新发现的获得性金属β-内酰胺酶GIM-1和SIM-1

金属β-内酰胺酶(简称金属酶,MBL),水解底物广泛,但相对其他β-内酰胺酶是研究较少的一类酶.由于碳青霉烯类抗生素的广泛应用,使一些沉默的金属酶被激活,产酶菌株增多,一些新的金属酶基因不断被发现,尤其是由整合子介导的金属酶基因的存在使得临床治疗失败.将从新的金属酶基因的发现与传播、酶动力学参数及分子生物学特点等几方面,对新发现的获得性金属酶GIM-1和SIM-1作一综述.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因blaIMP-1、blaVIM的检测

金属酶是一种含金属的β-内酰胺酶，能水解包括碳青酶烯抗生素在内的绝大多数β-内酰胺类抗生素，也是碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制之一。铜绿假单胞菌所产生的金属酶主要为获得性金属酶，分为两类：一类为IMP型金属酶，分为IMP-1-8型，以IMP-1型常见；一类为VIM型金属酶分为VIM-1-3型，各型问具有高度同源性。了解我市铜绿假单胞菌产酶情况。将有助于抗生素的合理使用及对耐药铜绿假单孢菌的流行进行有效的控制。     

产金属β-内酰胺酶的鲍氏不动杆菌在我国内地出现

获得性金属p内酰胺酶(金属酶)已经在全球出现．并且能导致对几乎所有p一内酰胺类抗生素耐药。近来，金属酶已经在我国的铜绿假单胞菌和杨氏柠檬酸菌中发现．但尚未在鲍氏不动杆菌中发现。2002和2003年．从四川大学华西医院的临床标本中分离出一些亚胺培南耐药或头孢他啶高度耐药的鲍氏不动杆菌菌株。通过亚胺培南联合亚胺培南一EDTA一邻二氮菲或头孢他啶联合头孢他啶一EDTA一邻二氮菲的琼脂稀释法，检测出12株不重复的鲍氏不动杆菌产金属酶。这些产金属酶的菌株主要分离自机械通气相关性肺炎患者的痰标本。PCR扩增IMP一4和VIM一2的编码基因无阳性结果。说明这些菌株所产的金属酶并非IMP一4、VTh^一9VTM—t壬兀VTh^一R持且首汗在弛同内*he硐古声A属酸的袖阵不；斗f饵苗     

金属β-内酰胺酶——抗感染治疗面临的新挑战

碳青霉烯类抗生素是当今抗菌谱最广、治疗产β－内酰胺酶革兰氏阴性杆菌感染疗效最好的β－内酰胺类抗生素。某些细菌产生的金属β－内酰胺酶（metallo-β-lactamase，简称金属酶）能水解碳青霉烯，导致产酶菌的耐药谱增宽，已引起临床重视。其中由染色体编码的金属酶多分布于临床较少见的细菌中；而获得性金属酶不仅可分布于铜绿假单胞菌和肠杆菌科细菌中，还能够通过质粒、整合子等水平扩散，大大增强了播散的能力及对临床的威胁程度。     

一种新的获得性金属β-内酰胺酶SPM-1

由于金属酶对碳青霉烯类抗生素的高效水解及缺乏有效的抑制剂,已成为临床抗感染治疗很棘手的问题。而由位于质粒上的基因编码的金属酶(称获得性金属酶)对抗感染治疗的威胁更大。本文对一种新的获得性金属酶SPM-1的发现与传播及其它获得性金属酶(IMP-1,VIM-1,VIM-2)的动力学参数比较及它的分子生物学特点进行简单的介绍。     

碳青霉烯类耐药大肠埃希菌耐药基因型检测及同源性分析

目的检测临床分离碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的耐药基因型,并对其同源性进行分析,研究其流行情况。方法收集铜陵市人民医院 2012年 9月至 2016年 10月临床分离碳青霉烯类耐药大肠埃希菌,采用 VITEK?2 Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定,改良 Hodge试验检测碳青霉烯酶表型, EDTA双纸片协同试验进行金属酶初筛,聚合酶链反应( PCR)检测碳青霉烯酶基因( blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM和 blaOXA?48)并对阳性扩增产物进行基因测序;同源性分析采用肠杆菌科基因间重复一致序列聚合酶链反应技术( ERIC?PCR)。结果共收,集碳青霉烯类耐药大肠埃希菌 25株, 8株改良 Hodge试验阳性, 13株金属酶初筛试验阳性,其中 4株携带 blaNDM?1基因, 1株携带 blaIMP?4基因, 1株携带 blaKPC?2基因; ERIC?PCR检测分为 10种型别。结论碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的耐药机制主要是产金属酶,携带 NDM?1型碳青霉烯酶大肠埃希菌需重点监测;碳青霉烯类耐药大肠埃希菌未在医院引起克隆流行。     

耐碳青霉烯类抗菌药物产气肠杆菌中发现金属酶IMP-4型

摘要目的对1株临床分离的的高水平耐碳青霉烯类抗菌药物产气肠杆菌进行金属酶检测,了解其耐药机制。方法采用纸片扩散法和E-test法检测耐药性,改良Hodge实验和金属酶实验检测产酶的类型,聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因并进行测序,采用转移接合实验对基因阳性的菌株进行转移接合。结果产气肠杆菌的改良Hodge实验阳性,金属酶（IMP）实验阳性,IMP和CTX-M、IntⅠ基因扩增阳性,经测序证为IMP-4和CTX-M15,膜孔蛋白基因阴性。结论耐碳青霉烯类抗菌药物产气肠杆菌的耐药机制是产IMP 4和CTX M 15,同时存在外膜蛋白的缺失。     

临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因blaIMP-1、blaVIM的PCR检测

目的：研究与产生金属酶相关的绿脓杆菌耐亚胺培南的耐药机制。方法：建立检测绿脓杆菌编码金属酶的基因balIMP-1和blaVIM的PCR方法，探讨临床分离的18株耐亚胺培南的绿脓杆菌中产生金属酶与耐药的关系。结果：1株菌blaIMP-1扩增阳性，6株菌blaVIM扩增阳性，11株菌blaIMP-1和blaVIM扩增均阴性。结论：产生金属酶是绿脓杆菌对亚胺培南耐药的重要机制之一。     

碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌IMP型金属β-内酰胺酶研究

目的:探讨肺炎克雷伯菌产金属酶的临床分离情况并对产金属酶菌株进行耐药性分析,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集2009年1月—2009年10月天津医科大学总医院142株临床分离肺炎克雷伯菌,通过改良Hodge试验、改良三维试验检测其碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验检测金属酶,PCR法扩增金属酶基因,用纸片法和VITEK2-Compact全自动微生物分析仪进行药物敏感性试验。结果:142株肺炎克雷伯菌中,通过改良Hodge试验、改良三维试验检测出2株产碳青霉烯酶菌株,这2株菌通过EDTA协同试验检测为阳性,提示这2株菌产金属酶经PCR证实为产IMP型金属酶,MIC方法显示2株产金属酶的菌株对氨曲南敏感,而对青霉素类、头孢菌素类耐药,κ-B法检测显示碳青霉烯类抗菌药物耐药。结论:天津地区已出现产金属酶肺炎克雷伯菌,该酶是引起肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。     

多重耐药不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因及Ⅰ类整合子

了解安徽省多重耐药不动杆菌碳青霉烯类耐药的机制.方法 收集安徽省多家医院2006～2007年临床分离非重复的不动杆菌共167株,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MICs),用聚合酶链反应(PCR)扩增和克隆测序方法确认碳青霉烯酶基因,用PCR扩增整合酶.结果 34株对包括碳青霉烯类抗菌素在内的多种抗菌药耐药,34株中19株产OXA-23型碳青霉烯酶基因、23株Ⅰ类整合酶阳性,未检测到OXA-24型酶,IMP、VIM、SIM型金属酶基因和Ⅱ,Ⅲ整合酶基因.发现2株新基因取得登录号FJ194460;FJl94494.23株Ⅰ整合酶阳性菌株有21株测出Ⅰ类整合子基因结构.结论 安徽省多重耐药不动杆菌的耐药性与其携带OXA-23型酶和Ⅰ类整合子有关.     

耐亚胺培南铜绿假单胞茵的耐药机制研究

目的 对临床分离的14株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制进行研究.方法药敏试验检测对15种常用抗菌药物的耐药情况;协同试验筛选产金属酶菌株和聚合酶链反应检测金属酶基因及oprD基因;氰氯苯腙检测主动外排情况及其对亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)的影响.结果耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对其它常用抗菌药物耐药率也很高,其中,5株产VIM-2型金属酶,11株oprD基因检测阴性.2株在有氰氯苯腙存在时对亚胺培南的MIC降低至原值的1/4,表明这2株有主动外排系统参与对亚胺培南的耐药.结论 OprD2蛋白表达缺失是本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,其次为产VIM-2型金属酶和主动外排系统,且至少有4株存在两种以上耐亚胺培南的机制.     

碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌IMP型金属β-内酞胺酶研究

目的:探讨肺炎克雷伯菌产金属酶的临床分离情况并对产金属酶菌株进行耐药性分析,为临床合理选用抗菌药物提供依据.方法:收集2009年1月-2009年10月天津医科大学总医院142株临床分离肺炎克雷伯菌,通过改良Hodge试验、改良三维试验检测其碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验检测金属酶,PCR法扩增金属酶基因,用纸片法和VITEK2-Compact全自动微生物分析仪进行药物敏感性试验.结果:142株肺炎克雷伯菌中,通过改良Hodge试验、改良三维试验检测出2株产碳青霉烯酶菌株,这2株菌通过EDTA协同试验检测为阳性,提示这2株菌产金属酶经PCR证实为产IMP型金属酶,MIC方法显示2株产金属酶的菌株对氨曲南敏感,而对青霉素类、头孢菌素类耐药,k-B法检测显示碳青霉烯类抗菌药物耐药.结论:天津地区已出现产金属酶肺炎克雷伯菌,该酶是引起肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因.     

赣南地区耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌耐药基因检测结果及其对药物的耐药性分析

目的:探究和分析赣南地区耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌耐药的基因检测结果及其对抗菌药物的耐药性。方法:抽取2017年8月—2018年8月间赣南地区4所综合性医院中分离出的耐碳青霉烯类药物的铜绿假单胞菌80株,同时应用K-B法对80株耐碳青霉烯类药物的铜绿假单胞菌开展药敏试验,并应用PCR法对耐碳青霉烯类药物的铜绿假单胞菌耐药的基因检测,分析其基因检测结果及其对抗菌药物的耐药性。结果:80株耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌菌株中,69株检出携带碳青霉烯酶基因,其检出率为86.25%,其中NMD型17株占24.64%,IMP型31株占44.93%,KPC型9株占13.04%,VIM型12株占17.39%;另有NMD型合并IMP型1株(1.25%);80株中膜孔蛋白基因OprD2全部缺失;除69株检出携带碳青霉烯酶基因外,其余11株均未检出SPM型金属酶、GIM型金属酶。结论:产碳青霉烯酶在铜绿假单胞菌碳青霉烯类耐药中具有重要意义,NMD酶、IMP酶、KPC酶、VIM酶基因为赣南地区碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌耐药的主要基因类型。     

临床分离产金属酶铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的研究临床分离耐亚胺培南(IPM)铜绿假单胞菌的产金属酶的检测方法及耐药特征。方法收集我院临床分离的40株耐IPM铜绿假单胞菌作为研究对象,采用EDTA纸片复合法、E-test法和PCR法分别检测产金属酶菌株,用微量肉汤稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果 40株耐IPM铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选9株产金属酶菌株;E-test法筛选6株产金属酶菌株;PCR法仅检测到1株blaIMP-1和3株blaVIM-2耐药基因。产金属酶菌株呈多重耐药,对头孢他啶、亚胺培南大多数表现为高水平耐药;阿米卡星抗菌活性最好,其次为环丙沙星。结论目前从临床分离的产金属酶铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。     

临床分离产金属酶铜绿假单胞菌的耐药生分析

目的 研究临床分离耐亚胺培南(IPM)铜绿假单胞菌的产金属酶的检测方法及耐药特征.方法 收集我院临床分离的40株耐IPM铜绿假单胞菌作为研究对象,采用EDTA纸片复合法、E-test法和PCR法分别检测产金属酶菌株,用微量肉汤稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC).结果 40株耐IPM铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选9株产金属酶菌株;E-test法筛选6株产金属酶菌株;PCR法仅检测到1株bhIMP-1和3株bhVIM-2耐药基因.产金属酶菌株呈多重耐药,对头孢他啶、亚胺培南大多数表现为高水平耐药;阿米卡星抗菌活性最好,其次为环丙沙星.结论 目前从临床分离的产金属酶铜绿假单胞菌多重耐药现象严重.     

变异选择窗口及防耐药变异浓度

细菌耐药问题越来越受到人们的关注，并没有很好的解决方法。细菌耐药分为天然耐药[固有耐药（intrinsic resistance）]和获得性耐药（acquired resistance），固有耐药是染色体基因决定、代代相传的天然耐药。如肠道阴性杆菌对青霉素天然耐药、绿脓杆菌对氨苄西林天然耐药等。获得性耐药是指细菌接触抗菌药物后，改变代谢途径。使自身对抗菌药物具有不被杀灭的抵抗力。因此，如果能很好地阻止获得性耐药菌的形成，抑制其突变菌的选择性富集，可以达到提高抗菌药物敏感性的目的。目前就该方面的研究很多，其中对变异选择窗口（mutant selection window，MSW）及防耐药变异浓度（mutant prevention concentration，MPC）的研究就是其中之一。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学及耐药机制

目的 研究碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌分子流行病学及对碳青霉烯类耐药机制。方法 KB法筛选对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌临床分离株24株,同时采用微量肉汤稀释法测定这些细菌的最低抑菌浓度,改良Hodge实验检测碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaIMI、blaSPM、blaNDMOXA-23、blaNDMOXA-24、blaNDMOXA-48和blaNDMOXA-58)。结果 药敏试验显示碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌具有多重耐药性。PCR扩增碳青霉烯酶基因,blaIMP阳性率为58.3%,经测序为IMP-4,其余均为阴性。结论 肺炎克雷伯菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要与产IMP-4金属酶有关。     

耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的表达情况

目的 检测临床分离的耐亚胺培南肺炎克雷伯菌临床分布、耐药情况及碳青霉烯酶的表达情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法 收集徐州3家三级医院微生物室培养出的非重复肺炎克雷伯菌,并根据药敏结果筛选对亚胺培南耐药的菌株,对耐药菌株采用改良Hodge实验检测碳青霉烯酶、IPM/EDTA组合纸片法检测金属酶表现型,采用PCR实验检测耐药菌株中blaKPC-2,blaCTX-M-15,blaVIM-1,blaIMP-4,blaNDM-1和blaOXA-48的表达情况。结果 共收集107株非重复肺炎克雷伯菌,其中26株耐亚胺培南,耐亚胺培南菌株均为多重耐药菌株,对常见抗菌药物均为耐药;表现型结果26株耐亚胺培南菌株有23株改良Hodge实验阳性,阳性率为88.5%;6株组合纸片法阳性,阳性率为23.1%;PCR扩增具有碳青霉烯酶活性的相关基因：26株均检测到KPC-2酶基因,25株检测到CTX-M-15酶基因,8株检测到IMP-4酶基因,1株检测到NDM-1酶基因,1株检测到VIM-1酶基因,暂未扩增出OXA-48酶基因。结论 本地区肺炎克雷伯菌耐亚胺培南形势严峻,产生β-内酰胺酶为其主要的耐药机制,KPC-2、CTX-M-15产生率较高,占主导地位,已经存在产NDM-1菌株,相关部门应注意预防其流行和传播。     

β-内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶的稳定性及酶动力学研究

目的通过比较9种β-内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶（金属酶）的稳定性及酶动力学参数，了解金属酶L1的酶学特性。方法制备金属酶L1的纯化产物，以紫外分光光度计测定9种β-内酰胺类抗生素对L1型金属酶的稳定性及酶动力学参数。结果重组L1酶水解青霉素及碳青霉烯类抗生素的能力接近，氨曲南及头孢他啶对L1酶高度稳定。结论L1酶的稳定性及动力学研究为指导临床合理应用抗生素提供了科学的理论依据。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌及其产金属酶的相关基因blaVIM-2研究

目的了解临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌(Imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,IPMRPa)及其耐药特征,探讨该菌产金属酶和相关基因blaVIM-2对抗菌药物耐药性的影响。方法收集3年临床分离铜绿假单胞菌,采用MIC法测定抗生素耐药性;用复合纸片法筛查IPMRPa产金属β-内酰胺酶的菌株;聚合酶链反应(PCR)法对金属酶相关基因(blaVIM-2)检测并测序确定。结果 1426株铜绿假单胞菌中IPMRPa为910株(63.8%),均为多重耐药;非IPMRPa的516株(36.2%)中仅有71株多重耐药,两者的多重耐药率比较有显著性差异(P<0.05)。在IPMRPa与非IPMRPa的耐药性比较中发现:除四环素外的其他测试抗生素耐药率均有显著差异(P<0.05)。910株IPMRPa中经复合纸片法检出产金属β-内酰胺酶168株,占18.6%(168/910);168株采用PCR扩增出135株(80.4%,135/168)携带有blaVIM-2型基因,扩增产物经序列分析均为VIM-2型。结论 IPMRPa多重耐药现象严重,VIM-2型金属酶基因型在产金属β-内酰胺酶的IPMRPa菌株中检出率高,但该基因并不是产金属酶的铜绿假单胞菌对本研究中12种测试抗菌药物耐药的主要原因。