重组人生长激素联合氟尿嘧啶体外干预人结肠癌细胞株增殖

目的:在体外环境下观察基因重组人生长激素(rhGH)及联合氟尿嘧啶(5-FU)干预不同细胞膜生长激素受体(GHR)表达水平对人结肠癌细胞的增殖情况。方法:采用免疫细胞化学法检测人结肠癌细胞株HCT-8和LOVO膜表面的GHR表达水平。每株细胞分为对照组、rhGH组、5-FU组和rhGH+5-FU组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、克隆形成实验和免疫细胞化学等方法,测定各组各株肿瘤细胞的抑制率、增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化。结果:HCT-8高表达GHR(阳性表达细胞数≥50%),LOVO未表达GHR。rhGH显著提高HCT-8细胞增殖和克隆形成率,PCNA表达增加,且联合化疗后,较LOVO组肿瘤抑制率减少(P0.05)。结论:在体外环境下,rhGH促GHR阳性表达的结肠癌细胞增殖,且对5-FU化疗有抵抗,对于不表达GHR的结肠癌细胞无上述作用。     

重组人生长激素对人结直肠癌细胞株放疗敏感性的影响

目的:观察重组人生长激素(rhGH) 是否会降低结直肠癌细胞株对放疗的敏感性,并探讨其与细胞凋亡以及DNA损伤修复的关系.方法:选择生长激素受体(GHR)阳性表达的HCT-8和阴性表达的LOVO细胞,各分为单纯放疗组、rhGH 放疗组、生长激素受体中和性抗体(GHRA) rhGH 放疗组.放疗剂量分别为2 Gy、4 Gy和8 Gy;rhGH浓度为100 ng/mL;GHRA浓度为0.2 μg/mL.应用克隆形成试验评估放疗敏感性,用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用彗星电泳法检测细胞DNA损伤.结果:经过rhGH干预的HCT-8细胞放疗后,其克隆形成率较单纯放疗组显著提高,在8 Gy放疗下尤为明显(52.1±2.9)% vs (21.0±2.7)%,P＜0.001.经GHRA预处理封闭GHR之后,这种作用消失.rhGH干预并不改变LOVO细胞接受放疗后的克隆形成率.rhGH干预显著减少了由放疗引起的HCT-8结直肠癌细胞的凋亡(2 Gy,P=0.042;4 Gy,P=0.013;8 Gy,P＜0.001 );经过中和性抗体预处理封闭GHR之后,这种作用消失.与空白对照相比,rhGH的干预使HCT-8细胞DNA初始受损的程度显著下降(Olive尾时刻21.53±2.88 vs 36.56±3.93,P=0.003),并在到达平台期后,其所处的水平与单纯放疗相比也明显下降(5.5±0.42 vs 9.07±0.84,P=0.012);在使用GHRA预处理封闭细胞表面GHR后,再加入rhGH,这种作用则消失.结论:rhGH降低GHR( )的HCT-8细胞对放疗的敏感性,GH与GHR结合,显著增强了GHR( )结直肠癌细胞对放疗诱导的DNA损伤的修复能力.     

生长激素联合氟尿嘧啶对生长激素受体不同表达胃癌细胞株的影响

目的: 研究重组人生长激素(rhGH)联合氟尿嘧啶(5-FU)在体外对生长激素受体(GHR) 不同表达状态人胃癌细胞株的影响. 方法: 选用GHR高表达的SGC-7901和GHR低表达的MKN-45胃癌细胞株.每种细胞株分为空白对照组、5-FU处理组、rhGH处理组和联合处理组.采用四基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术,分析不同浓度rhGH及其与5-FU合用,对人胃癌细胞株的生长抑制、凋亡、细胞周期和增殖指数(PI)等的影响. 结果: SGC-7901细胞株:与空白对照组比,各浓度rhGH组的生长率、G2/M期比例和PI显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与5-FU处理组比, 各浓度rhGH+5-FU组的G2/M期比例和PI显著升高,抑制率和细胞凋亡率显著降低(P<0.05).MKN-45细胞株:不同浓度rhGH对该细胞株的分裂增殖无明显影响(P>0.05).联合处理组与5-FU处理组间的细胞抑制率、凋亡率和PI也无显著性差异(P>0.05). 结论: rhGH在体外能促进高表达GHR的胃癌细胞增殖,减弱5-FU的抗癌作用,但对低表达GHR的胃癌细胞无明显影响,也不能明显干扰5-FU的抗癌作用.     

重组人生长激素联合5-氟尿嘧啶对表达或不表达生长激素受体人肝癌细胞的体外干预

目的研究重组人生长激素（rhGH）在体外对表达或不表达生长激素受体（GHR）的人肝癌细胞系的影响。方法采用免疫组织化学方法检测人肝癌细胞系的GHR表达。每种肿瘤细胞系分4组进行处理：未处理组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）处理组、rhGH处理组及5-Fu＋rhGH联合处理组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞术分析不同浓度rhGH及其与5-Fu合用对人肝癌细胞系的生长抑制、凋亡、细胞周期及增殖指数（PJ）等的影响。结果Bel-7402细胞表达GHR；与未处理组相比，各浓度rhGH组的生长率、G2／M期比例和PI显著升高，细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）；与5-Fu处理组相比，各浓度rhGH＋5-Fu组的G2／M期比例和PI显著升高，抑制率和细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）。SMMC7721不表达GHR；不同浓度rhGH对该细胞系的分裂增殖无明显影响（P均〉0．05）；rhGH＋5-Fu联合处理组与5-Fu处理组问的细胞抑制率、凋亡率及Pl差异也无显著性（P均〉0．05）。结论rhGH在体外能促进GHR^＋的肝癌细胞增殖，减弱5-Fu对GHR^＋细胞的抗癌作用，但对GHR^-的肝癌细胞无明显影响，也不能明显干扰5-Fu对GHR^-细胞的抗癌功能。     

重组人生长激素体外干预人肝癌细胞生长及受体表达

目的研究体外环境下重组人生长激素（rhGH）对生长激素受体（GHR）不同表达状态的人肝癌细胞株增殖、凋亡及其细胞膜表面GHR密度的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG-2、SMMC7721和QGY-7701,采用免疫细胞化学方法检测这3种肝癌细胞GHR的表达。每种肝癌细胞根据不同处理分为4组：未处理组、50ng／mlrhGH干预组、100ng／mlrhGH干预组、200ng／mlrhGH干预组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）荧光染色法、酶联免疫吸附法分析不同浓度rhGH对人肝癌细胞系的细胞生长、增殖、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）分泌等的影响。流式、放射性受体分析方法检测rhGH处理后细胞膜表面GHR表达情况。结果细胞株HepG-2高表达GHR;与未处理组相比,50、100、200ng／mlrhGH干预24h后生长率明显增高为：107．705％、114．181％、107．406％（P〈0．05）,48h后生长率明显增高为：109．594％、114．156％、109．292％（P〈0．05）;CFSE荧光强度明显减弱（P〈0．05）;50、100、200ng／mlrhGH干预组24h后下游蛋白IGF-1分别为（236．94±19．07）、（247．16±14．56）、（217．94±33．61）pg／ml,明显高于未处理组的（173．86±27．46）pg/ml（P〈0．05）;50、100、200ng／mlrhGH干预后,流式细胞术检测胞膜表面GHR表达情况,荧光强度较未处理组明显增加（P〈0．05）;放射性受体分析法检测50、100、200ng／mlrhGH干预后胞膜表面GHR位点数（10^3／细胞）分别为：8．44±0．24、9．40±0．51、8．33±0．31,明显多于空白对照组的7．51±0．54（P〈0．05）。细胞株SMMC7721弱表达GHR,细胞株QGY-7701未表达GHR,与未处理组比,rhGH干预组生长率、CFSE荧光强度、下游蛋白IGF-1、GHR表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论体外环境下,rhGH可以促进GHR高表达人肝癌细胞株HepG-2增殖,提高其IGF-1的表达量和增加其胞膜GHR密度;但不促进人肝癌细胞株QGY-7701、SMMC7721增殖,不能使其GHR表达状态发生改变。     

重组人生长激素促进肝癌血管新生的体外研究

目的: 观察重组人生长激素(rhGH)通过不同生长激素受体(GHR)表达的肝癌细胞株,对共培养的人脐静脉内皮细胞(ECV)增殖的影响. 方法:用免疫细胞化学方法筛选GHR阳性和阴性的细胞株,分别与ECV共培养.以不同浓度的rhGH(50和250 ng/mL、空白对照)进行干预.用流式细胞仪检测细胞周期比例,ELISA法测定肝癌细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)的浓度,描绘细胞生长曲线. 结果:Bel-7402(GHR阳性)在rhGH干预后分泌VEGF水平提高,与之共培养的ECV生长加速,细胞S期比例显著升高,呈现rhGH浓度依赖性(P<0.05).而SMMC-7721(GHR阴性)虽能促进ECV增殖,但不受rhGH影响,分泌的VEGF无变化(P>0.05). 结论:rhGH可诱导GHR( )肝癌细胞分泌VEGF,间接促进血管内皮细胞增殖.     

重组人生长激素对荷人胃癌裸鼠移植瘤血管内皮生长因子表达的影响

目的研究重组人生长激素（rhGH）对生长激素受体（GHR）不同表达状态裸鼠人胃癌移植瘤生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法采用免疫细胞化学染色法筛选出GHR阳性和阴性表达的细胞株各1株，分别接种于24只裸鼠皮下。将两种细胞接种裸鼠均随机分为对照组（0．9％NaCl，0．2ml／d）、低剂量rhGH组（0．5U·kg^-1·d^-1，0．2ml／d）和高剂量rhGH组（2．5U·kg^-1·d^-1，0．2mL／d）3组，每组8只，各组均连续给药14d，观察并记录裸鼠体重和肿瘤体积变化；采用酶联免疫吸附法测定各组裸鼠血清VEGF含量，免疫组织化学方法检测胃癌组织中VEGF蛋白表达，RT-PCR方法检测胃癌组织VEGFmRNA水平变化。结果筛选出GHR阳性表达的人胃癌细胞株SGC-7901和阴性表达的MKN-45。对于GHR^＋SGC-7901接种裸鼠，rhGH给药组皮下移植瘤体积较对照组增大（P〈0．05），且高剂量rhGH组促增长效应最为显著（P〈0．05），3组间体重差异无统计学意义（P〉0．05）；高剂量rhGH组的血清VEGF浓度为（252．94±15．32）ng／L，明显高于对照组的（49．94±5．73）ng／L和低剂量rhGH组的（167．60±9．54）ng／L（P〈0．05）；对照组VEGF表达为中度阳性，rhGH给药组呈强阳性；高剂量rhGH组肿瘤组织中VEGFmRNA相对表达量为0．6470±0．0447，明显高于对照组的0．3230±0．0258和低剂量rhGH组的0．4120±0．0351（P〈0．05）。对于GHR—MKN-45接种裸鼠，rhGH给药组体重明显大于对照组（P〈0．05）；肿瘤体积大小、血清VEGF水平、肿瘤组织VEGF蛋白及mRNA表达，3组间差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论rhGH能促进GHR阳性表达的SGC-7901移植瘤生长，并促进VEGF表达增高；对于GHR阴性的MKN-45移植瘤，则没有表现出明显的促肿瘤生长及促VEGF表达效应。GHR存在可能是rhGH影响VEGF分泌的关键靶点。     

重组人生长激素对裸鼠人胃癌移植瘤组织生长及Janus 激酶2-信号转导与转录激活因子3通路的影响

目的探讨重组人生长激素（rhGH）对荷人胃癌裸鼠移植瘤生长及Janus激酶2-信号转导与转录激活因子3通路相关的肿瘤血管生成因子的影响。方法采用免疫细胞化学染色法筛选出生长激素受体阳性（GHR^＋）和阴性（GHR^-）细胞株各1株,分别接种于裸鼠皮下,建立GHR不同表达状态胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,将裸鼠随机分为对照组、低剂量rhGH组和高剂量rhGH组,连续给药14d,观察并记录裸鼠体重及肿瘤体积的变化,RT-PCR、Western-bolt检测肿瘤血管生成因子mRNA及蛋白表达。结果SGC-7901细胞株GHR强阳性表达,MKN-45不表达GHR。SGC-7901接种裸鼠,低剂量rhGH组和高剂量rhGH组肿瘤体积[（1．141±0．234）和（2．106±0．260）cm^3]较对照组[（0．6124±0．156）cm^3]增大（P=0．034,P=0．001）,高剂量rhGH促增长效应最为显著（P=0．043）,各组间裸鼠体重差异无统计学意义;低剂量rhGH可促SGC-7901血管生成因子mRNA表达,GHR、Janus激酶2、信号转导与转录激活因子3、血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子1et（HIF-1α）、成纤维细胞生长因子和基质金属蛋白酶2（MMP-2）的P值分别为：0．001、0．011、0．042、0．045、0．040、0．002和0．003,但高剂量组未增加;低剂量rhGH组血管生成因子的蛋白表达水平明显升高,。磷酸化信号转导与转录激活因子3、信号转导与转录激活因子3、VEGF、HIF-lα和MMP-2的P值分别为：0．015、0．003、0,010．0,008和0．005,高剂量组VEGF、HIF-lα和MMP-2较低剂量组表达增加（P=0．012,P=0．025,P=0．046）。MKN-45接种裸鼠,低剂量rhGH组和高剂量rhGH组裸鼠体重[（24．94±0．517）和（26．97±0．686）g]较对照组[（22．78±0．418）g]增加（P=0．040,P=0．012）,肿瘤体积、血管生成因子mRNA及蛋白水平各组之间差异无统计学意义。结论rhGH促GHR^＋的SGC-7901移植瘤生长,并促肿瘤血管生成因子的分泌,对GHR^-的MKN-45则无此效应;GHR的表达情况是rhGH影响肿瘤生长及肿瘤血管生成因子表达的关键靶点之一,Janus激酶2-信号转导与转录激活因子3通路是其可能途径。     

重组人生长激素对裸鼠人胃癌移植瘤组织生长及Janus激酶2-信号转导与转录激活因子3通路的影响

目的 探讨重组人生长激素(rhGH)对荷人胃癌裸鼠移植瘤生长及Janus激酶2-信号转导与转录激活因子3通路相关的肿瘤血管生成因子的影响.方法 采用免疫细胞化学染色法筛选出生长激素受体阳性(GHR+)和阴性(GHR-)细胞株各1株,分别接种于裸鼠皮下,建立GHR不同表达状态胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,将裸鼠随机分为对照组、低剂量rhGH组和高剂量rhGH组,连续给药14 d,观察并记录裸鼠体重及肿瘤体积的变化,RT-PCR、Western-bolt检测肿瘤血管生成因子mRNA及蛋白表达.结果 SGC-7901细胞株GHR强阳性表达,MKN-45不表达GHR.SCC-7901接种裸鼠,低剂量rhGH组和高剂量rhGH组肿瘤体积[(1.141±0.234)和(2.106±0.260)cm3]较对照组[(0.612±0.156)cm3]增大(P=0.034,P=0.001),高剂量rhGH促增长效应最为显著(P=0.043),各组问裸鼠体重差异无统计学意义;低剂量rhGH可促SGC-7901血管生成因子mRNA表达,GHR、Janus激酶2、信号转导与转录激活因子3、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、成纤维细胞生长因子和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的P值分别为:0.001、0.011、0.042、0.045、0.040、0.002和0.003,但高剂量组未增加;低剂量rhGH组血管生成因子的蛋白表达水平明显升高,磷酸化信号转导与转录激活因子3、信号转导与转录激活因子3、VEGF、HIF-1α和MMP-2的P值分别为:0.015、0.003、0.010、0.008和0.005,高剂量组VEGF、HIF-1α和MMP-2较低剂量组表达增加(P=0.012,P=0.025,P=0.046).MKN-45接种裸鼠,低剂量rhGH组和高剂量rhGH组裸鼠体重[(24.94±0.517)和(26.97±0.686)g]较对照组[(22.78±0.418)g]增加(P=0.040,P=0.012),肿瘤体积、血管生成因子mRNA及蛋白水平各组之间差异无统计学意义.结论 rhGH促GHR+的SGC-7901移植瘤生长,并促肿瘤血管生成因子的分泌,对GHR-的MKN-45则无此效应;GHR的表达情况是rhCH影响肿瘤生长及肿瘤血管生成因子表达的关键靶点之一,Janus激酶2-信号转导与转录激活因子3通路是其可能途径.     

重组人生长激素体外干预人肝癌细胞生长及受体表达

24、9.40±0.51、8.33±0.31,明显多于空白对照组的7.51±0.54(P＜0.05).细胞株SMMC7721弱表达GHR,细胞株QGY-7701未表达GHR,与未处理组比,rhGH干预组生长率、CFSE荧光强度、下游蛋白IGF-1、GHR表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 体外环境下,rhGH可以促进GHR高表达人肝癌细胞株HepG-2增殖,提高其IGF-1的表达量和增加其胞膜GHR密度;但不促进人肝癌细胞株QGY-7701、SMMC7721增殖,不能使其GHR表达状态发生改变.     

生长激素联合氟尿嘧啶对结肠癌LOVO细胞影响的实验研究

目的: 探讨生长激素(GH)联合氟尿嘧啶(5-Fu)在体外对结肠癌LOVO细胞的影响. 方法: 将培养的结肠癌LOVO细胞分为对照组、GH组、5-Fu组和GH+5-Fu组,GH组又按剂量分为两个亚组,即GH1终浓度为50 ng/mL和GH2终浓度为100 ng/mL;GH+5-Fu组又按剂量分为两个亚组,即GH1+5-Fu(GH 50 ng/mL+5-Fu 100 μg/mL)和GH2+5-Fu(GH 100 ng/mL+5-Fu 100 μg/mL),加入不同浓度的处理液后24、48和72 h,分别行四基偶氮唑蓝(MTT)比色观察,计算细胞存活率.并于加入不同浓度的处理液24 h后,以流式细胞仪测定细胞周期和凋亡情况.结果: 5-Fu组和GH+5-Fu组与对照组比较,细胞存活率明显下降(P＜0.05).GH+5-Fu组与单用5-Fu组比较,细胞生存率均有所降低,但各时间段无显著性差异(P＞0.05).GH组与对照组比较,S期细胞百分比和增殖指数(PI)均增加(P＜0.05),G_0/G_1细胞百分比有所减少(P＜0.05).GH+5-Fu组的S期细胞百分比和PI均降低(P＜0.05).5-Fu组和GH+5-Fu组的细胞凋亡率均升高(P＜0.05);GH+5-Fu组与5-Fu组比较,S期细胞百分比、PI和凋亡率均无显著性差异(P＞0.05). 结论: rhGH体外作用于结肠癌LOVO细胞,未刺激细胞生长,GH与化疗联合用是安全的.     

生育三烯酚抑制结肠癌细胞增殖中Notch信号蛋白的表达及意义

目的探讨δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620细胞增殖抑制作用,研究Notch信号通路中关键蛋白在δ-生育三烯酚抑制结肠癌细胞增殖中的表达及意义。方法以终浓度分别为5、10、15、20、25、30μmol/L的δ-生育三烯酚培养SW620细胞,应用噻唑蓝（MTT）试验观察δ-生育三烯酚抑制结肠癌细胞增殖的作用,计算细胞存活率。应用免疫细胞化学方法检测Notch信号通路关键蛋白Notch、Jagged的表达变化。观察浓度为1μg/ml放线菌酮（CHX）对生育三烯酚抑制结肠癌细胞增殖作用的影响。结果随着δ-生育三烯酚浓度的增加,SW620细胞的存活率逐渐降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。Notch信号通路关键蛋白Notch1、Jagged1在溶剂对照组结肠癌细胞中表达量最高,随着加入生育三烯酚剂量的增加,表达量逐渐降低。经CHX干预过的细胞,再加入δ-生育三烯酚,作用24 h后,细胞存活率（83.33%）较单独加入生育三烯酚作用的细胞存活率（28.51%）显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论生育三烯酚抑制人结肠癌细胞增殖并诱导其死亡的方式可能为paraptosis样死亡,Notch信号通路中关键蛋白参与了这一过程。     

人生长激素对结肠癌细胞株细胞周期动力学的影响

目的：了解人生长激素（ｈＧＨ）对于结肠癌细胞有无促增殖和分化作用。方法：取对数生长期的人结肠癌细胞株ＬＯＶＯ,以顺铂和（或）不同浓度的ｈＧＨ体外培养,２４ｈ后以流式细胞增殖周期及细胞凋亡等指标。结果：同时加顺铂和ｈＧＨ培养细胞,癌细胞群在Ｇ２－Ｍ期发生阻滞,细胞凋亡率增加,Ｓ期细胞数率非常显著地降低;加ｈＧＨ１００ｎｇ／ｍｌ组Ｇ０－Ｇ１期九率降低,Ｓ期百分率增高。结论：ＬＯＶＯ细胞表面可能有ｈＧＨ     

垂体肿瘤转化基因1对结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制研究

目的 研究垂体肿瘤转化基因 1(Pituitary Tumor Tansforming Gene1,PTTG1)过表达对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的影响及其可能机制。方法 采用脂质体转染法将pcDNA3.1(+)-PTTG1及空载pcDNA3.1(+)质粒转染人结肠癌SW480细胞,G418法筛选阳性克隆。Western blot法检测PTTG1和cyclin D、cyclin E、p21的表达。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果 （1）成功获得PTTG1高表达的SW480细胞pcDNA3.1(+)-PTTG1及对照pcDNA3.1(+)细胞,Western blot结果显示pcDNA3.1(+)-PTTG1细胞PTTG1表达量分别为pcDNA3.1(+)细胞和SW480细胞的3.58倍和3.42倍;（2）过表达PTTG1基因后,SW480细胞周期改变,G0/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加;细胞周期调控蛋白cyclin D和cyclin E表达升高,p21表达降低;SW480细胞增殖显著性加快。（3） 过表达PTTG1基因后,SW480细胞中PI3K/AKT信号活化增强,使用PI3K/AKT信号抑制剂LY29400干预后,细胞增殖减弱,周期蛋白cyclin D和cyclin E表达降低,p21表达升高。结论 PTTG1基因过表达可能通过活化PI3K/AKT信号加速SW480细胞从G1期向S期的转化促进细胞增殖,提示PTTG1蛋白可能成为结肠癌治疗的一个潜在靶点。