影响人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用

探讨叉头盒蛋白M1（FOXM1）对人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用。方法 将含有正义FOXM1 互补的脱氧核糖核酸（cDNA）的真核表达载体、空质粒的真核表达载体采用脂质体转染法转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为过表达组、过表达对照组;另构建干扰FOXM1基因表达的重组载体、空载载体,利用脂质体介导将其转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为沉默组、沉默对照组;并设置空白组、抑制剂组。上述每组5个复孔,均加入顺铂,抑制剂组另加入硫链丝菌肽,培养48 h。实时逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测各组FOXM1 信使核糖核酸（mRNA）及蛋白表达;倒置显微镜观察细胞形态学改变;噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞仪双染法检测各组细胞凋亡率;RT-qPCR、Western Blot检测各组细胞周期蛋白B1（Cyclin B1）、细胞分裂周期因子25B（CDC25B）、存活蛋白（Survivin）、p21 mRNA及蛋白表达。结果 与空白组比较,沉默组和抑制剂组FOXM1、Cyclin B1、CDC25B、Survivin mRNA及蛋白表达均下降（P＜0.05）,过表达组上述指标均升高（P＜0.05）;与空白组比较,沉默组和抑制剂组增殖抑制率、凋亡率、p21 mRNA及蛋白表达均升高（P＜0.05）,过表达组上述指标均下降（P＜0.05）;空白组、沉默对照组、过表达对照组细胞连接紧密、形态均匀、轮廓清楚,过表达组细胞连接致密,沉默组和抑制剂组细胞减少,轮廓不清、形态不均、大小不一,且可见细胞皱缩及细胞碎片。结论 FOXM1表达下调可增加人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性,FOXM1表达上调则可降低其化疗敏感性,推测与正反馈调节Cyclin B1、CDC25B、Survivin表达,负反馈调节p21表达有关。     

调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

GANT61对Hela细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:研究Gli抑制剂GANT61作用于Hela细胞后Gli1、FoxM1及Cyclin D1的表达变化及细胞的增殖活力与侵袭迁移能力的影响,并分析其相关分子机制,以期为宫颈癌的治疗提供新的靶点。方法:采用CCK-8法检测不同浓度GANT61对Hela细胞增殖活力的影响;流式细胞仪检测Hela细胞的细胞周期的分布变化;RTPCR、Western Blot分别检测Gli1、FoxM1、Cyclin D1相应的mRNA水平及蛋白表达水平;Transwell小室模型及Matrigel基质胶实验分别检测Hela细胞的迁移与侵袭能力。结果:(1)GANT61可剂量依赖性的降低Hela细胞的增殖活力,其抑制Hela细胞的IC_(50)值约为36.337μmol/L,且细胞周期主要被阻滞在G2/M期(P<0.01);(2)随着GANT61浓度的增加,Gli1、Cyclin D1、FoxM1相应mRNA的表达水平逐渐降低(P<0.01),其相应蛋白的表达水平也降低;(3)Transwell实验显示,实验组Hela细胞穿膜数量明显低于对照组(P<0.01)。结论:(1)GANT61可抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭及迁移能力,且该作用是通过抑制Gli1的表达,进而影响FoxM1的转录活性从而阻断细胞周期的进展来实现的;(2)FoxM1很可能是Gli1下游的直接作用靶点。     

下调MCT1表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖并促进其凋亡

［摘要］ 目的探讨下调单羧酸转运蛋白1(monocarboxylate transporter 1,MCT1)表达对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响及其机制。 方法将体外培养的Hela细胞分为未转染组、阴性对照组和MCT1-siRNA组,Western blot检测Hela细胞中MCT1、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,MTT法检测Hela细胞增殖活力,流式细胞仪检测Hela细胞周期分布和凋亡率。 结果与未转染组比较,阴性对照组Hela细胞中MCT1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平和细胞增殖、周期分布以及细胞凋亡率差异均无统计学意义（P＞0.05）,MCT1-siRNA组细胞中MCT1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活力和细胞在S期所占百分比均明显降低,Bax蛋白表达水平、细胞在G0/G1期所占百分比和细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）。 结论下调MCT1表达可通过诱导细胞周期阻滞抑制Hela细胞增殖,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达促进Hela细胞凋亡。     

慢病毒转染KISS1基因对人结直肠癌HCT116细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的：探讨慢病毒转染KISS1基因过表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并阐明其作用机制。方法：选取KISS1基因低表达结直肠癌细胞株,构建慢病毒载体并转染KISS1基因,分为对照组（PBS处理）、空载体组（转染空载体）和过表达组（转染含KISS1载体）。荧光显微镜检查转染的荧光率（MOI）,Real-time PCR和Western blotting法检测各组细胞中KISS1mRNA和蛋白（metastin）的表达量,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭和迁移能力。结果：LoVo、SW620 、SW480、HCT-116和HT29细胞中,HCT-116细胞中KISS1mRNA和蛋白表达量相对最低,因此筛选其作为研究载体。包装有KISS1基因的慢病毒感染HCT-116细胞后,能够稳定表达增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因,MOI均>80%。与对照组和空载体组比较,过表达组细胞中KISS1 mRNA和蛋白表达量明显升高（P<0.05）,细胞增殖活力明显降低（P<0.05）,侵袭能力和迁移能力亦明显下降（P<0.05）;与对照组比较,空载体组细胞增殖活力、侵袭能力和迁移能力差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：慢病毒转染KISS1基因能够过表达KISS1蛋白及抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力,其机制可能与KISS1蛋白表达有关。     

Connexin43蛋白对耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬的抑制作用

目的探讨缝隙连接蛋白（Cx43）蛋白对耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬的作用。方法免疫印迹法检测Cx43蛋白在睾 丸癌I-10细胞与耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞中的表达水平;实验分为转染试剂对照组（Mock 组）、阴性对照组（NC组）、过表达 组（mCx43 组）,过表达（mCx43）Cx43 基因后,通过免疫印迹法检测Cx43 蛋白确定转染效率,自噬相关蛋白LC3 和p62 水平。 mCherry-GFP-LC3B转染法和透射电镜分析Cx43基因过表达后耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬水平。结果与I-10细胞相 比,I-10/DDP细胞中Cx43的表达量明显降低（P<0.01）;过表达Cx43基因后,与NC组相比,mCx43组中自噬相关蛋白LC3-II表 达降低（P<0.01）,p62表达升高（P<0.05）。使用mCherry-GFP-LC3B转染法和透射电镜观察自噬水平,与NC组相比,mCx43组 中细胞自噬体数量降低。结论Cx43抑制耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬。     

siRNA沉默MACC1基因表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达对Hela宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响。方法通过脂质体将siRNA MACC1及siRNA NC转入Hela细胞中,RT-PCR及western blot检测转染效果,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E,基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平。结果与siRNA NC组比较,siRNA MACC1组中MACC1蛋白及mRNA表达量降低(P0.01),细胞活力及侵袭能力下降(P0.01),细胞周期阻滞在G1期,cyclin D1、cyclin E、MMP2、MMP9及p-ERK表达量下调(P0.01)。结论siRNA MACC1能显著的抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭,可能与下调ERK磷酸化水平有关。     

白细胞介素37对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感性的增强作用

目的：通过将白细胞介素37（IL-37）基因转染到宫颈癌HeLa细胞中,探讨IL-37对宫颈癌细胞的杀伤作用及其对宫颈癌细胞化疗敏感性的增强作用。方法：将重组pIRES2-EGFP/IL-37质粒（IL-37组）和pIRES2-EGFP质粒（NC组）分别转染到HeLa细胞。Q-PCR和Western blotting法检测IL-37基因和蛋白表达水平;CCK8法检测NC组、IL-37组、顺铂（DDP）组及IL-37+DDP组细胞活性,计算细胞抑制率;RT-PCR法检测信号转导和转录激活因子3（STAT3）及细胞周期蛋白D1（Cyclin D1） mRNA表达水平。结果：与NC组比较,IL-37组IL-37 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P < 0.01）。给药后24~72 h,5~15 mg·L^-1 DDP组HeLa细胞活性受到明显抑制（P < 0.01）;与DDP组比较,IL-37+DDP组HeLa细胞抑制率在处理后48 h内明显升高（P < 0.05）;与IL-37组比较,IL-37+DDP组HeLa细胞抑制率在处理后96 h内均有升高（P < 0.05）。与NC组比较,IL-37组STAT3和Cyclin D1 mRNA表达水平明显下降（P < 0.01）。结论：IL-37高表达可抑制宫颈癌细胞的增殖,并能增强DDP对宫颈癌细胞的放疗效果,这种效应的发挥可能与IL-37使STAT3和Cyclin D1表达下调有关。     

RNPC1基因对乳腺癌细胞MCF-7阿霉素药物敏感性的影响

目的：研究RNPC1对乳腺癌细胞MCF-7阿霉素药物敏感性的影响。方法：在MCF-7细胞中使用慢病毒转染法,设敲除（shRNPC1）组和过表达RNPC1组、敲除对照（SCR）组和过表达对照（NC）组。用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组MCF-7细胞中RNPC1的mRNA和蛋白水平。以不同浓度的阿霉素处理各组MCF-7细胞,CCK-8法检测各组细胞生长抑制率。阿霉素处理各组MCF-7细胞后, 用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中调亡相关蛋白的表达。结果：shRNPC1组RNPC1 mRNA和蛋白相对表达量均低于SCR组,过表达RNPC1组RNPC1 mRNA及蛋白相对表达量均高于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞后,shRNPC1组IC50明显于低于SCR组（P<0.05）,过表达组IC50明显高于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞24 h后,发现shRNPC1组凋亡率明显高于SCR组;过表达RNPC1组凋亡率显著低于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞24 h后,shRNPC1组抑凋亡蛋白BCL-XL、BCL-2的表达低于SCR组,促凋亡蛋白BIM和BID的表达高于SCR组;过表达RNPC1组抑凋亡蛋白BCL-CL、BCL-2的表达高于NC组,促凋亡蛋白BIM和BID的表达低于NC组。结论：RNPC1能降低乳腺癌细胞MCF-7对阿霉素的敏感性,其机制与抗细胞凋亡有关。     

过表达NPM1对胰腺癌细胞增殖、凋亡影响的研究*

目的：探讨NPM1过表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法：对人胰腺癌细胞株AsPc-1，BxPc-3，PANC-1，CFPAC-1及人正常胰腺细胞株HPDE6CT作传代培养，检测其中NPM1表达。选择表达较低的细胞行NPM1过表达质粒转染，并设立空白质粒转染对照组。48小时后，采用RT-PCR及Western检测NPM1表达水平变化，并行MTT及流式细胞技术检测细胞增殖、凋亡情况。结果：（1）NPM1在BxPc-3细胞系中表达最低；（2）NPM1过表达组与空白质粒组相比，NPM1的mRNA表达量及蛋白表达量明显增多，差异显著（P<0.05）；（3）NPM1过表达组相比空白质粒组，细胞增殖增加，早期凋亡细胞明显减少（P<0.05）。结论：NPM1的过表达可促进胰腺癌细胞增殖，减少凋亡。     

miRNA-21-5p通过pdcd4靶向调控胃癌细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的:探究微小RNA-21-5p（miRNA-21-5p）通过下调pdcd4基因表达调控胃癌耐药细胞系SGC-7901/DDP对顺铂敏感性机制的研究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的顺铂（0、1、2、4、8、16、32 μmol/L）对胃癌细胞系SGC7901及胃癌耐药细胞系SGC7901/DDP增殖抑制的影响。通过实时荧光定量PCR检测SGC7901/DDP细胞中瞬时转染miRNA-21-5p inhibitors后miRNA-21-5p相对表达量的变化。采用Western blot及实时荧光定量PCR检测转染组、无关序列转染组（NC组）及空白转染组（CON组）分别转染miRNA-21-5p inhibitors及无关序列后对靶基因pdcd4蛋白及mRNA表达量的影响。结果:MTT实验结果显示耐药细胞SGC7901/DDP相对于亲本细胞SGC7901对顺铂不敏感（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果表明,转染组miRNA-21-5p表达量均明显低于NC组和CON组（P<0.01）,转染组pdcd4 mRNA表达量均明显高于NC组和CON组（P<0.01）。Western blot检测结果示,转染组pdcd4蛋白表达量均明显高于NC组和CON组（P<0.01）。结论:miRNA-21-5p表达水平的升高在一定程度上有利于胃癌细胞增殖,并通过下调pdcd4的表达,降低胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

核仁素表达下调对宫颈癌细胞Hela生物学行为的影响

目的 探讨核仁素表达下调对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的影响。方法 实验分4组：3个靶向人核仁素基因的实验组(siN1组、siN2组、siN3组)及1个阴性对照组(NC组)。体外化学合成各组siRNA并转染HeLa细胞;利用荧光实时定量RT-PCR法和Western blotting法分别从mRNA和蛋白水平检测核仁素基因的干扰效率,并筛选出干扰效率最高的片段;利用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测核仁素下调对HeLa细胞增殖活性的影响;利用流式细胞学Annexin V-FITC检测转染后HeLa细胞凋亡率的改变;Transwell实验检测转染后细胞侵袭能力的改变。结果 与NC组相比,各实验组核仁素mRNA表达水平均下降(P<0.05);蛋白表达水平也相应下调(P<0.05)。成功筛选出最佳干扰片段siN2,用于后续实验。siN2组HeLa细胞生长速率明显受到抑制(P<0.05);流式细胞学Annexin V-FITC检测siN2组HeLa细胞凋亡率明显高于NC组(P<0.05);Transwell实验显示siN2组HeLa细胞侵袭能力减弱(P<0.05)。结论 核仁素表达下调明显抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭能力,促进细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供了理论依据。     

FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选

目的构建携带绿色荧光蛋白（GFP）的人FoxM1 shRNA重组慢病毒载体,并构建筛选FoxM1敲低的人前列腺癌稳定细胞
株,检测FoxM1的表达及对细胞增殖能力的影响。方法设计并合成3对特异性针对人FoxM1基因的shRNA靶序列,构建到
pHBLV-U6-ZsGreen-Puro 慢病毒载体中,测序鉴定载体构建情况,利用慢病毒三质粒系统转染包装293T细胞,荧光显微镜下观
察转染效率。收集到的病毒上清转染人前列腺癌DU-145细胞,Real-time PCR检测各组细胞FoxM1 mRNA水平,经嘌呤霉素
筛选建立FoxM1敲低稳定细胞株,用Western blotting法检测细胞中FoxM1表达,并用MTT法观察稳转细胞的生长增殖活性,
流式细胞术观察稳转细胞凋亡情况,平板克隆实验观察稳转细胞的克隆形成能力。结果经测序鉴定成功构建了3对FoxM1
shRNA慢病毒载体,并进行包装,感染DU-145细胞后Real-time PCR检测结果表明第1对慢病毒载体干扰效率最佳,嘌呤霉素
抗性筛选建立了FoxM1敲低稳定细胞株,荧光显微镜观察感染效率较高,Western blotting结果显示细胞中FoxM1蛋白表达明
显受到抑制,细胞的生长增殖能力明显受限,流式细胞术结果显示FoxM1敲低组细胞凋亡率高于对照组,平板克隆实验结果表
明FoxM1敲低组细胞克隆形成能力下降。结论本研究成功构建了FoxM1 shRNA慢病毒载体,建立了FoxM1敲低稳定前列腺
癌细胞株,抑制细胞内FoxM1的表达能够抑制前列腺癌细胞DU-145的生长增殖、克隆形成能力,并能诱导细胞凋亡。
     

SOX7基因对肝癌细胞凋亡、氧化应激 及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨过表达SOX7对肝癌细胞凋亡、活性氧（ROS）水平及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法人肝癌Huh-7细胞分为空白组、空质粒pcDNA3.1组（Vector组）和pcDNA3.1-SOX7重组质粒组（pcDNA3.1-SOX7组）。转染48 h,Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒、DCFH-DA法及Western blotting分别检测细胞凋亡率、ROS含量及SOX7、β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3蛋白表达。MTT法检测pcDNA3.1转染24 h、48 h和72 h的细胞活力。结果pcDNA3.1-SOX7重组质粒组SOX7蛋白表达明显高于空白组（P < 0.05）。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力及β-catenin和cyclin D1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率、ROS含量及cleaved-caspase 3蛋白表达明显升高（P < 0.05）。结论过表达SOX7可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡机制与细胞内ROS水平提高及Wnt/β-catenin信号通路抑制有关。     

Hh信号通路抑制剂Cyclopamine对Hela细胞增殖、侵袭迁移的影响

目的:研究Hh信号通路抑制剂Cyclopamine作用Hela细胞后Gli1、FoxM1、上皮间质转化(EMT)过程相关标记物表达的改变及对其增殖、侵袭迁移能力的影响,探究Gli1、FoxM1、EMT过程的可能作用关系,以期为宫颈癌的分子靶向治疗提供多个靶点。方法:采用实时定量RT-PCR、Western Blot技术检测Hela、Siha细胞系Hh信号通路中Shh、Ptch1、Smo的表达情况,选择Hh信号通路表达较高的Hela细胞系作为后续实验细胞,利用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测不同浓度Cyclopamine作用Hela细胞后其增殖能力的改变;采用Transwell小室试验检测Hela细胞侵袭、迁移能力的改变,并采用实时定量RT-PCR、Western Blot技术检测Gli1、FoxM1、EMT过程标记物的表达情况。结果:(1)Hela细胞中Hh信号通路成分(Shh、Ptch1、Smo)在mRNA水平显著高于Siha细胞(P<0.01),且相应蛋白的表达强度也高于Siha细胞;(2)Cyclopamine对Hela细胞增殖的抑制作用具有时间、剂量依赖性;(3)Cyclopamine作用Hela细胞48h后,细胞侵袭试验显示,实验组侵袭细胞数较对照组明显降低(P<0.01)。细胞迁移试验显示,实验组细胞迁移细胞数较对照组明显降低(P<0.01);(4)Cyclopamine作用Hela细胞48h后,实验组Gli1、FoxM1、Vimentin在mRNA水平的表达显著低于对照组(P<0.05),且相应蛋白的表达强度也低于对照组;E-cadherin在实验组中mRNA层面的表达显著高于对照组(P<0.05),且相应蛋白的表达强度也高于对照组。结论:抑制Hh信号通路可显著降低Hela细胞系增殖、侵袭迁移能力,FoxM1很可能是Hh信号通路末端转录因子Gli1的下游靶基因,且其对宫颈癌细胞系增殖、侵袭迁移的作用很可能是通过EMT实现的。     

SCNN1B在非小细胞肺癌组织中的表达及其调节肺癌对顺铂的敏感性

【摘要】 目的 探讨SCNN1B在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其调节肺癌对顺铂的敏感性。 方法 选取本院2017年12月~2019年12月收治的130例NSCLC患者,RT PCR法检测其肺癌组织中SCNN1B mRNA水平;另设A549细胞组、A549/DDP细胞组、siRNA-SCNN1B组、siRNA-NC组,其中siRNA-SCNN1B组、siRNA-NC组分别转染SCNN1B过表达质粒及空载质粒（阴性对照）,RT-PCR法检测各组SCNN1B mRNA相对表达量,验证SCNN1B转染效果;并检测各组半数抑制浓度（IC50）、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测耐药相关蛋白表达。 结果 低分化NSCLC患者SCNN1B mRNA低表达率明显高于中高分化患者,TNM分期Ⅳ期患者中SCNN1B mRNA低表达率明显高于Ⅲ期（P＜0.05）;A549/DDP细胞组SCNN1B mRNA水平显著低于A549细胞组（P＜0.05）;与A549/DDP细胞组比较,siRNA-SCNN1B组SCNN1B mRNA水平明显上升（P＜0.05）;siRNA-SCNN1B组IC50明显低于siRNA-NC组,逆转系数下降（P＜0.05）;与A549细胞组比较,A549/DDP细胞组细胞凋亡率明显下降,细胞周期G0/G1期比例明显上升（P＜0.05）,siRNA SCNN1B组细胞凋亡率则较A549/DDP细胞组明显上升,细胞周期G0/G1期比例较A549/DDP细胞组明显下降（P＜0.05）;与A549细胞组比较,A549/DDP细胞组Bcl-2、生存素、周期蛋白D1(CyclinD1)、表皮生长因子受体(EGFR)、多药耐药相关蛋白-1(MRP1)、肺耐药相关蛋白（LRP）水平明显上升（P＜0.05）;siRNA-SCNN1B组Bcl-2、生存素、Cyclin D1、EGFR、MPR1、LRP水平则较A549/DDP细胞组明显下降（P＜0.05）。结论 SCNN1B与NSCLC患者肺癌组织分化程度、肿瘤分期密切相关,靶向上调SCNN1B可下调Bcl-2、生存素、Cyclin D1、EGFR、MPR1、LRP等蛋白表达。     

下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡

目的 探讨Pannexin2（Panx-2）蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平以及干扰Panx-2表达对顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡的影响。方法 免疫印迹法Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平；以睾丸癌I-10细胞株为研究对象，实验分为转染试剂对照组（mork组）、阴性对照质粒组（NC组）、干扰Panx-2组（shRNA1质粒组和shRNA2质粒组），采用免疫印迹法验证Panx-2的表达；在转染细胞中添加16 μmol/L的顺铂诱导细胞死亡，通过MTT法分别检测细胞在24、48、72 h的存活率，集落克隆法检测细胞的集落形成能力；在顺铂（16 μmol/L）处理8 h后，采用AnnexinV/PI双染法检测细胞的早期凋亡；在顺铂（16 μmol/L）作用24 h后， 免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白caspase 3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果 与I-10细胞和Tcam-2细胞相比，I-10/DDP细胞（P< 0.001）和Tcam-2/DDP细胞（P<0.01）中Panx-2的表达显著增加；干扰Panx-2基因后，免疫印迹结果显示，与NC组相比，shRNA1和shRNA2组中Panx-2的表达量下降（P<0.05）；MTT法显示shRNA1和shRNA2组细胞的存活率均低于NC组（P<0.001）；在含顺铂培养基的培养下，集落克隆法显示shRNA1和shRNA2组细胞的集落形成能力低于NC组（P<0.001）；AnnexinV/PI双染法显示shRNA1和shRNA2组的早期凋亡率（P<0.01）均低于NC组；免疫印迹结果显示，与NC组相比，shRNA1和shRNA2组中凋亡相关蛋白caspase 3表达升高（P<0.05），Bcl-2表达降低（P<0.01），Bax表达升高（P<0.05）。结论 下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡。     

长链非编码RNA，PTENP1通过miR-3611/PTEN基因途径调控宫颈癌进程的分子机制研究

目的 探讨长链非编码RNA PTENP1（以下简称“PTENP1”）在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 选取2019年1月至2022年12月海南省妇女儿童医学中心诊断的54例的癌组织与癌旁组织,另选取宫颈癌细胞系（HeLa、SiHa、C33A、Caski）和正常宫颈上皮细胞系（H8）,采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测PTENP1、miR-3611、PTEN基因、PTEN蛋白水平。选取合适的宫颈癌细胞系,比较PTENP1在细胞质和细胞核中的表达情况,并进一步将其分为空白组（无处理）、pcDNA3.1组（转染pcDNA3.1）、pcDNA3.1-PTENP1组（转染pcDNA3.1-PTENP1）、NC组（阴性对照,转染模拟物或抑制剂NC）、miR-3611抑制剂组（转染miR-3611 抑制剂）、pcDNA3.1-PTENP1+NC组（转染pcDNA3.1-PTENP1和NC）和pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组（转染pcDNA3.1-PTENP1和miR-3611模拟物）。比较空白组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-PTENP1组PTENP1、miR-3611、PTEN基因、PTEN蛋白及上皮间质转化的相关指标,采用细胞活力检测及流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况;比较空白组、NC组、miR-3611抑制剂组miR-3611、PTEN基因、PTENP1水平;比较pcDNA3.1-PTENP1+NC组和pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组的细胞增殖情况及上皮间质转化的相关指标。采用双萤光素酶报告基因及RNA下拉实验验证miR-3611与PTENP1、PTEN基因的靶向关系。 结果 癌组织PTENP1、PTEN基因、PTEN蛋白水平低于癌旁组织,miR-3611水平高于癌旁组织（P＜0.05）。HeLa、SiHa、C33A、Caski细胞PTENP1、PTEN基因、PTEN蛋白水平低于H8细胞,miR-3611水平高于H8细胞（P＜0.05）,后续实验选择HeLa、Caski细胞进行,PTENP1在HeLa、Caski细胞质中高表达。pcDNA3.1-PTENP1组PTENP1、凋亡率、上皮钙黏素、PTEN基因高于空白组,细胞增殖活力（培养48、72、96 h）及ZEB1、Snail、波性蛋白、miR-3611低于空白组（P＜0.05）。miR-3611抑制剂组miR-3611低于空白组,PTEN基因、PTENP1高于空白组（P＜0.05）。pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组细胞增殖活力（培养48、72、96 h）、上皮钙黏素低于pcDNA3.1-PTENP1+NC组,ZEB1、Snail、波性蛋白高于pcDNA3.1-PTENP1+NC组（P＜0.05）。野生型miR-3611转染生物素标记的HeLa、Caski细胞的PTENP1水平高于转染生物素标记的空白细胞和突变型miR-3611转染生物素标记的细胞,分别转染PTENP1或PTEN野生型和miR-3611模拟物的293T细胞的相对萤光活性低于仅转染PTENP1或PTEN野生型的293T细胞（P＜0.05）。结论 PTENP1通过竞争性结合miR-3611调控PTEN表达影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

微球蛋白1对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制

目的：探讨微球蛋白1（MCRS1）在胃癌细胞中的过表达对胃癌细胞侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：选择胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞进行培养,采用Western blotting法检测MCRS1在3种细胞中表达情况,并选择MCRS1蛋白表达低的胃癌BGC-823细胞进行后续实验。构建MCRS1重组质粒,选取处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞,设立空白组、空载体转染组和MCRS1转染组,利用Lipo3000将质粒转染入BGC-823细胞,采用Western blotting法检测侵袭相关蛋白上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）及Snail的表达水平,采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测各组胃癌细胞的迁移和侵袭能力。结果：与正常胃黏膜上皮GES-1细胞比较,MCRS1在胃癌BGC-823细胞中表达水平较低（P<0.01）,而在胃癌SGC-7901细胞中表达水平较高（P<0.01）。PCR鉴定和测序分析,MCRS1重组质粒构建成功。与空白组和空载体转染组比较,MCRS1转染组MCRS1和E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,N-cadherin和Snail蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,细胞迁移率明显降低（P<0.01）,侵袭细胞数明显减少（P<0.01）。结论：过表达MCRS1能抑制胃癌BGC-823细胞的迁移和侵袭,其机制可能与E-cadherin蛋白表达增加、N-cadherin和Snail蛋白表达降低有关。