miR-188-5p靶向Nek6对宫颈癌细胞的影响及机制

目的探究微小RNA-188-5p(miR-188-5p)对宫颈癌细胞增殖、侵袭、凋亡、迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对33例宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织中的miR-188-5p的表达水平进行检测。常规培养宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体分别将miR-188-5p模拟物(mimics)及阴性对照转染至HeLa细胞。采用甲基噻唑基四唑(MTT)与平板克隆形成实验检测细胞存活率及克隆数目。流式细胞仪分析细胞凋亡;Transwell小室法分析侵袭与迁移;利用Targetscan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-188-5p对NIMA相关激酶(Nek)6的靶向性作用;构建Nek6小干扰RNA(si-Nek6),观察抑制Nek6的表达对细胞生物学行为的影响。结果宫颈癌组织、癌旁组织中miR-188-5p的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-188-5p mimics或转染si-Nek6可降低细胞增殖、克隆形成能力,减少迁移和侵袭细胞数,并增加细胞凋亡率;miR-188-5p与Nek6基因的3′UTR结合,抑制Nek6的蛋白表达(P<0.05);Nek6过表达可逆转miR-188-5p对HeLa细胞生物学行为的调控作用。结论miR-188-5p可能靶向下调Nek6抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡。     

MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^TM2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白...     

circNT5E靶向miR-377-3p对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭的影响

目的探讨环状RNA NT5E(circNT5E)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭的影响,并探讨其机制是否与调控miR-377-3p表达有关。方法将人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)分为对照(Con)组(正常培养的细胞)、ox-LDL组(50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-NC组(转染小干扰RNA阴性对照,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E组(转染si-circNT5E,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+miR-NC组(转染miR-NC,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+miR-377-3p组(转染miR-377-3p模拟物,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E+anti-miR-NC组(转染si-circNT5E和anti-miR-NC,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E+anti-miR-377-3p组(转染si-circNT5E和anti-miR-377-3p,50 μg/ml ox-LDL)。实时定量PCR(RT-qPCR)检测circNT5E和miR-377-3p表达;细胞计数法、Transwell实验检测细胞活力、迁移和侵袭细胞数。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定circNT5E对miR-377-3p的靶向作用。结果 ox-LDL处理的HASMCs中circNT5E表达量、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P0.05),miR-377-3p表达量显著降低(P0.05)。干扰circNT5E表达或过表达miR-377-3p可减弱ox-LDL对HASMCs增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。circNT5E直接结合miR-377-3p,干扰circNT5E促进miR-377-3p表达,而过表达circNT5E抑制miR-377-3p表达(P0.05)。抑制miR-377-3p表达可逆转干扰circNT5E对ox-LDL诱导的HASMCs增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P0.05)。结论干扰circNT5E表达可抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭,其机制与上调miR-374a-3p表达有关。     

miR-485-5p靶向CKS1B对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-485-5p对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-485-5p在人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和人鼻咽癌细胞系CNE2中的表达情况;将体外培养的CNE2细胞分为Con组(正常培养)、NC组(转染mimics阴性对照)和mimics组(转染miR-485-5p mimics),实时荧光定量PCR测定miR-485-5p表达,噻唑蓝法、Transwell小室、流式细胞术分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移、凋亡,免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和CDC28蛋白激酶调节亚基(CKS)1B蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-485-5p和CKS1B靶向关系。结果 与NP69细胞比较,miR-485-5p在CNE2细胞中的表达水平明显降低(P<0.05)。与Con组、NC组比较,mimics组细胞中miR-485-5p表达水平、细胞凋亡率和E-钙黏蛋白表达水平均明显升高,而增殖活力、侵袭与迁移能力和N-钙黏蛋白、波形蛋白、CKS1B蛋白表...     

RNA-linc00858和miR-3182在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移调控作用及靶向关系

目的 观察长链非编码RNA-linc00858和微小RNA-3182(miR-3182)在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移的调控作用，分析宫颈癌细胞中linc00858、miR-3182的靶向关系。方法 (1)40例宫颈癌患者，均行宫颈癌根治术，术中留取宫颈癌组织及癌旁组织，采用RT-qPCR法检测宫颈癌及癌旁组织中linc00858、miR-3182的表达，采用Spearman相关性分析法分析宫颈癌组织中linc00858和miR-3182相关性。(2)筛选人宫颈癌细胞株MS751为受试细胞，1～4组分别转染si-linc00858（小干扰linc00858，沉默linc00858表达）、OE-linc00858（过表达linc00858）、si-NC（小干扰阴性对照）、OE-NC（过表达阴性对照），转染48 h时采用Transwell实验观察各组细胞侵袭、迁移情况。培养48 h时采用RT-qPCR法检测各组细胞linc00858、miR-3182的表达。(3)分别采用RNA免疫沉淀测定实验、双荧光素酶报告实验分析MS751细胞中linc00858与miR-3182的靶向关...     

miR-33a对胃癌细胞生物学功能的影响

目的探究miR-33a对胃癌细胞生物学功能的影响。方法收集胃癌患者胃癌组织标本40例,同时收集相应癌旁正常组织40例,采用实时定量PCR检测各组织中miR-33a相对表达量。以脂质体为载体将miR-33a模拟物转染于人胃癌细胞株SGC-7907(miR-33a mimics组),以转染脂质体的SGC-7907细胞为阴性对照组(miR-NC组),未转染的SGC-7907细胞为对照组(Control组)。采用CCK-8法检测各组细胞孵育不同时间后的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭,并检测各组粘附细胞数随孵育时间的变化。结果胃癌组织中miR-33a相对表达量明显低于癌旁正常组织(P 0. 01)。随着孵育时间延长,各组细胞增殖能力增强,且miR-33a mimics组增殖细胞数高于miR-NC组及Control组(P 0. 05)。miR-33a mimics组细胞迁移数及侵袭数均少于miR-NC组及Control组(P 0. 05),其粘附细胞数少于miR-NC组(P 0. 01)。结论胃癌组织低表达miR-33a,提升miR-33a表达量能明显抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭及粘附能力。     

circ＿0081666/miR-330-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的 探讨circ＿0081666对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 选取30例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁组织；A549细胞分为si-con组(转染si-con)、si-circ＿0081666组(转染si-circ＿0081666)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ＿0081666组(转染pcDNA-circ＿0081666)、miR-con组(转染miR-con)、miR-330-5p组(转染miR-330-5p)、si-circ＿0081666+anti-miR-con组(共转染si-circ＿0081666和anti-miR-con)、si-circ＿0081666+anti-miR-330-5p组(共转染si-circ＿0081666和anti-miR-330-5p)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circ＿0081666和miR-330-5p表达水平；四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性；Transwell检测细胞迁移和侵袭；双荧光素酶报告实验检测circ＿0081666和miR-330-5p的靶向关系。结果...     

miR-126-3p靶向AKT2对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-126-3p(miR-126-3p)对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常葡萄膜组织及葡萄膜黑色素瘤组织中miR-126-3p的表达。采用葡萄膜黑色素瘤MUM2B细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-126-3p mimics及其阴性对照miR-NC、si-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)2及其阴性对照si-NC,分别记为miR-126-3p组、miR-NC组、si-AKT2组、si-NC组。甲基噻唑基四氮唑(MTT)、平板克隆形成实验检测增殖;Transwell小室实验检测迁移及侵袭;靶基因预测miR-126-3p的靶基因,双荧光素酶报告实验验证靶基因,Western印迹检测AKT2蛋白表达。MUM2B细胞中共转染miR-126-3p mimics与AKT2过表达载体,用以上方法检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果 与正常葡萄膜组织相比,miR-126-3p在葡萄膜黑色素瘤组织中表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-126-3p mimics或si-AKT2后MUM2B细胞...     

环状RNA ITCH对高糖诱导的心脏成纤维细胞活化的影响与机制研究

目的 探讨环状RNA ITCH(Circ-ITCH)对高糖诱导的心脏成纤维细胞(CF)活化的影响及其机制。方法 体外培养人CF(HCF),按照处理方法的不同分为对照组、高糖组、过表达载体阴性对照(OV-NC)组、Circ-ITCH过表达载体(OV-Circ-ITCH)组；模拟物阴性对照[微小RNA(miR)-NC]组、miR-212-3p模拟物(miR-212-3p mimics)组、抑制物阴性对照(inhibitor-NC)组、miR-212-3p抑制物(miR-212-3p inhibitor)组；Circ-ITCH过表达载体+模拟物阴性对照(OV-Circ-ITCH+miR-NC)组、Circ-ITCH过表达载体+miR-212-3p模拟物(OV-Circ-ITCH+miR-212-3p mimics)组、Circ-ITCH过表达载体+小分子干扰RNA阴性对照(OV-Circ-ITCH+si-NC)组和Circ-ITCH过表达载体+Samd同源物7小分子干扰RNA(OV-Circ-ITCH+si-Smad7)组，除对照组外，其余各组转染12 h后采用30 mmol/L D-葡萄糖...     

miR-200a对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移、侵袭调控作用观察及其靶向mRNA和lncRNA预测分析

目的 观察微小RNA-200a(miR-200a)对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移和侵袭的调控作用,对miR-200a的靶向mRNA及靶向长链非编码RNA(lncRNA)进行预测分析。方法 取人宫颈癌细胞系HeLa分为1、2、3及4组,分别转染miRNA模拟物miR-200a mimics、miRNA抑制物miR-200a inhibitor、对照物mimics NC及inhibitor NC。培养48 h时采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-200a表达;采用CCK8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,采用Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。使用miRNA数据库在线预测miR-200a靶向mRNA和靶向lncRNA,采用基因本体论功能注释和京都基因和基因组百科全书富集分析法分析宫颈组织中miR-200a的靶向mRNA和靶向lncRNA的生物学功能。结果 与3组比较,1组细胞miR-200a相对表达量高;与4组比较,2组细胞miR-200a相对表达量低（P均<0.05）。与3组比较,培养72、96 h时1组细胞增殖...     

lncRNA DLX6-AS1靶向miR-195-5p调控前列腺癌细胞增殖、侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lnc RNA)DLX6-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用机制。方法 qRT-聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌细胞PC3、正常前列腺上皮细胞RWPE-1中DLX6-AS1、miR-195-5p的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-DLX6-AS1组(转染si-DLX6-AS1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-195-5p组(转染miR-195-5p mimics)、si-DLX6-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-DLX6-AS1和anti-miR-NC)、si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p组(共转染si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p)用脂质体法转染至PC3细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果 与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,前列腺癌细胞PC3中DLX6-AS1的表达显著上调,miR-195-5p的表达显著下调(P<0.05);抑制DLX6-AS1、过表达...     

miR-133靶向JAK2抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-133对胃癌(gastric cancer, GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法运用qRT-PCR法检测组织和细胞中miR-133、JAK2的mR NA表达;将miR-133组(转染miR-133 mimics)、miR-NC组(未转染细胞)、miR-133 inhibitors组(转染miR-133 inhibitors)、inhibitors-NC组(转染inhibitors)、JAK2WT(载体psiCHECK2-JAK2-32 MUT(载体pUT和miR-133共转染)、miUTRWT和miR-133共转染)、JAKsiCHECK2-JAK2-3UTR MR-133+JAK2组(miR-133 mimics和JAK2共转染)、miR-133+Vector组(miR-133 mimics和pc-DNA 3。1共转染)均用脂质体法转染至AGS、MGC-803细胞;用Western blot检测细胞中JAK2的蛋白表达; MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光素酶活性。结果与人癌旁组织、人正常胃黏膜细胞GES-1相比, GC组织、GC细胞AGS、MGC-803中miR-133均低表达,JAK2均高表达;且过表达miR-133、沉默JAK2均可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭; JAK2为miR-133的靶点,且回补JAK2可逆转miR-133对GC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-133可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭,其可能与靶向JAK2有关,将可为GC的临床诊断治疗提供新靶点。     

lncRNA UNC5 B-AS1靶向miR-300影响非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)不协调同源基因5B反义RNA1(UNC5B-AS1)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和分子机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中UNC5B-AS1和miR-300的表达水平。将si-NC、si-UNC5B-AS1、miR-NC、miR-300、si-UNC5B-AS1+anti-miR-NC、si-UNC5B-AS1+anti-miR-300分别转染A549细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell实验分别检测细胞活力、迁移侵袭细胞数。蛋白质印记(Western blot)检测细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达水平。双荧光素酶报告实验和检测RT-qPCR确定UNC5B-AS1对miR-300的靶向调控作用。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中UNC5B-AS1表达升高,miR-300表达降低(P0.05)。与转染si-NC比较,转染si-UNC5B-AS1后A549细胞活力、迁移侵袭细胞数降低,CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达降低,p21表达升高(P0.05)。与转染miR-NC比较,转染miR-300后A549细胞活力、迁移侵袭细胞数降低,CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达降低,p21表达升高(P0.05)。与共转染si-UNC5B-AS1和anti-miR-NC比较,共转染si-UNC5B-AS1和anti-miR-300后A549细胞活力、迁移侵袭细胞数升高,CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达升高,p21表达降低(P0.05)。miR-300是UNC5B-AS1的靶基因,UNC5B-AS1靶向负性调控miR-300表达。结论肺癌中UNC5B-AS1呈高表达,抑制UNC5B-AS1通过靶向miR-300可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法选取初治原发性老年鼻咽癌患者83例,正常鼻咽黏膜组织40例作为对照组,培养人鼻咽癌CNE-2细胞株,根据转染物不同将细胞分为miR-34b转染组、阴性对照组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测老年鼻咽癌及对照组组织中miR-34b表达以及不同转染组细胞中miR-34b表达,MTT比色法检测不同转染组细胞增殖能力,检测细胞黏附能力,Transwell法检测不同转染组细胞侵袭能力。结果老年鼻咽癌组织中miR-34b相对表达量为(0.64±0.09),显著低于对照组的(0.94±0.12),差异有统计学意义(t=14.410,P<0.001);miR-34b在老年鼻咽癌组织中相对表达量与临床分期、T分期、N分期和淋巴结转移有关(P<0.001);miR-34b转染组细胞中miR-34b相对表达量为(0.85±0.10),显著高于阴性对照组和空白对照组,分别为(0.52±0.08)和(0.50±0.07),差异有统计学意义(F=243.329,P<0.001);与阴性对照组和空白对照组相比,miR-34b转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.05);miR-34b转染组黏附细胞数显著高于阴性对照组和空白对照组,而侵袭细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.001)。结论 miR-34b在老年鼻咽癌组织中呈低表达,上调miR-34b表达可减少细胞增殖,增加细胞黏附能力,抑制细胞侵袭能力,有望成为提高鼻咽癌对放射治疗敏感性的目的基因。     

miR-26对TGF-β2诱导的人Tenon氏囊成纤维细胞迁移、细胞外基质蛋白表达的调控作用及其机制

目的 观察miR-26对转化生长因子β₂(TGF-β₂)诱导后人Tenon氏囊成纤维细胞(HTFs)的细胞迁移及细胞外基质(ECM)蛋白表达的调控作用,并探讨其可能的作用机制。方法 切取青光眼手术患者的结膜囊组织,以组织贴壁法体外培养HTFs。取传至第3～5代的HTFs,随机分为空白组(不予转染)、TGF-β₂组(不予转染)、TGF-β₂+miR-26 mimics组(转染miR-26类似物)、TGF-β₂+mimics NC组(转染miR-26类似物阴性对照物),TGF-β₂+miR-26 inhibitors组(转染miR-26抑制物),TGF-β₂+inhibitors NC组(转染miR-26抑制物阴性对照物),转染24 h后除空白组外均加入TGF-β₂5μg/L刺激48 h。采用划痕实验检测细胞迁移率,Western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、纤维连接蛋白(Fibronectin)...     

miR-200通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨miR-200对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为NC组(未进行任何处理的A549细胞)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-200组(转染miR-200-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-PD-L1组(转染si-PD-L1)、miR-200+pEGFP组(转染miR-200-mimic+pEGFP)及miR-200+pEGFP-PD-L1组(转染miR-200-mimic+pEGFP-PD-L1)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-200表达水平;MTT检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞PD-L1表达水平;荧光素酶实验验证miR-200与PD-L1的靶向关系。结果与HLF-1相比,A549细胞胞miR-200表达水平降低,PD-L1基因、蛋白表达升高(P0.05)。48和72 h时,miR-200组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、miR-NC组(P0.05)。48和72 h时,si-PD-L1组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、si-NC组(P0.05)。miR-200+pcDNA-PD-L1组细胞48、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量高于miR-200+pcDNA组、miR-200组(P0.05)。与对照组相比,A549细胞PD-L1野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P0.05),PD-L1突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P0.05)。结论 miR-200可负性调控PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-101对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其作用机制

目的探讨微小RNA-101(miR-101)对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法取对数生长期PANC1细胞分为5组, 除对照组外, 分别为转染miRNA模拟体的阴性对照(mimic-NC)组、转染miRNA-101模拟体(miR-101 mimic)组、转染miRNA抑制剂的阴性对照(inhibitor-NC)组、转染miRNA-101抑制剂(miR-101 inhibitor)组。采用qRT-PCR检测miR-101相对表达水平, MTT法检测细胞增殖率, 流式细胞仪检测细胞凋亡率, Transwell实验检测细胞侵袭能力, qRT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测IL-6、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 mRNA蛋白的相对表达水平, 双荧光素酶报告基因法检测miR-101与IL-6的靶向关系。结果转染48 h后, 对照组、mimic-NC组、miR-101 mimic组、inhibitor-NC组、miR-101 inhibitor组PANC1细胞miR101表达水平分别为1.98±0.12、2.01±0.18、6.73±0.23、2...     

微小RNA-424-5P靶向调控HMGA1基因对胃癌细胞生长、侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-424-5P对高迁移率族蛋白(HMG)A1的靶向调控及对胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法 将人胃癌BGC-823细胞复苏后，应用10%胎牛血清，在5%二氧化碳和37℃培养箱中进行培养，应用miR-424-5P抑制物(inhibitor)转染的BGC-823细胞列为anti-miR-424-5P组。应用阴性对照进行转染的BGC-823细胞列为anti-NC组，不进行转染的BGC-823细胞列为对照组，细胞转染后各组继续在培养箱中培养。应用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测各组miR-424-5P的相对表达水平；应用四甲基噻唑蓝(MTT)研究miR-424-5P对细胞增殖的影响；应用划痕实验检测miR-424-5P对细胞迁移的影响；应用transwell实验研究miR-424-5P对细胞侵袭的影响。应用免疫印迹实验对各组HMGA1蛋白相对表达水平进行检测。结果 转染48 h后qRT-PCR结果表明，anti-miR-424-5P组miR-424-5P相对表达量明显低于对照组和anti-NC组(P<0.05)。对BGC-823细胞进行转染48 h后，miR...     

miR-19-3p靶向TC-1对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的研究miR-19-3p对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用机制。方法 qRT-PCR法检测口腔鳞癌组织和细胞中miR-19-3p的表达;将miR-19-3p组(转染miR-19-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-TC-1组(转染pcDNA-TC-1)、miR-19-3p+pcDNA组(共转染miR-19-3p mimics和pcDNA)、miR-19-3p+pcDNA-TC-1组(共转染miR-19-3p mimics和pcDNA-TC-1)均用脂质体法转染至CAL27细胞;Western印迹检测细胞中TC-1、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、P21、Bax、Bcl-2、E-钙黏蛋白(cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;MTT、流式细胞术、Transwell检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测miR-19-3p与TC-1的结合力。结果与癌旁组相比,口腔鳞癌组miR-19-3p表达下调;上调miR-19-3p可抑制CAL27细胞的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,下调Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2,上调P21、Bax、E-cadherin;miR-19-3p下调野生型TC-1细胞荧光素酶活性;上调TC-1部分逆转miR-19-3p的癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡调控作用。结论 miR-19-3p可抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,其机制之一为靶向TC-1。     

miR-204-5p靶向JARID2调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖侵袭迁移的机制

目的研究miR-204-5p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR、Western印迹检测人葡萄膜黑色素瘤MUM-2B、正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19中miR-204-5p、JARID2的表达;将miR-204-5p组(转染miR-204-5p模拟物)、miR-con组(转染miR-con)、si-JARID2组(转染si-JARID2)、si-con组(转染si-con),miR-204-5p+pcDNA组(共转染miR-204-5p模拟物和pcDNA)、miR-204-5p+pcDNA-JARID2组(共转染miR-204-5p模拟物和pcDNA-JARID2),均用脂质体法转染至MUM-2B细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19相比,葡萄膜黑色素瘤MUM-2B中miR-204-5p表达显著降低,JARID2表达显著升高(P<0.05);过表达miR-204-5p、敲减JARID2均可明显抑制MUM-2B细胞的增殖、迁移、侵袭;miR-204-5p可靶向负调控JARID2的表达;过表达JARID2可逆转过表达miR-204-5p对MUM-2B细胞的增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论miR-204-5p可抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向JARID2有关,将可为葡萄膜黑色素瘤的靶向治疗提供新靶点。