miR-486-5p/PINK1通路调控线粒体自噬拮抗SK-N-SH细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤

目的 探究微RNA-486-5p/PTEN诱导激酶1(miR-486-5p/PINK1)通路调控线粒体自噬对SK-N-SH细胞糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的影响及机制。方法 实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测45例缺血性卒中(IS)患者和45例健康体检者血清miR-486-5p表达。双荧光素酶报告基因验证SK-N-SH细胞中miR-486-5p对PINK1的靶向关系。取对数生长期SK-N-SH细胞分为：Control、OGD/R、OGD/R+miR-486-5p mimic、OGD/R+miR-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,RT-qPCR检测miR-486-5p、PINK1、帕金蛋白(Parkin) mRNA表达,Western blot检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62、Beclin1、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素C(CytC)蛋白表达,流式细胞术...     

miR-215-5p调控YY1通过TGF-β1/Smad信号通路对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的 探究MicroRNA-215-5p(miR-215-5p)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的表达及其对卵巢颗粒细胞(GC)凋亡的影响,并分析潜在机制。方法 采用脱氢表雄酮(DHEA)建立PCOS大鼠模型,分离并培养原代PCOS大鼠卵巢GC,分为对照组(control组)、sh-NC组、sh-YY1组、sh-YY1+LY2109761组、miR-NC组、miR-215-5p mimic组、miR-215-5p mimic+pc-NC组、miR-215-5p mimic+pc-YY1组。TUNEL法检测PCOS大鼠卵巢组织GC凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢组织/GC中miR-215-5p、阴阳-1(YY1)mRNA表达;CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测PCOS大鼠卵巢组织/GC中YY1、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad4蛋白表达。结果 miR-215-5p在PCOS大鼠卵巢组织中低表达,YY1 mRNA和蛋白水平在PCOS大鼠卵巢组织中显著升高(P<0.05);敲低YY1或上...     

慢性HBV感染者外周血单个核细胞中miR-194-5p和MagT1表达水平检测及其意义

目的：检测慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-194-5p和镁离子（Mg²⁺）转运蛋白1（MagT1）表达水平,阐明其可能的临床意义。方法：收集40例健康体检者（健康对照组）、40例HBV携带者（HBV携带组）、40例轻中度慢性乙型肝炎（轻中度CHB组）和40例重度慢性乙型肝炎（重度CHB组）患者的临床资料。采集各组研究对象外周血并利用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMCs,采用RT-PCR法检测各组研究对象PBMCs中miR-194-5p及MagT1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组研究对象PBMCs中MagT1蛋白表达水平,检测各组研究对象外周血和PBMCs中Mg⁺水平,流式细胞术检测各组研究对象PBMCs中CD8+T淋巴细胞表面分子程序性死亡受体1（PD-1）和自然杀伤细胞受体2群D分子（NKG2D）表达水平。在293T细胞中分别转染miR-194-5p mimic质粒（miR-194-5p mimic组）和miR-NC质粒（miR-NC组）,应用双荧光素酶报告基因实验检测2组293T细胞中荧光素酶活性。结果：与健康对照组比较,HBV携带组、轻中度CHB组和重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均明显降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。与HBV携带组和轻中度CHB组比较,重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T细胞表面分子PD-1表达水平降低（P<0.05）。与HBV携带组比较,轻中度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验,MagT1是miR-194-5p靶基因。结论：miR-194-5p可能通过靶向下调MagT1表达,引起MagT1介导的Mg²⁺内流障碍,造成CD8+T淋巴细胞免疫活性降低,导致乙型肝炎慢性发展。     

miR-138-5p靶向调控程序性死亡配体-1对肺腺癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的：探讨微小RNA-138-5p(miR-138-5p)靶向调控程序性死亡配体-1(PD-L1)对肺腺癌细胞（H1299）增殖、迁移及上皮间质转化（EMT）的影响。方法：选择2019年3月至2021年5月在本院手术治疗的肺腺癌患者42例,术中取肺腺癌组织与癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肺腺癌组织、癌旁组织与肺腺癌细胞H1299、HCC827、A549、H1975及支气管上皮细胞BEAS-2B中miR-138-5p表达水平;将H1299细胞分为Control组、miR-138-5p过表达（miR-138-5p mimics）组及阴性对照（miR-NC）组、抑制PD-L1表达（si-PD-L1）组及阴性对照（si-NC）组、miR-138-5p mimics+空载质粒（pcDNA）组和miR-138-5p mimics+PD-L1过表达（PD-L1）组。双荧光素酶报告基因检测miR-138-5p与PD-L1的靶向关系,CCK-8法与细胞划痕实验检测H1299细胞增殖与迁移,Western blotting法检测H1299细胞PD-L1、增殖细胞核抗原（PCNA）、基...     

涤痰活血舒痹汤上调microRNA-148a表达减轻心肌缺血再灌注损伤的分子机制研究

目的 探究涤痰活血舒痹汤（DHS）与microRNA-148a(miR-148a)的调控关系以及其在心肌缺血再灌注损伤中的分子作用机制。方法 将H9c2细胞培养后分为对照组、缺氧/复氧（H/R）组、H/R+空白血清组、H/R+DHS含药血清组、H/R+DHS含药血清+miR-148a拮抗剂组、H/R+DHS含药血清+OE-NC组和H/R+DHS含药血清+硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）过表达质粒组。采用CCK-8检测H9c2细胞增殖,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡,Western blot检测H9c2细胞凋亡和自噬相关蛋白及靶蛋白TXNIP的表达,qRT-PCR检测miR-148a的表达。结果 与对照组比较,H/R组H9c2细胞活力下降[（69.72±8.80）%比（97.75±5.58）%,P<0.01]、细胞凋亡和自噬水平上升。与H/R+空白血清组比较,H/R+DHS含药血清组miR-148a表达上调[（2.45±0.39）比（1.04±0.25）,P<0.01],H9c2细胞活力增加[（135.98±10.45）%比（97.75±7.94）%,P<0.01]...     

circRNA001653对急性心肌梗死心肌细胞凋亡的作用及机制

目的 探讨环状RNA(circRNA)＿001653 (circ＿001653)对急性心肌梗死(AMI)心肌细胞凋亡的作用及机制。方法 采用生物信息学分析AMI时差异表达的circRNA;大鼠心肌细胞分别培养于常氧(Normoxia组)和缺氧12 h(Hypoxia 12 h组)、24 h(Hypoxia 24 h组)、48 h(Hypoxia 48 h组)条件下,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测上述4组细胞中circ＿001653、微小RNA (microRNA)-324-5p、ELAV样RNA结合蛋白1(ELAVL1)的表达;选取缺氧48 h的心肌细胞转染sh-NC(sh-NC组)、sh-circ＿001653(sh-circ＿001653组)、circ-NC(circ-NC组)、circ＿001653(circ＿001653组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-324-5p mimic(miR-324-5p mimic组)、circ＿001653+miR-NC(circ＿001653+miR-NC组)、circ＿001653+miR-324-5p mimic(ci...     

丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移

【摘要】 目的 探讨丙泊酚通过调控微小RNA-574-5P(miRNA-574-5P）/性别决定区Y框蛋白（SOX2）对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响和分子机制。 方法 以0、5、10和20 μg/mL丙泊酚处理AGS细胞48 h。筛选丙泊酚最佳使用浓度。将转染后的AGS细胞分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+miR-NC组、丙泊酚+miR-574-5p组、丙泊酚+si-con组、丙泊酚+si-SOX2组、丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组、丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组。采用细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测细胞中微小RNA（miR）-574-5p的表达水平;免疫印迹法检测细胞中SOX2蛋白的表达水平。采用上述方法检测AGS细胞增殖、侵袭、迁移能力。双荧光素酶报告基因实验检测miR-574-5p与SOX2的靶向关系。 结果 选择20 μg/mL丙泊酚浓度进行实验。与0μg/mL比较,5、10、20 μg/mL丙泊酚处理组细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,miR-574-5P表达水平呈浓度依赖性降低,SOX2呈浓度依赖性升高（P＜0.05）。与对照组比较,丙泊酚组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-NC组比较,丙泊酚+miR-574-5p组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+si-con组比较,丙泊酚+si-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组比较,丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。miR-574-5p直接与SOX2结合。 结论 丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-133b靶向YES1抑制心肌缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡和活性氧簇的积累

目的 探究miR-133b对心肌缺血再灌注（I/R）诱导心肌细胞凋亡的作用及机制。方法 体内实验,将大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、转染腺病毒对照组、转染miR-133b腺病毒组,每组9只。在左心室心肌的6个随机点注射转染复合物后,利用左侧冠状动脉前降支打活结方法诱导心肌I/R。通过RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,FDP-1 HRV和BRS分析系统测定心功能,酶联免疫吸附法测定血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（I CTnI）水平,HE染色观察心肌损伤,流式细胞术检测细胞凋亡,2,7-二氯荧光素双乙酸酯（DCFH-DA）探针测定ROS含量。体外实验,心肌H9C2细胞经缺氧/复氧（H/R）处理后,转染miR-NC或miR-133b mimic,RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量;双荧光素酶报告实验验证靶向关系;转染pc-YES1或miR-133b mimic后,Western blot检测YES1的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量。结果 与I/R组相比,AdmiR-133b组大鼠心肌中miR-133b的表达显著上调,LVEDP、cTnI和CK-MB水平显著降低,LVSP、+dp/dt、-dp/dt、HR和CF水平显著升高,病理损伤显著减轻,心肌细胞凋亡和ROS积累显著减少（P<0.01）。与H/R组相比,miR-133b mimic组H9C2细胞的miR-133b表达显著上调,细胞凋亡和ROS积累显著减少（P<0.01）。miR-133b与YES1在3’UTR区存在靶向结合位点,共转染YES1 WT和miR-133b mimic可以显著降低荧光素酶活性（P<0.01）。miR-133b mimic 组与H/R组相比H9C2细胞中YES1蛋白的表达显著下调（P<0.01）。共转染pc-YES1逆转miR-133b过表达对心肌细胞凋亡和ROS积累的作用。结论 无论是在体内还是体外,miR-133b靶向YES1抑制I/R引起的心肌细胞凋亡和ROS的积累,从而减轻心肌I/R损伤。     

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI...     

穿心莲内酯通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌感染的巨噬细胞焦亡

【目的】探讨穿心莲内酯（Andro）是否通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌（Mtb）感染的巨噬细胞焦亡。【方法】构建Mtb H37Ra感染的小鼠RAW264.7巨噬细胞模型。实验分5组：Control组（对照组）为未作处理的巨噬细胞；Mtb组为经Mtb感染的巨噬细胞；Mtb+Andro组为巨噬细胞经Mtb感染后，给予Andro处理；Mtb+Andro+miR-NC组或Andro+Mtb+miR-342-3p组为巨噬细胞经Mtb和Andro联合处理后，分别转染miR-NC或miR-342-3p mimic。各组处理后，利用细胞流式术分析细胞凋亡，乳酸脱氢酶（LDH）释放试验检测LDH活性，酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞焦亡相关的炎性因子白细胞介素（IL）-6和IL-18含量，荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法测定miR-342-3p表达，Western Blot法检测GSDMD、Caspase-1、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达。【结果】与Control组比较，Mtb组和Mtb+Andro组的细胞凋亡率，LDH活力，IL-6...     

MicroRNA-7-5p 调控p53 表达对非小细胞肺癌 增殖及侵袭能力的影响

目的 探讨microRNA-7-5p（miR-7-5p）是否通过调控p53 基因的表达而影响人非小细胞肺 癌（NSCLC）细胞体外的增殖、侵袭能力。方法 通过双荧光素酶报告证明p53 为miR-7-5p 的下游靶基 因,将miR-7-5p 转染至人NSCLC 细胞株NCI-H1975,依据实验对照原则分为空白对照组、miR-7-5p 组 和miR-NC 组,观察细胞中p53 基因在转录和蛋白水平的表达变化;然后通过细胞增殖、细胞周期实验及 侵袭实验,观察NCI-H1975 细胞体外增殖和侵袭能力的变化。结果 miR-7-5p 组的p53 mRNA 相对表达 量、迁移细胞数及克隆形成数均低于miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组3''UTR 荧光素酶的表达活性较 miR-NC 组低（P <0.05）。miR-7-5p 组p53 mRNA 和蛋白相对表达量较miR-NC 组低（P <0.05）。miR- 7-5p 组细胞增殖能力较miR-NC 组低（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞周期G0/G1 期比例高于空白对照组 和miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞周期的G2/M 期比例低于miR-NC 组（P <0.05）。miR-7- 5p 组细胞周期的S 期比例低于空白对照组和miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞侵袭能力低于空白对 照组和miR-NC 组（P <0.05）。结论 miR-7-5p 主要是通过靶向p53 促进其mRNA 和蛋白的表达,并减弱人 NSCLC 的增殖和侵袭能力。     

lncRNA KTN1-AS1调节miR-153-3p/NFAT5轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA Kinectin 1反义RNA 1(lncRNA KTN1-AS1)调控miR-153-3p/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测NSCLC组织、癌旁组织、人正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系A549、HCC827、H1299中KTN1-AS1、miR-153-3p表达及NFAT5蛋白表达;将A549细胞分为Ct组、si-NC组、si-KTN1-AS1组、mimic NC组、miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组、miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组,qRT-PCR检测细胞中KTN1-AS1、miR-153-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测NFAT5、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白...     

miR-431-5p抑制MDM2表达影响白血病细胞增殖、凋亡的机制研究

目的探讨miR-431-5p靶向MDM2对白血病细胞增殖、凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测白血病患者、正常人骨髓细胞和白血病细胞HL-60、K562中miR-431-5p的表达。以K562细胞为研究对象,将其随机分为miR-NC组（转染miR-NC）、miR-431-5p组（转染miR-431-5p）、miR-431-5p+pcDNA3.1组（miR-431-5p和pcDNA3.1共转染）和miR-431-5p+pcDNA3.1-MDM2组（miR-431-5p和pcDNA3.1-MDM2共转染）。MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测MDM2、CyclinD1、P21、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因法和Western blot验证miR-431-5p和MDM2的靶向关系。结果与正常人骨髓细胞相比,白血病患者骨髓细胞和白血病细胞HL-60、K562中miR-431-5p的表达显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-NC组相比,miR-431-5p组K562细胞MDM2、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达明显下调,P21和Bax蛋白的表达明显上调,细胞的增殖活力显著减弱,凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-431-5p+pcDNA3.1组比较,miR-431-5p+pcDNA3.1-MDM2组K562细胞MDM2、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达明显升高,P21和Bax蛋白的表达明显降低,细胞的增殖活力显著升高,凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-431-5p通过靶向下调MDM2可抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡。     

LncRNA GABPB1-AS1调控miR-150-5p表达对高糖诱导人肾小球系膜细胞纤维化的影响

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)GABPB1-AS1调控miR-150-5p表达对高糖诱导人肾小球系膜细胞（HMC）纤维化的影响。方法 采用qRT-PCR法检测高糖诱导的HMC细胞中LncRNA GABPB1-AS1、miR-150-5p表达情况,将对数期HMC细胞分为对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、高糖+pcDNA3.1-NC组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+mimic NC组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+miR-150-5p mimic组,培养48 h后,CCK-8法检测各组细胞增殖率;qRT-PCR法检测细胞中纤维连接蛋白（FN）、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、纤维结缔组织生长因子（CTGF）mRNA表达水平;ELISA法检测细胞上清液白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western blot法检测FN、ICAM-1、CTGF蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因验证LncRNA GABPB1-AS1、miR-150-5p靶向...     

MiR-125b-5p抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase(http://starbase. sysu.edu.cn/)生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcD...     

miR-125b-5p调控HK2抑制胆囊癌细胞增殖和糖酵解

目的 研究miR-125b-5p通过HK2调控人胆囊癌细胞增殖和糖酵解的作用机制。方法 分别在人胆囊癌细胞GBC-SD中转染NC mimic、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic+pcDNA-NC、miR-125b-5p mimic+pcDNA-HK2。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR）检测miR-125b-5p和HK2 mRNA的表达,Western blot检测HK2和LDHA、PDK1的蛋白表达。细胞计数试剂盒-8(cell countingKit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力,糖酵解相关试剂盒检测乳酸生成、葡萄糖消耗以及ATP生成。双荧光素酶报告基因实验对miR-125b-5p和HK2的靶向关系进行验证。结果 miR-125b-5p在胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ(P <0.001)以及组织（P <0.01）中表达降低,且在GBC-SD细胞中低于NOZ细胞中。过表达miR-125b-5p可显著抑制GBC-SD细胞的增殖（...     

miR-485-5p通过下调FOSL2表达影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡

【摘要】 目的 探讨微小RNA-485-5p（miR-485-5p）对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 选取2016年5月～2018年4月本院行手术治疗的36例鼻咽癌患者癌组织为研究对象,对应癌旁组织距离肿瘤边缘＞3cm作为对照组。RT-qPCR检测鼻咽癌组织和对应的癌旁组织中miR-485-5p和FOS样抗原2（FOSL2）mRNA水平,Pearson相关性分析鼻咽癌组织中miR-485-5p和FOSL2 mRNA表达相关性。以人永生化鼻咽上皮细胞系NP69为对照,RT-qPCR检测鼻咽癌细胞系6-10B和5 8F中miR-485-5p和FOSL2 mRNA表达水平,Western Blot检测FOSL2蛋白水平。将5-8F细胞分为miR-NC组、miR-485-5p组、si-NC组、si-FOSL2组、miR-485-5p+pcDNA3.0组和miR-485-5p+pcDNA3.0 FOSL2组,MTT实验、流式细胞术、Western Blot分别检测各组5-8F细胞增殖、凋亡及Cyclin D1、p21、Bcl-2和Bax表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-485-5p与FOSL2调控关系。结果 与癌旁组织比较,鼻咽癌组织中miR-485-5p水平降低（P＜0.05）,FOSL2 mRNA表达水平升高（P＜0.05）,且鼻咽癌组织中miR-485-5p与FOSL2 mRNA表达水平呈负相关（P＜0.05）。与NP69细胞比,鼻咽癌细胞系6-10B和5-8F中miR-485-5p表达水平显著降低（P＜0.05）,FOSL2 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与miR-NC组比较,miR-485-5p组5-8F细胞存活率、CyclinD1和Bcl-2蛋白水平降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平升高（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-FOSL2组5-8F细胞存活率及CyclinD1和Bcl-2蛋白水平降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平升高（P＜0.05）。miR-485-5p在5-8F细胞中负调控FOSL2表达。与miR-485-5p+pcDNA3.0组比较,miR-4855p+pcDNA3.0 FOSL2组5-8F细胞存活率及CyclinD1和Bcl-2蛋白水平升高（P＜0.05）,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平降低（P＜0.05）。结论 miR-485-5p在鼻咽癌组织和细胞中表达降低,FOSL2表达升高;过表达miR-485-5p通过靶向负调控FOSL2抑制鼻咽癌细胞增殖,并促进其凋亡。     

miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路调节滋 养层细胞的增殖、浸润和凋亡

目的 探讨miR-34a-5p及CDK6对滋养层细胞增殖,浸润和凋亡的作用和下游机制以及二者的调节关系。方法 培养滋养 层细胞HTR-8/Svneo和人绒毛膜癌细胞系BeWo和JEG-3HTR-8/Svneo,使用RTqPCR法检测3种细胞中miR-34a-5p的表达差 异。根据对HTR-8/Svneo细胞的不同处理进行如下分组：无处理的HTR-8/Svneo细胞（对照组）;miR-34a-5p拟似物mimic转染 细胞（mimic组）,pcDNA-CDK6和mimic共转染HTR-8/Svneo细胞（pcDNA-CDK6+mimic组）,miR-34a-5p抑制剂inhibitor转 染HTR-8/Svneo细胞（inhibitor组）。MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定caspase 3活性检测细胞凋亡水平,Transwell实验检 测细胞浸润能力;Western blot 检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK6,凋亡标记物cleaved-caspase 3,浸润标记物MMP-9的表达; 荧光素酶报告基因实验确认miR-34a-5p对CDK-6的直接靶向关系。结果 过表达miR-34a-5p抑制HTR-8/Svneo细胞的增 殖活性（P=0.000）和浸润能力（P=0.049）,下调细胞中MMP-9（P=0.004）和CDK6（P=0.014）的表达水平,上调caspase 3活性 （P=0.018）和cleaved caspase 3的表达水平（P=0.003）;CDK6是miR-34a-5p的靶基因,过表达CDK6削弱miR-34a-5p对细胞 增殖（P=0.000）、凋亡（P=0.015）和浸润（P=0.046）的作用;使用IFG-1激活PI3K/AKT通路部分逆转miR-34a-5p对细胞增殖 （P=0.011）、凋亡（P=0.004）和浸润（P=0.002）的作用。结论 miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路激活调节滋 养层细胞的增殖,浸润和凋亡。     

circPTK2调控miR-619-5p对食道癌细胞侵袭迁移的影响

目的：探讨circPTK2调控miR-619-5p对食道癌（EC）细胞侵袭、迁移的影响。方法：qRT-PCR检测EC组织和细胞系（OE19、KYSE-450、KYSE-520、TE-13）中circPTK2、miR-619-5p的表达。TE-13细胞随机分组为对照组、si-NC、si-circPTK2组、miR-NC组、miR-619-5p组、si-circPTK2+anti-NC组和si-circPTK2+anti-miR-619-5p组,细胞活力分析采用细胞计数盒-8(CCK-8)进行;Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力;western blot检测上皮间充质转化（EMT）相关蛋白（E-cadherin、Ncadherin、Vimentin）表达。双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证circPTK2和miR-619-5p互作。采用异种移植瘤实验研究circPTK2在体内的作用。结果：EC组织和细胞中circPTK2表达上调,miR-619-5p表达下调（P<0.05）。下调circPTK2表达或过表达miR-619-5p可抑制细胞的生长、侵袭、迁...