基于益肾填精法的茸菖胶囊对无镁诱导癫痫模型自噬相关蛋白影响的研究

[目的]探讨中药茸菖胶囊抗癫痫和神经保护作用的自噬调控机制,为临床应用提供实验依据。[方法]将无镁诱导的新生SD大鼠海马神经元放电模型分为模型组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、5%茸菖胶囊组、10%茸菖胶囊组、20%茸菖胶囊组,另设正常组,给予相应处理6、12、24、72 h后,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬活性相关蛋白Beclin-1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的表达。[结果]1)Beclin-1蛋白:4个时间点模型组较正常组无显著变化(P0.05),6 h 20%茸菖胶囊组及72 h 5%茸菖胶囊组较同时点模型组显著升高(P0.05)。2)Bcl-2蛋白:6 h模型组较正常组显著降低(P0.05);12、24 h 20%茸菖胶囊组,72 h 5%、10%及20%茸菖胶囊组较模型组显著增强(P0.05或P0.01),20%茸菖胶囊组较5%及10%茸菖胶囊组增强(P0.05)。[结论]基于益肾填精法的茸菖胶囊对无镁诱导的癫痫模型神经元抗癫痫及神经元保护作用的机制可能与影响Beclin-1蛋白的表达干预自噬过程,促进Bcl-2蛋白的表达抑制细胞自噬有关。     

茸菖胶囊对戊四唑点燃模型大鼠海马BDNF及其受体TrkB表达的影响

[目的] 阐明脑源性神经营养因子(BDNF)及其功能受体酷氨酸激酶B(TrkB)在癫痫后认知障碍中的作用以及茸菖胶囊对海马脑源性神经营养因子及其受体TrkB的远期影响.[方法] 以戊四唑点燃大鼠为模型,随机分为中药组?西药组?模型组和正常组,观察致痫大鼠的惊厥发作次数?级别?潜伏期,采用RT-PCR检测BDNF和TrkB基因表达水平.[结果] 各治疗组大鼠与治疗前相比,均可减少大鼠的发作程度,治疗前造模各组的发作次数无统计学差异(P>0.05),茸菖胶囊治疗后,治疗大鼠的发作评分明显下降,与模型组相比,各治疗组的发作评分较低(P<0.05),茸菖胶囊组与丙戊酸钠组的评分无统计学差异(P>0.05).各组海马组织BDNF mRNA表达显示,模型组海马组织BDNF mRNA表达较正常组?中药组和VPA组明显增多,中药组表达较其他各组增多均有统计学差异(P<0.01).海马组织TrkB mRNA表达与BDNF mRNA表达趋势相同.[结论] 茸菖胶囊可以有效控制癫痫大鼠的发作次数及级别,其作用机制与调控海马组织中BDNF?TrkB mRNA的表达有关.     

茸菖胶囊预处理对致痫大鼠血脑屏障超微结构及闭锁蛋白-5的影响

目的观察茸菖胶囊预处理对癫痫大鼠血脑屏障(BBB)超微结构及闭锁蛋白-5(claudin-5)的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、中药低剂量预处理组(中低组)、中药中剂量预处理组(中中组)和中药高剂量预处理组(中高组) 6组,每组10只。采用PTZ慢性点燃动物模型,茸菖胶囊预处理即采用造模同时分别予以各组相应的中西药药液预处理干预,预处理剂量分别为治疗量的1/2,2次/d,1次/d,连续28 d。预处理后各组均予相应治疗量继续治疗28 d。电镜观察各组大鼠海马BBB超微结构,伊文思蓝(EB)法观察海马BBB通透性及免疫组化法测定claudin-5表达。结果电镜下中药各组大鼠海马BBB超微结构损伤程度均低于模型组,中药各组和西药组海马EB浓度均低于模型组(P 0. 05);中药各组大鼠海马EB浓度表达与西药组比较,差异无统计学意义(P 0. 05);中药各组和西药组大鼠海马claudin-5表达均低于模型组(P 0. 05),中低组大鼠海马claudin-5表达低于西药组(P 0. 05),中中组和中高组与西药组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。推测从而达到改善癫痫大鼠认知功能的作用。结论通过茸菖胶囊预处给药的方法,可能通过降低claudin-5蛋白表达修复海马BBB超微结构,改善海马记忆功能。     

茸菖胶囊对戊四唑致痫大鼠学习记忆能力及海马苔藓纤维出芽的影响

[目的]观察茸菖胶囊对戊四唑致癫痫大鼠学习记忆能力及海马组织苔藓纤维发芽(MFS)的影响。[方法]以戊四唑点燃大鼠为模型,随机分为中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、丙戊酸钠组、模型组、正常组,水迷宫实验记录逃避潜伏期和跨越平台次数,戊四唑惊厥阈实验测定惊厥潜伏期,Timm染色法观察海马苔鲜纤维出芽。[结果]各治疗组大鼠与治疗前相比,均可减少大鼠的发作程度,水迷宫实验:中药组逃避潜伏期和跨越平台次数均明显短于模型组(P>0.05)。Timm染色结果表明:各治疗组海马CA3区及齿状回分子层Timm染色颗粒MFS评分低于模型组(P<0.01)。[结论]茸菖胶囊可以有效控制癫痫大鼠的发作次数及级别,改善戊四唑致癫痫大鼠的学习记忆能力,其作用机制与抑制海葬纤维异常出芽,从而保护海马神经元有关。     

茸菖胶囊对癫痫后认知障碍幼年大鼠神经发生的影响

目的观察茸菖胶囊对癫痫后认知障碍幼年大鼠学习记忆能力和神经发生的影响,探讨其治疗癫痫后认知障碍的可能机制。方法 102只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、西药组。运用戊四唑点燃法复制癫痫大鼠模型,并经水迷宫实验筛选认知障碍大鼠。正常组不予处理,模型组予生理盐水灌胃,中药高、中、低剂量组分别予浓度为0.44g/ml、0.22g/ml、0.11g/ml茸菖胶囊溶液灌胃,西药组予40mg/ml德巴金溶液灌胃,每次3ml,每日2次,均给药28d。每组又分别于5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记后24h和28d取材。采用水迷宫实验于治疗前后观察大鼠逃避潜伏期和跨越平台次数;观察BrdU阳性细胞形态并计数进行BrdU免疫组化评分,计算新生神经细胞迁移比率(Br-dU/DCX)、新生神经细胞分化为神经元比率(BrdU/NeuN)和新生神经细胞分化为胶质细胞比率(BrdU/GFAP)。结果治疗后西药组和中药高、中剂量组大鼠逃避潜伏期较模型组缩短(P<0.05或P<0.01),并且中药高剂量组较中药中、低剂量组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05)。中药高剂量组大鼠跨越平台的次数显著高于模型组和中药低剂量组(P<0.05)。与模型组比较,24h时中药高剂量组、西药组和28d时中药高剂量组、中药中剂量组、西药组BrdU免疫组化评分显著减少(P<0.05或P<0.01)。西药组、中药高剂量组、中药中剂量组BrdU/DCX、BrdU/NeuN低于模型组(P<0.05或P<0.01);中药高剂量组BrdU/NeuN明显低于中药中、低剂量组(P<0.01);各组大鼠BrdU/GFAP比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论茸菖胶囊可改善癫痫后认知障碍大鼠学习记忆功能,其机制可能为抑制大鼠海马齿状回神经前体细胞增、异常迁移和分化。     

基于益肾填精法的茸菖胶囊对海马神经元自噬LC3 mRNA及Cathepsin B mRNA蛋白表达水平的实验研究

目的探讨中药茸菖胶囊抗癫痫和神经保护作用的自噬调控机制,为临床应用提供实验依据。方法将无镁诱导的新生SD大鼠海马神经元放电模型分为模型组、5%茸菖胶囊组、10%茸菖胶囊组、20%茸菖胶囊组,3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,另设正常组,给予相应处理6,12,24,72 h后,采用RT-PCR法检测自噬活性相关蛋白LC3 mRNA及Cathepsin B mRNA的表达。结果 (1)在无镁诱导后6h、12h、24h三个时间点的5%、10%、20%茸菖胶囊组LC3 mRNA表达水平较模型组降低(P0.01或P0.05),72h各浓度茸菖胶囊组LC3 mRNA表达水平不稳定;(2)在无镁诱导后6h 20%茸菖胶囊组Cathepsin B mRNA表达水平较模型组降低(P0.01),12h、24h 5%、10%、20%茸菖胶囊组表达水平较模型组降低(P0.01或P0.05);72h各浓度茸菖胶囊组LC3 mRNA表达水平不稳定。结论茸菖胶囊对神经元保护作用的机制可能与影响LC3 mRNA及Cathepsin B mRNA蛋白的表达干预自噬过程有关。     

滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠脑组织脑源性神经营养因子蛋白含量的影响

目的观察滋肾通络方对MCAO大鼠脑组织脑源性神经营养因子(brain derived neurophic factor,BDNF)蛋白含量的变化,以探讨BDNF在脑缺血中的意义及滋肾通络方对缺血周围区神经细胞损伤修复的作用。方法制作MCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组。灌胃20天后,取大鼠脑组织,用免疫组织化学法检测各组BDNF的蛋白表达。结果假手术组海马区几乎见不到BDNF阳性细胞表达;模型组切片染色增强,阳性细胞略有表达;西药组、中药低剂量组及高剂量组均见到切片染色强,BDNF阳性细胞强表达,尤以中药高剂量组阳性细胞表达最强。结论 BDNF与损伤后神经元的修复作用有关。滋肾通络方可通过调节BDNF的合成,促进神经细胞的存活和损伤修复,从而减轻缺血性脑损伤。     

穴位埋线对癫痫大鼠认知行为、海马神经元丢失程度、及BDNF蛋白表达的影响

目的:观察穴位埋线疗法对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠认知行为学、镜下海马CAl区神经元丢失程度半定量分析及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响。方法:80只健康SD雄鼠随机分为空白组、模型组、西药组及埋线组,每组20只。癫痫模型建立后分别进行相应的干预共28 d,选择干预前及末次干预2个时间点,分别对各组大鼠进行拒俘反应实验;到达预定存活时间时,处死各组大鼠取海马,尼氏染色法半定量分析各组海马CAl区的神经细胞丢失程度,免疫组化法检测各组海马CA1区BDNF蛋白表达的情况。结果:西药组及埋线组大鼠攻击行为和逃避行为明显减少(P<0.05);西药组、埋线组神经元丢失程度有所减轻(P<0.05);西药及穴位埋线干预后海马中BDNF表达均较模型组增高(P<0.05);各指标西药组与埋线组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:癫痫可造成大鼠认知障碍,穴位埋线可以通过间接提高BDNF蛋白表达以减缓海马神经细胞丢失程度,具有明显的改善癫痫后认知障碍的作用,疗效与口服抗癫痫药左乙拉西坦相当。     

中药三七对急性局灶性脑缺血大鼠Nestin和BDNF表达的影响

目的:观察中药三七对急性局灶性脑缺血大鼠巢蛋白(Nestin)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:采用电热凝闭大鼠大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型,术后随机分为模型组、中药组,另设假手术组。观察中药三七对大鼠侧脑室室管膜下层(SVZ区)Nestin和大脑皮层BDNF表达的影响。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠SVZ区Nestin和大脑上层(BDNF)免疫阳性细胞数增多(P<0.01);与模型组相比,中药组大鼠SVZ区Nestin和大鼠皮层(BDNF)免疫阳性细胞数增多(P<0.01)。结论:脑缺血后BDNF、Nestin的表达出现增高,说明BDNF、Nestin参与神经元内源性保护;中药三七能明显提高Nestin和BDNF在缺血脑内的表达,从而保护神经元、修复损伤。     

榛花消肾安胶囊干预实验性糖尿病大鼠足细胞相关蛋白α-actinin-4的研究

[目的]通过实验观察实验性糖尿病(DM)大鼠的肾脏及足细胞相关蛋白α-actinin-4的表达,表明"榛花消肾安胶囊"治疗糖尿病肾病的有效性。[方法]建立链脲佐菌素(STZ)诱导的实验性糖尿病大鼠模型分为DM模型组、对照组、中药组、西药组,中药组给予榛花消肾安胶囊,西药组给予厄贝沙坦片;检测空腹血糖、24 h尿微量白蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),应用光学显微镜和透射电镜及免疫组化方法观察足细胞骨架蛋白α-actinin-4的表达;应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术检测α-actinin-4 m RNA表达。[结果]中药干预之后中药高、中、低剂量组及西药对照组尿量较DM模型组明显减少(P0.01);中药各剂量组与西药对照组大鼠血糖均明显低于DM模型组(P0.01);中药各剂量组和西药对照组大鼠α-actinin-4及m RNA含量均低于DM模型组(P0.01)。[结论]榛花消肾安胶囊能够降低实验性DM大鼠血糖、Scr、BUN,减少尿微量白蛋白的排泄,而改善肾功能;能够抑制实验性DM大鼠早期肾脏体积增大,而抑制α-actinin-4蛋白表达及其m RNA的表达。     

天麻素对戊四氮致痫大鼠海马氨基酸递质的影响

[目的]探讨天麻索抗癫痫的机制.[方法]应用SP法研究戊四氮致癫痫大鼠和天麻素抗癫痫大鼠海马谷氨酸(Glu)和r-氨基丁酸(GABA)的变化.[结果]海马Glu的表达在戊四氮致癫痫组明显高于正常对照组(P<0.01),天麻素抗癫痫组明显低于戊四氮致癫痫组(p<0.01),天麻素抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性意义(P>0.05):海马GABA的表达在戊四氮致癫痫组明显低于正常对照组(P<0.01),天麻索抗癫痫组明显高于戊四氮致癫痫组(P<0.01),天麻素抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性意义(P>0.05).[结论]天麻素可能通过抑制海马兴奋性氨基酸神经递质受体Glu和激活海马抑制性神经递质受体GABA的活性与表达,降低大脑皮质的兴奋性,抑制癫痫的形成及发展来发挥抗癫痫作用.     

基于cAMP-CREB-BDNF信号通路探讨交泰丸抗抑郁的作用机制

[目的]基于cAMP-CREB-BDNF信号通路探讨交泰丸抗抑郁作用机制。[方法]采用慢性温和不可预知性应激刺激建立大鼠抑郁症模型。酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测大鼠海马组织中环磷酸腺苷(cAMP)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)的含量和磷酸二酯酶-4(PDE4)的活性以及血浆中cAMP含量的变化,逆转录PCR法(RT-PCR)测定海马、皮质中的BDNF mRNA的含量。免疫组织化学分析大鼠海马组织CA1和CA3区中p-CREB阳性细胞的表达数量变化。[结果]与空白组相比,模型组的大鼠血浆及海马中cAMP含量明显降低,海马组织中CREB、BDNF含量降低,海马组织中PDE4活性增强,大鼠海马、皮质和下丘脑中BDNF mRNA表达含量减少,交泰丸逆转了以上改变。[结论]交泰丸可以通过调节cAMP-CREB-BDNF信号通路发挥抗抑郁作用。     

从NSCs关键调控基因Neurogenin1初探益肾化浊方改善阿尔茨海默病模型大鼠海马区学习记忆能力的作用机制研究

[目的]观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区Neurogenin1(ngn1)基因、GFAP和Tubulin蛋白表达的影响,初探益肾化浊方改善AD模型大鼠学习记忆能力的作用机制。[方法]雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、益肾化浊方低、中、高剂量组。治疗组给予益肾化浊方低、中、高剂量分别为2.8、5.6、11.2 g/kg,1次/日,共灌胃4周。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马区ngn1基因表达,蛋白质印迹法检测GFAP和Tubulin蛋白表达的变化。[结果]与假手术组比较,模型组大鼠海马区ngn1基因表达下降,GFAP蛋白表达增加,Tubulin蛋白表达显著下降,差异均具有统计学意义(P0.05);与模型组相比,益肾化浊方低、中、高剂量组大鼠海马区ngn1基因表达升高,GFAP蛋白表达减少,Tubulin蛋白表达显著升高。[结论]益肾化浊方可能通过增加AD模型大鼠海马区ngn1基因表达,促进神经元再生,进而改善其学习记忆功能。     

火针对大鼠脊髓损伤后运动功能及BDNF表达的影响

[目的]探讨火针对脊髓损伤后运动功能及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。[方法]将60只SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和火针组。采用改良Allen法制作脊髓损伤动物模型。火针组术后即刻及其后每隔24 h火针针刺大鼠脊髓损伤部位上下端的棘突间隙,另两组相应时间点行相同抓握。于伤后1、3、5、7 d采用大鼠脊髓损伤后运动功能(BBB)评分标准进行不同时段的行为学评分并取材。通过免疫组化法观察各组大鼠脊髓损伤后BDNF表达的变化。[结果]BBB评分显示,火针组的各时间点评分均高于模型组,特别是在造模并干预7 d后效果更加显著(P<0.05)。与假手术组相比,模型组和火针组的BDNF表达在各时间点均增加,火针组3、5、7 d的BDNF表达均高于模型组,差异具统计学意义(P<0.05)。BBB评分与BDNF表达量相关性分析显示两者呈高度相关。[结论]火针可促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复,其机制与促进BDNF表达有关。     

山茱萸多糖对衰老模型大鼠学习记忆能力及海马突触可塑性的影响

目的:观察山茱萸多糖对衰老模型大鼠学习记忆能力、海马脑源性神经生长因子(BDNF),酪氨酸蛋白激酶B(Trk B)蛋白表达及海马长时程增强(LTP)的影响,并探讨其机制。方法:清洁级SD大鼠40只,随机数字表法分为正常组、模型组、山茱萸多糖低、高剂量组,每组10只,采用D-半乳糖(140 mg·kg~(-1)·d-1)皮下注射构建大鼠衰老模型,同时正常组、模型组每天给予生理盐水、低剂量组和高剂量组给予山茱萸多糖(0.14,0.28 g·kg~(-1)·d-1)灌胃6周。Morris水迷宫检测学习记忆能力,高频刺激海马CA3区Schaffer侧支,在同侧海马CA1区诱导LTP的方法检测大鼠海马神经元突触可塑性的变化,免疫组化法检测海马神经元BDNF和Trk B蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组平均逃避潜伏期明显延长,在目标象限内游泳的距离占总距离的百分比和探索次数明显减少,海马LTP幅度显著降低,海马BDNF和Trk B蛋白表达降低(P0.01)。高剂量组与模型组比较平均逃避潜伏期明显降低,在目标象限内游泳的距离占总距离的百分比和探索次数明显升高,海马LTP幅度显著升高,海马BDNF和Trk B蛋白表达升高(P0.01)。结论:山茱萸多糖可通过提高海马BDNF和Trk B的表达及大鼠海马CA1区的LTP,明显改善突触的可塑性,这可能是山茱萸多糖提高学习记忆能力的重要机制之一。     

天麻素对癫痫大鼠p- AKT和caspase3的影响

目的观察天麻素对戊四氮诱导癫痫模型大鼠p-AKT和caspase 3的影响。方法将69只Wistar大鼠分为空白对照组18只、癫痫模型组28只(PTZ组,pentylenetetrazole,55～75 mg/kg)、天麻素干预组23只(Gas组,Gastrodin,200 mg/kg),除空白对照组外均腹腔注射戊四氮(PTZ)诱导形成癫痫模型,天麻素干预组给予天麻素(Gas)干预。电镜下观察各组大鼠海马组织形态学变化,免疫组化及Western blot检测各组大鼠海马组织丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase 3)蛋白的表达。结果与对照组比较,PTZ组海马区表现为明显的癫痫病理改变,神经元变性及坏死显著,主要为大锥体细胞和部分齿状回颗粒细胞,损伤细胞细胞核固缩,核碎裂样改变,胞浆肿胀,尼氏体消失,细胞周隙增大,体积增大。药物干预后病理改变改善。大鼠癫痫发作后,癫痫模型组p-AKT、caspase 3蛋白表达高于空白对照组(P0.05)。与癫痫模型组比较,天麻素干预组caspase 3的表达下调(P0.05),在第3天差异尤为显著(P0.01)。结论天麻素通过减少p-AKT、caspase 3蛋白表达,起到抗凋亡的作用,对癫痫模型起到一定保护作用。     

痫愈痊颗粒对戊四氮致痫大鼠海马Glu,GABA含量的影响

目的:观察痫愈痊颗粒对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸(Glu),γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨痫愈痊颗粒治疗癫痫的机制。方法:将70只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丙戊酸钠组(200 mg·kg-1)、痫愈痊颗粒低、高剂量组(586,1 172 mg·kg-1),采用亚惊厥剂量戊四氮(PTZ)ip建立癫痫大鼠模型,在造模同时即开始给药,共28 d。行为学观察后取海马组织,采用高效液相色谱-四级杆离子阱串联质谱仪检测海马中Glu,GABA的含量。结果:59只大鼠进入结果分析,与模型组比较,痫愈痊颗粒与丙戊酸钠干预后发作潜伏期延长、惊厥持续时间缩短(P0.01);惊厥持续时间高剂量组优于低剂量组(P0.05)。模型组与正常组相比,海马Glu含量明显上升,GABA含量明显下降(P0.01);与模型组比较,痫愈痊颗粒高、低剂量组和丙戊酸钠组可明显降低海马Glu含量,升高GABA含量(P0.05,P0.01)。结论:采用亚惊厥剂量PTZ能够建立癫痫大鼠模型;痫愈痊颗粒抗癫痫机制可能与其降低海马Glu含量,增加GABA含量有关。     

熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠皮质和海马多药耐药相关蛋白1表达影响的研究

[目的]研究熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠皮质和海马多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响。[方法]1)利用氯化锂-匹罗卡品制作癫痫大鼠模型。2)实验大鼠按随机数字表法随机分为正常组、模型组、熄风胶囊高剂量组(熄高组)、熄风胶囊中剂量组(熄中组)、熄风胶囊低剂量组(熄低组)、熄风胶囊大剂量+卡马西平(CBZ)组(联高组)、熄风胶囊大剂量+CBZ1/2剂量(联低组)和CBZ组。3)通过Western-blot方法检测癫痫大鼠海马和皮质MRP1的表达程度。[结果]实验结果显示治疗组与模型组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]熄风胶囊能有效抑制MRP1的过度表达。