三氧化二砷对K562细胞细胞周期的影响及其机制的研究

最近，有关三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）有效治疗急性早幼粒细胞白血病，且无严重毒副作用及骨髓抑制的报道［１，２］，再度引起人们对Ａｓ２Ｏ３治疗白血病甚至其他恶性肿瘤的浓厚兴趣。为阐明Ａｓ２Ｏ３治疗慢性髓细胞白血病的机制，并为其临床应用提供理论依据，我们以Ｋ...     

蟾蜍毒素粗提物对白血病K562细胞的杀伤作用

目的:观察蟾蜍毒素提取物对白血病K562细胞杀伤作用及对细胞周期的影响。方法:用无水乙醇、二甲基亚砜(DMSO)、PBS缓冲液浸溶中华大蟾蜍的耳后腺及皮下腺分泌物,采用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测对细胞周期的影响。结果:3种浸液均能抑制K562细胞的增殖,其抑制强度依次为乙醇浸液>DMSO浸液>PBS浸液。5 ng/ml的乙醇浸液、50 ng/ml的DMSO浸液、500 ng/ml的PBS浸液均能使K562细胞发生G2/M期阻滞。结论:蟾蜍毒素粗提物对白血病K562细胞增殖具有明显的抑制作用,并伴有G2/M期阻滞。     

manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用

探讨manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用,为其治疗白血病提供理论依据。方法：实验设阴性对照组（K562加含10%胎牛血清的IMDM培养液）和manumycin组（终浓度分别为2、4、8及16 μmol/L）,分别作用24、48和72 h,镜下观察manumycin作用后K562细胞的生长情况;MTT法检测K562细胞的生长抑制率;24 h 后,用Western blotting方法检测对照组及4、 16 μmol/Lmanumycin组K562细胞中survivin蛋白的表达。结果：镜下观察显示,对照组细胞生长状态良好,密度均一,大小一致,轮廓清晰,折光性强。与对照组比较,8 μmol/L manumycin组细胞明显变小,密度稀疏,大小不均一,细胞轮廓欠清晰,折光性差;16 μmol/L  manumycin组细胞密度明显减少,大小不等,轮廓不清,有细胞碎片。MTT结果显示,随着manumycin浓度增加和作用时间延长,生长抑制率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,且存在时间-剂量-效应关系。Western blotting结果显示,与对照组比较,16 μmol/L manumycin作用K562细胞24 h以后细胞内survivin蛋白含量下降。结论：manumycin通过下调K562细胞survivin蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,从而达到治疗白血病的目的。     

甘草次酸对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制作用,分析其引起细胞周期的变化及探讨其可能的抗癌机制.方法 MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期的变化以及cyclin D1和cyclin E蛋白表达的变化;RT-PCR测定细胞中cyclin D1和cyclin E mRNA表达的改变.结果 甘草次酸对K562有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为量效和时效依赖性,作用48 h的IC50值为(93.1±3.7)μmol/L.甘草次酸可以诱导细胞发生凋亡,Hoechst染色可见细胞核内凋亡小体.甘草次酸可以诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期,同时G2/M期细胞比例减小,S期变化不明显,仅在最大浓度组稍有降低.甘草次酸可以同时下调K562细胞内cylin D1和cyclin E蛋白和基因的表达,下调作用与剂量呈正相关.结论 甘草次酸能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其周期阻滞于G0/G1期.该效应可能与其下调周期蛋白cyclin D1和cyclin E表达有关,有望成为新型抗肿瘤中药.     

MAPK反义寡核苷酸对K562细胞系的增殖抑制作用

目的 :探讨MAPK在慢性髓细胞白血病 (CML)信号转导中的作用及其作用机制 .方法 :用脂质体转染法将MAPKASO导入K5 6 2细胞中 ,通过集落形成、DNA合成、蛋白质含量和MAPK活性的变化检测MAPKASO对K5 6 2细胞的作用 .结果 :MAPKASO可明显抑制细胞集落形成、DNA合成、蛋白质含量和MAPK活性 ,其抑制率分别为 4 6 .1% ,5 7.1% ,4 3.2 %和 6 2 .0 % ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) .结论 :MAPK在CML信号转导中起重要作用 ,极有可能成为CML治疗的新靶点     

木黄酮对白血病K562细胞增殖的影响

目的:探讨木黄酮(genistein)抑制白血病K562细胞增殖的机制.方法:用噻唑蓝染色法检测genistein对K562细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪进行细胞周期解析,通过细胞形态学观察细胞分裂;应用RT-PCR方法检测白血病细胞WT1 mRNA表达.结果:Genistein浓度分别为2～30μg/ml作用K562细胞72 h,细胞增殖呈浓度依赖性受抑,与对照组相比差异显著(P＜0.01),IC50=11.4μg/ml;细胞周期解析发现,浓度为30μg/ml的genistein作用K562细胞12 h,引起了明显的G2/M期阻滞,24 h后G2/M期细胞增至93%;细胞分裂指数与对照组比没有明显差别;30μg/ml genistein作用K562细胞24 h,3 h起WT1 mRNA表达开始降低,24 h时降至对照的30%.结论:genistein抑制K562细胞增殖,诱导G2期或M早期阻滞及下调WT1的表达.     

Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其机制

目的探讨Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其作用机制。方法通过脂质体将化学合成针对Bmi-1基因的siRNA转染K562细胞,采用MTT法观察Bmi-1 siRNA对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot检测Bmi-1 siRNA对K562细胞中Bmi-1和P16蛋白表达的影响。结果Bmi-1 siRNA能明显延长K562细胞的倍增时间、G1期比例增加;下调Bmi-1表达的同时上调P16蛋白表达。结论体外化学合成的Bmi-1 siRNA对K562细胞的体外增殖具有明显的抑制作用,下调Bmi-1蛋白表达的同时上调P16蛋白表达。     

依硫磷酸对人慢性髓细胞白血病K562细胞系增殖的抑制作用

目的观察依硫磷酸对人慢性髓细胞白血病K562细胞系增殖的抑制作用。方法将依硫磷酸（粉末）以1640培养液稀释成0.2mg/ml、0.5mg/ml、0.75mg/ml、1.0mg/ml、1.6mg/ml、3.2mg/ml共6个浓度组,分别处理增殖期人慢性髓细胞白血病K562细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度（IC50）。结果依硫磷酸对K562细胞增殖具有抑制作用,细胞倍增时间为48h,并且具有时间和剂量依赖性。在给药48h〉0.75mg/ml浓度的依硫磷酸对K562细胞增殖具有抑制作用（P〈0.05）,而3.2mg/ml浓度的依硫磷酸与K562细胞培养72h后对其增殖抑制作用最强,抑制率为91%。结论依硫磷酸对K562细胞增殖具有抑制作用,为临床应用依硫磷酸治疗慢性髓细胞白血病提供了实验基础。     

钟基因Per2对白血病K562细胞增殖、分化、凋亡的影响及其机制研究

目的 研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制.方法 将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株.瑞氏染色观察细胞形态,台盼蓝拒染法和MTT法检测K562细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡,电镜观察细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法 检测该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53、cyclin B1和c-myc等的表达.结果 筛选到稳定表达Per基因的稳定表达细胞株K562/Per2细胞,与空载体转染组及未处理对照组细胞相比,K562/Per2细胞体积缩小,但是分化不明显;台盼蓝拒染法和MTT实验发现Per2抑制细胞生长与增殖能力;流式细胞仪检测周期结果 K562/Per2细胞中G2期细胞增多[转染组(36.1±5.5)%,空载组(12.5±2.9)%,未处理对照组(9.7±2.3)%,P<0.05],凋亡检测显示转染组细胞凋亡明显增加[14.8%P<0.05];电镜结果 显示染色质浓集、断裂,核固缩和凋亡小体;RT-PCR及Western blot显示Per2明显上调p53基因的mRNA和蛋白表达,而抑制cyelin B1、c-myc基因mR-NA和蛋白的表达.结论 钟基因Per2能抑制K562细胞的生长和增殖,并诱导其发生凋亡,但对分化无明显作用.其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控并阻止细胞周期进程来实现的.     

高浓度胰岛素抑制人白血病细胞株K562增殖的实验研究

目的 探讨高浓度胰岛素(insulin,INS)对K562细胞株增殖的抑制作用及其机理。方法 用不同浓度胰岛素处理K562细胞,分别用CCK-8法、细胞计数法和台盼蓝拒染法检测K562细胞的增殖活性,同时检测培养基中葡萄糖浓度变化;流式细胞术检测K562细胞的凋亡效应;并分别采用不同浓度的胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和IGF-1受体非特异性阻滞剂苏拉明（Suramin）对高浓度胰岛素影响K562细胞增殖作用进行干预。结果 胰岛素在0.1～1 mU/mL浓度下具有明显促进K562细胞增殖的作用,而高浓度胰岛素（1.6～100 mU/mL）则相反;无论培养基中葡萄糖浓度高低,高浓度胰岛素都有对K562细胞增殖的抑制作用;高浓度胰岛素抑制K562细胞增殖呈时效和量效关系;0.1、1、10、100 mU/mL胰岛素处理K562细胞48 h,与对照组比较,0.1、1 mU/mL浓度下抑制细胞凋亡,而10、100 mU/mL浓度下促进细胞凋亡（P均<0.05）;IGF-1能逆转高浓度胰岛素对K562细胞增殖的抑制作用,并且具有量效和时效关系;Suramin能增强高浓度胰岛素对K562细胞增殖的抑制作用,并且具有量效和时效关系。结论 胰岛素对K562细胞有双重作用,即在0.1～1 U/mL浓度下促进细胞增殖、抑制凋亡,高浓度（1.6～100 mU/mL）下抑制细胞增殖、促进凋亡,且其抑制作用与培养基中葡萄糖代谢无关与抑制IGF-1途径有关。     

红景天对人红白血病细胞K562 DNA合成的抑制作用

红景天有效成分是从红景天根中提取的，目前已从中分离出40多种成分，其主要有效成分为红景天甙。研究表明红景天具有抗缺氧，抗氧化，抗寒冷、抗疲劳、抗微波辐射、抗毒、双向调节、增强恼干网状系统的兴奋性及抗肿瘤作用。本实验证实了红景天对体外培养人红白血病细胞系K562增殖和DNA合成的抑制作用。     

WT1基因特异性siRNA对K562细胞表达及增殖的影响

目的:研究WT1基因特异性小干扰RNA (small RNA interference, siRNA)对K562细胞表达及增殖的影响,为白血病的基因治疗提供新的思路.方法:以慢性粒细胞白血病细胞系-K562为研究对象,化学合成并转染针对K562细胞WT1基因的siRNA,倒置显微镜观察细胞的生长状态及形态学改变;MTT法检测细胞增殖状态;半定量RT-PCR检测siRNA对WT1基因表达的抑制作用;流式细胞仪法检测K562细胞凋亡.结果:siRNA转染K562细胞后, 细胞生长受抑,增殖能力减弱,其增殖抑制作用于转染后48、72 h最明显, 增殖抑制率分别为50.6%和54.1%.半定量RT-PCR显示WT1mRNA表达水平明显低于对照组;WT1 siRNA转染48 h后有42.19 %的K562细胞发生凋亡.结论:WT1基因特异性siRNA可显著抑制K562细胞增殖,促进凋亡,为白血病的基因治疗提供了新的思路.     

野生型p53基因对白血病K562细胞的增殖抑制作用

目的:建立携野生型p53基因的K562细胞株,研究该细胞内野生型p53基因的表达并观察其生物学特性。方法:构建重组人p53逆转录病毒载体,导入PA317细胞中进行包装,经过病毒滴度测定,筛选高滴度的产病毒细胞克隆。收集培养上清液中的重组人p53逆转录病毒颗粒,感染K562靶细胞,建立携野生型p53基因的K562细胞株。观察该细胞株的生长方式、形态学和生长速度。SP免疫组化染色法检测p53蛋白表达。进一步用流式细胞仪检测p53蛋白表达率和细胞周期变化;双层软琼脂培养实验检测细胞的增殖潜能改变。以pBabe空载体同时实验,作为各阶段的对照。结果:成功地构建了重组逆转录病毒载体pBabe/p53;获得逆转录病毒生产PA317/p53细胞系,最高病毒滴度为4.64×105CFU/m l;获稳定表达p53基因的K562/p53靶细胞,免疫组化结果证实该细胞内有野生型P53蛋白表达,流式细胞仪检测到野生型P53蛋白表达率为1.32%;与对照K562/pBabe细胞比较,K562/p53靶细胞的生长速度下降;软琼脂集落生成的下降率为27.14±4.49%(P<0.05);增殖指数下降,S期比例下降(P均<0.01)。结论:制备了携p53基因的高滴度逆转录病毒,建立携野生型p53基因的K562/p53细胞株,证实表达的野生型p53蛋白对该细胞有抑制作用。     

野生型p53基因对白血病K562细胞增殖抑制作用及机制

目的:研究重组腺病毒介导的野生型?53基因(AdSmp53)对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制.方法:分别将含有Ad5wtp53,突变型p53基因(Ad5mtp53)和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(AdSGFP),联合阳离子多聚季胺(polybrene)共感染K562细胞,经RT-PCR和Western Blot检测p53mRNA和P53蛋白的表达后,应用流式细胞术分析K562细胞周期、DNA含量的变化.Western Blot检测P21蛋白、核磷蛋白(NPM)、磷酸化核磷蛋白(Thr199-NPM)的表达情况.结果:Ad5wtp53和Ad5mtp53能在K562细胞中表达p53mRNA和P53蛋白.Ad5wtp53感染K562细胞48,72 h后分别有(74.45±12.09)%和(69.80±11.70)%的细胞周期出现G0/G1期阻滞,DNA含量分别下降了32.25%和38.13%;同时P21蛋白的表达升高,核磷蛋白的表达无改变,磷酸化核磷蛋白(Thr199)表达下降.而AdSmtp53感染组和AdSGFP感染组未见相应改变.结论:野生型P53蛋白町能通过上调P21的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制S期DNA的合成,降低核磷蛋白第199位苏氨酸残基的磷酸化来抑制K562细胞的增殖.     

蟾蜍灵对白血病K562细胞生长抑制机制

目的探讨中药蟾酥有效成分蟾蜍灵对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡的影响。方法倒置光显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态结构改变;MTT实验测定K562细胞对蟾蜍灵的敏感性;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;流式细胞术分析蟾蜍灵对细胞周期的影响。结果在光镜、荧光显微镜和电子显微镜下,蟾蜍灵作用K562细胞的形态和结构发生明显改变;蟾蜍灵对K562细胞的生长具有明显的抑制作用,与对照组细胞进行比较,差异具有显著性(P<0.05);MTT实验显示,蟾蜍灵对K562细胞的IC50值为0.013μmol/L,统计学分析证明,差异具有显著性(P<0.01);蟾蜍灵可明显诱导K562细胞调亡;经琼脂糖电泳,蟾蜍灵作用细胞可见到DNA梯形条带;蟾蜍灵可阻滞K562细胞于G2/M期。结论①蟾蜍灵对K562细胞的增殖抑制作用可能是因为它的凋亡诱导作用;②蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡可能归功于G2/M期阻滞。     

大黄素对白血病K562细胞抑制增殖和诱导凋亡体外研究近况

白血病(leukemia)是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,是最常见的血液系统恶性疾病。大黄(Rhubarb)为中医临床常用中药,具有泻下攻积、凉血解毒、清热利湿等作用。现代药理研究及临床应用表明,大黄具有良好的抗肿瘤及改善脏腑功能等多种作用。其有效成分之一的大黄素(Emodin,EM)是一种蒽醌类化合物,对于白血病细胞有明显的抑制杀灭作用。     

铁树叶提取液对白血病细胞株K562、HL—60增殖抑制作用的实验研究

目的观察铁树叶在白血病细胞株K562及HL-60中的作用.方法细胞培养液中分别加入铁树叶(实验组1和实验组2)及P.B.S(对照组1和对照组2),观察集落细胞数、死活细胞计数及细胞蛋白质含量.实验组和对照组比较,死活细胞计数和细胞蛋白含量P值均＜0.05,集落细胞计数实验组抑制率50%.结果实验组和对照组比较,死活细胞计数和细胞蛋白含量P值均＜0.05,集落细胞计数实验组抑制率＞50%.结论铁树叶提取液对白血病细胞株K562及HL-60细胞的增殖有明显抑制作用.     

丹参酮ⅡA对白血病细胞株K562增殖抑制及机制研究

目的 探讨丹参酮ⅡA(TAT)对人白血病细胞株K562的生长抑制作用及其可能机制。 方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TAT（终浓度1、10、15、30、50 μmol/L)对K562细胞的增殖抑制作用,光学显微镜观察TAT (30 μmol/L)作用24 h后K562细胞的形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡蛋白BCL-2、BAX的表达和蛋白激酶AKT/mTOR信号通路的变化。 结果 终浓度为10~50 μmol/L的TAT对K562细胞的生长具有抑制作用,与对照组比较差异具有统计学意义（P50）值为（7.75±2.47） μmol/L。30 μmol/L TAT作用K562细胞24 h后显微镜下显示细胞破坏明显,部分细胞裂解成碎片。流式细胞仪检测发现30 μmol/L TAT作用组凋亡细胞明显增多（P<0.05）。Western blot结果提示,30 μmol/L TAT作用K562细胞后AKT、mTOR、p70S6K、4-EBP1等信号通路关键点蛋白磷酸化表达水平减低,凋亡抑制蛋白BCL-2下调,而促凋亡蛋白BAX上调。 结论 TAT通过抑制AKT/m-TOR信号通路,下调BCL-2和上调BAX的表达,促进细胞凋亡,抑制白血病细胞株K562的生长。     

茶多酚对K562细胞体外增殖影响的研究

目的 验证茶多酚对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其作用机制.方法用MTr比色法观察茶多酚对K562细胞的生长增殖的影响;用流式细胞术观察茶多酚诱导K562细胞凋亡;用荧光分光光度计测定茶多酚处理后的K562细胞内Ca^2＋浓度的变化.结果与对照组相比,茶多酚处理后的K562细胞体外生长增殖受到抑制并诱发凋亡情况,并可使细胞内Ca^2＋浓度增高.结论茶多酚具有抑制K562细胞增殖,促进其凋亡的作用.