lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

MiR497HG靶向miR-588调控肺癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的机制研究

目的研究MiR497HG对肺癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用RT-PCR法检测永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B、肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG、miR-588的表达;将blank组(不做任何处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-MiR497HG组(转染si-MiR497HG)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-588组(转染anti-miR-588)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-588组(转染miR-588 mimics)、si-MiR497HG+anti-miR-NC组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-NC)、si-MiR497HG+anti-miR-588组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-588),均用脂质体法转染至NCI-H1975细胞;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞的迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MiR497HG与miR-588的结合力。结果与永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B相比,肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG表达显著升高,miR-588表达显著降低(P0.05);抑制MiR497HG或过表达miR-588均可抑制NCI-H1975细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;miR-588可抑制野生型MiR497HG细胞的荧光活性,且可负向调控MiR497HG的表达;过表达MiR497HG可逆转miR-588对肺癌细胞的增殖、迁移侵袭抑制和凋亡促进作用。结论长链非编码RNA MiR497HG可促进肺癌细胞增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其机制可能与靶向抑制miR-588有关,将可为肺癌的治疗提供新靶点。     

三叶青黄酮通过调控miR-497表达对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨三叶青黄酮(RTHF)对肺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-497的调控作用。方法 体外培养人肺癌细胞A549,加入不同剂量的RTHF处理细胞;miR-NC、miR-497 mimics转染至A549细胞,anti-miR-NC、anti-miR-497转染至A549细胞后加入RTHF处理细胞;采用噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测细胞增殖及细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌组织、癌旁组织及各组A549细胞中miR-497的表达量;Western印迹法检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果 RTHF可明显提高细胞增殖抑制率、凋亡率及p21、Bax蛋白水平明显降低细胞周期蛋(Cyclin)D1、Bcl-2蛋白水平(均P<0.05);与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-497的表达水平明显降低(P<0.05);RTHF可明显提高A549细胞中miR-497的表达水平(P<0.05);转染miR-497 mimics可明显提高细胞增殖抑制率与凋亡率及p21、Bax蛋白水平,明显降低Cyc...     

过表达miR-489-3p通过靶向调控MCM2抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制

目的探讨miR-489-3p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及潜在的作用机制。方法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-489-3p组(转染miR-489-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-微小染色体维持蛋白(MCM)2组(转染si-MCM2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-489-3p组(转染anti-miR-489-3p)、miR-489-3p+pcDNA组(共转染miR-489-3p和pcDNA)、miR-489-3p+pcDNA-MCM2组(共转染miR-489-3p和pcDNA-MCM2)、miR-NC+WT-MCM2组(共转染miR-NC和WT-MCM2)、miR-NC+MUT-MCM2组(共转染miR-NC和MUT-MCM2)、miR-489-3p+WT-MCM2组(共转染miR-489-3p和WT-MCM2)、miR-489-3p+MUT-MCM2组(共转染miR-489-3p和MUT-MCM2),均用脂质体法转染至肺癌A549细胞;运用qRT-PCR检测miR-489-3p和MCM2 mRNA的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果相较于正常肺上皮细胞BEAS-2B,肺癌细胞A549、H1299、SPC-A1中miR-489-3p表达水平均显著降低,MCM2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05)。miR-489-3p过表达、MCM2抑制表达均可抑制A549细胞增殖活力,促进细胞凋亡;抑制细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白表达水平,促进p21、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase)-3、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达。miR-489-3p可靶向调控MCM2表达;MCM2过表达逆转了miR-489-3p过表达对肺癌A549细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-489-3p可抑制肺癌A549细胞的增殖、促进其凋亡,其机制可能与靶向MCM2有关,将可为肺癌的预防和治疗提供新靶点。     

龙胆苦苷通过调控miR-218表达减轻高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤

目的 探讨龙胆苦苷(GPS)对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞(MPC5)损伤的影响及其可能的作用机制。方法 高糖诱导MPC5细胞建立细胞损伤模型(HG组),正常培养的MPC5细胞记为Con组，用不同剂量(8、40、200μg/μl)GPS处理高糖诱导的MPC5细胞(HG+GPS-L组、HG+GPS-M组、HG+GPS-H组),anti-miR-NC、anti-miR-218转染至MPC5细胞后加入30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h(HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-218组),miR-NC、miR-218 mimics分别转染至MPC5细胞后加入200μg/μl GPS与30 mmol/L D-葡萄糖共同处理24 h(HG+GPS+miR-NC组、HG+GPS+miR-218组);流式细胞术检测细胞凋亡率；qRT-PCR法检测miR-218相对表达量；Western印迹法检测肾素(nephrin)、足突蛋白(podocin)、剪切的胱天蛋白酶(cleaved-caspase)3、cleaved-caspase9蛋白相对表达量。结果 HG组nephrin、podo...     

LINC00176下调miR-761对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨LINC00176对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法 miR-NC组(转染miR-NC)、miR-761组(转染miR-761 mimics)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LINC00176组(转染pcDNA3.1-LINC00176)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00176组(转染si-LINC00176)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-761组(转染anti-miR-761)、miR-NC+WT-LINC00176组(共转染miR-NC和WT-LINC00176)、miR-NC+MUT-LINC00176组(共转染miR-NC和MUT-LINC00176)、miR-761+WT-LINC00176组(共转染miR-761和WT-LINC00176)、miR-761+MUT-LINC00176组(共转染miR-761和MUT-LINC00176)、pcDNA3.1-LINC00176+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-LINC00176和miR-NC)、pcDNA3.1-LINC00176+miR-761组(共转染pcDNA3.1-LINC00176和miR-761)均用脂质体法转染至SGC-7901细胞;采用qRT-PCR检测LINC00176和miR-761的表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于正常胃黏膜细胞GES-1,胃癌细胞MGC-803、SGC-7901中LINC00176的表达水平显著降低(P0.05);过表达LINC00176、抑制表达miR-761均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡;抑制Bcl-2、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MPP)-2蛋白表达,促进Bax蛋、E-钙黏蛋白(cadherin)、P21蛋白表达。LINC00176靶向调控miR-761表达。过表达miR-761能逆转LINC00176对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡的促进作用。结论长链非编码RNA LINC00176可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与靶向miR-761基因有关,将可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。     

LC通过调控miR-4500表达对前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨细梗香草总皂苷(LC)对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-4500的调控作用。方法 采用不同剂量的LC处理DU145细胞，分别将miR-NC、miR-4500 mimics转染至DU145细胞，分别将anti-miR-NC、anti-miR-4500转染至DU145细胞后加入LC处理细胞；噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡；采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌组织、癌旁组织及DU145细胞中miR-4500的表达量。结果 LC可明显提高细胞增殖抑制率、凋亡率(P<0.05),且呈剂量依赖性；前列腺癌组织中miR-4500的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);LC可明显提高细胞中miR-4500的表达水平(P<0.05);转染miR-4500 mimics可明显提高细胞增殖抑制率及凋亡率(P<0.05);转染anti-miR-4500可明显逆转LC对DU145细胞增殖及凋亡的作用(P<0.05)。结论 LC可通过上调miR-4500的表达诱导前列腺癌DU145细胞凋亡。     

microRNA-384靶向HDAC9调控肝癌细胞增殖迁移侵袭和凋亡的机制研究

[目的]:研究microRNA-384(miR-384)、人组蛋白去乙酰化酶(HDAC9)对肝癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其作用机制。[方法]运用qRT-PCR检测正常肝上皮细胞THLE3和肝癌细胞HEP3B、BEL-7402、HUH7中HDAC9、miR-384的mRNA的表达;将PC DNA组(转染PC DNA)、PC DNA-HDAC9组(转染PC DNA-HDAC9)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-384组(转染anti-miR-384)、si-NC组(转染si-NC)、si-HDAC9组(转染si-HDAC9)、PC DNA-HDAC9+miR-NC组(共转染PC DNA-HDAC9和miR-NC)、PC DNA-HDAC9+miR-384组(共转染PC DNA-HDAC9和miR-384),用脂质体法转染至HUH7;Western blot检测细胞中HDAC9的蛋白表达;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性。[结果]与THLE3细胞比较,肝癌细胞HEP3B、BEL-7402、HUH7中HDAC9的mRNA和蛋白均显著上调,miR-384的mRNA显著下调(P0.05);过表达HDAC9可明显促进HUH7的增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,敲减HDAC9具有相反的结果;HDAC9是miR-384的靶标,且受miR-384的负向调控。过表达miR-384可逆转HDAC9对肝癌细胞的作用。[结论]miR-384抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,其机制与靶向负调控HDAC9相关,将可为肝癌的治疗提供新的治疗靶点。     

沙利度胺通过miR-29c-3p/TGIF2途径调控血管内皮细胞增殖凋亡的分子机制

目的研究沙利度胺对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用qRT-PCR检测沙利度胺处理的HUVECs细胞中miR-29c-3p、同源异型结构域蛋白转化生长影响因子(TGIF)2的表达;miR-29c-3p组(转染miR-29c-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、沙利度胺+anti-miR-29c-3p组(转染anti-miR-29c-3p再用沙利度胺处理)、沙利度胺+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC再用沙利度胺处理)、si-con组(转染si-con)、si-TGIF2组(转染si-TGIF2)、沙利度胺+pcDNA组(转染pcDNA再用沙利度胺处理)、沙利度胺+pcDNA-TGIF2组(转染pcDNA-TGIF2再用沙利度胺处理)均用脂质体转染至HUVECs,再用20μg/ml沙利度胺处理48 h;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测各组细胞中TGIF2的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组HUVECs细胞相比,沙利度胺处理的HUVECs增殖显著下降,细胞凋亡率和miR-29c-3p的表达明显上升(P0.05);过表达miR-29c-3p、敲减TGIF2均可抑制HUVECs增殖,促进凋亡;抑制miR-29c-3p、过表达TGIF2均可逆转沙利度胺对HUVECs的增殖抑制和凋亡促进作用。miR-29c-3p靶向TGIF2。结论沙利度胺可抑制血管内皮细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与调控miR-29c-3p/TGIF2信号通路有关,为沙利度胺用于疾病治疗提供依据。     

白山毛桃根提取物联合miR-135a-5p抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭及迁移的机制

目的 探讨白山毛桃根提取物对宫颈癌细胞HeLa增殖、侵袭及迁移的影响及分子机制。方法 不同浓度的白山毛桃根提取物处理HeLa细胞,将miR-NC、miR-135a-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞,将anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞后用40 mg/ml白山毛桃根提取物处理细胞;噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移;qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-135a-5p的表达量;Western印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、p-磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和p-蛋白激酶B(Akt)蛋白表达量。结果 白山毛桃根提取物可显著降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、miR-135a-5p表达和MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05);转染anti-miR-135a-5p可降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05...     

LncRNA NEAT1靶向miR-520b调控口腔鳞癌细胞增殖、凋亡及自噬的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)核富集的转录物(NEAT)1对人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖、凋亡和自噬的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR检测人口腔鳞癌细胞Tca8113、人正常口腔上皮细胞HOEC中NEAT1、短链非编码RNA(miR)-520b的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1)、miR-520b组(转染miR-520b mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(si-NEAT1和anti-miR-NC共转染)、si-NEAT1+anti-miR-520b组(si-NEAT1和anti-miR-520b共转染),用脂质体法转染至Tca8113细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;Western印迹检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与HOEC相比,Tca8113中NEAT1表达显著升高,miR-520b表达显著降低(P0.05);抑制NEAT1、过表达miR-520b均可抑制Tca8113细胞增殖,促进凋亡和自噬。抑制miR-520b可逆转抑制NEAT1对Tca8113细胞的增殖抑制和凋亡、自噬促进作用。结论抑制NEAT1可抑制口腔鳞癌细胞增殖、促进凋亡和自噬,其机制可能与靶向miR-520b有关,将可为口腔鳞癌的靶向治疗提供依据。     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

miR-181a-5p靶向PIAS1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)引起的急性炎症对人们健康的危害性极大,严重时会危及生命.其发病机制复杂,尚未完全清楚,研究发现miRNA参与了AP的发病过程.研究发现miR-181a-5p可抑制癌细胞迁移、侵袭和血管生成; miR-181a-5p还能抑制胃癌细胞增殖、侵袭,转移和上皮间充质转化.抑制miR-181a-5p表达可通过负向靶向INPP5A抑制细胞增殖和侵袭,增强宫颈癌细胞凋亡. miR-181a可抑制胰腺癌细胞系的生长、减少迁移,增加凋亡.但miR-181a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-181a-5p对AP腺泡细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法用100nmol/L的雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J和MPC-83构建AP模型,设置Con组、Caerulein组、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-181a-5p组(转染miR-181a-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Caerulein+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p后进行Caerulein处)、Caerulein+pcDNA组(转染pcDNA后进行Caerulein处理)、Caerulein+pcDNA-PIAS1组(转染pcDNA-PIAS1后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-NC组(anti-miR-181a-5p和si-NC共转染后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+siPIAS1组(anti-miR-181a-5p和si-PIAS1共转染后进行Caerulein处理),用脂质体法转染至AR42J和MPC-83细胞.酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达;qRT-PCR检测AR42J和MPC-83细胞中miR-181a-5p、PIAS1mRNA的表达水平; Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞后, TNF-α和IL-6的表达显著升高; miR-181a-5p的表达水平显著升高;PIAS1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低. miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达抑制TNF-α和IL-6的表达,抑制细胞凋亡. miR-181a-5p靶向负调控PIAS1;抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用.结论抑制miR-181a-5p表达可以抑制雨蛙肽诱导的AP腺泡细胞损伤,其机制可能与靶向调控PIAS1有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

circPRKCI靶向miR-217对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨circPRKCI对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡的影响及其对miR-217的调控作用。方法采用H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,pcDNA、pcDNA-circPRKCI、anti-miR-NC、anti-miR-217、pcDNA-circPRKCI与miR-NC、pcDNA-circPRKCI与miR-217 mimics分别转染至心肌细胞后进行H/R处理;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测circPRKCI、miR-217表达量;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测circPRKCI与miR-217的靶向关系;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果H/R诱导的H9c2细胞中circPRKCI表达水平降低(P<0.05),miR-217、MDA、凋亡率及Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。H/R诱导的H9c2细胞中转染pcDNA-circPRKCI或转染anti-miR-217后可降低MDA含量、凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05),提高SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平(P<0.05)。双荧光素酶实验显示circPRKCI可靶向结合miR-217;miR-217过表达可逆转circPRKCI过表达对H/R诱导的H9c2细胞氧化应激及凋亡的作用。结论circPRKCI过表达通过下调miR-217表达抑制氧化应激及其诱导的细胞凋亡,从而减轻心肌细胞氧化损伤。     

MiR-148b-3p通过调控CDKN1B表达影响心肌细胞增殖及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)是否通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)表达影响心肌细胞增殖及凋亡。方法通过Lipofectamine2000将anti-miR-NC、anti-miR-148b-3p、pcDNA、pcDNA-CDKN1B、anti-miR-NC与si-NC、anti-miR-148b-3p与si-CDKN1B转染至心肌细胞,给予10μg/ml的脂多糖(LPS)刺激24 h,分别记作LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-CDKN1B组、LPS+anti-miR-NC+si-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p+siCDKN1B组。使用含有10μg/mL的LPS处理H9c2细胞24 h,记作LPS组。同时将正常培养的心肌细胞作为Con组。实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-148b-3p、CDKN1B的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-148b-3p与CDKN1B的靶向作用;Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量。结果与Con组比较,LPS组miR-148b-3p的表达水平显著升高(P0.05),CDKN1B mRNA及蛋白水平显著降低(P0.05),细胞存活率显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P0.05);与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p组心肌细胞存活率显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P0.05);与LPS+pc DNA组比较,LPS+pc DNACDKN1B组心肌细胞存活率显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-148b-3p可靶向结合CDKN1B;与LPS+anti-miR-NC+si-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组细胞存活率显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P0.05)。结论抑制miR-148b-3p的表达可通过靶向调控CDKN1B表达从而促进LPS诱导的心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

LncRNA MCM3AP-AS1调控miR-19b-3p对OGD/R诱导的神经元细胞损伤的影响

目的 探讨LncRNA MCM3AP-AS1对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)诱导的神经元细胞损伤的影响及其对miR-19b-3p的调控作用。方法 采用OGD/R诱导小鼠海马神经元细胞HT22建立细胞损伤模型，si-NC、si-MCM3AP-AS1、miR-NC、miR-19b-3p mimics、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-NC、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p分别转染入HT22细胞后再进行OGD/R处理；采用qRT-PCR法检测MCM3AP-AS1、miR-19b-3p的表达量；根据试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告基因实验检测MCM3AP-AS1与miR-19b-3p的靶向关系。结果 转染si-MCM3AP-AS1或转染miR-19b-3p mimics可降低OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6水平和凋亡率，SOD水平明显升高(P<0.05);MCM3A...     

LncRNA LINC01503调控miR-331-3p/Nrf2/Keap1信号通路对缺氧诱导PC12细胞损伤的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)LINC01503对缺氧诱导的PC12细胞增殖、凋亡、氧化应激的影响及其对miR-331-3p/核因子相关因子(Nrf)2/Kelch样ECH相关蛋白(Keap)1信号通路的调控作用。方法 采用缺氧诱导PC12细胞建立细胞损伤模型,分别将si-NC、si-LINC01503、miR-NC、miR-331-3p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-331-3p、si-LINC01503与anti-miR-NC、si-LINC01503与anti-miR-331-3p转染至PC12细胞48 h后进行缺氧处理24 h;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测LINC01503、miR-331-3p的表达量;噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡率;检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量;双荧光素酶报告实验检测LINC01503与miR-331-3p的靶向关系;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、裂解半胱天冬酶(Cleaved-caspase)-3、Nr...     

lncRNA UNC5 B-AS1靶向miR-300影响非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)不协调同源基因5B反义RNA1(UNC5B-AS1)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和分子机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中UNC5B-AS1和miR-300的表达水平。将si-NC、si-UNC5B-AS1、miR-NC、miR-300、si-UNC5B-AS1+anti-miR-NC、si-UNC5B-AS1+anti-miR-300分别转染A549细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell实验分别检测细胞活力、迁移侵袭细胞数。蛋白质印记(Western blot)检测细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达水平。双荧光素酶报告实验和检测RT-qPCR确定UNC5B-AS1对miR-300的靶向调控作用。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中UNC5B-AS1表达升高,miR-300表达降低(P0.05)。与转染si-NC比较,转染si-UNC5B-AS1后A549细胞活力、迁移侵袭细胞数降低,CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达降低,p21表达升高(P0.05)。与转染miR-NC比较,转染miR-300后A549细胞活力、迁移侵袭细胞数降低,CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达降低,p21表达升高(P0.05)。与共转染si-UNC5B-AS1和anti-miR-NC比较,共转染si-UNC5B-AS1和anti-miR-300后A549细胞活力、迁移侵袭细胞数升高,CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达升高,p21表达降低(P0.05)。miR-300是UNC5B-AS1的靶基因,UNC5B-AS1靶向负性调控miR-300表达。结论肺癌中UNC5B-AS1呈高表达,抑制UNC5B-AS1通过靶向miR-300可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-24-3p靶向HAP1基因对STZ诱导胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨微小RNA-24-3p(miR-24-3p)靶向亨廷顿蛋白相关蛋白(HAP)1基因表达对链脲佐菌(STZ)诱导胰岛β细胞凋亡的影响。方法培养小鼠胰岛β细胞NIT,分别将anti-miR-NC、anti-miR-24-3p、pcDNA、pcDNA-HAP1转染入NIT细胞,加入STZ诱导细胞;不做任何处理为Con组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24-3p及HAP1 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹(Western印迹)实验检测HAP1及B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证miR-24-3p的靶基因。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 STZ处理后胰岛β细胞中miR-24-3p相对表达量明显高于Con组(P0.05),而HAP1 mRNA及蛋白表达均明显降低(P0.05);STZ可增加胰岛β细胞凋亡率,抑制miR-24-3p表达可降低胰岛β细胞凋亡率,还可上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3表达;HAP1过表达与抑制miR-24-3p表达均可抑制STZ诱导的胰岛β细胞凋亡;HAP1是miR-24-3p的靶基因,miR-24-3p可负向调节HAP1表达;抑制HAP1表达可促进胰岛β细胞凋亡。结论 miR-24-3p表达可通过抑制靶基因HAP1表达进而促进STZ诱导的胰岛β细胞凋亡。     

灵芝提取物通过miR-143-3p对Aβ25～35诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨灵芝提取物对β淀粉样蛋白(Aβ)_25～35诱导的神经细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法 采用Aβ_25～35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,不同浓度的灵芝提取物处理PC12细胞,anti-miR-NC、anti-miR-143-3p分别转染至PC12细胞后进行Aβ_25～35处理24 h, miR-NC、miR-143-3p mimics分别转染至PC12细胞后加入10 mg/L灵芝提取物与Aβ_25～35处理24 h;采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)的水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-143-3p表达量。结果 Aβ_25～35作用条件下,灵芝提取物可明显降低细胞凋亡率、MDA水平、miR-143-3p表达量(P<0.05),明显升高细胞活力和SOD、CAT的活性,且呈剂量依赖性(P<0....