抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的抑制作用

目的：探讨抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响,阐明TRIM24基因在乳腺癌发生发展中的作用。方法：以脂质体法转染TRIM24 siRNA和阴性对照NC-siRNA至MCF-7细胞作为si-TRIM24组和NC-siRNA组,以未转染的MCF-7细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blotting法检测转染48 h后各组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测各组MCF-7细胞增殖能力,流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率,Transwell实验检测各组MCF-7细胞侵袭和迁移数。结果：与对照组和NC-siRNA组比较,si-TRIM24组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,MCF-7细胞增殖能力降低（P<0.05）,MCF-7细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,MCF-7细胞侵袭和迁移数明显减少（P<0.05）。结论：抑制TRIM24基因表达能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移,且能够诱导细胞凋亡。     

TRIM59对人鼻咽癌细胞增殖、凋亡及EMT的影响

目的 探讨三基序蛋白59(tripartite motif containing 59,TRIM59)对人鼻咽癌细胞增殖、凋亡、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及相关分子机制。方法 Western blot检测鼻咽癌细胞系HNE1、CNE-2Z和人正常鼻黏膜上皮细胞系(HNEpC)中TRIM59的蛋白表达情况。实验中HNE1和CNE-2Z分别构建si-NC组(Lip2000+si-NC)、si-TRIM59组(Lip2000+si-TRIM59)和mimic-NC组(Lip2000+mimic-NC)、TRIM59-mimics组(Lip2000+mimic-TRIM59)。CCK-8和集落形成实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测TRIM59对鼻咽癌细胞凋亡的影响;细胞划痕试验和Transwell检测细胞上皮-间质转化(EMT)能力;同时通过Western blot分析下调或上调TRIM59后鼻咽癌细胞中凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)的表达情况;通过Western blot分析TRIM59对鼻咽癌细胞中EMT相关蛋白...     

TRIM59靶向调控PPM1B对鼻咽癌侵袭和迁移的作用

目的 探讨TRIM59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法 TCGA数据库分析TRIM59在鼻咽癌中的表达;Western blot实验检测TRIM59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况;RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中TRIM59和PPM1B mRNA和蛋白的相对表达量;建立HNE1细胞TRIM59过表达及抑制表达的稳定细胞系,实验设未转染组（Control）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、TRIM59 模拟物组（mimic-TRIM59）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及TRIM59抑制剂组（si-TRIM59）。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测TRIM59和PPM1B靶向关系;Transwell小室检测HNE1细胞侵袭和迁移能力的变化。结果 TCGA数据库结果表明,TRIM59在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P= 0.006）;TRIM59在鼻咽癌组织中表达增加（P=0.01）且PPM1B 表达下降（P=0.03）;与HNEpC细胞相比,TRIM59在HNE1细胞中相对表达量显著增加（P=0.04）,PPM1B在HNE1细胞中相对表达量显著下降（P=0.02）;PPM1B为TRIM59下游靶基因且与TRIM59表达呈负相关（P=0.01）;Transwell结果显示,上调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力增强（P=0.01,P=0.02）,下调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制（P=0.01）;同时下调TRIM59且上调PPM1B表达后,HNE1细胞侵袭和迁移能力均较单独下调TRIM59表达显著被抑制（P=0.02,P=0.01）。结论 TRIM59通过靶向调控PPM1B影响鼻咽癌细胞侵袭和转移。     

JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响

目的分析JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。 方法将Hela细胞分为si-NC组、si-JMJD2B组和si-HPIP组。实时荧光定量PCR检测宫颈癌细胞中JMJD2B、HPIP mRNA表达水平。Western blotting检测宫颈癌细胞和人正常宫颈上皮细胞JMJD2B、HPIP蛋白表达水平。CCK-8检测Hela细胞增殖能力。Transwell检测Hela细胞迁移和侵袭能力。 结果JMJD2B、HPIP蛋白在宫颈癌细胞中表达高于人正常宫颈上皮细胞(P＜0.05)。与si-NC组比较,si-JMJD2B组和si-HPIP组JMJD2B、HPIP mRNA和蛋白表达、细胞增殖、迁移细胞数量、侵袭细胞数量均明显减少(P＜0.05)。 结论JMJD2B和HPIP表达可能调节宫颈癌Hela细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为。     

DHA对宫颈癌细胞株凋亡、侵袭和转移的影响

目的探讨多不饱和脂肪酸DHA对宫颈癌细胞（HeLa、Siha）凋亡、迁移侵袭的影响。方法HeLa、Siha细胞,分为空白对照 组、不同浓度DHA组,观察不同药物浓度作用于宫颈癌细胞后的形态学改变,Hoechst 33258染色检测48 h后细胞核凋亡情况; MTT法检测DHA作用于宫颈癌细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测不同浓度DHA作用于宫颈癌细胞48 h后 的凋亡率;细胞划痕实验和Transwell 迁移实验检测不同浓度DHA对宫颈癌细胞体外迁移能力的影响;Western Blotting检测 DHA刺激细胞48 h 后凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3）及肿瘤转移侵袭相关蛋白MMP-9、VEGF表达情况。结果 倒置显微镜下及经Hoechst33258染色后,随着DHA浓度增加,宫颈癌细胞形态改变越明显,凋亡小体增多;MTT结果显示DHA 呈时间-浓度依赖性抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞划痕实验和transwell迁移实验提示DHA作用于细胞后,浓度越高, 对细胞的体外迁移能力的抑制作用越强;Western Blotting 显示DHA作用于细胞48 h 后,cleaved-caspase3、Bax蛋白表达增加 （P<0.05）,而Bcl-2、MMP-9、VEGF 蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2/Bax 比值下降（P<0.05）。结论DHA 可通过调控 cleaved-caspase3、Bax及Bcl-2表达,促进宫颈癌细胞凋亡的作用并能通过降低MMP-9、VEGF的表达抑制宫颈癌细胞的迁移和 侵袭。     

溶酶体组织蛋白酶L对人宫颈癌细胞HeLa迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响宫颈癌细胞的侵袭及迁移能力.方法 利用荧光定量PCR来检测人宫颈癌细胞HeLa、CaSki以及HeLa229中Cathepsin L的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的宫颈癌细胞HeLa以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,通过Western blot和定量PCR来验证shRNA的干扰效率,拟将Cathepsin L-shRNA和空白对照载体转染HeLa细胞,并将构建好的稳定细胞株命名为HeLa/shRNA,空白组和对照组分别为HeLa和HeLa/Con.通过Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、WNT-5a的变化.结果 Cathepsin L-shRNA转染后,能够有效抑制HeLa细胞中Cathepsin L的表达;Transwell法检测结果显示,Cathepsin L干扰组细胞侵袭及迁移能力显著低于阴性对照组(P ＜0.001).Western blot法检测结果发现,Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、WNT-5a表达较对照组显著下降.结论 运用RNA干扰技术能够有效沉默HeLa细胞的Cathepsin L基因,并诱导其迁移侵袭能力的下降,其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT,从而影响宫颈癌细胞的迁移及侵袭.提示Cathepsin L在宫颈癌的发生发展中起重要作用,抑制Cathepsin L的表达可能成为一种治疗宫颈癌的新方法.     

ELF1负调控TRIM16促进胃腺癌上皮间质转化

目的 探讨E74样因子1(ELF1)对胃腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响及其机制。方法 利用基因表达谱交互分析2(GEPIA2)数据库分析ELF1在胃腺癌组织中的表达情况。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot分析胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中ELF1的表达水平。ELF1短发夹RNA(sh-ELF1)或其阴性对照短发夹RNA(sh-NC)转染AGS细胞,分别命名为sh-ELF1组和sh-NC组。划痕实验检测细胞迁移能力,Tranwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测EMT相关分子Snail、E-cadherin、Vimentin及三重基序包含蛋白16(TRIM16)的表达情况。染色质免疫共沉淀-PCR(ChIP-PCR)实验检测ELF1与TRIM16启动子区的结合情况。选取AGS细胞进行挽救实验,分为sh-ELF1+si-TRIM16组(sh-ELF1和TRIM16小干扰RNA共同转染)和sh-ELF1+si-NC组(sh-ELF1和阴性对照小干扰RNA共同转染),Western blot检测TRIM16、Snail、E-c...     

miR-208a-3p靶向LZTFL1调控宫颈癌细胞的增殖和侵袭转移及其分子机制

【摘要】 目的 探讨miR-208a-3p靶向亮氨酸拉链转录因子样1（LZTFL1）对宫颈癌细胞增殖、侵袭转移的影响和分子机制。方法 收集2016年5月～2018年3月于湖北省中西医结合医院妇产科收治并经病理科确诊的40例宫颈癌患者手术标本。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印记（Western Blot）检测宫颈癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-208a-3p和LZTFL1的表达。将将宫颈癌细胞Hela分为anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、anti-miR-208a-3p组（转染anti-miR-208a-3p）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-LZTFL1组（转染pcDNA-LZTFL1）。采用MTT法检测细胞活力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数目,western blot检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP 2）和MMP 9蛋白的表达。〖HTH〗结果〖HTK〗〓相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-208a-3p的表达显著升高,LZTFL1的表达显著降低（P＜0.05）。miR-208a-3p靶向LZTFL1并负性调控其表达。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-208a 3p组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP 2和MMP-9蛋白的表达显著降低,p21的表达显著升高,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。与pcDNA组比较,pcDNA-LZTFL1组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP-2和MMP 9蛋白表达显著降低,p21表达显著升高,差异均有统计学意义（P＜005）。与anti-miR-208a-3p+si-NC组比较,anti-miR-208a-3p+si-LZTFL1组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著升高,p21的表达显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 宫颈癌中miR-208a-3p呈高表达,LZTFL1呈低表达。抑制miR-208a-3p通过上调LZTFL1可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

UCH37与MARCH8表达对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的分析泛素羧基末端水解酶37(UCH37)、膜相关RINpCH 8(MARCH8)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法将Hela细胞分为si-NC组、si-UCH37组和si-MARCH8组,利用siRNA技术在Hela细胞中沉默UCH37、MARCH8基因。CCK-8法检测细胞增殖能力。Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。qRT-PCR检测细胞UCH37、MARCH8 mRNA表达水平。Western blotting检测细胞UCH37、MARCH8蛋白水平。 结果宫颈癌Hela细胞UCH37、MARCH8 mRNA和蛋白水平明显高于人正常宫颈上皮HUCEC细胞(P＜0.05)。与si-NC组比较,si-UCH37组UCH37和si-MARCH8组MARCH8的mRNA和蛋白水平均降低；si-UCH37组和si-MARCH8组细胞增殖活性、迁移细胞数量、侵袭细胞数量均减少(P＜0.05)。 结论UCH37和MARCH8在宫颈癌细胞中高表达,干扰其表达后可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

UBQLN1诱导上皮-间质转化促进食管鳞癌细胞的迁移和侵袭

目的分析泛醌蛋白1（UBQLN1）及上皮-间质转化（EMT）标志分子在食管鳞癌（ESCC）组织中的表达及其相关性,探讨UBQLN1对ESCC细胞迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和western blot检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达;RT-qPCR检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中EMT标志分子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA表达;构建UBQLN1 siRNA和过表达重组质粒,分别转染ESCC细胞系EC9706、HET-1A和TE-1;采用划痕试验和Transwell试验检测各细胞的迁移和侵袭能力;RT-qPCR和western blot检测各组EC9706细胞中EMT标志分子的mRNA和蛋白表达。结果 ESCC癌组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC癌组织中E-cadherin mRNA的表达低于癌旁组织（P<0.05）,而N-cadherin和Vimentin mRNA的表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC组织中UBQLN1与E-cadherin的mRNA表达呈负相关（r=-0.517 3,P<0.001）,而与N-cadherin和Vimentin的mRNA表达呈正相关（r=0.780 3、0.685 6,P<0.001）。下调UBQLN1表达增加EC9706、HET-1A和TE-1细胞中E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Vimentin的表达,抑制其迁移和侵袭,而过表达UBQLN1下调E-cadherin的表达,上调N-cadherin和Vimentin的表达,促进细胞迁移和侵袭。结论 UBQLN1能诱导EMT,促进ESCC细胞的迁移和侵袭。     

TRIM32在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的：探讨TRIM32在肝细胞癌（HCC）组织中的表达和预后价值,及其对HCC细胞恶性生物学行为的影响。方法：使用癌症基因组图谱（TCGA）的测序数据评估HCC中TRIM32的表达是否有差异。qPCR和Western Blot分别检测TRIM32在HCC组织中的mRNA和蛋白表达水平。进一步分析TRIM32的表达水平与HCC患者临床病理特征的关系。使用Kaplan-Meier Plotter网站和Cox回归分析评估TRIM32在HCC中的预后价值。向HCC细胞中转染si-TRIM32,分别采用细胞增殖实验、划痕实验和Transwell侵袭实验检测敲低TRIM32对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。利用Linkedomics数据库分析与TRIM32相关的基因并进行KEGG分析。结果：TRIM32在HCC组织高表达（P<0.05）。TRIM32表达的上调与HCC患者的病理分期、组织学分级、血清甲胎蛋白（AFP）表达升高和不良预后显著相关（P<0.05）。功能实验表明,敲低TRIM32可以抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。KEGG分析表明,TRIM32及其相关...     

IQ结构域GTP酶激活蛋白3表达对宫颈癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨宫颈癌组织及细胞系中IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQGAP3)的表达及其对宫颈癌细胞增殖、凋亡和转移的影响。 方法 应用免疫组化和定量PCR检测IQGAP3在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达,利用siRNA敲低IQGAP3在宫颈癌细胞CaSki和HeLa中的表达,通过MTT法和流式细胞术分别检测IQGAP3表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,通过Transwell检测IQGAP3表达对宫颈癌细胞迁移的影响,从而探讨IQGAP3在宫颈癌细胞的增殖、凋亡及迁移过程中的作用。 结果 IQGAP3在宫颈癌组织及细胞中高表达,高表达IQGAP3的患者预后较差(χ2=6.15, P=0.01);敲降IQGAP3在宫颈癌细胞CaSki和HeLa的表达后,宫颈癌细胞的增殖受到抑制,凋亡增加,细胞迁移减少,E-cadherin表达增加,N-cadherin表达下调(P均<0.001)。 结论 IQGAP3在宫颈癌组织中表达上调,在宫颈癌细胞增殖和转移过程中发挥重要作用;IQGAP3通过诱导上皮细胞-间充质转变(EMT),促进宫颈癌细胞的转移。     

过表达CLEC5A基因抑制肝细胞癌增殖和转移并逆转上皮-间质转化

目的 研究C型凝集素结构域家族5成员A（CLEC5A）对肝细胞癌（HCC）增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化（EMT）特性的影响,探索CLEC5A在HCC发生发展过程中的作用及机制。方法 采用免疫组化实验检测CLEC5A在50例HCC组织和癌旁组织中的表达特点,并分析其与HCC肝癌临床病理参数的相关性;通过慢病毒转染构建CLEC5A过表达HCC细胞,分别采用细胞增殖实验（CCK-8法、EdU法）、细胞迁移和侵袭实验（Transwell法）和Western blot实验检测CLEC5A对HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力以及EMT标志物表达水平的影响。结果 CLEC5A蛋白在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织,其表达水平与患者的肿瘤大小（P=0.008）、肿瘤数量（P=0.010）、肿瘤分化程度（P=0.016）、BCLC分期（P=0.040）和微血管侵犯（P=0.024）等相关;过表达CLEC5A能够抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并逆转HCC细胞的EMT特性。结论 CLEC5A是HCC潜在的抑癌基因,有望成为该疾病新的治疗靶点。     

环状RNA Hsa_circ_0006948对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨环状RNA Hsa_circ_0006948（circ_0006948）对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 qRT-PCR检测SCC-15、CAL27和HIOEC细胞circ_0006948的表达;将SCC-15细胞分别转染pc-NC、pc-circ_0006948、si-NC、si-circ_0006948,记为pc-NC组、pc-circ_0006948组、si-NC组以及si-circ_0006948组,取正常培养的细胞作为NC组。CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆法检测细胞克隆情况;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞E-Cadherin、N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果 与HIOEC细胞相比,CAL27细胞和SCC-15细胞中circ_0006948表达明显升高（P＜0.05）,由于SCC-15细胞中circ_0006948的表达最高,后续使用SCC-15细胞进行后续转染实验。与NC组和pc-NC组相比,pc-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显升高（P＜0.05）,细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显降低（P＜0.05）;与NC组和si-NC组相比,si-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显升高（P＜0.05）。结论 circ_0006948在OSCC细胞中呈高表达,过表达circ_0006948会促进SCC-15细胞增殖,克隆,迁移,侵袭,并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控上皮间充质转化（EMT）有关     

LncRNA UCA1通过调节miR-206/PTP1B轴影响宫颈癌细胞增殖迁移及侵袭

【摘要】 目的 探讨LncRNA UCA1通过miR-206 / PTP1B轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 将细胞培养后随机分为对照组、si-NC组（转染si-NC）、si-UCA1组（转染si-UCA1）、si-PTP1B组（转染si-PTP1B）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-206组（转染miR-206）、anti-miR-206组（转染anti-miR-206）、miR-NC+si-NC组（转染miR-NC 和si-NC）、miR-206+si-NC组（转染miR-206和si-NC）、anti-miR-206+si-NC组（转染anti-miR-206和si-NC）、anti-miR-206+si-UCA1组（转染anti-miR-206和si-UCA1）、miR-NC+si-PTP1B组（转染miR-NC和si-PTP1B）、anti-miR-206+si-PTP1B组（转染anti-miR-206和si-PTP1B）。qRT-PCR检测宫颈癌细胞UCA1和miR-206的表达;Western blot检测宫颈癌细胞PTP1B的表达;荧光素酶报告基因实验验证UCA1与miR-206、miR-206与PTP1B的靶向关系;CCK-8检测宫颈癌细胞活力;流式细胞术检测宫颈癌细胞凋亡;Transwell实验检测宫颈癌细胞迁移和侵袭能力。 结果 与人正常宫颈上皮细胞相比,宫颈癌细胞中UCA1表达显著升高（P＜0.01）,miR-206表达显著降低（P＜0.05）。与si-NC组相比,si-UCA1组细胞UCA1表达、细胞活力、迁移和侵袭能力均显著降低（P＜0.01）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。UCA1和miR-206间存在相互调控作用;与miR-NC+si-NC组相比,miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）,anti-miR-206+si-NC组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-UCA1组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.01）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。miR-206靶向调控PTP1B;与miR-NC+si-NC组相比,anti-miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜005）,miR-NC+si-PTP1B组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-PTP1B组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。 结论 LncRNA UCA1通过调节miR-206 / PTP1B轴促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

MicroRNA-93在宫颈癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响

目的  探讨microRNA-93（miR-93）在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法  收集2014年1月-2014年7月中南大学湘雅医院有完整病历资料的41例宫颈癌患者组织标本及对应癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测宫颈癌组织中miR-93表达水平;采用脂质体转染法将miR-93模拟片段（mimic）转染入宫颈癌Hela细胞,恢复细胞内miR-93表达;活细胞计数试剂盒（CCK-8）和流式细胞术检测miR-93对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响;Transwell小室法检测其对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测Hela细胞中上皮生长因子受体（EGFR）及其下游蛋白的表达量变化。结果  41例宫颈癌患者肿瘤组织中miR-93表达量（0.048±0.013）低于癌旁组织（0.113±0.025）,差异有统计学意义（P =0.026）;转染miR-93模拟片段后,宫颈癌Hela细胞中miR-93表达恢复;与对照组和空白组比较,实验组宫颈癌细胞增殖能力下降（P =0.004）,早期凋亡比例增加（P =0.032）,侵袭（P =0.003）和迁移能力下降（P =0.003）;过表达miR-93的Hela细胞EGFR及下游的p-AKT表达下降（P =0.005）,而总AKT蛋白无明显变化（P =0.372）。结论  miR-93在宫颈癌组织中的表达量下降,恢复其在宫颈癌细胞中的表达能够明显抑制其细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制部分与miR-93抑制宫颈癌细胞EGFR/AKT信号通路活性有关。

     

沉默环状RNA hsa_circ_0011021表达对宫颈癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

【摘要】 目的 探讨环状RNA（circRNA）hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和细胞株中的表达变化及其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 选取河南科技大学第一附属医院就诊的15例宫颈癌患者,取15对宫颈癌组织和癌旁组织。qRT PCR实验检测hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和宫颈癌癌旁组织（Hela和SiHa）细胞中的相对表达水平;CCK 8和克隆形成实验检测沉默hsa_circ_0011021对Hela细胞活性和克隆形成能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默hsa_circ_0011021对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 hsa_circ_0011021在宫颈癌组织的相对表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.05）;hsa_circ_0011021在Hela和SiHa细胞中的相对表达水平明显高于人永生化表皮细胞HaCaT（P＜0.05）。在Hela细胞沉默hsa_circ_0011021,Hela细胞的活性和克隆形成能力显著降低,迁移距离明显减少,侵袭能力也明显下降（P＜0.05）。结论 hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和宫颈癌细胞（Hela和SiHa）中的表达水平明显升高;沉默hsa_circ_0011021显著抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭。     

CDKL1在肺腺癌中的表达及其对肺腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1(CDKL1)在肺腺癌（LUAD）中的表达及其对LUAD细胞增殖、侵袭和迁移能力等细胞恶性生物学行为的影响。方法：采用TCGA数据库分析CDKL1基因在LUAD组织和正常肺组织中的表达差异；利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析CDKL1基因表达水平与LUAD患者预后的关系；收集78例行手术切除的LUAD组织和对应癌旁组织，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹（western blotting）法检测LUAD组织和癌旁组织中CDKL1 mRNA和蛋白的表达水平，并分析CDKL1表达水平与LUAD患者临床病理特征的关系。体外培养LUAD细胞系NCI-H1975，并将CDKL1过表达质粒及其空载质粒转染至NCI-H1975细胞中，分别为空白对照（blank）组、空载（Vector）组和CDKL1过表达（oe-CDKL1）组。然后采用细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）和BrdU法检测细胞增殖活性；流式细胞术检测细胞凋亡水平；Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力变化；Western blotting法检测细胞凋亡蛋...     

长链非编码 RNAFBXL19-AS1通过下调 miR-223表达增加宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力

摘要:目的 明确 F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义 RNA1(F-boxandleucinerichrepeatprotein19antisense RNA1,FBXL19-AS1)与微小 RNA-223(microRNA-223,miR-223)对宫颈癌生物学行为的影响,并探讨 FBXL19-AS1是 否对 miR-223具有调节作用。方法 利用实时荧光定量聚合酶链反应检测 FBXL19-AS1与 miR-223在44例宫颈癌样 本与细胞系的表达。利用荧光原位杂交技术检测 FBXL19-AS1的定位。利用寡核苷酸片段干扰 FBXL19-AS1与过表 达 miR-223。应用 CCK-8法检测细胞增殖能力。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。 蛋白质印迹法检测各蛋白的表达量。应用荧光素酶报告基因实验检测FBXL19-AS1对 miR-223的调节作用。结果 与 癌旁组织及 End1/E6E7细胞相比,癌组织及 HeLa细胞 FBXL19-AS1表达量上调而 miR-223表达量下调,二者呈负相 关(均P<0.05)。FBXL19-AS1定位于细胞质。FBXL19-AS1表达与肿瘤大小、淋巴结转移、宫颈侵袭深度以及 FIGO 分期相关(均P<0.05)。干扰FBXL19-AS1显著降低 HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力。过表达 miR-223显著降低 HeLa细胞增殖,迁 移 和 侵 袭 能 力。FBXL19-AS1 通 过 海 绵 吸 附 方 式 下 调 miR-223 表 达。干 扰 miR-223 部 分 逆 转 干 扰 FBXL19-AS1对 HeLa细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。结论 FBXL19-AS1通过下调 miR-223表达增加宫颈癌细胞 的增殖、迁移和侵袭能力。