金钗石斛总生物碱抑制海马tau蛋白的过度磷酸化

目的研究金钗石斛总生物碱(DNLA)对衰老小鼠及痴呆模型大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化的影响。方法以SAMP8小鼠作为衰老小鼠模型,SAMR1小鼠作为正常对照,自4月龄始给予DNLA(20和40 mg·kg~(-1)),每天灌胃1次,连续6个月;SD大鼠双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)作为痴呆模型,侧脑室注射溶媒大鼠作为正常对照,术后给予DNLA,每天1次,连续28 d。Morris水迷宫及Y迷宫检测各组动物学习记忆功能;HE和Nissl染色观察海马神经元形态及数量;Western印迹法检测海马组织tau蛋白表达及Ser199,Ser396,Ser404,Ser422和Thr231位点的磷酸化水平;GSK-3β蛋白表达及Ser9和Y216位点的磷酸化水平;以及PP2A的蛋白表达水平。结果 DNLA可改善SAMP8小鼠和STZ大鼠的学习记忆功能(P<0.05);减少模型小鼠和大鼠海马组织神经元形态的损伤和数量的丢失(P<0.01);并降低tau蛋白Ser199,Ser396,Ser404,Ser422和Thr231位点的磷酸化水平(P<0.05),提高GSK-3β在Ser9位点的磷酸化水平(P<0.05),对GSK-3β的Y216位点磷酸化、PP2A、总tau蛋白及总GSK-3β的蛋白表达无明显的影响。结论 DNLA对脑内tau蛋白的过度磷酸化的具有抑制作用。     

M1胆碱受体通过AMPA受体GluA1亚基改善β-淀粉样肽导致的学习记忆功能障碍

目的碱型乙酰胆碱受体(M受体)亚型M1受体在脑内的分布量最大,并且在大脑皮质和海马中大量表达,发挥着重要的促进学习和记忆的功能。M1受体是治疗以胆碱神经元丢失、淀粉样斑块沉积等为病理特征的神经退行性疾病阿尔茨海默病(AD)的潜在治疗靶标。我们前期研究发现,选择性激活M1受体可促进AMPA受体GluA1亚基向神经元表面和突触后膜运输,并且在激动M1受体促进学习记忆中起着重要作用。本研究进一步探讨AMPA受体GluA1亚基在M1受体改善β-淀粉样肽(Aβ)所致学习记忆障碍中的作用。方法选用野生型和AMPA受体GluA1亚基Ser845位点突变小鼠(S845A小鼠),以3次脑室内注射Aβ纤丝以破坏学习记忆功能,通过Morris水迷宫实验研究给予M1受体选择性激动剂77-LH-28-1对野生小鼠和突变小鼠的学习记忆的改善作用。实验结束后收集海马组织进行Western蛋白印迹法和免疫荧光检测,研究77-LH-28-1对海马组织内GluA1亚基表达及其向突触转运的影响。结果 Morris水迷宫实验表明,S845A小鼠的空间学习记忆能力与野生型小鼠相同,表明S845A小鼠学习记忆功能未受损。给予3次脑室内Aβ纤丝注射使野生型和S845A小鼠的空间记忆能力受损,给予M1受体选择性激动剂77-LH-28-1可明显缩短野生型小鼠寻找平台的潜伏期和游泳路程,但对S845A小鼠无明显作用。Morris水迷宫训练期24 h后进行目标象限探索实验,结果表明,77-LH-28-1可使注射Aβ纤丝的野生型小鼠在目标象限的时间和路程百分百显著提高,与正常野生小鼠无区别,而这些作用在注射Aβ纤丝的S845A小鼠都缺失。并且各组小鼠的游泳速度不存在显著性差异,说明M1受体激动通过GluA1亚基显著改善了Aβ所致的空间学习和记忆障碍。Western蛋白印迹法检测表明,77-LH-28-1提高野生型小鼠海马内GluA1亚基的表达及其Ser845位点的磷酸化。免疫荧光检测表明,77-LH-28-1提高野生型小鼠海马内GluA1亚基与突触后蛋白PSD95的共定位,而这些作用在S845A小鼠中缺失。结论选择性激动M1受体显著改善Aβ所致的学习记忆障碍,该作用与其调控对AMPA受体GluA1亚基的调控有关。激动M1受体可使GluA1亚基Ser845位点的磷酸化程度增加,并由此增加GluA1的表达和向突触后的转运。Ser845位点突变可阻断M1受体对GluA1亚基的调控作用从而不能改善Aβ所致的学习记忆障碍。本研究揭示了M1受体改善学习记忆的分子机制。     

芥子碱对Aβ_(25-35)诱导的认知功能障碍小鼠海马神经元再生的影响

目的探讨芥子碱对Aβ25-35诱导的认知功能障碍小鼠海马神经元再生的影响。方法采用侧脑室内注射Aβ25-35诱导认知功能障碍小鼠模型,并分为4组:假手术组、Aβ25-35组、假手术+芥子碱组和Aβ25-35+芥子碱组。采用Y型电迷宫法检测学习和记忆行为;TUNEL法检测海马CA1区的神经元凋亡情况;ELISA法检测海马的丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot法检测海马生长相关蛋白43(GAP-43)和突触素(P38)的蛋白水平。结果相比于假手术组,Aβ25-35组的学习次数、海马MDA和TNF-α的水平增加,记忆次数减少、海马CA1区神经元凋亡率升高、GAP-43和P38的蛋白水平降低(P<0.05);而芥子碱处理可改善以上症状,但仍与假手术组有差异。结论芥子碱可改善Aβ25-35诱导的认知功能障碍小鼠的学习和记忆功能障碍,降低海马神经元凋亡,并缓解海马区与神经再生相关蛋白及分子的水平。     

氯肟衍生物对记忆障碍模型动物空间学习记忆障碍改善作用及其机制研究

目的研究氯肟衍生物arimoclomol和TCO-2对记忆障碍动物学习记忆能力的影响并初步探讨其机制。方法采用东莨菪碱致记忆获得性障碍小鼠模型和侧脑室注射Aβ1-42所致记忆障碍大鼠模型。动物分为正常组、模型组、多奈哌齐对照组、arimoclomol干预组和TCO-2干预组。正常组与模型组动物每日相同时间腹腔注射相应剂量的药物溶剂(生理盐水);多奈哌齐对照组及待测药物干预组分别给予相应剂量的药物。给药8 d后,采用Morris水迷宫方法检测动物的空间学习记忆能力,并且检测动物海马组织的乙酰胆碱酯酶活性;检测侧脑室注射Aβ1-42大鼠海马组织的Aβ1-42含量,并测定磷酸化tau蛋白表达。结果与模型对照组相比,给予两种氯肟衍生物的动物搜索平台潜伏期缩短,穿越平台次数增加,表明氯肟衍生物可以明显改善注射东莨菪碱或Aβ1-42引起的记忆障碍;给予氯肟化合物还能够明显降低脑内乙酰胆碱酯酶活性和Aβ1-42含量,下调磷酸化tau蛋白的表达。结论氯肟衍生物可改善东莨菪碱以及侧脑室注射Aβ1-42所致的记忆障碍,其作用机制可能与增强中枢胆碱能系统功能、降低脑内Aβ蛋白和磷酸化tau蛋白含量有关。     

二精丸影响肾阴虚动物记忆障碍机制的实验研究

目的 探讨二精丸有效部位影响肾阴虚模型大鼠学习记忆障碍机制.方法 使用附子、肉桂等热性中药复制大鼠肾阴虚记忆障碍模型.二精方总黄酮和总多糖灌胃给药结束后Morris水迷宫法测定各组的学习记忆能力,采用免疫组织化学法检测大鼠海马BCL-2、Bax表达及Tau蛋白异常磷酸化水平.结果 二精丸总黄酮和总多糖能显著恢复海马区BCL-2和Bax表达,能显著抑制模型大鼠海马区Tau蛋白Ser199/202、Ser396两个磷酸化位点异常磷酸化.结论 二精丸总黄酮和总多糖可能通过恢复海马区BCL-2和Bax表达和抑制模型大鼠海马区Tau蛋白Ser199/202、Ser396两个磷酸化位点异常磷酸化来提高肾阴虚模型大鼠的学习记忆能力.     

文冠果壳提取物对β-淀粉样蛋白致动物学习记忆障碍的改善作用

目的研究文冠果壳乙醇提取物对动物学习记忆障碍的改善作用并探讨其可能的作用机制。方法采用水迷宫法、避暗法测定小鼠的学习记忆能力;用Y迷宫法及Morris水迷宫法测试大鼠的学习记忆能力,显微镜下观察海马组织形态学改变。结果文冠果壳乙醇提取物显著减少侧脑室注射β-淀粉样蛋白(25-35)(Aβ(25-35))致记忆障碍小鼠水迷宫实验的逃避潜伏期和避暗实验的错误次数,延长避暗潜伏期;文冠果壳乙醇提取物显著提高D-半乳糖合用Aβ(25-35)致记忆障碍大鼠Y迷宫测试中正确反应率,显著缩短Morris水迷宫测试中的潜伏期及游泳路程;抑制海马神经元的变性及脱落。结论文冠果壳乙醇提取物对Aβ(25-35)致鼠学习记忆障碍有显著的改善作用,其作用机制可能与对抗Aβ(25-35)的毒性有关。     

罗格列酮通过IRS-1/Akt信号通路改善ob/ob小鼠的认知功能障碍

目的本研究旨在对ob/ob小鼠腹腔注射罗格列酮,观测小鼠空间学习记忆能力及大脑海马组织中与认知功能相关的蛋白表达变化,进而探讨引起这些变化的机制。方法C57BL/6J♂ob/ob小鼠分两组,一组腹腔注射罗格列酮(RSG),即罗格列酮组(ob/ob-RSG),一组注射同等体积的生理盐水,即生理盐水组(ob/ob-Saline),同鼠龄正常C57BL/6J(WT)♂小鼠为同型对照,即正常组(WT)。饲养7个月后注射药物并连续检测随机血糖10 d,新事物探索实验检测空间学习记忆能力。Western blot方法检测海马中BACE1、磷酸化Tau、磷酸化IRS1及IRS1、磷酸化Akt及Akt等蛋白的表达水平,ELISA的方法检测Aβ1-40的水平。结果罗格列酮组小鼠随机血糖水平明显低于生理盐水组,并趋于正常组。新事物探索实验结果显示罗格列酮组的空间学习记忆能力相对于生理盐水组有所改善。罗格列酮组小鼠海马组织中BACE1及磷酸化Tau的表达水平相对于生理盐水组明显下降,并趋于正常组。类似的,海马组织中Aβ水平在罗格列酮处理后明显下降。罗格列酮组小鼠大脑海马组织中胰岛素信号通路相关蛋白IRS1以及下游Akt的磷酸化水平相对于生理盐水组均明显增高,并趋于正常组。结论ob/ob小鼠在注射罗格列酮后,海马组织中IRS1/Akt胰岛素信号通路被激活进而改善肥胖导致的认知功能障碍。     

人参皂甙Rb1通过提高PP2A活性抑制冈田酸诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白AD样异常磷酸化

目的 研究人参皂甙Rb1对冈田酸诱导的海马神经元Tau蛋白过度磷酸化的抑制作用及其可能机制。方法用不同浓度的Rb1预处理大鼠后，向海马背侧一次性注射适量OA，建立Tau蛋白过度磷酸化的大鼠模型。通过Bieschowski’s染色、免疫组化和western-blot观察大鼠海马神经元突起和Tau蛋白磷酸化水平的变化；检测蛋白磷酸酯酶PP2A和胆碱乙酰转移酶(T-chE)活性，探讨Rb1作用的可能机制。结果模型组大鼠海马神经元神经原纤维排列紊乱，轴突断裂；Tau蛋白磷酸化水平和总Tau含量增多，PP2A活性明显受抑制，但T-chE活性无改变；Rb1预处理的大鼠，神经原纤维走行规则，轴突较完整，Tau磷酸化和总Tau水平比模型鼠下降，PP2A活性明显增高，但T—chE活性无明显改变。结论。Rb1可以减轻OA诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化，其机制可能主要与提高PP2A活性有关；Rb1对T-chE则无明显影响。     

硫酸软骨素锂的制备及对D-Gal和AlCl_3诱导的AD小鼠学习记忆障碍的改善作用

目的阿尔兹海默病(AD)是一种常见的以记忆损伤,认知功能障碍及语言障碍等为特征的中枢神经系统退行性疾病。硫酸软骨素(CS)具有抗炎、抗氧化、神经保护等多种药理活性。Li Cl是发现的第一类tau蛋白激酶GSK-3β特异性抑制剂,通过下调GSK-3β的表达,上调抗凋亡因子Bcl-2和神经营养因子,从而降低Aβ蛋白的毒性和tau蛋白的磷酸化程度。本研究拟制备低分子量硫酸软骨素锂(CS-Li),并从抑制β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集、减少细胞骨架损伤、抑制tau蛋白的过度磷酸化等方面考察CS-Li对D-Gal和Al Cl3诱导的AD小鼠学习记忆障碍的改善作用。方法采用离子树脂交换法制备CS-Li,并通过红外光谱(FTIR)和电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对其进行表征。采用透射电镜(TEM)、Th T结合实验、圆二色谱法(CD)、细胞活性实验和荧光显微镜等方法来考察CS-Li对Aβ1-42聚集的抑制作用。激光共聚焦显微镜观察CS-Li对冈田酸(OA)诱导的SH-SY5Y细胞骨架损伤的抑制作用。采用皮下注射D-Gal和Al Cl3灌胃法构建AD小鼠模型,皮下注射D-Gal和Al Cl3连续给药30 d后,通过新物体识别和Morris水迷宫等行为学方法考察CS-Li对AD小鼠的空间学习记忆能力和探索能力以及精神状况的改善作用。行为学测试结束后处死小鼠,取小鼠海马组织,HE染色观察小鼠海马神经细胞的形态学变化情况,透射电镜下观察小鼠海马体神经元形态结构、神经元之间突触的数目、髓鞘和线粒体的形态结构,Western蛋白印迹实验考察CS-Li对AD小鼠海马中p-Tau(ser396)蛋白表达的调节作用。结果采用离子树脂交换法成功的制备了CS-Li,FTIR光谱结果显示,1741 cm-1和1558 cm-1附近的羰基上羧酸盐的偶合峰明显增强,表明Li+已经成功的结合到了CS的羧基上,CS-Li中Li+含量为6.051 g·kg~(-1)。通过透射电镜观察到CS-Li有效地抑制了Aβ1-42的聚集。通过TEM、Th T结合实验、圆二色谱实验结果显示,CS-Li可以有效的抑制Aβ1-42的聚集。激光共聚焦显微镜研究表明,CS-Li保护SH-SY5Y细胞拮抗OA诱导的细胞骨架结构损伤。Morris水迷宫定位航行实验中,给药组小鼠的逃避潜伏期显著缩短;给药组与模型组穿过平台次数比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。新物体识别实验结果显示,各组小鼠的总探索时间无显著差异,给药组小鼠较模型组对新物体的辨别率显著得到提升(P<0.01)。HE染色和透射电镜结果显示,与模型组相比,经CS-Li治疗的小鼠的海马体CA1区突触明显增多,髓鞘结构和线粒体结构更为完整。Western蛋白印迹实验结果表明,CS-Li可以抑制D-Gal和Al Cl3诱导的AD小鼠海马内Tau蛋白在Ser396位点过度磷酸化。结论采用离子交换法制备的CS-Li,可以抑制Aβ1-42的聚集,减少细胞骨架损伤,调节tau蛋白的过度磷酸化,改善D-Gal和Al Cl3诱导的AD小鼠的学习记忆障碍,改善小鼠海马神经元存活及突触超微结构,CS-Li可能是一种有效的多靶点治疗AD的药物,值得进一步研究和评价。     

二十二碳六烯酸-磷脂对AD大鼠学习记忆的影响

目的 研究二十二碳六烯酸-磷脂(docosahexaenoic acid-phosphatidylcholine, DHA-PC)对海马CA1区注射Aβ25-35所致的阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）大鼠模型学习记忆能力改善作用,为DHA-PC的药用开发奠定理论基础。方法 SPF级雄性Wistar大鼠40只,250~300 g,随机分为正常对照组、AD组、多奈哌齐组、DHA-PC组。大鼠双侧海马CA1区注射Aβ25-35制作AD大鼠模型,水迷宫检测学习记忆能力改变,检测Tau(Ser 396)蛋白的含量,检测超氧化物歧化酶活性。结果 水迷宫结果显示：与AD组相比,定向航行实验DHA-PC组大鼠的潜伏期明显降低（P<0.05）;空间探索实验DHA-PC组大鼠在安全平台所在象限的活动时间明显增加（P<0.05）。与AD组相比,DHA-PC组和DHCI组大鼠皮层和海马的Tau（Ser396）蛋白含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,DHA-PC组和DHCI组皮层SOD活性增强（P<0.01）。结论 DHA-PC可通过降低皮层和海马396位点磷酸化Tau蛋白的表达和增强SOD活性,改善AD大鼠学习记忆能力,具有较好的药用开发前景。     

胰岛素对AD样小鼠学习记忆的影响及其机制

【摘要】目的 研究胰岛素对阿尔茨海默病（AD）样小鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法 将21只小鼠随机分为对照(CON) 组、模型（链脲佐菌素,STZ）组和胰岛素治疗(INS) 组,每组7只,后2组小鼠脑室内注射STZ建立 AD模型,INS组小鼠皮下注射胰岛素持续30 d。Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,Western blotting检测Tau和神经丝（NFs）蛋白的磷酸化水平,荧光染料Fluoro-Jade B（FJB）标记退化神经元。结果 与CON组相比,STZ组小鼠平均逃避潜伏期和路径长度明显增加(P < 0.05)、穿越隐匿平台次数明显减少(P < 0.05),小鼠脑内Tau蛋白在Ser199/ 202、Ser396/404、Thr212和Thr205位点的磷酸化水平以及NFs蛋白的磷酸化增加(P < 0.05),FJB标记的小鼠海马CA1 区平均累积光密度(IOD)较CON组明显增加(P < 0.001);与STZ组相比,INS组小鼠学习记忆改善,逃避潜伏期和路径长度明显减少(P < 0.05)、穿越隐匿平台次数明显增加(P < 0.05),Tau蛋白特异性位点和NFs蛋白的磷酸化作用明显降低(P < 0.05),FJB标记的小鼠海马CA1区平均累积分光密度(IOD)明显减少(P < 0.001)。结论 胰岛素能改善STZ脑室内注射的AD样小鼠学习记忆减退,可能与降低Tau和NFs蛋白的过度磷酸化和神经细胞退行性变有关。     

板桥党参通过PP2A信号通路改善AD模型大鼠认知功能障碍

目的探讨板桥党参(BCP)对冈田酸(OA)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能的保护作用及其可能机制。方法将SD大鼠随机分为DMSO组﹑OA组﹑BCP低、中、高治疗组,每组分1周和2周组灌胃。水迷宫训练5 d,训练结束24 h后造模,DMSO组大鼠双侧脑海马各注射10%DMSO 1.5μL,OA组和BCP治疗组同位置注射OA(0.392 mmol·L~(-1))1.5μL。造模后,水迷宫测试观察大鼠空间学习能力;Western blot检测各组海马PP2A活性、Tau蛋白磷酸化水平及突触蛋白表达情况;尼氏染色观察大鼠海马CA1﹑CA3区尼氏小体变化情况。结果水迷宫实验发现,BCP能改善AD大鼠空间记忆障碍;Western blot结果显示,BCP能提高PP2A活性,增加突触蛋白表达量,同时减少Tau蛋白磷酸化水平。尼氏染色提示,BCP治疗组尼氏小体数量增加。结论 BCP能上调PP2A活性,降低Tau蛋白的磷酸化水平,同时提高突触相关蛋白表达水平,修复受损神经元。     

阿魏酸钠对抗Aβ(25-35)致大鼠学习记忆障碍与IL-1β和p38MAPK表达的相关性探讨

目的研究阿魏酸钠(sod ium feru late)对抗Aβ25-35致大鼠学习记忆障碍与白介素-1β(IL-1β)和丝裂原激活的蛋白激酶p38(M itogen-activated prote in k inase,p38MAPK)表达的相关性。方法大鼠脑室内一次性注射Aβ25-35制备AD动物模型,通过大鼠行为学和海马CA1区的病理学改变观察阿魏酸钠的作用。W estern b lot和ELISA方法检测磷酸化p38MAPK和IL-1β蛋白表达量的变化。RT-PCR分析FasLmRNA表达水平。结果脑室内注射Aβ25-35可使大鼠出现明显的学习记忆障碍,即逃避潜伏期明显延长,原平台象限游泳时间占总游泳时间百分比明显降低。这些行为学的改变伴随有海马CA1区星形胶质细胞激活和浸润,IL-1β蛋白表达和FasL mRNA表达水平明显增加,海马CA1区锥体神经元损伤。另外,Aβ25-35也能引起磷酸化的p38MAPK蛋白表达明显增加。阿魏酸钠(50,100,250 mg.kg-1,连续应用4 wk)与阳性对照药布洛芬(15 mg.kg-1)均能明显对抗Aβ25-35所致大鼠学习记忆障碍,抑制Aβ25-35引起的IL-1β、磷酸化p38MAPK和FasL mRNA表达增加,海马CA1区锥体神经元的损伤和星形胶质细胞激活和浸润也被明显减轻。结论阿魏酸钠通过抑制Aβ25-35引起的海马炎症反应和p38MAPK活性,减轻大鼠海马锥体神经元的损伤,改善大鼠的学习记忆功能。     

拟人参皂苷-F11对SAMP8小鼠认知障碍的改善作用及机制

目的阿尔茨海默病(AD)是一种常见的、以认知障碍为主要症状的中枢神经系统退行性疾病。β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成的淀粉样斑块(SP)和过度磷酸化的Tau蛋白引发的神经原纤维缠结(NFT)是AD临床上的主要病理特征。拟人参皂苷F11(PF11)是西洋参茎叶中分离提取的一种三萜皂苷化合物,本文通过自发快速老化(SAMP8)模型小鼠,从Aβ沉积和Tau过度磷酸化等方面,结合神经行为学、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹等手段,进一步评价PF11对AD模型动物认知障碍的改善作用及潜在机制。方法灌胃给予6月龄雄性SAMP 8快速衰老小鼠PF11(2,8和32 mg·kg~(-1)),在给药3个月后进行行为学实验,并检测APP和β-分泌酶(BACE1)、晚期内含体Rab7和循环内含体Rab11的表达。结果灌胃给予PF11(8和32 mg·kg~(-1))3个月可以显著改善SAMP8小鼠的识别记忆和空间学习记忆障碍,显著增加SAMP8小鼠海马和皮质中突触后致密蛋白95的水平;显著降低SAMP8小鼠海马和皮质中胞浆淀粉样蛋白前体蛋白(APP)和β-分泌酶(BACE1)的水平,减少海马和皮质中APP与晚期内含体(LE)的共定位,从而降低脑内Aβ的沉积;PF11可以显著提高SAMP8小鼠海马和皮质中异常降低的亮氨酸羧甲基转移酶(LCMT-1)水平,增加甲基化蛋白磷酸酶2A(PP2A)的水平,从而减少过度磷酸化的Tau。结论 PF11能够明显改善SAMP8小鼠的认知障碍,其机制与抑制海马和皮质脑区中APP淀粉样剪切途径进而减少Aβ沉积,以及增加PP2A活力进而减少Tau蛋白的过度磷酸化相关。     

虾青素对Aβ诱导的阿尔茨海默病大鼠损伤的保护作用

目的 观察虾青素对Aβ诱导损伤模拟阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能的改善作用,并探讨其作用机制。方法 按随机数字表法将大鼠随机分为假手术组,模型组,虾青素组。模型组、虾青素组采用侧脑室定位注射β-淀粉样蛋白(Ａβ25-35)建立AD动物模型。造模后第8天开始灌胃,假手术组、模型组给予玉米油5 ml/kg.d,虾青素组按照25 mg/kg.d灌胃,连续灌胃给药21天后进行Morris水迷宫实验,检测大鼠的学习记忆能力;采用 ELISA 法检测大鼠海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)含量以及磷酸化Tau蛋白含量,数据采用单因素方差分析。结果 与模型组相比,虾青素组能明显缩短大鼠逃避潜伏期的时间,增加其穿越平台的次数,显著提高大鼠海马组织的SOD含量,降低LDH和MDA含量从而减轻AD大鼠氧化应激状态,降低磷酸化Tau蛋白水平。结论 虾青素能通过提高AD大鼠海马组织的抗氧化能力和降低磷酸化Tau蛋白含量,从而改善AD大鼠的学习记忆能力,对Ａβ25-35所致的阿尔茨海默病症有一定的治疗效果。     

铁螯合肽联合索马鲁肽治疗阿尔兹海默症小鼠的研究

摘要:目的 研究bs-5-YHEDA铁螯合肽联合索马鲁肽对Gal-D诱导的阿尔兹海默症（AD）模型小鼠认知能力和病理特征的影响。方法 将40只8周龄昆明小鼠随机分为5组,分别为空白组,模型组,bs-5-YHEDA铁螯合肽组,联合治疗组和美金刚组,每组8只,雌雄各半。除空白组外,注射D-半乳糖诱导AD小鼠模型,连续6周。从第4周开始各治疗组连续给予相应治疗3周,空白组和模型组注射同等剂量生理盐水。治疗结束后通过Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力,解剖取全脑和全血,苏木素-伊红（HE）染色观察海马区病理改变,免疫组织化学、酶联免疫吸附、免疫印迹检测Aβ表达和Tau蛋白磷酸化水平。结果 在Morris水迷宫空间探索实验结果显示,各组小鼠穿越平台次数、目标象限游泳路程比和时间比的差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比较,联合治疗组目标象限游泳路程比增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常对照小鼠相比,模型组海马区锥体细胞层次减少,排列紊乱,细胞水肿,细胞核固缩深染,药物治疗后各治疗组海马区细胞排列紊乱、胞核固缩深染及细胞凋亡情况明显改善。免疫组织化学染色和WB结果显示,与正常对照小鼠相比,模型组小鼠Aβ表达水平和Tau蛋白磷酸化水平明显升高,药物治疗后各组小鼠Aβ表达水平和Tau蛋白磷酸化水平明明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 bs-5-YHEDA铁螯合肽联合索马鲁肽能够有效改善AD小鼠学习记忆能力和病理特征,但从水迷宫实验结果来看,相较于单一bs-5-YHEDA铁螯合肽组,联合治疗组对AD模型小鼠的记忆改善不明显,提示我们设计的双靶点联合治疗对AD模型鼠认知改善可能存在阈值效应,多靶点组合治疗效果的优化及验证有待进一步的研究。     

左旋丁苯酞对低灌注大鼠脑皮质Tau蛋白磷酸化的影响

目的通过观察左旋丁苯酞(1-NBP)对脑低灌注大鼠学习记忆的改善作用,并研究其皮质β-淀粉样肽(Aβ1-42)水平以及Tau蛋白磷酸化变化,以探讨1-NBP改善认识功能的作用机制。方法大鼠双侧颈总动脉结扎90d,制备脑低灌注模型。实验分假手术组,溶剂对照组,1-NBP 30、120mg/kg组。1-NBP治疗组连续给予45d后,用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习和记忆能力,后取大鼠脑皮质组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Aβ1-42含量,用蛋白印迹法检测Tau蛋白的磷酸化水平。结果在水迷宫空间探索实验中1-NBP明显增加脑低灌注大鼠在目标象限活动时间的百分比。1-NBP明显减少了大鼠皮质Aβ1-42含量,降低低灌注大鼠皮质Tau蛋白的磷酸化水平。结论 1-NBP改善了脑低灌注大鼠的学习记忆缺陷,可能是通过减少皮质Aβ1-42的水平,从而减轻Tau蛋白的磷酸化,最终保护了神经元免受损伤。     

复智散通过细胞周期依赖性蛋白激酶5通路减轻皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的探讨复方中药复智散(FZS)能否通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)通路,减轻Aβ_(25-351)诱导的新生鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。方法选用24 h内新生Wistar大鼠,分离纯化皮层神经元,进行体外培养。皮层神经元在体外培养7 d后,应用20μmol·L-1Aβ_(25-351)作用于皮层神经元24 h。药物治疗组则应用FZS(20 mg·L~(-1))、CDK5抑制剂Roscovitine(15μmol·L~(-1))、钙蛋白酶(calpain)制剂Calpeptin(20μmol·L~(-1))预处理24 h,然后用20μmol·L~(-1)Aβ_(25-351)作用24 h。用Western blot检测Tau蛋白Ser396、Ser202和Thr231位点磷酸化水平和CDK5的激活蛋白p25/p35的蛋白水平;荧光酶标仪测定荧光强度来反映calpain活性;免疫沉淀法检测CDK5激酶活性。结果 20μmol·L~(-1)Aβ_(25-351)作用于皮层神经元24 h后,Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位点磷酸化水平增加,CDK5激酶活性升高,CDK5激活蛋白p25水平升高,calpain活性升高。20 mg·L-1FZS治疗组则明显抑制了Aβ_(25-351)导致的Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位点磷酸化水平增加,抑制了CDK5激酶活性、p25蛋白水平以及calpain活性升高。CDK5抑制剂roscovitine和calpain抑制剂calpeptin作为阳性对照药物也显示了抑制Tau蛋白过度磷酸化的作用。结论复智散可能通过calpain-p25/CDK5通路抑制Aβ_(25-351)导致的皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及tau蛋白磷酸化的影响

目的 探究电针对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆能力改善的情况以及对大鼠海马tau蛋白磷酸化的影响.方法 将雄性SD大鼠30只随机分成正常组、模型组和电针组,每组10只.除正常组外,其余两组侧脑室各注射β淀粉样蛋白多肽片段Aβ25-35制备动物模型.电针组治疗分为3个疗程.以Morris水迷宫来评价大鼠的学习和记忆能力,并且使用Western blot法来检测大鼠海马区Tau蛋白和其丝氨酸198位点、404位点磷酸化水平,利用软件分析测定Western blot图像条带的光密度（OD）值.结果 模型组Morris水迷宫试验逃避潜伏期比正常组长（均P 〈 0.05）,电针组与模型组差异有统计学意义.3个组之间海马区tau蛋白总量的差异无统计学意义,与模型组比较,电针组丝氨酸的198和404位点的tau蛋白磷酸化tau蛋白水平具有降低（均P 〈 0.05）的趋势.结论 电针治疗显著并且能减轻AD大鼠海马tau蛋白磷酸化水平,改善AD模型大鼠学习记忆能力.     

阿托伐他汀对Aβ_(1-42)诱导的大鼠AD模型保护作用及其机制研究

目的观察阿托伐他汀(atorvastatin,Ato)对Aβ1-42诱导的AD大鼠学习记忆功能、炎症因子释放以及突触素(synaptophysin,SYP)和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达的影响及机制。方法选用健康SD大鼠60只,随机分为4组:正常对照组、Aβ1-42组、Ato+Aβ1-42组、Ato组,每组15只,采用侧脑室注射给药。应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测AD大鼠海马组织上清液内白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)含量;Morris水迷宫实验观察AD大鼠的行为学变化;Western blot法检测AD大鼠海马突触素(synaptophysin,SYP)、pJNK蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,脑室注射Aβ1-42后大鼠出现明显的学习记忆障碍,即逃避潜伏期明显延长,原平台象限游泳时间占总游泳时间百分比明显降低(P<0.01);海马组织上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显增加(P<0.01);SYP蛋白表达量明显减少(P<0.01);pJNK蛋白表达水平明显增加(P<0.01)。Ato给药后可明显对抗Aβ1-42引起的大鼠学习记忆障碍,抑制Aβ1-42引起的IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P<0.05,P<0.01)、SYP蛋白表达增加(P<0.01)及p-JNK蛋白表达水平明显减少(P<0.05)。结论 Ato能够明显改善Aβ1-42引起的AD大鼠学习记忆障碍、炎症细胞因子释放增加及SYP蛋白表达降低,这种保护作用可能与Ato抑制JNK信号转导通路的激活有关。