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞仪测定细胞凋亡.结果:复方化纤灵方药物血清能显著抑制体外培养的HSC-T6增殖,中、高剂量组凋亡率分别为(20.37±0.78)%、(21.69±2.35)%、显著高于正常对照组(P<0.01);化纤灵方药物血清均可诱导HSC凋亡.结论:复方化纤灵方能抑制HSC增殖并促进其凋亡,可能是抗肝纤维化作用的主要机制.     

伊立替康联合氟尿嘧啶对大肠癌LOVO细胞株增值和凋亡的影响

目的探讨伊立替康联合氟尿嘧啶体外抑制人大肠癌细胞株增值和凋亡的效果,以确定联合用药是否具有协同效应。方法使用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,流式细胞仪,Annexin V-PI双标法等多项方法,体外研究伊立替康联合氟尿嘧啶对人大肠癌LOVO细胞生长抑制和促凋亡作用。结果两药联合应用对大肠癌LOVO细胞株的抑制作用要明显强于单用一种药物,差异均具有显著性意义;24 h时流式细胞仪检测LOVO细胞的凋亡情况发现,单用伊立替康、单用5-FU和联合用药均较对照组显著升高（P〈0.01）。结论伊立替康联合氟尿嘧啶对大肠癌LOVO细胞株生长的抑制作用具有协同或者相加作用,并有促凋亡效应。