阿斯匹林抑制白血病细胞增殖的实验研究

目的以人急性髓细胞性白血病细胞系HL-60为模型,研究非甾体类抗炎药阿斯匹林(ASA)对HL-60细胞生长的影响.方法利用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,并分析剂量反应曲线;通过流式细胞仪(FCM)了解其对细胞周期的影响.结果(1)ASA在浓度为(2.5～10.0)mmol/L作用72h后,HL-60细胞增殖抑制随浓度增加而增加,其IC 50值为8.97mmol/L;并且2.5mmol/L ASA与100μg/ml Ara-c有协同作用;(2)ASA处理后HL-60细胞G0/G1期细胞减少,S期细胞增多.结论结果提示一定浓度ASA在体外能抑制HL-60细胞增殖,抑制率与ASA剂量相关;ASA抑制HL-60细胞增殖可能与其干扰细胞周期有关.     

白藜芦醇诱导HL-60细胞凋亡机制的实验研究

背景与目的:探讨白藜芦醇(resveratml,Res)诱导人早幼粒白血病HL60细胞凋亡的机制.材料与方法:用不同浓度Res作用HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞的形态学变化,MTY法检测Res对HL-60细胞增殖的抑制作用,确定Res作用于HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50).Western blot法检测Res作用HL-60后Caspase-3活性的变化及GADD45a、Annexin A1、Bcl-2/Bax、Cleaved-Caspase 3表达的变化.结果:Res处理后,HL-60细胞体积变小,细胞的折光性减弱,细胞内出现颗粒样物质,且随着Res浓度的增加上述形态变化增强.12.5～200 μmol/L浓度的Res可明显抑制HL-60细胞的增殖,具有时间和剂量依赖性(P<0.05),24 h的IC50为75.64 μmol/L.Res处理后,HL-60细胞Caspase-3活性增强,12 h达高峰,24 h开始下降;细胞的Annexin A1、GADD45α、Bax、Cleaved-Caspase 3蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量下降,Bcl-2/Bax比值下降.结论:Res抑制HL-60细胞增殖,并通过依赖Caspase-3途径诱导HL-60细胞凋亡,GADD45α、Annexin A1参与了凋亡过程.     

化疗药物与STI571联合应用对bcr-abl和mdrl共同阳性白血病细胞的抑制作用

目的 研究治疗bcr-abl和mdrl共同阳性的白血病的新方法。方法：采用MTT法检测酪氨酸激酶抑制剂STI571(1μmol／L)分别与浓度为10^(-4)、10^(-5)、10^(-6)、10^(-7)、10^(-8)mol／L的长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)及DNR 阿糖胞苷(Ara-C)(浓度为1 mmol／L)联合应用对bcr-abl和mdrl共同阳性的裸鼠高致瘤性人白血病细胞系K562-n／VCR的作用。结果：不同浓度的VCR单独应用及与STI571联合应用IC50分别为127．28μmol／L、1．37μmol／L，协同倍数为93．04倍；不同浓度的DNR单独应用及与STI571联合应用IC50。分别为6.96μmol／L、0．30μmol／L，协同倍数为23．25倍；不同浓度的HHT单独应用及与STI571联合应用IC50分别为156．70μmol／L、7．916μmol／L，协同倍数为19．80倍；不同浓度的DNR Ara-C单独应用及与STl571联合应用IC50。分别为0．10μmol／L、0．015μmol／L，协同倍数为464倍，化疗药物与STI571联合应用细胞毒作用明显增强：结论：化疗药物VCR、DNR、DNR Am-C与STl571等联合应用对于bcr-abl与mdrl共同阳性的白血病细胞较单独应用有更强的抑制作用。     

维甲酸和甘草酸联合对人肺癌细胞增殖和侵袭抑制作用的研究

目的　探讨全反式维甲酸和甘草酸单独及联合作用对高转移人肺癌细胞 (PGCL3 )增殖和侵袭的抑制作用。方法　用维甲酸和甘草酸处理PGCL3细胞 ,通过细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、侵袭、运动和黏附试验、以及组织蛋白酶B活性的测定 ,观察PGCL3细胞增殖和侵袭能力的变化。结果　维甲酸和甘草酸可减弱PGCL3细胞增殖能力 ,并呈剂量依赖性 ,半抑制浓度IC50 分别为 12 .6μmol/L和 1.8mmol/L。 2 .5 μmol/L和 5 .0 μmol/L维甲酸、0 .5mmol/L和 1.0mmol/L甘草酸能抑制PGCL3细胞的侵袭能力 (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,且有剂量依赖性。 5 .0 μmol/L维甲酸和 0 .5mmol/L甘草酸联合作用对PGCL3细胞的侵袭抑制率高于两药单独作用之和 ,呈协同作用。上述浓度甘草酸对细胞的运动、黏附、组织蛋白酶B分泌和软琼脂集落形成率均有显著抑制作用 (P <0 .0 1)。结论　维甲酸和甘草酸对PGCL3细胞的增殖和侵袭有抑制作用 ,两药有协同作用 ,甘草酸抗侵袭机理不是对侵袭的某一环节的阻断 ,而是对侵袭各个基本环节都有抑制作用     

PARP抑制剂olaparib对急性髓系白血病细胞HL-60抑制作用研究

目的 研究PARP抑制剂olaparib对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的抑制作用。方法 对数生长期HL-60细胞经不同浓度(0、1.25、2.5、5、10 μmol/L)olaparib作用不同时间后,CCK-8法检测olaparib对HL-60细胞的增殖抑制作用;Annexin-V/PI双标法检测HL-60细胞凋亡水平,Western blot检测HL-60细胞内相关信号蛋白(PARP-1、Caspase-3)表达变化。结果 与对照组相比,经不同浓度(1.25、2.5、5、10 μmol/L)olaparib作用48 h后的HL-60细胞出现增殖抑制,并且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增加;同时发现olaparib诱导HL-60细胞发生凋亡,并显示出剂量依赖效应;Western blot结果显示,olaparib处理后的HL-60细胞内PARP活性受到抑制,Caspase-3活化。结论 PARP抑制剂olaparib对HL-60细胞不仅具有增殖抑制作用,同时可通过激活Caspase-3,抑制PARP活性,诱导HL-60细胞凋亡。     

苯丙氨酸解氨酶脂质体的制备及其抗白血病细胞增殖作用的初探

 目的　探讨苯丙氨酸解氨酶 (PAL)脂质体对小鼠白血病L12 10 细胞和人白血病K562 细胞生长的抑制作用。方法　采用改良的逆相蒸发法制备出PAL脂质体 ,应用MTT还原法分别检测PAL脂质体和游离的PAL对L12 10 和K562 细胞增殖的作用。结果　在酶活性相同条件下 ,PAL脂质体比游离PAL有较强的抑制细胞增殖作用 ,对K562 细胞作用 4 8h ,IC50 分别为 0 .90 5U/ml和 1.14 0U/ml,对L12 10 细胞作用 4 8h ,IC50 分别为 0 .95 8U/ml和 1.5 13U/ml。结论　PAL脂质体能抑制L12 10 和K562 白血病细胞增殖 ,并呈时间和剂量依赖关系 (P <0 .0 1)。     

姜黄素对急性早幼粒白血病细胞增殖分化及cofilin表达的影响

目的 探讨姜黄素对急性早幼粒白血病HL-60细胞(以下简称“HL-60细胞”)增殖、分化及丝切蛋白(cofilin)表达的影响.方法 以不同浓度(6.25 μmol/L、12.5 μmol/L、25 μmol/L)姜黄素作用于HL-60细胞,同时设立空白对照组.作用24 h后,采用MTT法检测姜黄素对细胞增殖能力的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期变化,双向电泳与质谱分析检测cofilin蛋白表达.结果 不同浓度姜黄素作用24 h后,空白对照组细胞生长抑制率为0,6.25 μmol/L组、12.5 μmol/L组和25 μmol/L组分别为(6.46±0.73)％、(9.79±1.36)％和(79.48±7.99)％,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),且随药物浓度递增,抑制作用逐渐增强,呈浓度依赖性(P＜0.05);倒置相差显微镜观察可见典型细胞生长阻滞的形态改变;流式细胞仪检测发现当姜黄素浓度为12.5 μmol/L时,细胞阻滞在G2/M期;双向电泳与质谱分析发现姜黄素可下调HL-60细胞cofilin的表达.结论 姜黄素可在体外抑制急性早幼粒白血病HL-60细胞增殖,具有浓度依赖性,且在一定血药浓度时可使细胞周期发生阻滞,从而阻滞细胞分化,其作用机制可能与姜黄素下调细胞内cofilin的表达有关.     

羟基磷灰石纳米粒子对HL—60细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子对HL-60细胞的生长抑制作用。方法：采用体外细胞培养和四甲基氮唑蓝(MTT)测定等方法。将不同浓度的HAP纳米粒子(0．001～0．02)mg／mL分别加入HL-60细胞培养液中，置37℃、5％CO2培养48h。结果：1)不同浓度HAP对HL-60细胞增殖均可产生影响，在倒置显微镜下，可见全部测定孔细胞增殖均较对照孔低下，且呈明显量效关系。2)不同浓度HAP对HL-60细胞生长抑制率呈明显正相关性，在浓度为1．0、5．0、10．0、15．0、20．0时，抑制率相应为16．80、39．20、53．60、64．20、75．00。结论：HAP纳米粒子明显抑制HL-60细胞生长，具有细胞毒和基因毒作用。HAP纳米粒子对白血病及肿瘤的治疗将具有良好的开发应用前景。     

木香烃内酯通过p38-MAPK通路影响慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞对多柔比星敏感性的研究

目的探讨木香烃内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/ADR多柔比星敏感性的影响及其机制。方法取对数生长期K562/ADR细胞,分别以不同浓度木香烃内酯、多柔比星以及两药联合作用72 h,CCK-8法检测细胞增殖情况,计算细胞增殖率,获得两药半数抑制浓度(IC50)。以10μmol/L木香烃内酯、10μmol/L多柔比星及两药联合作用于K562/ADR细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测p38-MAPK通路相关蛋白的表达水平。结果木香烃内酯与多柔比星联用组细胞增殖率均低于相应浓度两药单用组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多柔比星对K562/ADR细胞的IC50为(13.50±0.86)μmol/L,木香烃内酯为(7.30±0.55)μmol/L,差异有统计学意义(t=7.044,P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,10μmol/L木香烃内酯和10μmol/L多柔比星联用组K562/ADR细胞凋亡率均高于空白对照组、木香烃内酯单用组以及多柔比星单用组[(19.68±3.21)%比(2.96±0.87)%、(9.34±2.89)%、(9.18±2.13)%],差异均有统计学意义(均P<0.01)。与10μmol/L木香烃内酯单用组和10μmol/L多柔比星单用组相比,两药联用组凋亡抑制蛋白bcl-2表达下调,bad、p-p38、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白的表达水平上调。结论木香烃内酯可增强多柔比星对慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞增殖的抑制作用,促进多柔比星诱导细胞凋亡,其可能通过调控p38-MAPK通路逆转K562/ADR细胞的耐药性。     

STI571与三氧化二砷对多药耐药bcr-abl阳性白血病细胞的协同抑制作用

目的　研究酪氨酸激酶抑制剂STI5 71与三氧化二砷 (As2 O3 )联合应用对多药耐药bcr abl阳性白血病细胞的协同效应。方法　采用MTT法比较STI5 71单独或与不同浓度的As2 O3 联合应用对bcr abl和mdr1共同阳性的白血病细胞系K5 6 2 n/VCR的抑制作用。结果　 1μmol/L的STI5 71对K5 6 2 n/VCR细胞无明显细胞毒作用 ,与 10 -5,10 -6,10 -7,10 -8mol/L的As2 O3 联合应用 ,细胞毒作用明显增强。As2 O3 单独对K5 6 2 n/VCR细胞的IC50 为 1.879μmol/L ,加STI5 71后 ,IC50 为 0 .15 5 μmol/L ,协同抑制作用为 12 .12倍。结论　STI5 71与As2 O3 联合应用对于bcr abl与mdr1共同阳性的白血病细胞有更强的抑制作用     

Effect of homoharringtonine on proliferation and differentiation of human leukemic cells in vitro

Homoharringtonine (HHT) is a cephalotaxine ester derived from an evergreen tree of southern China. We studied the effect of HHT on the clonal proliferation and differentiation of human leukemic cells from cell lines and patients. Dose-response studies found that HHT inhibited colony formation of myeloid cell lines (50% inhibitory dose range, 7 to 12 ng/ml), lymphocytic cell lines (50% inhibitory dose range, 4 to 7 ng/ml), and fresh leukemic cells (50% inhibitory dose range, 2 to 25 ng/ml). Pulse-exposure studies showed that colony formation of HL-60 cells was inhibited 50% by HHT (10 to 20 ng/ml) at 45 h and completely inhibited at 72 h. Radioactive precursor studies using HL-60 cells showed that HHT predominantly inhibited protein synthesis as compared with RNA and DNA synthesis. Taking advantage of this, we have found that the combination of HHT with 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine (inhibitor of DNA synthesis) was synergistic in the inhibition of HL-60 clonal growth. HHT (2 to 20 ng/ml) also was found to induce up to 28% of HL-60 cells to differentiate toward macrophage-like cells.     

多西苯醌联合塞莱昔布对结肠癌细胞转移作用的研究

目的对比研究单独及联合应用参与花生四烯酸代谢的环氧合酶-2（COX-2）及5-脂氧合酶（5-LOX）抑制剂塞来昔布与多西苯醌（AA861）代谢途径对结肠癌细胞转移的抑制作用。方法体外分组培养具有高转移能力的人类结肠癌HT-29细胞,药物分别作用48h后,采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测AA861及塞来昔布对结肠癌细胞增殖的影响,Transwell法检测不同药物分组对结肠癌HT-29细胞迁移能力的影响,免疫荧光染色法检测细胞内细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白的变化,反转录-聚合酶链（RT-PCR）法检测细胞内ICAM-1及血管内皮生长因子（VEGF）基因表达变化。结果AA861与塞来昔布单独应用都能以时间浓度依赖性抑制结肠癌细胞增殖与迁移,其中AA861与塞莱昔布100μmol／L分别单独应用时对结肠癌细胞增殖的抑制率分别为43．2％、42．8％,两者100μmol／L联合应用时对结肠癌细胞增殖的抑制率为53．8％,与分别单独应用时比较差异有统计学意义（均P〈0．001）;AA861与塞莱昔布100μmol／L分别单独应用时对结肠癌细胞迁移的抑制率为32．0％、29．3％,两者100μmol／L联合应用时对结肠癌细胞增殖的抑制率为57．8％,与分别单独应用时比较差异有统计学意义（均P〈0．001）。免疫荧光染色及RT-PCR提示两种药物都能抑制结肠癌细胞内VEGF与ICAM-1蛋白及基因表达,小剂量联合应用都能抑制结肠癌细胞内VEGF与ICAM-1蛋白及基因表达,且两者联合应用比单独应用抑制作用强（P〈0．001）。结论小剂量塞来昔布及AA861联合应用能以协同作用抑制结肠癌细胞的增殖与迁移,其机制可能与抑制细胞内肿瘤转移相关因子VEGF及ICAM-1表达有关。     

冬凌草甲素联合丙戊酸钠对HL-60细胞的生长抑制和诱导凋亡作用研究

目的 研究中药单体冬凌草甲素(ORI)联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)诱导急性早幼粒白血病细胞株HL-60凋亡,探讨其应用于临床的可行性.方法 在对数生长期的HL-60细胞中分别加入6～12 la,mol/L的ORI和0.5~1 mmol/L的VPA,采用细胞计数法测定ORI和VPA单独和联合应用时对细胞的...     

黄芩苷作用HL-60细胞前后c-myc基因表达的变化

 目的 研究中药黄芩苷（baicalin）对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增生、凋亡的影响及探讨c-myc基因在其中的作用。方法 培养人髓系白血病细胞株HL-60细胞,应用MTT法绘制细胞生长曲线观察黄芩苷对HL-60细胞增生的影响;DNA凝胶电泳观察细胞凋亡;RT-PCR检测黄芩苷作用前后c-myc基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测黄芩苷作用前后c-myc蛋白表达水平的变化。结果　细胞生长曲线结果示黄芩苷能明显抑制HL-60细胞增生,半数抑制浓度（IC50）约为20μmol／L,DNA 片段化的检出表明黄芩苷能有效诱导HL-60细胞凋亡;黄芩苷作用后HL-60细胞c-myc基因和蛋白的表达水平均下降,并且随作用时间延长,表达下降更明显。结论 黄芩苷能有效抑制HL-60细胞增生,诱导其凋亡,c-myc基因可能参与了黄芩苷抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡的过程。     

Granulocyte colony-stimulating factor, not granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, co-operates with retinoic acid on the induction of functional N-formyl-methionyl-phenylalanine receptors in HL-60 cells.

The interaction of colony-stimulating factors (CSF) and retinoic acid (RA) in the proliferation and differentiation of HL-60 cells was examined. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) stimulated the proliferation of HL-60 cells in a dose-dependent manner at concentrations of 0.01-100 ng/ml; however, the proliferation due to GM-CSF was suppressed by 100 nM RA. Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) slightly stimulated the proliferation of HL-60 cells at concentrations above 10 ng/ml. Neither G-CSF nor GM-CSF alone induced 12-o-tetra-decanoyl-phorbol-13-acetate (TPA)- or N-formyl-methionyl-phenylalanine (FMLP)-stimulated nitro-blue tetrazolium (NBT) reduction at concentrations of 0.01-100 ng/ml. G-CSF induced TPA- and FMLP-stimulated NBT reduction in the presence of 100 nM RA, but GM-CSF induced only TPA-stimulated NBT reduction. RA in addition to G-CSF synergistically increased FMLP binding to HL-60 cells, accompanied by increased NBT reduction in response to FMLP. RA in addition to GM-CSF markedly increased FMLP binding to HL-60 cells more than that induced by RA alone, but the combined treatment with RA and GM-CSF did not increase FMLP-stimulated NBT reduction more than that induced by RA alone. The results suggest that G-CSF stimulates RA-induced morphological and functional differentiation of HL-60 cells, but the differentiation-enhancing effects of GM-CSF are limited, whereas the growth-stimulating effect of GM-CSF on HL-60 cells is greater than that of G-CSF.     

沙利度胺、5-氟尿嘧啶对胃癌细胞生长和凋亡作用的影响

 目的　探讨沙利度胺（Thal）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）单用和联合应用对MGC-803细胞株的抑制增生、诱导凋亡的作用。方法　采用 AO／EB染色荧光显微镜观察处理细胞的形态变化,MTT法检测对细胞的增生抑制作用,流式细胞术（FAM）定量检测对细胞的诱导凋亡作用。结果　在MTT分析中,单药Thal药物浓度≥25 mg／L、5-Fu单药各浓度组与空白对照组相比均可增加对MGC-803细胞的增生抑制率（P＜0.05）。在5-Fu剂量为25 mg／L时,联合用药组的增生抑制率增加更显著（P＜0.01）,但两个联合用药组之间差异无统计学意义（P＞0.05）;在5-Fu剂量均为12.5 mg／L时,联合使用沙利度胺50 mg／L或100 mg／L时与5-Fu 25 mg／L单药组相比差异均无统计学意义（P＞0.05）。而在FAM检测中,各实验组与空白对照组相比及各实验组两两比较,凋亡率差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论　Thal和5-Fu单用时对MGC-803细胞株均有抑制增生和诱导凋亡作用,联合应用时其作用明显增强,联合使用沙利度胺时可降低5-Fu的使用剂量。     

植物黄酮抗人白血病HL-60细胞增殖的结构-效应关系

背景与目的:植物黄酮为植物多酚化合物,广泛存在于植物性膳食与草药中,其多项有益人体的生物活性已经被研究证实,本研究观察比较23种植物黄酮对人白血病HL-60细胞株增殖的影响,并分析其结构-效应关系.方法:选用纯度单一、结构明确的23种植物黄酮,分别作用于HL-60细胞,MTT法检测细胞增殖抑制状况,计算半数抑制浓度(IC50),比较不同植物黄酮抑制能力的强弱,分析特定结构元件对IC50的影响.结果:23种植物黄酮中21种对HL-60细胞具有显著增殖抑制作用,并呈现浓度依赖性趋势,但不同植物黄酮作用差异很大,印棉黄素和桑黄素显示出显著促进作用.抑制效应强弱依次为:3,6-二羟基黄酮＞毛地黄黄酮＞3'-甲氧基,3,7,4'-三羟基黄酮＞2'-羟基二氢黄酮＞5,7,4'-三羟基黄酮＞3,7-二羟基黄酮＞杨梅黄酮＞漆树黄酮＞黄芩黄酮＞槲皮素＞二氢黄酮＞白杨黄素＞高良姜黄素＞4'-羟基二氢黄酮＞6-羟基黄酮＞染料木黄酮＞黄酮＞7-羟基黄酮＞大豆黄素＞橙皮素＞柚皮素.构效关系分析显示,C环2,3位双键、一定数目的羟基、3位羟基、B环邻位羟基、B环定位于2位,对于植物黄酮抗HL-60细胞增殖效应的发挥可能是至关重要的,是其中的关键结构效应元件.相反,C环2,3位双键的缺失、羟基数目的过少或过多、5位羟基、7位羟基、B环间位羟基及异黄酮结构则会降低其抑制效应.结论:C环2,3位双键、一定数目的羟基、3位羟基、B环邻位羟基、B环定位于2位可能是植物黄酮抗HL-60细胞增殖的关键结构效应元件.     

环氧合酶-2抑制剂对白血病细胞HL-60的化疗增敏作用及机制

 目的　观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60的化疗增敏作用,并对其机制进行初步探讨。方法　MTT法评估塞来昔布、多柔比星及二者联合对HL-60细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的表达;Western blotting检测Survivin蛋白的表达。结果　多柔比星联合塞来昔布5和10 μmol／L对HL-60细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0.25及0.16 μg／ml,明显低于多柔比星单用的IC50（0.48 μg／ml）;多柔比星0.10 μg／ml联合10 μmol／L塞来昔布下调Survivin基因mRNA及蛋白的表达;联合塞来昔布5和10 μmol／L的凋亡率[分别为（13.07±1.66）%及（22.36±1.84）%]较多柔比星0.10 μg／ml单用[（5.72±1.25）%]明显增加（P＜0.01）。结论　COX-2抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60具有明显的化疗增敏作用,其初步机制涉及下调Survivin的表达,增加细胞凋亡。