粘着斑激酶在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达和意义

目的探讨粘着斑激酶（FAK）在增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）中的表达和意义。方法运用细胞免疫组化技术，测定HSFB和正常皮肤成纤维细胞（NSFB）中的FAK、整合素α1、转化生长因子受体1（TGF-βR1）及α肌动蛋白（α—SMA）的表达；同时将HSFB分别用抗FAK、整合素α1、TGF-βR1及α—SMA抗体进行阻断培养，并测定培养前后整合素α1、TGF—βR1、α—SMA及FAK的表达。结果与NSFB相比，HSFB中的FAK、整合素α1、TGF—βR1、α—SMA的表达增高，差异具有显著意义（P〈0．05）。分别用抗整合素α1、TGF-βR1、α—SMA抗体进行阻断培养后，HSFB中的FAK表达下降（P〈0．01）；阻断FAK表达也可分别导致了整合素α1、TGF-βR1、α—SMA的表达降低（P〈0．01）。结论FAK对整合素α1、TGF-βR1及α—SMA的蛋白合成具有重要的调控作用，与增生性瘢痕的发生、发展关系密切。减少FAK在成纤维细胞中的过度表达，可能是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径。     

整合素在增生性瘢痕挛缩过程中作用机制的实验研究

目的 了解整合素在瘢痕挛缩过程中的作用。方法 取10例增生性瘢痕标本进行成纤维细胞原代培养，通过荧光定量PCR法（FQ—PCR）测定经整合素和黏着斑激酶（FAK）抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞中α-SMA mRNA表达量的变化。结果 经整合素和FAK抗体阻断后培养的成纤维细胞α-SMA的基因拷贝数均较阴性对照组明显下降（P（0．05）。结论 整合素及FAK通过促进α-SMA的合成引起瘢痕的挛缩，在瘢痕挛缩过程中具有重要的作用．     

粘着斑激酶在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达和意义

目的探讨粘着斑激酶(FAK)在增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)中的表达和意义。方法运用细胞免疫组化技术,测定HSFB和正常皮肤成纤维细胞(NSFB)中的FAK、整合素α1、转化生长因子受体1(TGF-βR1)及α肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时将HSFB分别用抗FAK、整合素α1、TGF-βR1及α-SMA抗体进行阻断培养,并测定培养前后整合素α1、TGF-βR1、α-SMA及FAK的表达。结果与NSFB相比,HSFB中的FAK、整合素α1、TGF-βR1、α-SMA的表达增高,差异具有显著意义(P<0.05)。分别用抗整合素α1、TGF-βR1、α-SMA抗体进行阻断培养后,HSFB中的FAK表达下降(P<0.01);阻断FAK表达也可分别导致了整合素α1、TGF-βR1、α-SMA的表达降低(P<0.01)。结论FAK对整合素α1、TGF-βR1及α-SMA的蛋白合成具有重要的调控作用,与增生性瘢痕的发生、发展关系密切。减少FAK在成纤维细胞中的过度表达,可能是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径。     

小干扰RNA分子对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 使用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术抑制黏着斑激酶（Focal adhesion kinase,FAK）基因的表达,观察增生性瘢痕成纤维细胞在生物学行为上发生的变化。方法设计特异性探针合成FAKSiRNA片段,脂质体法转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,光学显微镜观察细胞形态;MTT检测细胞活性并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期。结果转染后的成纤维细胞呈短梭形改变,胞质、突触减少,细胞核内核仁减少。细胞生长曲线表明．转染FAKsiRNA的瘢痕成纤维细胞生长明显抑制。转染后瘢痕成纤维细胞阻滞在G1期,S期和G2期细胞比例减少。结论FAK与瘢痕增生相关密切,因此改变FAK在成纤维细胞中的表达可望调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物活性．     

水蛭素对皮肤增生性瘢痕成纤维细胞bFGF及TGFβ_1表达的影响

目的：检测水蛭素对人皮肤瘢痕成纤维细胞碱性成纤维细胞因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGFβ1）表达的影响,探讨水蛭素抑制瘢痕形成的作用及机制。方法：体外培养并鉴定人皮肤瘢痕成纤维细胞,实时荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测不同浓度水蛭素作用人成纤维细胞24h后,bFGF、TGFβ1的mRNA和bFGF、TGFβ1蛋白表达水平。结果：浓度为0.156～2.5 U/L的水蛭素可下调瘢痕成纤维细胞TGFβ1mRNA、蛋白的表达,同时上调bFGF的mRNA、蛋白的表达,不同浓度组间比较,差异有统计学意义。水蛭素可抑制增生性瘢痕成纤维细胞分泌TGFβ1,促进其分泌bFGF。结论：水蛭素抑制瘢痕可调节bFGF、TGFβ1分泌,由此抑制成纤维细胞的生长、增殖并进一步抑制瘢痕形成。     

褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控

目的 探讨褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控.方法 分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用四氮唑复合物/硫酸酚嗪甲酯(XTT/PMS)法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中β1转化生长因子(TGF-β1)含量和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原ⅢmRNA表达,评价褪黑素和褪黑素受体拮抗剂(luzindole)对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响.结果 褪黑素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,抑制效果呈浓度依赖性(P＜0.05);高浓度褪黑素(10-3 mmol/L)可降低增生性瘢痕成纤维细胞产生TGF-β1 (P＜0.05)和α-SMA mRNA、胶原Ⅰ mRNA的表达(P＜0.05);褪黑素受体拮抗剂能阻断褪黑素对细胞产生TGF-β1和α-SMA、胶原Ⅰ mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);但褪黑素对该细胞胶原ⅢmRNA表达无影响(P＞0.05).结论 褪黑素可通过与受体结合调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物学活性.     

整合素和转化生长因子β受体在瘢痕组织中表达相关性的定量研究

目的　了解整合素与TGF - β受体在增生性瘢痕形成过程中的相互关系。 方法　采用荧光定量PCR法 ,分别测定经原代细胞培养后 ,瘢痕成纤维细胞中整合素α1、β1与TGF - βRmRNA的表达量 ,并对两者间的表达强度进行相关分析。结果　整合素α1和β1与TGF - βRⅠ间在表达的强度上 ,均成正 相关的关系 (r =0 .74、0 .6 8,P <0 .0 5 )。结论　整合素和TGF - β受体在瘢痕形成的过程中 ,可能存在着相互协同和促进的作用。     

整合素和转化生长因子β受体在瘢痕组织中表达相关性的定量研究

目的了解整合素与TGF-β受体在增生性瘢痕形成过程中的相互关系.方法采用荧光定量PCR法,分别测定经原代细胞培养后,瘢痕成纤维细胞中整合素α1、β1与TGF-βR mRNA的表达量,并对两者间的表达强度进行相关分析.结果整合素α1和β1与TGF-βRⅠ间在表达的强度上,均成正相关的关系(r=0.74、0.68,P＜0.05).结论整合素和TGF-β受体在瘢痕形成的过程中,可能存在着相互协同和促进的作用.     

肾上腺素对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1、bFGF及Ⅰ型前胶原表达的影响

目的实验研究肾上腺素对体外培养人皮肤成纤维细胞中Ⅰ型前胶原、TGF—β1及bFGF表达的影响。方法实验采用RT-PCR检测。肾上腺素作用24h后bFGF、TGF-β1、人Ⅰ型前胶原的mRNA表达差异，并以ELISA检测bFGF、TGF-β1在肾上腺素作用24h后的蛋白表达差异。结果与对照组比较，肾上腺素上调bFGF mRNA及蛋白的表达和下调TGFβ1 mRNA及蛋白的表达；但在增生性瘢痕成纤维细胞中，0．20μmol／L的。肾卜腺素可显著下调人Ⅰ型前胶原mRNA水平的表达，而在正常皮肤成纤维细胞中，0．05、0．1和0．2μmol／L的。肾上腺索均可下调人Ⅰ型前胶原mRNA水平的表达，且其差异有统计学意义。结论在增生性瘢痕成纤维细胞生长融合后早期（24h），肾上腺素可促进成纤维细胞bFGF的mRNA和蛋白的合成，降低TGF—β1的mRNA和蛋白的生成，降低Ⅰ型前胶原mRNA的表达。     

β1转化生长因子对瘢痕成纤维细胞纤维粘连蛋白及其受体α5β1整合素表达的影响

目的　研究 β1转化生长因子 (TGF β1)对瘢痕成纤维细胞纤维粘连蛋白 (FN)及其受体α5β1整合素表达的影响 ,探讨TGF β1、FN及其受体α5β1整合素在增生性瘢痕形成发展中的作用。方法　采用细胞培养、ELISA法、免疫组织化学、图像分析技术 ,观察浓度分别为 0、5、10、2 5、5 0、10 0 μg/L的TGF β1作用下 ,瘢痕成纤维细胞FN及其受体α5β1整合素表达的变化。结果　TGF β1浓度在 10～ 5 0μg/L之间时 ,可明显刺激瘢痕成纤维细胞FN及其受体α5β1整合素的表达 ,与对照组相比较 ,两者差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,其作用呈一定的剂量效应关系 ,随着TGF β1浓度增加 ,促合成作用也随之增加 ,浓度在 10 0 μg/L时 ,作用达到饱和。 结论　TGF β1作用下FN及其受体α5β1整合素在成纤维细胞中的过度表达可能与增生性瘢痕形成有关。     

α—平滑肌肌动蛋白在瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的诱导作用。方法 以5例增生性瘢痕为实验组,3例正常瘢痕为对照组,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及LSAB免疫组织化学染色技术,观察在不同TGF-β1浓度作用下,来源于实验组和对照组的成纤维细胞表达α-SMA的情况。结果 实验组的成纤维细胞,三维培养体系中α-SMA含量明显低于二维培养体系,不同浓度TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-SMA的作用不同,以5ng/ml的TGF-β1作用最有效;与对照组的成纤维细胞相比,实验组的成纤维细胞在表达α-SMA方面,对TGF-β1的反应更为敏感。结论 在体外,TGF-β1诱导α-SMA在瘢痕成纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异;实验组与对照组中的成纤维细胞在细胞性状方面存在差异,对TGF-β1敏感性不同;细胞外基质成分可能会降低TGF-β1的诱导作用,使α-SMA的表达减少。     

整合素表达对伤口愈合时成纤维细胞合成原胶原的影响

目的 研究伤口愈合时创面成纤维细胞整合素表达对成纤维细胞合成原胶原的影响。方法 以反义寡核苷酸阻断创面成纤维细胞表面相应整合素亚基的表达，用反转录多聚酶链式反应RT—PCR检测该整合素表达被抑制后创面成纤维细胞原胶原mRNA量的变化。结果 反义寡核苷酸能特异性抑制创面成纤维细胞相应整合素亚基的表达，该成纤维细胞合成原胶原α1(I)、α1(Ⅲ)mRNA的量显著降低。结论 降低创面成纤维细胞整合素的表达可从转录水平抑制成纤维细胞合成原胶原，为伤口愈合时减少瘢痕产生的研究提供实验依据。     

5-FU对增生性瘢痕中cyclinD1、cdk4及p53基因表达的影响

目的探讨5-Fu对增生性瘢痕组织的成纤维细胞中细胞周期蛋白因子（cyclinD1）、细胞周期蛋白依赖性激酶（cdk4）及抑癌基因（p53）的mRNA表达的影响，以阐明5-Fu对病理性瘢痕的作用机制。方法组织块法培养增生性瘢痕组织及正常皮肤组织的成纤维细胞。用不同浓度的5-Fu作用于体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞，检测MTT值；利用半定量RT—PCR分析用药前后cyclinD1、cdk4、p53的mRNA表达的变化。结果5-Fu在体外能明显抑制人增生性瘢痕组织中成纤维细胞的增殖及cyclinD1、cdk4的mRNA表达；对p53的mRNA表达无影响。结论5-Fu抑制病理性瘢痕成纤维细胞的机制与其抑制cyclinD1、cdk4的表达有关，而与p53表达无关。     

黏着斑激酶在转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 观察转化生长因子（TGF）β1诱导的正常人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化（EMT）过程中黏着斑激酶（FAK）的表达及下调FAK的表达后对TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化进程的影响。 方法 应用TGF-β1（10 μg/L）刺激HK-2细胞,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光方法分别检测E钙黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、FAK mRNA和蛋白的表达及磷酸化（p）-FAK（Tyr397）的蛋白表达。应用Lipofectmine2000将FAK siRNA转染HK-2细胞,采用Western印迹观察下调表达FAK对上述指标的影响。 结果 TGF-β1刺激后,HK-2细胞α-SMA蛋白和mRNA水平上调,E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。FAK蛋白和mRNA随时间的延长表达逐渐增多,48 h达到高峰。p-FAK（Tyr397）蛋白表达趋势与FAK相同。脂质体转染siRNA后FAK的mRNA和蛋白分别下调了50%和41%,下调表达FAK后可以显著抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞α-SMA蛋白的上调表达,逆转 E-cadherin蛋白的下调表达。 结论 在TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化进程FAK蛋白表达上调,敲低FAK蛋白表达后可以部分减轻EMT的程度,提示FAK在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和肾脏纤维化中发挥一定的作用。     

硅凝胶膜对增生性瘢痕的影响

目的 观察硅凝胶膜对增生性瘢痕的影响，探索其作用机制。方法 以患者的增生性瘢痕为研究对象，通过临床观察和组织形态学、免疫组织化学检测等手段，观察硅凝胶膜对瘢痕的影响及组织内成纤维细胞、胶原代谢、细胞因子表达的变化。结果 治疗组与对照组比较，增生性瘢痕明显变薄、变软，颜色变淡，组织内胶原纤维含量、TGF－β1、TGF－β（RI）、α－SM actin阳性表达细胞明显减少。结论 硅凝胶膜可能通过抑制成纤维细胞内TGF－β1、TGF－β（RI）、α－SM actin的表达，而达到治疗瘢痕的目的。     

瘢痕成纤维细胞中TGF-β受体与整合素相互作用的实验研究

目的:了解TGF-β受体和整合素在瘢痕增生和挛缩过程中的作用.方法:通过荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定经TGF-β受体、整合素和粘着斑激酶(FAK)抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞TGF-β受体以及整合素表达量的变化.结果:经不同抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞其TGF-β RI和整合素β 1的基因拷贝数均较阴性对照组有不同程度的下降(P＜0.05).结论:TGF-β受体和整合素介导的信号传导途径间可能存在着正反馈的效应,共同促进瘢痕的增生和挛缩.FAK是两条信号传导途径的交汇点和作用的中心环节.     

整合素α5β1在病理性瘢痕中的表达及意义

目的　研究整合素α5β1 在病理性瘢痕中的表达情况 ,探讨其在瘢痕发生、发展中的作用和意义。方法　运用SP免疫组化及SPA 胶体金免疫电镜技术对 15例增生性瘢痕、15例瘢痕疙瘩及 10例正常皮肤进行整合素α5β1 的检测 ,并对结果进行半定量及定量分析。结果　在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纤维细胞中整合素α5β1 呈阳性表达 ,较正常皮肤强 (P <0 0 1) ;在瘢痕疙瘩中的表达较增生性瘢痕强 (P <0 0 1)。结论　整合素α5β1 与病理性瘢痕发生、发展关系密切。设法减少整合素α5β1 在成纤维细胞的过度表达或许是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径     

PPARγ激动剂对成人正常皮肤成纤维细胞转分化的作用

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导成纤维细胞转分化的影响,探讨其抗瘢痕纤维化的潜在作用。方法：体外培养成人正常皮肤成纤维细胞,利用免疫荧光细胞化学法观察、分析PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,利用Western blot、实时荧光RT-PCR技术检测PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的α-SMA蛋白及mRNA水平的影响。结果：TGF-β1能显著增加成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞;与TGF-β1诱导组相比,10μM曲格列酮、15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少（P〈0.01）,抑制效应分别为31%、57%;预处理组的α-SMA mRNA水平显著下降（P〈0.01）。结论：PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的成人正常皮肤成纤维细胞的转分化的效应,具有抗皮肤瘢痕化、挛缩的潜在作用。     

厚朴酚通过抑制TGF-β1抑制增生性瘢痕成纤维细胞中的炎症因子

目的 探讨厚朴酚是否能够通过影响TGF-β1影响增生性瘢痕成纤维细胞的炎症反应。方法 自2019年9月至2020年9月,铁岭市第二人民医院外科从10例增生性瘢痕患者身上采集了10份增生性瘢痕组织样本,10例皮瓣移植患者术后采集10份正常皮肤组织样本。通过ELISA检测增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中白细胞介素（interleukin, IL）-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达情况。获取增生性瘢痕成纤维细胞后,分别采用0、10、20和40μmol/L厚朴酚处理增生性瘢痕成纤维细胞和正常成纤维细胞,在处理后24 h,采用ELISA和实时定量PCR检测检测细胞中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、IL-1β和TNF-α的表达情况,Western blot实验检测TGF-β1的表达情况。分别在细胞中转染对照和TGF-β1后,采用0μmol/L和40μmol/L厚朴酚处理细胞,在处理后24 h时,采用ELISA和实时定量PCR检测细胞中IL-1β、TNF-α和TGF-β1的表达...     

虾青素对人源增生性瘢痕成纤维细胞的作用及机制研究

目的:探讨虾青素对人源增生性瘢痕成纤维细胞的作用以及机制研究。方法:体外培养人源增生性瘢痕成纤维细胞分别加入0、10、50、100μmol/L浓度的虾青素作用24h,MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中的TIMP-1、MMP-1、COL-I及COL-Ⅲ的浓度;Western-blotting检测Bcl-2、α-SMA、TGF-β1及Bax等蛋白的表达。结果:不同浓度的虾青素使人源增生性瘢痕成纤维细胞活力降低而凋亡率增加;促凋亡蛋白Bax表达上调,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达下调,同时抑制α-SMA、TGF-β1的表达及TIMP-1、MMP-1、COL-I、COL-Ⅲ合成。结论:虾青素能诱导人源增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡并抑制HSF细胞增殖、转化,减少胶原分泌,促进胶原酶解,继而有效改善增生性瘢痕的发生与发展。