siRNA沉默ERCC1基因表达对结肠癌细胞奥沙利铂耐药的影响和机制

目的 采用小干扰RNA(siRNA)技术作用于人结肠癌细胞HCT116中的ERCC1,探讨其对结肠癌铂类耐药细胞株增殖、凋亡的影响。方法 体外培养结肠癌奥沙利铂耐药细胞株HCT116/L-OHP并验证其耐药性;qRT-PCR和蛋白印迹技术检测细胞和组织中ERCC1表达量的变化;采用siRNA-NC和siRNA-ERCC1转染细胞,CCK-8法检测耐药细胞的增殖能力,流式细胞术检测耐药细胞的凋亡变化。结果 结肠癌耐药组织和人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP ERCC1的表达水平明显升高(P<0.05);转染siRNA ERCC1后,HCT116/L-OHP细胞中的ERCC1 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05);奥沙利铂联合处理后,siRNA ERCC1转染使HCT116/L-OHP细胞的增殖活性下降、凋亡率升高。结论 siRNA能有效下调ERCC1基因表达,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡,增强奥沙利铂对耐药细胞株HCT116/L-OHP的杀伤作用。     

吲哚美辛对结肠癌细胞CDK2、CDK4、P21WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的：非甾体类抗类药通过环氧合酶途径是抑制肿瘤的机制之一，是否还有其他途径抑制细胞增殖及诱导凋亡。探讨吲哚美辛抗肿瘤的作用机制。为其临床应用实验依据。方法：不同浓度的吲哚美辛作用于结肠癌细胞株HCT116细胞24h，通过Western蛋白印迹技术检测CDK2、CDK4、p21s^WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果：吲哚美辛降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2、CDK4及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达上，上调细胞周期依赖蛋白激酶抑制剂p21s^WAF1/CIP1蛋白，而对促凋亡蛋白Bax的表达无影响。结论：吲哚美辛通过降低CDK2、CDK4、Bcl-2蛋白，上调p21s^WAF1/CIP1的表达来抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

微小RNA-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭迁移影响及其与同源盒基因A10结合力

目的 观察微小RNA-144(miR-144)对人结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及其与同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)的结合力。方法 (1)人结肠癌细胞株HCT116、SW480、CL-11和永生化正常人结肠上皮细胞株FHC中miR-144及HOXA10 mRNA检测：采用实时荧光定量PCR法检测HCT116、SW480、CL-11及FHC中miR-144与HOXA10 mRNA，观察人结肠癌细胞和人结肠上皮细胞miR-144、HOXA10 mRNA表达变化，选择miR-144相对表达量最低HCT116细胞为后续研究对象。(2)miR-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响观察：取对数生长期HCT116细胞分为3组，1组细胞顺序转染miR-144模拟物（miR-144 mimics）和HOXA10过表达质粒pcDNA3.1-HOXA10,2组细胞转染miR-144 mimics,3组细胞转染空白质粒。转染24 h时测算各组细胞增殖活性、观察各组细胞的侵袭及迁移情况、检测各组细胞miR-144及HOXA10蛋白。(3)HCT116细胞中miR...     

TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组：NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<...     

广西地区鼻NK/T细胞淋巴瘤p-ATM和CHK2表达及其临床意义

目的探讨广西地区鼻NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)组织磷酸化共济失调毛细血管扩张突变(p-ATM)蛋白和磷酸化检测点激酶2(checkpoint kinase 2,CHK2)蛋白表达及其临床意义。方法收集2010-01~2016-12该院49例鼻NKTCL组织(研究组)及患者的临床资料,另取30例同期鼻咽黏膜良性淋巴样增生(NBLP)组织作为对照组。比较p-ATM蛋白和CHK2蛋白在鼻NKTCL组织和NBLP组织间的表达差异。分析NKTCL组织p-ATM蛋白和CHK2蛋白表达水平与患者临床特征及预后的关联性。结果研究组p-ATM蛋白高表达者23例(46.94%),低表达者26例(53.06%);CHK2蛋白高表达者24例(48.98%),低表达者25例(51.02%)。对照组p-ATM蛋白和CHK2蛋白均为低表达者,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。鼻NKTCL组织CHK2高表达组临床分期为Ⅰ/Ⅱ期的比例低于CHK2低表达组(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,鼻NKTCL组织p-ATM高表达组的中位生存时间为6个月,p-ATM低表达组中位生存时间为21个月,低表达组生存预后优于高表达组(P=0.011);鼻NKTCL组织CHK2高表达组的中位生存时间为7个月,低表达组中位生存时间为21个月,低表达组生存预后优于高表达组(P=0.025)。鼻NKTCL组织p-ATM蛋白和CHK2蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论ATM和CHK2蛋白的异常表达在广西地区鼻NKTCL的发生和发展中具有重要作用。检测鼻NKTCL组织p-ATM和CHK2蛋白表达水平有助于评估患者预后。     

MicroRNA-21(miR-21)在大肠癌细胞中的表达及其靶基因

目的探讨微RNA(miRNA)-2l在大肠癌(CRC)细胞中的表达,抑制miRNA-21(miR-21)表达对大肠癌细胞中磷酸醋酶张力蛋白同源物(PTEN)、PI3K、蛋白激酶B(Akt)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、mTOR表达的影响及其可能调控的靶基因。方法通过反义寡核苷酸(ASO)技术抑制大肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证。通过荧光定量PCR(FQ-PCR)技术及Western印迹法检测HCT116细胞中PTEN、PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达的改变。利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,荧光素酶双报告基因系统检测PTEN活性。结果 miR-21在HCT116中表达最高,在SW480中表达最低。miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制,并且PTEN蛋白的表达明显上调,PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调。筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一。结论抑制miR-21的表达可促进HCT116细胞PTEN表达升高,PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调,PTEN可作为miR-21的靶基因参与调控过程。miRNA-21在CRC中表达失控,通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移。     

胃腺癌中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

目的检测胃腺癌中细胞周期检测点激酶(CHK)1、2和DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51的表达,分析三者在不同临床特征中的表达意义及相关性。方法以97例胃腺癌术后组织为观察组,以切端经病理证实为正常胃黏膜组织80例为对照组,应用免疫组化方法检测两组CHK1、CHK2和RAD51表达,分析其表达的特征及相关性。结果观察组CHK1、CHK2和RAD51表达的阳性率明显高于对照组,观察组CHK1、CHK2和RAD51表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和临床分期相关,而与淋巴结转移无关。CHK1和RAD51、CHK2和RAD51的表达具有正相关性。结论 CHK1、CHK2和RAD51高表达可以有效促进胃腺癌发生和进展,CHK1、CHK2和RAD51具有一定协同作用。     

慢病毒介导的CDK2-shRNA促进黑色素瘤细胞A375凋亡

目的探讨慢病毒介导的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2-shRNA对人黑色素瘤细胞A375凋亡的影响。方法依据CDK2基因序列,设计3条靶向干扰CDK2的序列,构建CDK2-shRNA慢病毒载体,质粒转染人胚肾细胞株(HEK293)细胞进行慢病毒包装,滴度测定包装的重组p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒,免疫印迹检测对CDK2的干扰效率及对细胞周期蛋白(cyclin)E、E2F1、RB蛋白表达的影响,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测A375凋亡的发生。结果成功获得包装的重组p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒,病毒滴度为5×108TU/ml。重组的p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒能有效下调CDK2、cyclin E、E2F1蛋白表达,抑制A375细胞增殖和触发凋亡。结论基于慢病毒介导的CDK2-shRNA能够促进黑色素瘤细胞A375凋亡发生,为黑色素瘤的基因治疗提供理论支撑。     

microRNA-122抑制肝肿瘤细胞HepG2的增殖研究

目的探究microRNA-122(miR-122)对肝肿瘤细胞HepG2增殖的抑制效应。方法培养肝肿瘤细胞HepG2并随机分为miR-122组、阴性对照组(NC组)、空白对照组,miR-122组使用LipofectamineTM2000试剂转染肝癌细胞株HepG2细胞,NC组将阴性对照siRNA转染HepG2细胞,空白对照组只加胎牛血清RPMI-1640培养基。转染24 h后,采用MTS试剂盒测定细胞活力,计算细胞增殖抑制率,采用荧光定量PCR测定细胞中凋亡抑制蛋白(XIAP)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGFR1、VEGFR2、肝细胞生长因子(HGF)的mRNA含量。结果干预后24 h,miR-122组细胞的吸光值(OD)明显低于空白对照组、NC组,细胞增殖抑制率明显高于NC组(t=9.43、19.475、P0.05),miR-122组细胞中XIAP、Cyclin D1、CDK2、CDK4 mRNA含量明显低于空白对照组、NC组(t=8.135、7.542、11.740、5.937,P0.05),VEGF、VEGFR1、VEGFR2、HGF mRNA含量明显低于空白对照组、NC组(t=7.741、13.002、6.347、6.662,P0.05)。结论 miR-122能够抑制肝肿瘤细胞HepG2的增殖,靶向抑制细胞周期相关分子、血管新生相关分子的表达是miR-122发挥增殖抑制效应的可能机制。     

重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞周期、凋亡以及P21表达的影响

目的将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖（DCN）真核表达载体转染到HepG2中并检测其表达同时研究其抗肿瘤作用的机制。方法脂质体介导分泌型DCN真核表达载体转染HepG2细胞，经G418筛选建立稳定转染的细胞株，采用RT-PCR、免疫组化检测其表达。MTT检测细胞增殖活力，流式细胞仪分析细胞周期，RT-PCR方法检测P21^WAF1/CIP1mRNA表达情况。结果RT-PCR可见转染组细胞DCNmRNA表达明显增多，免疫组化可见转染组细胞DCN蛋白表达明显增高。细胞生长曲线显示转染组细胞生长缓慢；G1期细胞显著增多；P21^WAF1/CIP1mRNA表达增高。结论本研究成功建立稳定转染DCN的HepG2细胞株，证实DCN通过阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和提高P21^WAF1/CIP1蛋白抑制HepG2的生长。     

miR-21通过调节TGF-β/activin信号通路影响人骨髓间质干细胞向成骨细胞分化的机制

目的 研究miR-21调控转化生长因子(TGF)-β/activin信号通路对人骨髓间质干细胞(BMSCs)分化为成骨细胞的影响。方法 将BMSCs培养后分为空白对照组(无转染)、miR-21过表达组(转染miR-21 mimics)及miR-21敲低组(转染miR-21 inhibitor)后对细胞进行转染，TGF-β/激活蛋白(activin)信号通路上miR-21的靶基因为TGF-β受体Ⅱ(TGF-βR2)、TGF-β1,RT-PCR检测miR-21、TGF-βR2、TGF-β1、骨特异性转录因子(Runx2)、成骨细胞特异基因(Osterix)mRNA;Western印迹检测TGF-βR2、TGF-β1、Runx2、Osterix蛋白；检测成骨细胞钙沉积、碱性磷酸酶(ALP)活性及骨桥蛋白(OPN)的表达。结果 与空白对照组相比，miR-21过表达组中TGF-β1与TGF-βR2 mRNA及蛋白的表达均显著上升(P<0.05),而miR-21敲低组中TGF-β1与TGF-βR2 mRNA及蛋白的表达显著降低(P<0.05)。miR-21与TGF-β1、TGF-βR2...     

老年宫颈鳞癌患者癌组织中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

目的检测老年宫颈鳞癌患者癌组织中细胞周期检测点激酶(CHK)1、2和DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51的表达特征,关注其在不同临床特征中的表达差别及相关性。方法 121例老年宫颈鳞癌患者作为观察组,以70例慢性宫颈炎组织作为对照组,采用免疫组织化学方法检测CHK1、2和RAD51表达及在不同临床病理特征中的表达差别及相关性。结果观察组CHK1、2和RAD51表达阳性率明显高于对照组,观察组CHK1、2和RAD51表达阳性率与肿瘤最大径、淋巴结转移、脉管浸润、累及宫颈管深度和Ki67表达密切相关。观察组CHK1和2、CHK1和RAD51、CHK2和RAD51的表达均呈正相关性。结论老年宫颈鳞癌患者癌组织中CHK1、2和RAD51高表达且具有协同作用,不仅可以加速肿瘤发生和进展,也可能对判断肿瘤生物学行为有重要意义。     

错配修复基因MLH1激活p53和线粒体凋亡通路参与雌激素诱导的结肠癌细胞凋亡

临床和流行病学研究显示雌激素替代治疗可降低绝经后妇女的结直肠癌发生风险。前期研究发现雌激素能上调结肠癌细胞的错配修复(MMR)基因MLH1表达,在MLH1基因缺失的结肠癌细胞中再表达MLH1能明显增强雌激素诱导的细胞凋亡。目的:探讨MLH1参与雌激素诱导结肠癌细胞凋亡所涉及的信号通路以及p53及其相关基因在此凋亡通路中的作用。方法:以含人野生型MLH1(hMLH1)全长cDNA的质粒转染MLH1基因缺失的人结肠癌细胞株HCT116。以转染空质粒的HCT1 16细胞作为对照,在有或无雌激素作用的条件下,采用电泳法检测凋亡DNA Ladder,蛋白质印迹法检测p53等凋亡相关蛋白表达。结果:转染hMLH1后,10~(-8)mol/L雌二醇(E_2)能明显诱导HCT116细胞凋亡。转染hMLH1并经E_2处理的HCT116细胞(D组)与经E_2处理但未转染hMLH1的HCT116细胞(B组)相比,其caspase-3、caspase-9、p53、Bax、胞质细胞色素C蛋白表达均显著增强,D组上述蛋白表达亦均高于转染hMLH1但未经E_2处理的HCT116细胞(C组)。结论:MMR基因MLH1主要通过激活p53和线粒体凋亡通路参与雌激素诱导的人结肠癌细胞株HCT116凋亡。     

弓形虫ROP16蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨弓形虫Ⅰ型(RH)ROP16蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期及凋亡方面的作用。方法 以空载体(MCF-7-HBLV)和过表达ROP16蛋白的慢病毒(HBLV-RH ROP16)分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达ROP16的细胞株,Real time PCR、Western blot法检测MCF-7细胞中ROP16 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖、周期和凋亡。Western blot法检测细胞周期及凋亡相关蛋白表达。结果 相比MCF-7-HBLV(空载体组)和MCF-7细胞组(对照组),MCF-7-RH ROP16细胞组中ROP16 mRNA和蛋白表达升高;细胞增殖率降低(P<0.01);S期细胞比例、细胞凋亡率升高(P<0.01)。促凋亡因子Bax、P53、Caspase-9、Caspase-3及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21表达增高(P<0.01);抗凋亡蛋白Bcl-2及细胞周期蛋白A1(CyclinA1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达均下降(P<0.01)。结论 弓形虫Ⅰ型(RH)ROP1...     

pemt2-Cdna转染抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞周期相关蛋白的表达

目的探讨磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶2（PEMT2）的转染抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法将带有完整pemt2-cDNA质粒转染人大鼠肝癌CBRH-7919细胞，筛选出稳定传代并高表达PEMT2的细胞株，用Westem blot比较了细胞周期调控因子细胞周期蛋白D1／细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4、细胞周期蛋白E／CDK2、phospho—Rb、caspase3、c-jun以及小窝蛋白caveolin的表达变化。结果在PEMT2高表达细胞中CDK2、CDK4、phospho—Rb和cjtin表达下调，caspase3表达上调。结论PEMT2的高表达降低cDK2和cDK4的表达水平，同时下调原癌基因phospho—Rb和c-jun的表达，抑制肝癌细胞由G1期进入S期，从而抑制肝癌细胞增殖并诱发肝癌细胞的凋亡。     

大肠癌胃泌素、生长抑素的表达及比势与细胞周期调控基因的相关性

目的:探讨大肠癌组织中胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)的表达及其比势与细胞周期调控蛋白P16~(INK4a)、P21~(CIP1)及细胞周期素(Cyclins)、细胞周期依赖性蛋白激酶(CDKs)表达的关系.方法:随机选择79例大肠癌患者的手术切除标本,采用免疫组化SP法检测GAS、SS、P16~(INK4a)、P21~(CIP1)、Cvclin D1、Cvclin E、Cyclin A、Cyclin B1、CDK2、CDK4的表达情况.结果:Cyclin D1、CDK2、CDK4、Cyclin A在GAS高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组;而P16~(INK4a)、P21~(CIP1)阳性表达率与此相反.cyclin E在SS低表达组的阳性表达率明显高于中表达组、高表达组;P21~(CIP1)在ss高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组;CDK2在SS低表达组的阳性表达率明显高于SS高表达组.大肠癌组织中GAS、SS表达的积分比值(GAS/SS)与Cyclin D1(r =0.252)、Cyclin E(r=0.387)、Cyclin A(r= 0.466)、CDK2(r=0.519)、CDK4(r=0.434)呈正相关(P<0.01)与P16~(INK4a)(r=-0.385)、P21~(CIP1)(r =-0.454)蛋白的表达积分呈负相关(P<0.01).结论:GAS、SS对大肠癌细胞生长的调控可能与P16~(INK4a)、P21~(CIP1)、Cvclin D1、Cvclin A、CDK2、CDK4、cvclin E基因异常表达有关.GAS对大肠癌细胞周期的调控位点可能在G1、S、G2期,SS对大肠癌细胞周期的调控位点可能在G1/S、G2/M期的交界点,即S、M期的入口.对大肠癌GAS/SS积分比值分析、可作为临床大肠癌生物学行为的重要评估指标.     

弓形虫Ⅰ型和Ⅱ型ROP16蛋白对人肺腺癌A549细胞增殖、周期和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨弓形虫Ⅰ型和Ⅱ型ROP16蛋白对人肺腺癌A549细胞增殖、周期和凋亡的影响及分子机制。方法将构建好的Ⅰ型和Ⅱ型ROP16重组慢病毒表达载体(A549-RH ROP16、A549-Me49ROP16)感染A549细胞,经嘌呤筛选稳定后获得单克隆过表达细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot法鉴定过表达效果,免疫荧光法检测其定位。CCK-8法测定A549细胞的增殖活性。流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化水平。Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspases-3、Caspase9、p53和细胞周期相关蛋白p21、CDK6、CyclinD1的蛋白水平。结果Western blot和q-PCR检测结果显示,重组慢病毒表达载体转染A549细胞72h后其ROP16mRNA和蛋白都有明显表达(P<0.05)。cck8检测结果显示,Ⅰ型ROP16蛋白抑制A549细胞增殖(P<0.05)。流式细胞术检测显示,与对照组比较,Ⅰ型ROP16过表达组中细胞凋亡率下降20.69%,G1期细胞百分由原来的63.2%升高到83.2%。Western blot结果显示促细胞周期G1/S转化因子CDK6、CyclinD1蛋白表达明显降低,而细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21表达明显升高(P<0.05);促凋亡因子Bax、Cleaved Caspases-3、Caspase9、p53蛋白的表达明显升高,抗凋亡因子Bcl-2表达受到抑制(P<0.05)。而Ⅱ型ROP16过表达组与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论Ⅰ型ROP16蛋白过表达可诱导人肺腺癌A549细胞周期停滞和细胞凋亡。     

至真方抑制自噬改善大肠癌HCT-116/L-OHP细胞耐药性

[目的]探讨至真方对大肠癌HCT116/L-OHP细胞耐药性的影响,并从自噬角度探讨至真方改善大肠癌HCT116/L-OHP耐药的可能作用机制。[方法]CCK-8及Western blot检测大肠癌HCT116/L-OHP细胞耐药性;mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示体系检测至真方对大肠癌HCT116/L-OHP细胞自噬的影响;流式细胞术检测至真方对大肠癌HCT116/L-OHP细胞凋亡诱导作用;Western blot检测至真方干预后耐药细胞自噬标志蛋白Beclin-1、SQSTM1/P62、LC3的表达。[结果]至真方可下调LC3、Beclin-1、上调SQSTM1/P62的表达(P0.05),经低、中、高浓度干预后凋亡率分别为5.1%、7.7%、13.1%(P0.05)。mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示体系检测发现至真方干预组随着浓度的降低,黄点(自噬体)和红点(自噬溶酶体)数量均减少(P0.05)。[结论]至真方可通过抑制HCT-116/L-OHP细胞自噬活性,增加大肠癌HCT-116/L-OHP细胞凋亡率,恢复其部分敏感性。     

长链非编码RNA-CECR7抑制食管癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨长链非编码RNA-CECR7(lncRNA-CECR7)对食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人食管癌细胞KYSE30、EC9706、TE-13、Eca109和人食管黏膜上皮细胞HET-1A中lncRNA-CECR7的表达,以表达量最高的食管癌细胞作为转染对象,分别转染siRNACECR7(实验组)或siRNA-NC(对照组);qRT-PCR检测转染后两组中lncRNA-CECR7的表达;集落形成实验和细胞增殖试验(MTS法)检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、细胞周期素D1(Cyclin D1)和p21活化蛋白激酶2(PAK2)mRNA及蛋白的表达水平。结果 lncRNA-CECR7在食管癌细胞中表达明显高于食管黏膜上皮细胞,其中TE-13细胞中的表达最高;与对照组相比,沉默CECR7后,实验组细胞周期明显受到抑制,细胞凋亡比例显著增加,细胞增殖能力被抑制。实验组TE-13细胞中CDK4、Cyclin D1和PAK2mRNA及蛋白的表达明显降低(P0.05)。结论 lncRNA-CECR7在食管癌细胞中高表达,沉默CECR7可抑制TE-13细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过抑制CDK4、Cyclin D1和PAK2基因的表达,为食管癌诊断和治疗提供了新的方向。     

Lin28对胃腺癌细胞株增殖周期的影响及机制

目的:通过检测可以调控微小RNA(microRNA)生成的RNA结合蛋白Lin28在不同分化程度胃腺癌细胞中的表达水平,探讨了Lin28对胃癌细胞周期的影响及其可能的机制。方法:用RT-PCR法在RNA水平检测Lin28的表达,免疫荧光染色分析Lin28蛋白和人细胞角蛋白18(CK-18)在细胞中的共表达情况,分别应用RNA干扰技术敲减Lin28,及细胞转染技术过表达Lin28,比较Lin28表达水平变化前后细胞周期调控相关蛋白的变化情况,碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色检测细胞周期变化。结果:Lin28在高分化胃腺癌细胞株MKN28中的RNA和蛋白水平均低表达,而在低分化胃腺癌细胞株MKN45中均高表达;Lin28与肿瘤干细胞的常见标志物CK-18共表达于极少数胃癌细胞中;敲减了Lin28的MKN45细胞株S期则明显增加,而G1期比对照组相应地减少。相反,Lin28过表达导致S期明显减少,而G1期比对照组相应增加。Westernblot检测发现,敲减了Lin28的MKN45细胞株细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)蛋白发生明显的上调,抑制其活性的蛋白p21和p27水平降低;而MKN28获得Lin28后,CDK2水平有所下调,p21和p27表达水平上调。结论:Lin28参与胃癌细胞分化和细胞周期相关的调控,且对细胞周期抑制蛋白p21/CDK2,p27/CDK2也发挥着一定的调节作用。