和厚朴酚对肺癌细胞紫杉醇耐药的逆转作用及对Notch信号通路的影响

目的 探究和厚朴酚对肺癌细胞紫杉醇耐药的逆转作用及对Notch信号通路的影响。方法 以不同浓度和厚朴酚(0、10、20、30、40、50μmol/L)联合5 nmol/L紫杉醇处理紫杉醇耐药的肺癌细胞(A549/Taxol),采用MTT检测细胞存活率,筛选试验浓度。再将A450/Taxol细胞分为对照组、紫杉醇组、和厚朴酚+紫杉醇组和Notch信号通路激活剂(Jagged1/FC)组,检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,并采用Western Blotting法检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白及Notch信号通路蛋白表达。结果 5 nmol/L紫杉醇与20、30、40、50μmol/L和厚朴酚联用时,细胞存活率明显降低,其中30μmol/L和厚朴酚抑制效果最佳,选用此浓度进行后续实验;与紫杉醇组比较,和厚朴酚+紫杉醇组细胞存活率、细胞迁移能力降低,细胞凋亡率升高,c-Myc、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Notch1、Jagged1和Hes1表达下调,cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9和E-c...     

低氧条件下共培养体系中肺动脉内皮细胞经Notch1/Jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖

目的探讨低氧条件下细胞共培养体系中肺动脉内皮细胞经由Notch1/Jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖。方法建立Transwell共培养体系,将肺动脉内皮细胞(PAEC)和平滑肌细胞(PASMC)分别接种于下室和上室,PAEC经DAPT(Notch信号阻断剂)或(和)S iR-NA-Jagged1预处理后,与PASMC共同置入自动常压缺氧孵箱进行低氧处理。根据PAEC是否行DAPT、Jagged1小RNA干扰预处理进行实验分组:常氧时PAEC与PASMC共培养对照组(N)、低氧时PAEC与PASMC共培养组(H1)、低氧时DAPT(终浓度10μmol/L)预处理PAEC与PASMC共培养组(H2)、低氧时S iRNA-Jagged1预处理PAEC与PASMC共培养组(H3)、低氧时DAPT加S iRNA-Jagged1预处理PAEC与PASMC共培养组(H4)。用3H-TdR掺入法检测PAEC和PASMC增殖情况,RT-PCR检测PAEC中Notch1、Jagged1 mRNA表达水平。结果低氧时各组PAEC和PASMC的3H-TdR掺入量明显高于常氧共培养对照组(均P<0.01);与H1组比较,...     

γ-分泌酶抑制剂干预对鼠心脏成纤维细胞平滑肌肌动蛋白-α及MMP-1/TIMP-1表达的影响

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂(DAPT)抑制Notch信号通路对心肌成纤维细胞(CFs)平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)的表达及细胞外基质(ECM)降解平衡变化的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法分离和纯化SD乳鼠CFs进行体外培养,将CFs分为正常组(N组,培养时不加干预药物)和尾加压素Ⅱ组(U组,加UⅡ10~(-8) mol/L)和DAPT+尾加压素Ⅱ组(D组,同时加入UⅡ10~(-8) mol/L和DAPT 75μmol/L),培养干预48h后采用RT-PCR法测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、α-SMA和Notch蛋白胞内段(Notch1)mRNA的表达;Western Blot检测α-SMA及Notch1蛋白的表达。结果:U组TIMP-1、α-SMA及Notch1的mRNA表达水平明显高于N组(均P0.01),MMP-1mRNA的表达和MMP-1mRNA/TIMP-1mRNA比值低于N组(均P0.01);D组TIMP-1、α-SMA、Notch1的mRNA表达以及α-SMA和Notch1蛋白的表达均较U组下调(均P0.01),MMP-1mRNA的表达和MMP-1mRNA/TIMP-1mRNA比值较U组上调(P0.01);但D组上述指标与N组相比差异无统计学意义。结论:DAPT可通过阻断Notch信号通路抑制尾加压素Ⅱ诱导的CFs表型转换,激活胶原降解途径,并可重调MMP-1/TIMP-1平衡,此作用有助于抑制心肌纤维化。     

麦冬皂苷B通过调控Notch1信号通路增加前列腺癌细胞的放疗敏感性

目的探讨麦冬皂苷(OP)-B增强前列腺癌(PC)-3细胞放疗敏感性及其可能机制。方法体外培养PC-3细胞,PC-3细胞分为5组:空白对照组(未处理)、阳性对照组(Notch1信号通路特异性阻断剂DAPT处理)、低剂量组(加入2.5μmol/L OP-B)、中剂量组(加入5μmol/L OP-B)、高剂量组(加入10μmol/L OP-B),每组细胞平均分成5份,每份只经0、2、4、6、8 Gy其中一种辐射处理48 h后进行后续实验。四甲基偶唑氮盐(MTT)实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率。Western印迹法检测Notch1、Hes1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase)-3、裂解的多聚ADP核糖聚合酶(cleaved PARP)蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,阳性对照组及OP-B不同剂量组PC-3细胞增殖率、LDH漏出率、Notch1、Hes1及Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P0.05),且高剂量组显著低于低剂量组、中剂量组(P0.05);与空白对照组相比,阳性对照组及OP-B不同剂量组PC-3细胞凋亡率、Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP蛋白表达水平均显著升高,呈剂量依赖关系(P0.05),且高剂量组显著高于低剂量组、中剂量组(P0.05),高剂量组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 OP-B可促进PC细胞凋亡并增加其放疗敏感性,其作用机制可能与抑制Notch1信号通路有关。     

Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡中的作用及机制探讨

目的 观察Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡中的作用,并探讨其机制.方法 将U87细胞随机分为A、B、C组,分别加入Notch信号激活剂rhNF-κB、抑制剂DAPT及PBS共培养48 h.用MTT法检测细胞吸光度值(A值)观察细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot法分别检测U87细胞中的Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白.结果 培养24、48、72、96 h,A组细胞A值分别为0.185±0.007、0.398±0.012、0.735±0.015、1.083±0.031,B组分别为0.102±0.003、0.130±0.004、0.161±0.006、0.194±0.003,C组分别为0.167±0.005、0.265±0.008、0.496±0.011、0.737±0.016,A、B组与C组比较,P均＜0.05.A、B、C组细胞凋亡率分为0.96％±0.17％、26.51％±3.74％、8.76％±1.40％,A、B组与C组比较,P均＜0.05.与C组比较,A组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P均＜0.05),B组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著降低(P均＜0.05).结论 Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡中发挥了重要的调控作用,其机制可能与调节靶基因Hes1、抗凋亡蛋白Bcl-2表达有关.     

Notch1与Jagged1蛋白在大肠腺癌组织中的表达及临床病理意义

目的探讨Notch1和Jagged1蛋白在大肠腺癌发生发展的作用。方法采用免疫组织化学PV-9000法和Western blotting法检测78份大肠腺癌组织(大肠癌组),40份大肠腺瘤组织(腺瘤组)及40份正常大肠组织(距大肠腺癌组织远端5㎝,正常组)Notch1与Jagged1蛋白表达情况,分析其与大肠癌临床病理参数的关系。结果大肠癌组Notch1、Jagged1蛋白阳性率明显高于腺瘤组及正常组,P<0.05;Notch1和Jagged1蛋白表达强度与大肠癌组织学分级、Dukes分期和淋巴结转移密切相关,P均<0.05。大肠癌组Notch1与Jagged1蛋白表达关系呈正相关(r=0.407,P<0.01)。结论 Notch1和Jagged1蛋白在大肠腺癌的发生与发展中起重要作用。     

Notch1蛋白在人心脏瓣膜间质细胞凋亡与钙化关系中的作用

目的用人心脏瓣膜间质细胞(hVICs)在体外培养并用钙化诱导液建立瓣膜钙化模型,观察hVICs钙化过程中Notch1蛋白表达及细胞凋亡情况,探讨Notch1蛋白在hVICs凋亡与钙化关系中的作用。方法将体外培养的hVICs随机分为两组,钙化组用含钙化诱导液的培养基培养,以建立钙化模型,并按1~7天分别诱导细胞,观察钙化的动态过程;空白组用正常培养基(I-GRO PLUS)培养。所有hVICs均培养7天。检测两组细胞钙化结节数目、BMP-4蛋白、Notch1蛋白的表达及hVICs凋亡率。然后将钙化组中诱导钙化细胞再随机分脂多糖组(LPS)、Notch1抑制剂组(γ分泌酶抑制剂,DAPT)、对照组(只加钙化诱导液)体外培养3天,检测BMP-4、Notch1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达。结果与空白组细胞比较,钙化组细胞钙化及Notch1蛋白的表达均高于空白组,且随着诱导天数的增加而增加;细胞凋亡率在钙化诱导3天时最高,随后逐渐下降。LPS组与对照组比较,细胞凋亡和钙化均随着Notch1蛋白的表达增加而增加;DAPT组与对照组比较,细胞凋亡和钙化均减少。结论hVICs钙化与细胞凋亡有着密切的关系,且Notch1蛋白在hVICs凋亡与钙化关系中起着重要的作用。     

Notch信号通路介导血小板源生长因子AA诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨Notch信号通路在血小板源生长因子AA(PDGF-AA)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移中的作用及机制。方法脱臼处死1~2月龄雄性SD大鼠,无菌取腹主动脉,剥弃外膜及去除内皮后,贴块法培养VSMC,α-SM-actin染色鉴定。实验分为四组:对照组、γ-secretase抑制剂组(DAPT组)、PDGF-AA组和PDGFAA+γ-secretase抑制剂组(PDGF-AA+DAPT组)。实时荧光定量PCR(Real-time q PCR)检测Notch信号分子mRNA表达;Cell Titer96 Aqueous One Solution试剂盒检测细胞增殖活性;采用细胞划痕实验检测VSMC的迁移能力。结果腹主动脉VSMC表达Notch信号通路Jagged1、Jagged2、Notch1~3等几种主要的配体及受体;PDGF-AA刺激24h和48 h后分别导致Jagged2和Jagged1 mRNA表达显著增强(P0.01,n=4);与0 h相比,PDGF-AA刺激72 h后,Notch1、Notch3 mRNA表达显著增高(P0.01,n=4),而刺激24 h后Notch2 mRNA表达显著降低。PDGF-AA显著促进HES1(P0.05,n=4)、HEY2(P0.05,n=4)和转录因子Rbp-jКmRNA(P0.05,n=4)表达,DAPT抑制PDGF-AA介导的HES1、HEY2 mRNA表达增强(P0.01,n=4),但是进一步促进PDGF-AA诱导的Rbp-jКmRNA表达(P0.05,n=4);PDGF-AA刺激促进VSMC增殖(P0.01,n=5)和减少划痕余留面积(P0.01,n=4),两种效应均可被DAPT显著阻抑(P0.01,n=4)。结论 PDGF-AA调节了VSMC Notch信号分子表达,PDGF-AA部分通过激活Notch信号通路调节VSMC的增殖和迁移。     

激活Notch1通路减轻高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的明确Notch1通路在高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤中的作用及其潜在机制。方法常规培养H9C2心肌细胞并将其分6组即对照组;H/R组;高温高湿组;高温高湿+H/R组;高温高湿+Jagged1(Notch1激动剂)+H/R组;高温高湿+溶剂+H/R组。TUNEL法检测细胞凋亡,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位,ATP检测试剂盒检测ATP含量,Western blot检测Notch1细胞内段(Notch1 intracellular domain,Notch1 ICD)、Hairy和分裂增强子(Hairy and enhancer of split,Hes1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubuleassociated protein1 light chain 3,LC3)和p62的蛋白表达水平。结果与对照组相比,急性损伤H/R后,细胞凋亡增加(P0.05),线粒体膜电位降低(P0.05),ATP含量减少(P0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I(p62相应降低)表达升高(P0.05),而慢性损伤高温高湿后,细胞凋亡增加(P0.05),线粒体膜电位降低(P0.05),ATP含量减少(P0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I表达降低(p62相应升高)(P0.05);和H/R组或高温高湿组对比,高温高湿+H/R组中细胞凋亡进一步增加(P0.05),线粒体膜电位和ATP含量进一步降低(P0.05),Notch1ICD、Hes1、LC3-II/I表达进一步降低(p62进一步升高)(P0.05);和高温高湿+H/R组对比,加入Notch1激动剂Jagged1后,细胞凋亡减少(P0.05),线粒体膜电位和ATP含量增高(P0.05),Notch1 ICD、Hes1、LC3-II/I表达升高(p62相应降低)(P0.05)。结论激活Notch1通路通过促进自噬从而缓解高温高湿条件下H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

替莫唑胺通过Notch1信号通路对胶质瘤干细胞分化、增殖、凋亡影响的研究

目的研究替莫唑胺对胶质瘤U251干细胞分化、增殖、凋亡的影响及作用机制。方法培养U251胶质瘤细胞,用磁细胞分选法分选出U251干细胞。用0、100、500μmol、1 mmol替莫唑胺分别处理对数期的U251干细胞24、48、72、96h,MTT检测各个处理对U251细胞增殖的影响;用含血清培养基诱导U251干细胞分化,分别加入0、500μmol替莫唑胺处理72 h,提取分化前及两组替莫唑胺处理后干细胞总蛋白,Western-blot检测干细胞标记物CD133及分化标记物MAP2、GFAP、MBP蛋白表达情况;分别利用0、500μmol替莫唑胺处理U251干细胞72 h,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;提取0、500μmol替莫唑胺处理72 h后的U251干细胞总蛋白,Western-blot检测Notch1信号通路关键蛋白表达情况。结果替莫唑胺处理抑制U251干细胞增殖,与0μmol替莫唑胺处理相比差异显著(P0.01),500μmol替莫唑胺处理72 h差异最显著。U251细胞分化后,CD133蛋白表达量降低,MAP2、GFAP、MBP蛋白表达量升高,与分化前相比差异显著(P0.01),与0μmol处理相比,500μmol替莫唑胺处理后CD133、MAP2、GFAP、MBP蛋白表达差异显著(P0.01)。500μmol替莫唑胺处理72 h后U251干细胞凋亡明显增加,与0μmol处理相比差异显著(P0.01)。500μmol替莫唑胺处理72 h后Notch1通路关键蛋白Notch1、CBF-1、HES-1表达明显下降,与0μmol处理相比具有显著性差异(P0.01)。结论替莫唑胺可能通过抑制Notch1信号通路抑制胶质瘤U251干细胞增殖,促进U251干细胞分化及凋亡。     

吉西他滨对人胰腺癌SW1990和BxPC3细胞株Notch信号通路的诱导作用

目的 观察吉西他滨对人胰腺癌细胞(SW1990和BxPC3)Notch信号通路活性的影响,探讨其与胰腺癌对吉西他滨化疗耐药的关系.方法 不同浓度吉西他滨处理人胰腺癌SW1990和BxPC3细胞株48 h,实时定量PCR检测Notch信号通路受体Notch1、2、3、4,配体Jagged1、2和下游靶基因Hes1 mRNA的表达,Western blotting测定细胞Hes1蛋白表达.结果 2μmol/L吉西他滨作用胰腺癌细胞株48 h,SW1990细胞的Notch1、2、3、Jagged1、2和Hes1 mRNA表达量分别为8.26±0.48、39.12±4.87、0.84±0.06、105.8±17.92、6.59±0.32和17.30±2.96,均较未处理细胞的1.02±0.15、15.25±1.28、0.12±0.02、32.66±1.98、1.88±0.29和5.02±0.64明显升高(P<0.05或P<0.01);BxPC3细胞上述各项表达量分别为7.87±0.59、109.4±10.98、0.74±0.19、62.73±13.50、2.09±0.16和15.38±1.06,也均较未处理细胞的1.14±0.43、58.96±2.63、0.10±0.02、16.95±3.79、0.98±0.02和2.04±0.16,明显升高(P<0.05或P<0.01).1、2 μmol/L吉西他滨作用胰腺癌细胞株48 h,SW1990细胞Hes1蛋白表达量分别为0.30±0.03、0.42±0.03;BxPC3细胞分别为0.33±0.02、0.45±0.03,均较未处理细胞显著增高(0.13±0.01、F=33.71;0.09±0.02、F=38.54,P值均<0.01).结论 吉西他滨可明显激活SW1990和BxPC3细胞的Notch信号通路,这可能是胰腺癌细胞获得化疗耐受性的机制之一.     

Notch信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞移植后促进脑缺血区血管新生过程中的作用

目的探讨Notch1信号通路在骨髓间充质干细胞(MSCs)移植后促进脑缺血区血管新生过程中的作用。方法分离、培养SD大鼠MSCs,制作大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,将试验分为正常组、脑缺血后MSCs移植组、脑缺血后MSCs移植+rh NF-κB组、脑缺血对照组。脑组织冰冻切片行Ⅷ因子免疫组织荧光染色检测各试验组MSCs移植1、4、7、14 d后缺血皮质区微血管数量。Western印迹检测各试验组MSCs移植1、4、7、14 d后缺血皮质区血管内皮生长因子(VEGF)165、Notch1、Hes1蛋白表达。结果缺血对照组、MSCs移植组和MSCs移植+rh NF-κB组在各时间点微血管数量及VEGF165、Notch1、Hes1蛋白表达均显著高于正常组,从第14天起开始下降,3组的微血管数量及VEGF165、Notch1、Hes1蛋白表达依次上升,差异显著(P<0.01)。结论 MSCs移植可促进缺血区新生血管的形成,并可通过激活Notch信号通路促进缺血皮质区VEGF165的表达,从而促进缺血区的血管新生。     

血管紧张素(1-7)通过Dll4/TLR-4/NF-κB通路减轻巨噬细胞的炎症反应

目的探讨Notch信号通路在血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]调控动脉粥样硬化(As)炎症反应中的作用。方法诱导人单核细胞白血病细胞株分化为巨噬细胞,然后随机分为对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、Ang-(1-7)组和Ang-(1-7)+A-779组,以相应药物处理后用ox-LDL刺激建立泡沫细胞模型。利用q RT-PCR和Western blot检测Ang-(1-7)对泡沫细胞分化过程中Notch信号通路分子的影响,包括Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4)、Notch配体(Dll1、Dll3、Dll4、Jagged1、Jagged2)和目标基因Hes1,ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。进一步用可溶性Dll4(Dll4. Fc)激活Notch信号通路,用q RTPCR和Western blot检测Hes1和Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)通路的变化进一步验证Ang-(1-7)对Dll4通路的影响。结果给予Ang-(1-7)处理后,由ox-LDL刺激巨噬细胞产生的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α被显著抑制(P0. 05)。同时,在泡沫细胞中Notch信号通路各分子的表达发生了不同的变化。其中Notch信号通路下游靶基因Hes1 m RNA的表达量经ox-LDL刺激后均明显增加,Ang-(1-7)可部分抑制Hes1的激活,Ang-(1-7)受体拮抗剂A-779可逆转Ang-(1-7)的作用。Notch1、Notch2受体及Dll1配体的m RNA表达量在ox-LDL组明显下调,而Ang-(1-7)组明显上调(P0. 05)。而Notch3、Notch4受体及Jagged2、Dll4配体的m RNA表达量在ox-LDL组明显增加(P0. 05),给予Ang-(1-7)干预后,其表达量较ox-LDL组明显下降(P0. 05)。Dll3和Jagged1配体在各组间表达量无明显变化(P0. 05)。Western blot也可见ox-LDL刺激诱导Notch3、Notch4、Dll4和Hes1蛋白明显升高(P0. 05),Ang-(1-7)可明显下调其表达(P0. 05),而A-779能部分抑制Ang-(1-7)的作用(P0. 05)。利用Dll4. Fc激活Notch信号通路可见炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著增加(P0. 05),Hes1、TLR-4 m RNA和蛋白,以及i NOS m RNA的表达增高(P0. 05),并促进NF-κB核转位,Ang-(1-7)能明显下调其表达,A-779能部分逆转Ang-(1-7)的作用,差异有统计学差异(P0. 05)。结论 Ang-(1-7)可能通过调节Dll4相关通路,从而减轻TLR-4/NF-κB通路激活所致的巨噬细胞炎症因子分泌的作用。     

Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株的增殖及转分化的影响

目的观察Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株HSC-T6增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法 HSC-T6细胞常规培养及乙醛处理,加入Notch途径特异性阻断剂DAPT和TGF-β/ALK5途径特异性阻断剂SB-431542,分为空白组、单阻断组及双阻断组;MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白(TIMPⅠ)、纤维黏连素(FN)的表达;RT-PCR检测Notch途径节点分子RBP-JK、Hes1及效应蛋白Smad3表达量;Western印迹检测细胞内效应蛋白α-SMA的表达。结果 MTT检测发现乙醛刺激明显增强HSC活性(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);ELISA结果表明乙醛刺激后TIMP I和FN的表达明显上调(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);RT-PCR检测Hes1乙醛刺激后上调明显(P<0.05),阻断组RBP-JK、Hes1及Smad3明显下调(P<0.05),双阻断组Hes1及Smad3下调更明显(P<0.05);Western印迹检测结果显示乙醛刺激明显促进α-SMA表达(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05),双阻断组下调更明显(P<0.05)。结论 Notch通路明显影响乙醛对肝星状细胞的增殖及转分化为肌成纤维细胞。     

同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖的机制及辛伐他汀的干预作用

目的:探讨同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的机制及辛伐他汀的干预作用。方法:贴壁培养的大鼠原代VSMC随机分为3组。(1)对照组:用含10%胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基);(2)同型半胱氨酸组:在完全培养基中加入同型半胱氨酸(0.05 mmol/L);(3)辛伐他汀组:在完全培养基中加入同型半胱氨酸(0.05 mmol/L)和辛伐他汀(10μmol/L)。培养24 h后,光学显微镜下观察各组细胞的形态;采用半定量PCR法检测c-myc、P27kip1的mRNA水平;用Western blot检测细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin E、cyclin A和核增殖抗原(PCNA)的蛋白表达水平。结果:与对照组相比,同型半胱氨酸组c-myc mRNA水平上调,P27kip1 mRNA水平下调,下游cyclin D1、cyclin E、cyclin A和PCNA蛋白表达增加。与同型半胱氨酸组相比,辛伐他汀组上述检测指标均得到逆转。结论:同型半胱氨酸可促进大鼠VSMC c-myc、cyclin D1、cyclin E、cyclin A等增殖相关基因的表达,抑制P27kip1表达。辛伐他汀可逆转上述效应。     

白术内酯I抑制胃癌MGC-803细胞增殖的机制

目的探讨白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用及其机制。方法 MTT实验和集落形成实验检测白术内酯I对MGC-803细胞增殖的抑制作用;Western印迹检测白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1蛋白表达的影响;实时定量PCR分析白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1 mRNA水平表达的影响。结果 MTT实验和集落形成实验表明,白术内酯I抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性(P<0.05);Western印迹实验表明白术内酯I抑制Notch信号通路中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1蛋白表达水平;实时定量PCR结果显示白术内酯I抑制Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1 mRNA表达水平(P<0.05)。结论白术内酯I通过抑制Notch信号通路从而抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,白术内酯I可能用于治疗胃癌的新型治疗策略。     

Notch1/Hes1通路活化通过抑制氧化应激改善高糖诱导的心肌细胞肥大

目的研究Notch1/Hes1信号通路活化对高糖诱导的心肌细胞肥大的影响,及其对氧化应激的作用。方法原代培养大鼠心肌细胞,采用图像分析法检测心肌细胞表面积,BCA试剂盒分析细胞总蛋白含量,采用RTq PCR和Western blot技术检测Notch1、Hes1、超氧化物歧化酶(SOD1)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平,相关试剂盒检测细胞匀浆中丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量。结果与对照组比较,高糖能明显诱导心肌细胞表面积及总蛋白含量的增加(P0.05),心肌细胞中Notch1、Hes1蛋白表达量也明显降低(P0.05),同时氧化应激产物MDA、NO明显升高(P0.05),并且SOD1显著降低、iNOS显著升高(P0.05);激活Notch1/Hes1信号通路能够显著降低高糖引起的心肌细胞肥大及氧化应激损伤(P0.05),而Notch1干扰慢病毒可阻断Notch1对心肌细胞肥大及氧化应激的上述改善作用(P0.05)。结论激活Notch1可以降低高糖诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与降低细胞氧化应激损伤有关。     

雌激素对绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路的影响

目的观察雌激素对绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞(OP-hBMSCs)Notch信号通路的影响。方法无菌条件下抽取绝经后骨质疏松患者和健康女性骨髓间充质干细胞(hBMSCs),分离培养并传代。通过流式细胞仪分子表型鉴定确定培养的细胞为骨髓间充质干细胞。比较绝经后骨质疏松患者与健康女性骨髓间充质干细胞的生物特征。通过实时定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)比较OP-hBMSCs与hBMSCs中Notch信号通路关键分子(Notch1、Jagged1、Hes1)的表达水平。对人骨髓间充质干细胞进行成骨诱导与成脂诱导,观察雌激素对Notch信号通路Notch1,Jagged1、Hes1表达的影响。结果与正常健康女性相比,绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路减弱(P0.01)。给予雌激素后,可逆转绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞已减弱的Notch信号通路活性,使Notch信号通路下游分子Hes1表达上升近3倍。雌激素促进OP-hBMSCs向成骨分化,抑制成脂分化,Notch信号通路关键分子的表达均明显增高(P0.01)。结论 Notch信号通路在绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞显著减弱。Notch信号通路可能在绝经后骨质疏松症的发生过程中起着重要作用,可能成为雌激素治疗绝经后骨质疏松症的新机制。     

RNA干扰TRAF4表达下调Notch1信号通路增强肺癌替莫唑胺化疗敏感性

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF) 4表达对肺癌替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法 RT-PCR检测SPC-A-1、A549、H322、H1299肺癌细胞相对于人胚肺成纤维细胞MRC5中TRAF4的表达量;TRAF4的siRNA转染和替莫唑胺处理A549细胞,细胞被分为空白对照组、阴性对照组、TRAF4-siRNA组、替莫唑胺组和TRAF4-siRNA+替莫唑胺组,细胞培养48 h,RT-PCR及Western印迹检测各组A549细胞TRAF4的表达; CCK8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力(OD值)及凋亡率; Western印迹检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch神经同源蛋白(Notch) 1前体信号中Notch1和下游重要靶基因发状分裂相关增强子(Hes) 1的蛋白表达。结果 TRAF4在4个肺癌细胞中的表达水平均显著高于其在MRC5细胞中的表达(P<0. 05); TRAF4-siRNA转染A549细胞后,TRAF4的表达显著低于空白对照组(P<0. 05); TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组细胞凋亡率及Caspase-3和Bax的表达均显著高于空白对照组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于空白对照组,TRAF4-siRNA+替莫唑胺组凋亡率及Caspase-3和Bax的表达显著高于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组(P<0. 05)。结论抑制肺癌细胞TRAF4表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞活力及诱导细胞凋亡,并可增强替莫唑胺化疗敏感性。     

安罗替尼通过NF-κB信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨安罗替尼通过核因子κB(NF-κB)信号通路对人脑胶质瘤细胞（T98G细胞）增殖、凋亡的影响。方法 体外培养T98G细胞,并将其随机分为对照组、5μmol/L安罗替尼组、10μmol/L安罗替尼组、20μmol/L安罗替尼组、阳性药物组、抑制剂组。对照组不予干预,5μmol/L安罗替尼组、10μmol/L安罗替尼组、20μmol/L安罗替尼组分别以5、10、20μmol/L安罗替尼进行干预,阳性药物组以50 mg/L的5-氟尿嘧啶进行干预,抑制剂组加入10μmol/L安罗替尼+5μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082进行干预。用CCK-8法检测细胞活力,用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷法测算细胞增殖率,用Hoechst33258染色法测算细胞凋亡率,用Western blotting法检测细胞增殖、凋亡相关蛋白与NF-κB信号通路相关蛋白[细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(NF-κB p65)]表达。结果 与对照组比较,5μmol/L安罗替尼组细胞活力差异...