GTPs 对 PD 小鼠脊髓前角星形胶质细胞过度活化的影响及机制探讨

目的观察绿茶多酚（GTPs）对帕金森病（PD）小鼠脊髓前角星形胶质细胞过度活化的影响,并探讨其机制。方法将45只C57BL／6J小鼠随机分为3组各15只。模型组及预防组以1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）腹腔注射7d,30mg／（kg·d）,但预防组于模型制备前3个月开始GTPs干预,至注射MPTP结束;正常组连续7d腹腔注射同体积生理盐水,饮水中未加入GTPs,余处理方法及时长均与上述两组相同。采用免疫组化法对脊髓进行染色,光镜下观察脊髓胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞变化,计数GFAP阳性细胞个数;电镜下观察各组星形胶质细胞变化;比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。结果3组GFAP阳性细胞形态无明显差异。与正常组及预防组比较,模型组颈膨大、腰膨大GFAP阳性细胞数增加（P均〈0．01）。模型组出现较多活化的星形胶质细胞,增生、肥大,常成群分布,细胞胞体、胞核增大,胞质丰富,其内细胞器增多;预防组及正常组活化的星形胶质细胞较少。与正常组比较,模型组颈膨大、腰膨大SOD水平降低,MDA水平升高;与模型组比较,预防组颈膨大、腰膨大SOD水平升高,MDA水平降低（P均〈0．01）。结论GTPs能缓解PD脊髓前角星形胶质细胞过度活化,其机制可能为降低脊髓前角氧化应激水平。     

大鼠星形胶质细胞Toll样受体表达谱

目的探索Toll样受体4(TLR4)表达定位,揭示星形胶质细胞(AS)参与阿尔茨海默病(AD)炎症机制的可能分子机制。方法取新生1³ d的SD大鼠皮层进行星形胶质细胞的培养,传代纯化。细胞免疫荧光双标法鉴定传代后的AS及其纯度。实时PCR检测正常AS中TLRs表达谱。细胞免疫荧光双标法鉴定TLR4在AS的表达定位。结果传代培养可以纯化AS;AS表达TLR13 d的SD大鼠皮层进行星形胶质细胞的培养,传代纯化。细胞免疫荧光双标法鉴定传代后的AS及其纯度。实时PCR检测正常AS中TLRs表达谱。细胞免疫荧光双标法鉴定TLR4在AS的表达定位。结果传代培养可以纯化AS;AS表达TLR1¹1,但不同的TLRs表达量不同,其中TLR4表达水平相对较高,并且TLR4表达定位于胞膜和胞质。结论 AS参与AD炎症机制的可能分子机制。     

海分枝杆菌感染活化星形胶质细胞对VEGFA表达的研究

目的研究分枝杆菌感染巨噬细胞后的条件培养基活化星形胶质细胞表达血管内皮生长因子A(VEGFA)作用及其可能的机制。方法用海分枝杆菌感染小鼠腹腔巨噬细胞后的条件培养基感染星形胶质细胞,采用qRT-PCR及ELISA检测VEGFA mRNA和VEGFA蛋白的表达情况,采用Western blot检测低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF-1α)的表达,ELISA检测加入HIF-1α抑制剂后VEGFA的表达。结果海分枝杆菌感染巨噬细胞后的条件培养基能活化星形胶质细胞,并在感染后12h~24h诱导HIF-1α明显表达,同时随着感染时间的延长,VEGFA表达逐渐增多,24h达到峰值。使用HIF-1α的抑制剂不能完全阻断VEGFA的合成。结论 HIF-1α可能参与分枝杆菌感染后星形胶质细胞表达VEGFA,且还可能有其他转录因子参与这一过程。     

大鼠脑缺血再灌注损伤中星形胶质细胞活化与热休克蛋白70表达上调的关系

业已证实 ,脑缺血性损伤可诱导热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达上调。HSP70作为分子伴侣参与了细胞修复过程 ,在脑缺血损伤中具有神经保护作用。以往认为 ,HSP70主要由神经元及小胶质细胞产生 ,近年来研究发现 ,脑缺血时 ,活化的星形胶质细胞也可表达HSP70。但有关二者关系的报道极少 ,我们观察了可逆性大脑中动脉阻塞后再灌注不同时点HSP70与星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达变化 ,初步探讨二者在脑缺血再灌注损伤中的关系及意义。　　一、材料和方法　　 1 动物分组 :健康雄性Sprague Dawley大鼠共 4 2只 ,体重 2 …     

成年大鼠神经元和星形胶质细胞细胞周期蛋白依赖激酶的表达

目的 研究成年大鼠细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）在神经元和星型胶质细胞的表达.方法 应用免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜观察成年大鼠生理状态下大脑皮层或海马CA1区神经元和星型胶质细胞CDK1、CDK2、CDK4的表达.结果 成年大鼠大脑皮层和海马CA1区神经元的细胞核和细胞浆均有CDK1、CDK2和CDK4表达,以胞核为主;星形胶质细胞也有CDK1、CDK2和CDK4的表达,但表达细胞数目较少,且表达这些指标的星形胶质细胞多聚集在海马CA1区.结论 成年大鼠大脑皮层和海马区的神经元和星形胶质细胞均表达CDK,而神经元的CDK表达较星形胶质细胞更为普遍.     

糖尿病神经性疼痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞变化的研究

目的 观察糖尿病神经性疼痛(DNP)大鼠脊髓星形胶质细胞的变化. 方法 SD大鼠30只,分为正常对照(NC)组10只和糖尿病(DM)组20只.DM组腹腔单次注射STZ(80 mg/kg),NC组腹腔注射生理盐水.两周后眼眶内眦取血测定血糖值,血糖＞16.7 mmol/L大鼠作为糖尿病模型.4周后测定大鼠热板反应潜伏时间作为痛阈指标,选取DM组痛阈最低的10只作为DNP模型组.取DNP组大鼠脊髓腰段组织切片.神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)标记星形胶质细胞,观察星形胶质细胞在脊髓背角的分布;采用多媒体彩色病理图像分析系统检测阳性面积(Area)μm2和灰度值(Gray Scale). 结果 DM组痛阈(18.41±6.25)较NC组(37.40±7.35)降低(P＜0.01),DNP组GFAP染色阳性脊髓星形胶质细胞面积(1377.37±271.83)μm2和灰度值(8638.21±1861.90)水平较NC组升高(P＜0.01).结论 糖尿病神经性疼痛时大鼠脊髓星形胶质细胞被激活增生,表达水平升高,抑制脊髓星形胶质细胞激活可能成为治疗DNP的新策略.     

小鼠脑缺血后星形胶质细胞和小胶质细胞的活化规律比较

目的比较小鼠脑缺血后星形胶质细胞和小胶质细胞的活化规律。方法采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞再灌注局灶性脑缺血损伤模型。昆明小鼠48只,随机分为假手术组24只和脑缺血组24只。脑缺血组缺血3h后再分为再灌注1、3、7和14d,每个时间点6只。再灌注结束后,取脑作HE染色观察脑组织病理改变,免疫组织化学染色法检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和小胶质细胞离子钙接头蛋白1(Iba1)的表达。结果与缺血再灌注1d比较,脑缺血组缺血再灌注3、7、14d皮质缺血周边区的GFAP阳性产物显著增加[(699.22±160.82)μm2/HP,(1817.97±290.88)μm2/HP,(2831.64±481.38)μm2/HP vs(33.13±7.45)μm2/HP,P0.01]。脑缺血组缺血再灌注1d皮质缺血周边区出现以"分支状"为主的Iba1阳性小胶质细胞,3、7d活化的小胶质细胞显著增多并表现为"灌木样"细胞,14d后活化小胶质细胞呈现"阿米巴样"细胞。结论脑缺血再灌注损伤时,小胶质细胞和星形胶质细胞均出现活化,但小胶质细胞活化出现得更早;星形胶质细胞活化只出现在缺血周边区,而活化的小胶质细胞可从缺血周边区向缺血中央区迁移。     

电针对阿尔茨海默病大鼠齿状回星形胶质细胞和白细胞介素-10表达及其共定位的影响

目的观察电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马齿状回星形胶质细胞(AC)和白细胞介素(IL)-10表达及其共定位的影响。方法 40只雄性Wistar大鼠随机等分成对照组、假手术组、模型组和治疗组。采用双侧海马注射Aβ1～42建立AD模型。对照组、假手术组和模型组不予任何治疗;治疗组选取百会、肾俞,电针20 min,1次/d,6 d为1个疗程,2个疗程间休息1 d。采用免疫组化法和免疫双标法检测相关指标。结果模型组和治疗组胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达均显著升高(P<0. 01),但两组间无显著性差异(P>0. 05),模型组AC胞体变大,突起增多增粗,胞核空化,染色深。模型组IL-10阳性表达显著降低(P<0. 01),治疗组IL-10阳性表达显著增强(P<0. 01)。假手术组IL-10与GFAP共定位呈金黄色,模型组IL-10主要定位于神经元细胞核,治疗组IL-10表达显著增强,不仅表达在神经元细胞核,也表达在神经元纤维。结论电针对AD的调节作用不限于抗炎作用,尚可促进AC对神经元的抗炎保护作用。     

缺血后处理对大鼠缺血再灌注后星形胶质细胞的影响

目的 探讨缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注后星形胶质细胞(AS)的影响.方法 54只Wistar雄性大鼠随机分为假手术(Sham)组、缺血后处理(I/R)组、缺血后处理(IP)组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血2h后,IP组给予缺血后处理.于脑缺血再灌注后24 h行TrC染色观察脑梗死体积,免疫组化法观察AS中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,应用透射电镜观察AS的超微结构变化.结果 IP组脑梗死体积明显小于I/R组,IP组AS损伤均轻于I/R组,IP组AS GFAP阳性细胞数明显多于I/R组.结论 缺血后处理可减小脑梗死体积,减轻AS损伤,增加细胞活化程度,对AS具有保护作用.     

黄体酮对小胶质细胞活化的影响

目的 观察黄体酮对体外培养小胶质细胞活化的抑制作用.方法 取新生sD大鼠皮层,分离、纯化、培养小胶质细胞,脂多糖(LPS)诱导其活化,ELISA法检测活化前后细胞培养上清液内TNFα、IL-1β水平的变化.结果 黄体酮干预组小胶质细胞培养上清液内TNFα、IL-1β的表达水平明显低于LPS处理组.结论 黄体酮可以显著减少上清液内炎症介质的水平,抑制体外培养小胶质细胞的活化.     

坐骨神经卡压对脊髓运动神经元及胶质细胞的影响

目的探讨周围神经卡压对大鼠脊髓神经元、神经胶质细胞及超微结构的影响。方法以坐骨神经卡压法建立大鼠周围神经卡压模型50只,设左侧为实验侧,右侧为正常对照,按试验设计分别于12、18、24、30、36 w后入路取材(L4^L6),进行两侧神经元计数、两侧神经元数目之比(L/R)等指标检测,观察神经胶质细胞和神经细胞超微结构变化。结果①HE染色:术后12 w,脊髓前角神经元数目无明显变化,术后18、24、30、36 w神经元数目分别减少7.46%、12.24%、16.83%、20.98%,术后18 w发现"卫星现象",30 w时位于laminaⅨ区的前角细胞明显减少,局部可见大量神经胶质细胞。②电镜观察:脊髓前角细胞于12 w时可见核仁清晰,染色质分布均匀,呈正常染色质状态,但线粒体肿胀,内质网扩张;18 w时染色质边集,异染色质增多,线粒体肿胀加剧,内质网进一步扩张,溶酶体消失;24、30、36 w核变小且深染浓缩,细胞空化,核周膜模糊不清,神经细胞趋向坏死。结论坐骨神经卡压后相应节段脊髓前角α运动神经元数目减少,并随卡压时间延长、程度加重而加重且超微结构发生改变;神经胶质细胞在神经损伤早期修复起重要作用。     

燃煤型氟中毒对大鼠海马齿状回星形胶质细胞的影响

目的探讨燃煤型氟中毒对大鼠海马齿状回星形胶质细胞的影响,为地方性氟中毒引起脑损伤的发病机制提供实验依据。方法取断乳2周的SD大鼠90只（平均体重91.1 g,80～100 g）,按体重随机分为正常对照组、低氟组（3.3mg/kg）、高氟组（106 mg/kg）,每组30只,雌雄各半。除对照组食用正常饲料外,其他各组均食用不同配方饲料,复制氟中毒大鼠模型。模型建立后,取海马组织用常规石蜡切片,行胶质原纤维酸性蛋白免疫组化染色,计数海马齿状回GFAP免疫组化染色阳性反应细胞,并用细胞形态学计量方法测量各阳性反应产物的平均光密度;通过透射电镜观察海马齿状回区星形胶质细胞的细微结构。结果氟中毒组大鼠的主要变化有GFAP免疫组化染色阳性细胞明显多于对照组（P〈0.05）,阳性反应产物平均光密度明显高于对照组（P〈0.05）。结论实验结果提示燃煤型氟中毒大鼠可导致其海马齿状回星形胶质细胞增多;氟可导致大鼠神经发育障碍。     

大鼠急性缺血性脑损伤后星形胶质细胞的活动及药物对其的影响

目的 探讨大鼠在急性缺血性脑损伤后缺血周边星形胶质细胞(AS)的活动情况和施加药物后对该活动的影响.方法 采用线栓法实施大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)2 h后进行再灌注,制成大鼠脑缺血再灌注模型.然后给予缺血再灌注模型大鼠不同剂量的甘露醇,观察其再灌注后不同时间点的神经功能缺损评分值(mNSS).在缺血再灌注后72 h采用免疫组化法测定各剂量组缺血周边胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数目.结果 0剂量组的mNSS和小、中、大剂量组的GFAP阳性细胞数目差别均有统计学意义(P＜0.05),而小、中、大三个不同剂量组的mNSS无统计学差异(P =0.972).不同剂量组缺血周边GFAP阳性细胞数目不完全相同(P =0.009).多重比较结果为:0剂量组分别和小、中、大剂量组比较均P＜0.05,而小、中、大剂量组间检验均P＞0.05.大鼠缺血再灌注后72 h的mNSS和其对应的缺血周边的GFAP阳性细胞数目的Pearson相关系数为-0.828(P =0.005),表明两者间具有负相关性.结论 一定程度上,尚不能认为不同剂量甘露醇对缺血再灌注模型大鼠缺血周边AS的活动影响有区别.模型大鼠的mNSS值和缺血周边的AS数目负相关.本实验证实大鼠急性缺血性脑损伤后,缺血周边AS反应性增生明显.使用甘露醇24 h或72 h后皆可明显增加缺血再灌注模型大鼠缺血周边AS的反应性活动.推断急性缺血性脑损伤后应用甘露醇,可能通过增加缺血周边AS反应性活动对缺血脑组织及周边组织起保护作用.     

乳黄片对A型肝性脑病大鼠大脑皮层星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的：探讨乳黄片对A型肝性脑病大鼠大脑皮层星形胶质细胞结构蛋白一神经胶质纤维酸性蛋白（CFAP）表达的影响。方法：Wistar雄性大鼠96只随机分为6组，正常对照组（A组）、模型组（B组）、乳果糖组（C组）、乳黄片低、中、高剂量组（D、E、F组）。除A组外，其余各组大鼠用硫代乙酰胺（TAA）造模，在TAA首次造模前，对A、B组大鼠灌以生理盐水1ml／100g。其余各组大鼠灌以相应药物。实验30小时后取材。免疫组化法测定大鼠皮层GFAP的表达水平。结果：B组大鼠GFAP染色阳性细胞以及平均光密度较A组明显降低，两者比较P〈0．01，差异有显著性意义。D、E、F组和C组大鼠GFAP均较B组显著升高（P〈0．01），且D、E、F组升高程度均较C组显著（P〈0．05或P〈0．01），其中以中剂量组升高最明显。结论：乳黄片有良好的防治A型肝性脑病的作用，其机制可能是通过保护肝细胞降低血氨进入血脑屏障的浓度，改善星形胶质细胞受损结构，提高GFAP蛋白表达而实现的。乳黄片抗A型肝性脑病的作用位点可能为星型胶质细胞。     

人肝脏星形细胞培养激活及其c-fos,c-jun的表达

目的观察体外培养过程中人肝脏星形细胞(HSCs)表型及其c-fos和c-jun表达的改变.方法将分离的正常人HSCs进行原代及传代培养,倒置显微镜下动态观察培养细胞形态改变,对原代及传代培养细胞铺展片进行PCNA、Ⅰ型前胶原、α-SMA,c-fos及c-jun免疫细胞化学染色.结果正常人HSCs在含100 mL/L小牛血清中培养时,其表型由原代培养初期的静息型转变为原代培养后期及传代后的激活型.激活的人HSCs呈现典型的成纤维细胞形态特征,其表达PCNA、Ⅰ型前胶原及α-SMA明显阳性.刚分离的正常人HSCs在不含血清的培养液中培养24 h后,其c-fos及c-jun表达均为阴性,而在含100 mL/L小牛血清的培养液中继续培养24 h后,c-fos及c-jun表达为阳性.原代培养d10及传代培养d 3的HSCs其c-fos及c-jun表达持续阳性.结论在含小牛血清的DMEM培养液中培养时,人HSCs自发地激活,这种激活可能与c-fos及c-jun表达增加有关.     

碘过量对仔鼠海马GFAP阳性星形胶质细胞的影响

目的探讨碘过量与甲状腺激素对仔一代Wistar大鼠大脑海马星形胶质细胞的形态学影响。方法将断乳后1个月Wistar大鼠随机分为5组(NI、5HI、10HI、50HI、100HI),饮用不同浓度的KIO3碘水,饲养3个月后雌雄合笼,取60日龄仔鼠大脑,应用免疫组织化学技术观察海马CA1、CA2、CA3、CA4区星形胶质细胞,并进行形态计量学分析。结果与NI组比较,50HI、100HI组的海马各区GFAP阳性星形胶质细胞面数密度、平均灰度值和阳性细胞的强阳性率均明显降低。结论长期严重碘过量会影响仔鼠甲状腺激素水平,阻碍其大脑海马星形胶质细胞发育,其机理可能与碘过量所致的甲状腺功能低下有关,但大鼠对碘过量有极强的耐受力,当碘摄入量为正常摄入量的50倍以内时,不会影响仔鼠大脑海马星形胶质细胞的发育。     

经颅电刺激对大鼠脑梗死后运动功能及星形胶质细胞活性的影响

目的 研究经颅电刺激对大鼠脑梗死后运动功能的恢复和星形胶质细胞活性的影响。方法 将120只SD成年雄性大鼠行大脑中动脉闭塞(MCAO)后,随机分为经颅电刺激治疗1、2、3、4、5、6周治疗组及相应对照组,每组10只。分别于治疗后第1周至第6周末以横木行走试验(BWT)评价大鼠的精细运动功能恢复情况。应用免疫组化法观察星形胶质细胞活性。 结果 术后第1周,治疗组及对照组大鼠BWT均低于2分。至第3周两组大鼠差异有显著性意义,治疗组大鼠为3.7分±0.8分,对照组大鼠为2.7分±0.5分。至第6周治疗组运动功能恢复到术前的95％,而对照组仅恢复到术前的56%。治疗组的大鼠从第2疗程末缺血性半影区星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数均较对照组大鼠高(P<0.05),细胞体肥大,突起增粗变长,原纤维增多,免疫染色明显加深。 结论 经颅电刺激可以直接兴奋大鼠大脑皮质的运动中枢,引起星形胶质细胞活性增强,促进中枢神经兀轴突发芽并形成新的神经联系,使兴奋从大脑皮质传导到骨骼肌的整个运动系统。从而改善脑急性梗死瘫痪肢体运动功能。     

星形胶质细胞缺氧缺糖后PKC PKA PKG CaMKⅡ表达的变化及对AQP4的影响

目的探讨星形胶质细胞在缺氧、缺糖情况下蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶G(PKG)及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化情况。方法取2 d龄新生SD大鼠的大脑皮层进行星形胶质细胞的纯化与培养,通过缺氧、缺糖处理建立缺血细胞模型。以实验处理方式的不同分为对照组和模型组,通过RT-PCR法检测星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达的变化,采用Western blot法检测星形胶质细胞PKC、PKA、PKG和CaMKⅡ的表达情况。比较两组各项指标的差异。结果模型组的AQP4表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。模型组的PKC表达水平低于对照组,CaMKⅡ表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。PKA、PKG的表达水平在两组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论缺氧、缺糖导致的星形胶质细胞的PKC表达水平下降及CaMKⅡ表达水平升高,可能与星形胶质细胞水肿有关。     

脑缺血时星形胶质细胞与谷氨酸的相互作用

星形胶质细胞是中枢神经系统的一大类细胞 ,具有重要的生理功能。脑缺血时神经细胞外兴奋性氨基酸 ,特别是谷氨酸浓度大大增高 ,而谷氨酸的兴奋毒性在神经元死亡中起重要作用。星形胶质细胞与谷氨酸的相互作用可保护神经元 ,从而减轻缺血性脑损伤。     

全反式维甲酸对星形胶质细胞清除淀粉样蛋白的影响及机制

目的：探讨全反式维甲酸（ ATRA）对星形胶质细胞清除淀粉样蛋白（ Aβ）的影响及其机制。方法原代培养星形胶质细胞,使用Aβ42诱导原代星形胶质细胞凋亡,分别加入0．01、0．1、1、10μmol/L ATRA进行干预。采用MTT法检测细胞存活率,ELISA法检测培养基和细胞内Aβ42含量,Western blot 法检测APOE、BACE1表达变化。结果不同浓度的ATRA对Aβ42诱导的星形胶质细胞凋亡作用不同,其中0．1、1μmol/L可以显著抑制Aβ42诱导的星形胶质细胞凋亡（P＜0．05）。细胞外培养基中Aβ含量、细胞内Aβ含量均明显下降（P均＜0．01）。实验组APOE表达上调（P＜0．01）,BACE1表达无明显变化。结论 ATRA可以上调APOE表达,促进星形胶质细胞清除Aβ;低浓度ATRA对星形胶质细胞有保护性作用。