胃窦癌组织中MMP-26 mRNA及蛋白的表达

目的探讨胃窦癌及癌旁正常胃黏膜组织中MMP-26 mRNA及蛋白的表达意义。方法应用RT-PCR检测40对胃窦癌及癌旁正常胃黏膜组织中MMP-26基因的表达,Western blot方法检测其中10对标本的MMP-26蛋白表达,同时采用免疫组化MaxVision法检测102例胃窦癌组织和58例癌旁胃黏膜组织MMP-26蛋白的表达,分析MMP-26的表达与临床病理变量之间的关系。结果 MMP-26 mRNA在27例胃窦癌中的表达明显高于正常胃黏膜(67.5%)。Western blot结果显示7例胃癌组织中MMP-26蛋白表达明显高于对应的正常胃黏膜组织。免疫组化染色结果显示102例胃癌组织中有57例(55.9%)对MMP-26呈阳性反应,癌旁胃黏膜组织58例中有8例阳性(13.8%)。且MMP-26蛋白表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关。结论 MMP-26蛋白表达与胃癌浸润转移密切相关,可能作为胃癌早期诊断及预测预后的分子标记物。     

DNMT在胃癌中的表达及DNMT抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷对胃癌的影响

目的: 研究DNA甲基化转移酶(DNMT)各亚型DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L在胃癌与胃黏膜中的表达特点,并分析DNMT抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷对胃癌和胃黏膜细胞的影响。方法: 免疫组化法对60例胃癌与癌旁组织行5种DNMT表达研究。免疫荧光法和Western免疫印迹法对SGC-7901、MKN-45(胃癌细胞)和GES-1(胃黏膜细胞)行5种DNMT表达研究。噻唑蓝比色法和流式细胞术分析5-氮杂-2’-脱氧胞苷对SGC-7901、MKN-45和GES-1增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果: 胃癌与癌旁组织均有5种DNMT不同程度表达,但胃癌组织DNMT1和DNMT3A表达显著低于癌旁组织(P<0.01),DNMT2和DNMT3L表达也低于癌旁组织(P<0.05),只有DNMT3B在胃癌与癌旁组织中无显著差异(P>0.05)。胃癌细胞(SGC-7901和MKN-45)与胃黏膜细胞(GES-1)亦有部分DNMT表达,除DNMT3B在胃黏膜细胞表达较强外,余DNMT在胃癌与胃黏膜细胞中无显著差异。5-氮杂-2’-脱氧胞苷对胃癌与胃黏膜细胞的增殖率、周期分布和凋亡率并无显著影响。结论: DNMT在胃癌中表达呈降低趋势,抑制DNMT对胃癌细胞的增殖和凋亡无显著影响。     

不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位

目的 通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SCC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系.方法 上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度.结果 B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中.结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致.结论 B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达.     

GRP78在胃癌生长中的作用*

 目的： 探讨内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78（GRP78）参与胃癌细胞生长的作用。方法: 回顾性分析34例胃癌及34例癌旁组织,利用组织微阵列技术,构建组织阵列,采用免疫组织化学技术SP法检测该阵列中GRP78蛋白在胃癌及其癌旁组织中表达情况。利用Western blotting检测人体胃癌组织、癌旁组织（肿瘤旁1 cm处）和正常组织（远离肿瘤≥10 cm处）中GRP78蛋白的表达情况。利用Western blotting检测人胃癌细胞SGC7901和过表达GRP78的SGC7901-H78细胞（稳定转染GRP78）中GRP78和生长相关蛋白cyclin D1的表达情况。结果: (1) 免疫组织化学检测发现：人体胃癌组织中GRP78表达水平明显高于癌旁组织和正常组织,且与性别、分化程度相关（P<0.05）; (2) Western blotting检测发现：胃癌组织中GRP78蛋白的表达明显高于癌旁组织和正常组织;(3)  Western blotting检测发现： 相对于SGC7901细胞,SGC7901-H78细胞中GRP78蛋白的表达明显升高,同时检测生长相关蛋白cyclin D1的表达发现,随着GRP78表达的上调,cyclin D1蛋白表达增加。结论: GRP78蛋白的高表达可能参与了胃癌细胞的生长。     

食管鳞状细胞癌组织中B7-H3和CD44的表达及其临床意义

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中B7-H3和CD44的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测128例食管鳞状细胞癌组织和64例癌旁正常组织中B7-H3与CD44的表达,分析B7-H3、CD44表达与临床病理特征的关系及两者的相关性。结果 B7-H3和CD44在食管鳞状细胞癌组织中的阳性率均明显高于癌旁正常组织(P均0.05)。B7-H3高表达与肿瘤分化程度、浸润深度、pTNM分期及淋巴结转移密切相关(P0.05),与患者性别、年龄、肿块大小均无关(P0.05)。CD44高表达与肿瘤浸润深度、pTNM分期及淋巴结转移有关(P0.05),与患者性别、年龄、肿块大小、肿瘤分化程度均无关(P0.05)。B7-H3与CD44在食管鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关(r=0.333,P0.05)。结论 B7-H3、CD44均与食管癌侵袭性及淋巴结转移关系密切,且两者表达呈正相关,提示B7-H3和CD44协同参与肿瘤的进展,促进肿瘤转移。     

miR-570对胃癌细胞B7-H1蛋白表达的抑制作用

B7-H1是一种重要的负性共刺激分子,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,而微小RNA具有直接的转录后调控作用。本文研究miR-570对B7-H1表达的调控作用。首先将miR-570及其抑制剂anti-miR-570分别转染B7-H1表达阳性的人胃癌细胞SGC-7901和B7-H1表达阴性的人乳腺癌细胞MDA-MB-435,以流式细胞术检测B7-H1分子表达情况;然后构建pcDNA/B7-H1表达质粒与miR-570共转染CHO细胞,以流式细胞术检测CHO细胞上B7-H1分子的表达情况;最后分别构建含B7-H1基因3-UTR片段和含miR-570作用靶点序列的荧光素酶表达载体与miR-570共转染CHO细胞,用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。结果显示miR-570能显著抑制SGC-7901细胞和B7-H1基因转染细胞膜上B7-H1蛋白的表达,并能显著抑制荧光素酶表达载体表达的荧光素酶蛋白,而且anti-miR-570能上调MDA-MB-435细胞上B7-H1表达。本研究证明miR-570能显著抑制B7-H1蛋白表达,为通过抑制B7-H1信号通路以增强机体抗肿瘤免疫力的治疗途径奠定了基础。     

负性共刺激分子在胆囊癌中的表达及其临床意义

目的探讨负性共刺激分子B7-H1、B7-H3及B7-H4在胆囊癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测90例胆囊癌及20例癌旁组织中B7-H1、B7-H3及B7-H4的表达,分析三者表达与胆囊癌临床病理特征的关系及其相关性。结果 (1)B7-H1、B7-H3及B7-H4在胆囊癌组织中的表达均高于癌旁组织(P均0.01)。(2)B7-H1的表达与远处转移相关(P0.05),B7-H3的表达与原发灶浸润深度(P0.05)、淋巴结转移(P0.01)、临床分期(P0.01)相关;B7-H4的表达与患者性别(P0.05)、肿瘤大小(P0.05)相关。(3)B7-H1与B7-H4、B7-H3与B7-H4在表达上呈正相关(P0.05,r=0.235;P0.01,r=0.315)。结论 B7-H1、B7-H3及B7-H4在胆囊癌中表达增高,在肿瘤原位生长、侵袭和转移中发挥作用。     

PTPN13在人胃癌组织和胃癌SGC-7901细胞系中的表达及其对细胞增殖和侵袭的影响

目的分析PTPN13在人胃癌组织中及胃癌SGC-7901细胞系中的表达及其对细胞增殖、侵袭的影响。方法收集106例胃癌患者的胃癌组织及癌周正常组织标本。常规培养SGC-7901细胞并分为pc DNA3.1-PTPN13质粒转染组和未转染组。免疫组织化学法检测组织中的PTPN13表达;分析PTPN13表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度及转移的关系;Kaplan-Meier曲线分析不同PTPN13表达患者生存率的差异;CCK-8法检测细胞的增殖能力;Trans-well试验分析侵袭能力;Western blot检测E-cadherin、Snail及MMP9的表达。结果胃癌组织中的PTPN13阳性率低于癌周正常胃组织(31%vs 83%,P0.05);PTPN13的表达与肿瘤直径、浸润深度、淋巴结和远隔器官转移情况有关(P0.05);PTPN13阴性的胃癌患者2生存率较低;PTPN13过表达可以降低SGC-7901细胞的增殖率(P0.05),同时降低其侵袭能力(P0.05);上调PTPN13后SGC-7901细胞上皮化标志物E-cadherin表达增加,而间质化标志物Snail和MMP9表达减少。结论 PTPN13在胃癌组织和胃癌细胞中具有肿瘤抑制作用,较低的PTPN13表达提示患者预后不良。PTPN13具有成为胃癌的治疗诊断或治疗靶点的潜力。     

MicroRNA-10b对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨Micro RNA-10b(miR-10b)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法应用Real-time PCR方法检测21例胃癌组织和癌旁正常组织中miR-10b的表达水平,应用Lipofectamine?LTX试剂将化学合成的miR-10b mimics和miR-10b inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞,采用MTT方法检测SGC-7901细胞增殖能力的变化,Transwell小室法检测SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的变化;应用Western Blot方法检测P21蛋白表达水平。结果与正常组织相比,miR-10b在胃癌组织中的表达水平显著增高。与对照组相比,miR-10b表达沉默能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力,显著增加P21的蛋白表达水平。miR-10b过表达的作用与之相反。结论 MiR-10b沉默抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭可能与上调P21蛋白表达相关。     

miR-125b通过靶向STAT3抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力

目的研究miR-125b靶向STAT3对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响。方法运用qPCR法检测miR-125b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测STAT3在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对STAT3转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-125b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-125b后SGC-7901细胞STAT3的表达变化。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织miR-125b的表达水平明显降低,STAT3蛋白表达水平明显升(P0.01)。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控STAT3的转录活性。过表达miR-125b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显降低,STAT3的表达水平下调(P0.01)。结论miR-125b可靶向STAT3的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力。     

锌指转录因子Snai1通过E-钙黏蛋白调控胃癌侵袭及淋巴结转移

目的 探讨锌指转录因子Snai1在胃癌发生发展中的作用,以及胃癌组织中Snai1与E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达的关系.方法 收集本院普外科2010年1月至2012年1月收治的65例胃癌患者手术切除的胃癌组织及邻近的正常胃黏膜组织,免疫组织化学检测Snai1和E-cadherin的表达.体外培养人胃腺癌细胞株SGC-7901,分为3组：空白对照组不进行转染,阴性对照组转染不含靶向作用于Snai1的siRNA的空质粒,转染组转染靶向作用于Snai1的siRNA.转染结束后实时定量PCR和免疫印迹法检测3组细胞Snai1和E-cadherin的表达.结果 胃癌组织中Snai1表达阳性率较正常胃黏膜组织明显增高（58.5％比0.0％,P＜0.001）,而E-cadherin表达阳性率明显降低（43.1％比100.0％,P＜0.001）.Snai1阳性和阴性的胃癌组织中E-cadherin表达的阳性率分别为28.9％ （11/38）、63.0％（17/27）.Snai1阳性的胃癌患者较Snai1阴性的胃癌患者淋巴结转移率明显升高（78.9％比40.7％,P＜0.001）.体外细胞实验显示,空白对照组与阴性对照组比较,Snai1和E-cadherin的表达差异无统计学意义（均P＞0.05）;与空白对照组比较,转染组Snai1 mRNA和蛋白表达下调,而E-cadherin mRNA和蛋白表达上调（均P＜0.05）.结论 Snai1可通过抑制E-cadherin表达,促进胃癌发生局部浸润及淋巴结转移.     

Dickkopf-1沉默通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及上皮-间充质转化

目的:探讨分泌蛋白Dickkopf-1(DKK1)在人胃癌细胞中的表达及其对胃癌细胞侵袭能力的影响。方法:以real-time PCR和Western blot法检测DKK1在人胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(MKN-45和SGC-7901)中的表达水平;以RNA干扰法沉默DKK1,沉默效果以real-time PCR、Western blot及ELISA法验证;Transwell实验检测细胞侵袭能力,以丝裂霉素C抑制细胞增殖;real-time PCR及Western blot法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)水平。结果:DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中的表达明显高于GES-1细胞,表明DKK1在胃癌细胞中表达显著升高;DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中被成功沉默后,细胞侵袭能力显著下降,并具有时间依赖性,同时伴随E-cadherin表达增高及N-cadherin和vimentin表达下降,表明DKK1沉默能够显著抑制胃癌细胞侵袭和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT);经外源性重组DKK1(r DKK1)转染肿瘤细胞后,进一步证实DKK1具有促胃癌细胞侵袭的作用,并可促进EMT进程;DKK1沉默通过下调β-catenin水平来实现其对胃癌细胞侵袭及EMT的抑制作用。结论:DKK1在人胃癌细胞中表达显著增高,且DKK1沉默能够通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及EMT过程。     

组织金属蛋白酶抑制剂TIMP—2基因转染对胃癌细胞体内外侵袭能 …

了解ＴＩＭＰ－２基因转地胃癌细胞侵袭行为的影响，进行阻断肿瘤细胞侵转移的筛选尝试。     

miR-199a-3p targets ETNK1 to promote invasion and migration in gastric cancer cells and is associated with poor prognosis

PurposeTo investigate the prognostic significance of miR-199a-3p and its role in invasion and metastasis in gastric cancer.MethodsmiR-199a-3p expression in 436 formalin-fixed and 39 frozen gastric cancer tissues was investigated by in situ hybridization and RT-PCR, respectively. The role of miR-199a-3p in the migration and invasion of gastric cancer cells was determined in overexpression and inhibitor studies using transwell assays and the SGC-7901, BGC-823 and MGC-803 gastric cancer cells lines. The effect of miR-199a-3p expression on ethanolamine kinase 1 (ETNK1) levels was determined by western botting.ResultsmiR-199a-3p was significantly up-regulated in AGS, SGC-7901, BGC-823 and MGC-803 gastric cancer cells, when compared with GES-1 non-malignant gastric epithelial cells. In situ hybridization studies revealed that human non-tumor gastric mucosa samples were negative for miR-199a-3p expression, while 162 of 436 (37.16%) cases of gastric cancer demonstrated positive expression. miR-199a-3p overexpression was associated with tumor size, Lauren classification, depth of invasion, lymph node and distant metastasis, TNM stage and prognosis. In patients with I, II and III stage tumors, high miR-199a-3p expression was associated with a significantly lower 5-year survival rate. miR-199a-3p overexpression was associated with increased cell migration and invasion. ETNK1 expression was inhibited following miR-199a-3p overexpression in BGC-823 and SGC-7901 cells, and elevated following miR-199a-3p suppression in MGC-803 cells.ConclusionmiR-199a-3p is highly expressed in gastric cancer, and correlates with invasion, metastasis and prognosis. miR-199a-3p regulates the invasion and migration of gastric cancer cells by targeting ETNK1. Consequently, miR-199a-3p may serve as a prognostic indicator in gastric cancer.     

DARPP-32在胃癌中的表达及其意义

目的 探讨DARPP-32蛋白在胃癌组织、细胞系及耐药细胞系中的表达及意义。方法用免疫组织化学SABC法检测96例胃癌组织及57例正常胃黏膜中DARPP-32的表达,用Western蛋白印迹检测胃癌组织及细胞系中DARPP-32的表达。结果 胃腺癌组织中DARPP-32的表达率(92.7％,89/96)显著高于正常胃组织(52.6％,30/57,P<0.05),且DARPP-32表达与胃腺癌的分化、浸润、转移无关(P>0.05)。在胃癌患者的癌组织中DARPP-32和剪切产物t-DARPP均表达,其表达水平显著高于其癌旁组织(t=2.45,P=0.015),并以t-DARPP的表达为主。在人胃癌细胞系中也存在DARPP-32和t-DARPP的表达,而且DARPP-32在SGC7901耐药细胞株SGC7901/VCR和SGC7901/ADR中的表达水平较其亲本细胞明显下调。结论 DARPP-32在胃腺癌组织中的表达增高,DARPP-32参与胃癌的发生,其信号转导通路可能存在于胃上皮细胞,并与胃癌的发生及多药耐药相关。     

FAP在胃癌间质中的表达及其与微血管密度的关系

目的 探讨FAP在胃癌间质中的表达及其与微血管密度(microvessel density,MVD)的关系.方法 收集162例胃癌组织,同时建立人胃癌细胞系SGC-7901裸鼠皮下移植瘤模型,采用免疫组织化学染色法检测FAP和CD34的表达.结果 在人胃癌组织中,FAP表达于问质成纤维细胞,表达阳性率为90.74%(147例),而胃癌细胞和正常胃组织中无表达,且FAP表达和MVD分别与胃癌的分化程度(χ2=51.882,P<0.01;χ2=46.383,P<0.01)、侵袭深度(χ2=40.193,P<0.01;χ2=21.617,P<0.01)及淋巴结转移(χ2=24.232,P<0.01;χ2=13.393,P<0.01)有关.在15例裸鼠皮下移植瘤中,所有肿瘤中FAP均不同程度在间质成纤维细胞呈阳性表达.在人胃癌组织(χ2=97.710,P<0.01)和裸鼠皮下移植瘤组织(χ2=11.100,P<0.01)中,不同强度的FAP表达组间肿瘤间质MVD的差异具有统计学意义,且随着FAP表达水平的增高,MVD也随之增加.结论 FAP的表达与胃癌的分化程度、侵袭深度及淋巴结转移有关.FAP可能通过促进肿瘤的微血管生成,加快肿瘤的生长、侵袭和转移.     

人类胃组织复合表达两种不同剪接的胆囊收缩素-B/胃泌素受体

为了探讨正常和异位剪接的胆囊收缩素 - B/胃泌素受体基因是否在人类胃上皮细胞中表达及其表达量与胃癌分化和转移的关系。检测了 30例胃癌和癌周正常胃组织上皮细胞、10例胃炎和 2例胃正常组织上皮细胞及胃癌细胞株 SGC- 790 1中这两种受体基因的表达水平。结果显示 ,正常、炎症和恶性胃上皮细胞同时表达正常和异位剪接的胆囊收缩素 - B/胃泌素受体 ,两种受体的表达量与胃癌的分化与转移无关。推测异位剪接的胆囊收缩素 -B/胃泌素受体在胃上皮细胞中以目前尚不清楚的功能发挥作用