SNHG14调控miR-181b对H2O2诱导的人脑微血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响

目的 小核仁RNA宿主基因(SNHG)14对H₂O₂诱导的人脑微血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及作用机制。方法 体外培养人脑微血管内皮细胞BB19,100μmol/L H₂O₂诱导分别作用于转染SNHG14小干扰RNA、miR-181b模拟物及共转染SNHG14小干扰RNA与miR-181b抑制剂的BB19细胞后,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中SNHG14和miR-181b mRNA表达,CCK-8和流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平。双荧光素酶报告实验验证SNHG14与miR-181b调控关系。结果 干扰SNHG14表达或过表达miR-181b后,H₂O₂诱导的BB19细胞增殖活性、Bcl-2表达及SOD和CAT活性明显升高,细胞凋亡率、Bax表达和MDA水平明显...     

阿司匹林对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用

目的 探讨阿司匹林对宫颈癌Hela细胞增殖的影响.方法 体外培养Hela细胞,分别以不同浓度阿司匹林干预.应用Giemsa染色观察细胞形态学的改变;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder现象;采用MTT法测定细胞增殖抑制率.结果 Giemsa染色后可见阿司匹林组细胞体积缩小,凋亡小体形成,且随着浓度增加,凋亡率也增加;不同浓度阿司匹林作用Hela细胞48 h后,提取DNA电泳,可见明显的DNA裂解带;MTT结果显示,在1.0～10.0 mmol/L浓度区间内,随浓度增加和时间的延长,阿司匹林对细胞的抑制率逐渐增加.结论 阿司匹林在体外可抑制人宫颈癌Hela细胞增殖,其机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成有关.     

中药清毒栓对宫颈癌Hela细胞的抑制作用

目的探讨中药清毒栓诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及增殖抑制作用。方法采用胆囊收缩素-8肽(CCK-8)法检测清毒栓对Hela细胞增殖的作用,线粒体膜电位法检测Hela细胞凋亡的变化。结果高剂量清毒栓在24 h时对Hela细胞增殖具有明显的抑制及诱导细胞凋亡的作用,分别与空白对照组及清毒栓中、低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05),清毒栓中剂量组与低剂量组比较无显著性差异(P>0.05)。结论中药清毒栓对宫颈癌Hela细胞抑制作用可能通过抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖及降低线粒体膜电位诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

阿司匹林对宫颈癌Hela细胞凋亡及增殖的影响

目的研究阿司匹林对宫颈癌Hela细胞的增殖和凋亡的影响。方法不同浓度的阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)处理细胞48 h后,显微镜下观察细胞生长状况,采用水溶性四氯唑(WST)-1法检测细胞增殖情况;Hochest 33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测凋亡相关蛋白。结果阿司匹林能够抑制Hela细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在1 mmol/L时,细胞生长变慢;处理浓度达到5 mmol/L时,大量细胞凋亡;阿司匹林浓度高于5 mmol/L时,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显增加。结论阿司匹林在体外实验条件下可抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

蛋白酶体抑制剂Bortezomib对宫颈癌Hela细胞的体外作用

目的探讨蛋白酶体抑制剂Bortezomib对宫颈癌Hela细胞存活率的影响。方法 MTT检测Bortezomib对宫颈癌Hela细胞体外生长及增殖的影响;并用Western印迹、RT-PCR检测NF-κB(P65)蛋白和mRNA表达水平的变化。结果 (1)MTT检测结果显示:与对照组相比,Borte-zomib 1.25μmol/L组〔(84.9±0.08)%〕、Bortezomib 2.50μmol/L组〔(67.1±0.12)%〕、Bortezomib 5.00μmol/L组〔(51.6±0.11)%〕、Bortezomib10.00μmol/L组〔(41.3±0.13)%〕及Bortezomib 20.00μmol/L组〔(20.8±0.12)%〕Hela细胞增殖率明显降低(P<0.05)。(2)Western印迹检测结果表明:随着Bortezomib浓度的增高,NF-κB(P65)蛋白表达量有剂量依赖性的降低趋势(P<0.05)。(3)RT-PCR结果显示,与对照组相比,随着Bortezomib浓度的增加,NF-κB(P65)mRNA的表达水平明显降低(P<0.05)。结论蛋白酶体抑制剂Bortezomib能够体外抑制宫颈癌Hela细胞的短期增殖,其机制与下调NF-κB(P65)的表达密切相关。     

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

维生素A和4HPR对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究维生素A、N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(4HPR)对Hela细胞增殖与凋亡的影响.方法 通过集落形成试验和裸鼠致瘤试验观察维生素A和4HPR对Hela细胞增殖的影响;通过电子显微镜及细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法观察维生素A和4HPR对Hela细胞凋亡形态的影响及生物化学特征.结果 维生素A和4HPR对Hela细胞集落形成有明显抑制作用,并可抑制Hela细胞对裸鼠的致瘤作用(P<0.01);维生素A的抑瘤作用强于4HPR(P<0.01);电镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;细胞DNA被降解,在琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的"阶梯状"图谱.结论 维生素 A和4HPR可抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡.     

lncRNA SNHG8负调控miR-411-5p影响神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)、小核仁RNA宿主基因子8(SNHG8)对神经母细胞瘤(NB)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测31例NB病人NB组织和瘤旁组织中SNHG8和miR-411-5p表达水平。体外培养NB细胞系SK-N-SH,双荧光素酶报告基因实验验证SNHG8和miR-411-5p调控关系。将SK-N-SH细胞分为对照组、si-NC组、si-SNHG8组、si-SNHG8+anti-miR-NC组和si-SNHG8+anti-miR-411-5p组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测Ki67、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspases-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:与瘤旁组织比较,NB组织中SNHG8表达水平升高(P<0.05),miR-411-5p表达水平降低(P<0.05)。SNHG8在S...     

脐血CIK细胞对耐药白血病细胞体外杀伤效应及其机制的研究

目的:探索干预或克服白血病细胞耐药的新策略.方法:采用抗CD3McAb联合多种细胞因子诱导的脐血杀伤细胞(CB-CIK)体外作用于K562耐药细胞株(K562/A02),用MTT比色法检测其杀伤效应;用免疫组化染色法检测杀伤前后K562/A02细胞表面多药耐药基因mdr1表达产物P170水平;采用DNA凝胶电泳进行CB-CIK细胞诱导白血病细胞凋亡的检测.结果:①CB-CIK细胞杀伤K562/A02细胞活性(73.647±5.72)与杀伤K562细胞活性(75.124±4.36)相比差异无统计学意义,P＞0.05;其杀瘤活性显著高于CB-LAK细胞、CB-CD3AK细胞,P<0.05,与成人CB-CIK细胞相比差异无统计学意义,P＞0.05.②经CIK细胞杀伤后,K562/A02细胞表面mdr1表达产物P170含量明显减少.③K562/A02细胞在CIK细胞作用20 h后,其DNA结构断裂,在DNA凝胶电泳上呈现凋亡特有的梯形图谱(DNA Ladder).结论:CB-CIK细胞对K562细胞及其耐药株K562/A02细胞均有较强的杀伤作用,其杀伤机制可能与CIK细胞能下调白血病细胞表面多药耐药基因mdr1表达产物P170水平,以及诱导白血病细胞凋亡有关.提示脐血CIK细胞在抗白血病多药耐药性方面具有独特的优势,若与化疗联合使用,有可能成为克服白血病细胞多药耐药性的一种可供选择的新策略,因脐血的来源较广,采制相对简便,该研究方法可能具有广泛的应用前景.     

lncRNA ADPGK-AS1通过调控miR-217表达对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究lncRNA ADPGK-AS1和miR-217在非小细胞肺癌中的表达及其对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法以癌旁组织为对照,qRT-PCR检测lncRNA ADPGK-AS1和miR-217在116例非小细胞肺癌组织中的表达水平,双荧光素酶报告系统验证ADPGK-AS1和miR-217的调控关系,在A549细胞中转染si-ADPGK-AS1和miR-217以抑制lncRNA ADPGK-AS1和过表达miR-217,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和凋亡,Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,在116例非小细胞肺癌组织中lncRNA ADPGK-AS1的含量显著升高(P0.05),miR-217的含量则显著下降(P0.05);lncRNA ADPGK-AS1靶向负调控miR-217的表达;抑制ADPGK-AS1表达和过表达miR-217均可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞中CyclinD1和Bcl-2含量降低(P0.05),p21和Bax含量升高(P0.05);干扰miR-217表达逆转了抑制ADPGK-AS1表达对A549细胞增殖、凋亡的作用。结论 LncRNA ADPGK-AS1可能通过靶向miR-217促进非小细胞肺癌A549细胞增殖,抑制细胞凋亡。LncRNA ADPGK-AS1可能是非小细胞肺癌的潜在分子靶点。     

TRAIL 基因转染对人宫颈癌 Hela 细胞凋亡的影响

目的：探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡配体（ TRAIL）基因对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法将构建的真核表达质粒pEGFP-TRAIL用Lipofectamine2000转染试剂盒转染到Hela细胞中,共聚焦显微镜下观察质粒的表达,分别用DAPI细胞核染色法和四甲基偶氮唑蓝（ MTT）比色法细胞染色法检测Hela细胞凋亡率。结果真核表达质粒pEGFP-TRAIL构建成功且能在Hela细胞中持续表达;转染真核表达质粒pEGFP-TRAIL的Hela细胞、转染空载体pEGFP-C1的Hela细胞凋亡率分别为12．1％、61．2％,两组比较,P＜0．05。结论外源性TRAIL基因可诱导Hela细胞凋亡。     

外源性趋化因子CXC配体12对Hela宫颈癌细胞增殖作用及机制

目的探讨外源性趋化因子CXC配体(L)12对宫颈癌Hela细胞增殖的作用及机制。方法 CCK8实验考察不同浓度和不同时间的外源性CXCL12对宫颈癌Hela细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度的外源性CXCL12对细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达量的影响。结果 48 h后,浓度40 ng/ml的外源性CXCL12对Hela细胞增殖作用明显高于0 ng/ml(P<0.05);72 h后,浓度20 ng/ml的外源性CXCL12对Hela细胞增殖作用明显高于0 ng/ml(P<0.05),且浓度40 ng/ml时尤其明显(P<0.01);与浓度0 ng/ml外源性CXCL12比较,浓度20 ng/ml和40 ng/ml外源性CXCL12显著上调宫颈癌Hela细胞ERK表达量(P<0.05)。结论外源性CXCL12可经活化丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路而促进Hela宫颈癌细胞增殖活性。     

ZNF217在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对细胞增殖活性和克隆形成能力的影响

目的研究锌指蛋白(ZNF)217在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对细胞增殖活性及克隆形成能力的影响。方法以Real-time PCR和Western印迹检测ZNF217在非小细胞肺癌细胞和正常人肺上皮细胞中的表达变化。短发夹RNA(shRNA)-ZNF217慢病毒干扰载体感染非小细胞肺癌细胞,Real-time PCR和Western印迹检测干扰效果。MTT检测细胞增殖变化,细胞克隆实验检测细胞克隆能力变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,Western印迹检测细胞中p21、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果非小细胞肺癌细胞中ZNF217表达水平明显高于正常人肺上皮细胞(P0.05)。shRNA-ZNF217慢病毒干扰载体可以成功下调非小细胞肺癌细胞中ZNF217的表达水平。沉默ZNF217后的非小细胞肺癌细胞的增殖能力降低,细胞克隆能力也降低,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率也升高,细胞中p21蛋白水平升高,Cyclin D1蛋白水平下降,Bax蛋白水平也升高。结论 ZNF217在非小细胞肺癌细胞中高表达,沉默其表达可以抑制非小细胞肺癌细胞增殖和克隆形成能力,阻碍细胞G1期向S期进展,诱导细胞凋亡。     

细胞因子对人食道鳞癌细胞的体外杀伤作用

目的 探讨细胞因子活化杀伤(CIK)细胞对人食道鳞癌细胞(ESCC) Ecap-109的体外杀伤作用.方法 先用细胞因子诱导CIK细胞的生成并进行表型鉴定,后与人食道鳞癌细胞Ecap-109按不同比例进行共同培养,MTT法测定CIK对Ecap-109的杀伤活性.结果 不同比例的CIK细胞对Ecap-109均有明显的杀伤效果,最高可达94.8％.结论 CIK细胞对人食道鳞癌细胞Ecap-109具有明显的杀伤作用.     

骨髓间充质干细胞来源外泌体中lncRNA SNHG12对心肌细胞的影响及其机制

目的 探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源外泌体中长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)对心肌细胞的影响及其机制。方法 贴壁法分离培养BMSCs并传代。取传3代BMSCs,转染SNHG12 48 h,分离外泌体并鉴定。取H9c2细胞,随机分为阴性对照（NC）外泌体组与SNHG12外泌体组,分别转染NC外泌体、SNHG12外泌体;SNHG12外泌体+miR138-5p抑制剂组与SNHG12外泌体+NC抑制剂组,分别转染SNHG12外泌体+miR138-5p抑制剂及SNHG12外泌体+NC抑制剂;SNHG12外泌体+SH-NC组与SNHG12外泌体+SH-SIRT1组,分别转染SNHG12外泌体+SH-NC及SNHG12外泌体+SH-SIRT1。制备缺氧溶液,将上述各组细胞与缺氧溶液共孵育6 h,建立体外缺氧细胞模型。收集各组细胞培养液,离心留取上清液。采用ELISA法检测上清液IL-1β、IL-18含量。收集各组细胞,采用Western blotting法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、剪切的半胱氨酸蛋白...     

过表达miR-136调控E2F1对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用及其机制

目的探讨过表达miR-136对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用及其机制。方法利用RT-qPCR检测miR-136和E2F1在宫颈癌He La细胞中的表达,以脂质体转染miR-136 mimics至He La细胞,噻唑蓝(MTT)法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western印迹检测细胞中B细胞淋巴病/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和E2F1蛋白表达。结果与正常上皮293T细胞相比,miR-136在宫颈癌He La细胞中表达显著降低,E2F1表达显著升高(P<0. 01);转染miR-136 mimics 48 h后,与对照组相比,miR-136 control组中miR-136的相对表达量、细胞增殖率、细胞凋亡率、Bcl-2、Bax和E2F1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0. 05);而miR-136 mimics组中miR-136的相对表达量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达量显著升高,细胞增殖率、Bcl-2、和E2F1蛋白表达量显著降低(P<0. 01)。转染siRNA-E2F1 48 h后,细胞的增殖凋亡趋势与上调miR-136表达结果一致。结论 miR-136在宫颈癌细胞中呈现低表达,上调其表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与E2F1有关。     

白杨素通过调控SNHG9/miR-184对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨白杨素对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法 体外培养人软骨细胞,不同浓度(20、40、60μg/L)的白杨素与10 ng/ml的IL-1β共同干预软骨细胞24 h后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测细胞中裂解的半胱氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,RT-聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中小核仁RNA宿主基因(SNHG)9和miR-184表达。转染SNHG9过表达载体或小干扰RNA至软骨细胞后,用10 ng/ml的IL-1β干预24 h或60μg/L白杨素与10 ng/ml IL-1β共同干预24 h,上述相同方法检测细胞增殖、凋亡、Cleaved-caspase3蛋白表达及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α水平。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG9和miR-184靶向关系。结果 20、40、60μg/L的白杨素显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞光密度(OD)值(P<...     

ESCC组织SNHG17表达及转染si-SNHG17质粒的人食管鳞癌细胞株增殖、凋亡、放射敏感性观察

目的 观察食管鳞癌（ESCC）组织小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)表达情况及转染si-SNHG17质粒的人ESCC细胞株ECA109增殖、凋亡、放射敏感性。方法 取ESCC肿瘤组织与癌旁组织标本各89例份;另取ECA109细胞,并随机分为对照组（Control组,空白培养基处理）、si NC组（转染si NC质粒）、si-SNHG17组（转染siSNHG17质粒）、si-SNHG17+inhibitor NC组（si-SNHG17与inhibitor NC共转染）、si-SNHG17+miR-375 inhibitor组（si-SNHG17与miR-375 inhibitor共转染）;采用RT-qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和各组细胞SNHG17、miR-375、USP14 mRNA,CCK-8法检测各组细胞增殖能力（OD值）,流式细胞术及Western blot法检测各组细胞凋亡能力[凋亡率及凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Caspase3、USP14蛋白）],克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性。双荧光素酶报告基因实验分别验证SNHG17、miR-375及miR-37...     

川芎嗪对宫颈癌Hela细胞磷酸化Bad蛋白和Survivin蛋白表达的影响

目的研究川芎嗪(TMP)对Hela细胞磷酸化Bad(p-Bad)蛋白和Survivin蛋白表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测TMP对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹法检测p-Bad和Survivin蛋白的表达。结果与对照组相比TMP可抑制Hela细胞的增殖(P0.01);增加Hela细胞的凋亡率(P0.05,P0.01);降低p-Bad蛋白和Survivin蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论TMP可抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡,降低p-Bad蛋白和Survivin蛋白的表达,这可能是TMP诱导Hela细胞凋亡的机制之一。