中药材熟地的X射线衍射Fourier谱鉴定

目的:建立中药材熟地的鉴定新分析方法。方法:采用粉末X射线衍射Fourier谱鉴定法。结果:通过对4个熟地及1个生地中药材进行实验、分析,获得了熟地的标准X射线衍射Foureir图谱及特征标记峰值。结论:实验结果表明X射线衍射Fourier谱鉴定法可用于中药材熟地的鉴定。     

广地龙的X射线衍射Fourier谱鉴定

目的：建立中药材广地龙的鉴定新分析方法。方法；采用粉末X射线衍射Fourier谱地。结果；通过对1个广地龙药材对照品，4个广地龙中药材进行实验，分析，获得了广地龙的标准X射线衍射线Fourier图谱及特征标记峰值。结论：表明X射线衍射Fourier谱鉴定法可用于中药材广地龙的鉴定。     

中药材当归的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定

目的：建立中药材当归的鉴定新分析方法。方法：采用粉末x射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法。结果：对1个当归尾对照品、1个当归标本和3个当归中药材进行实验、分析，获得了当归的标准X射线衍射Fourier图谱及特征标记峰值。结果：结果表明X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于当归的鉴定。     

中药材辛夷的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定

目的:建立将木兰科所属其它植物能否作为中药材辛夷和现有中药材辛夷质量的新鉴定方法。方法:采用X射线衍射Fourier谱鉴定法。结果:通过对五个辛夷中药材进行实验、分析,获得辛夷的标准X射线衍射Fourier图谱及特征标记峰值。结论:X射线衍射Fourier谱鉴定法可用于中药材辛夷的鉴定。     

中药材厚朴的X射线衍射Fourier指纹图谱分析

目的:建立中药材厚朴的鉴定分析新方法.方法:采用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法.结果:通过对3个中药材厚朴、3个凹叶厚朴、14个厚朴的代用品和习用品、1个伪品厚朴进行实验、分析,获得了中药材厚朴和凹叶厚朴的对照X射线衍射Fourier指纹图谱.结论:粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于中药材厚朴和凹叶厚朴的鉴定和识别.     

中药材川芎的X射线衍射Fourier谱鉴定

目的:建立中药材川芎鉴定的新分析方法。方法:采用粉末X射线衍射Fourier谱鉴定法。结果:通过对1个川芎药材对照品、1个川芎药材标本和3个川芎中药材样品进行X衍射实验、分析、获得了川芎的标准X射线衍射Foureir图谱及特征标记峰值。结论:表明X射线衍射Fourier谱鉴定法可用于中药材川芎的鉴定。     

中药材甘草的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定研究

目的:建立中药材甘草的新鉴定分析方法。方法:采用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法。结果:通过对2个甘草对照品和8个甘草中药材进行实验、计算分析,获得了甘草的标准X射线衍射Fourier指纹图谱及特征标记峰值。结论:X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于中药材甘草的鉴定。     

马鹿茸的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定

目的:建立中药材马鹿茸的鉴定分析新方法.方法:采用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法.结果:通过应用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法对3个马鹿茸和1个花鹿茸中药材进行分析鉴定,获得了马鹿茸的对照X射线衍射Fourier指纹图谱及特征标记峰值.结论:表明X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于中药材马鹿茸的鉴定.     

女贞子的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定

目的:建立中药材女贞子新鉴定分析方法。方法:以乙醇、氯仿为提取溶剂提取中药材女贞子,采用X射线衍射Fourier谱鉴定法。结果:通过对四个中药材女贞子的乙醇、氯仿提取物实验分析比较,获得中药材女贞子的标准X射线衍射Fourier图谱及特征标记峰值。结论:X射线衍射Fourier谱鉴定法可用于中药材女贞子的分析鉴定。     

石韦的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定研究

目的 建立中药材石韦的新鉴定分析方法。方法 采用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法。结果 通过对3个石韦对照品和17个石韦中药材进行实验、计算分析，获得了石韦的标准X射线衍射Fourier指纹图谱及特征标记峰值。结论 表明X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于中药材石韦的鉴定。     

射干的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定

目的 建立射干药材XRD的鉴定分析新方法.方法 采用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法.结果 通过对5个射干中药材进行实验、计算分析,获得了各样品的Fourier指纹图谱、特征标记峰值和相似度,并结合X射线衍射半定量相分析比较各个组分中α-石英、一水草酸钙、蔗糖的含量.结论 X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于中药材射干的鉴定.     

芍药肌动蛋白基因组DNA的克隆及分析

目的 克隆芍药Paeonia lactiflora肌动蛋白（Actin）基因组DNA序列并解析基因结构,分析Actin基因在芍药不同组织中的表达情况。方法 根据本课题组报道的芍药Actin基因cDNA序列（JX310002）设计特异性引物,以芍药栽培品种“桃花飞雪”总DNA为模板,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增芍药Actin基因组基因,克隆PCR产物并进行测序。应用生物信息学软件预测芍药Actin基因的外显子及内含子,基于Blastn程序分析芍药Actin基因在核苷酸水平上的同源性,应用MEGA5.0软件构建分子系统进化树;设计跨越内含子的半定量RT-PCR扩增引物,分析芍药Actin基因在芍药根、茎、叶、花中的表达情况。结果 测序结果表明芍药Actin基因组DNA序列全长1 405 bp,含4个外显子和3个内含子,3个内含子中共6个剪接位点均遵循高等真核生物5’端供位GU与3’端受位AG模式;共编码377个氨基酸,GenBank登录号为KF363830。设计了一对半定量RT-PCR扩增引物,其中上游引物跨越了芍药Actin基因的第1个内含子,可有效防止由DNA 污染而造成RT-PCR扩增的假阳性;半定量RT-PCR分析结果表明Actin基因在芍药根、茎、叶、花等不同组织中的表达量保持恒定。结论 首次克隆了芍药Actin基因组DNA序列并明确了其基因结构,半定量RT-PCR分析结果表明Actin基因可以作为芍药功能基因表达分析的内标基因。     

白芍药材的质量属性研究及产地评价

[目的]通过药材含量、药材水煎液特征图谱及出膏率表征不同产地白芍药材的质量属性,为其在经典名方中的应用提供质量评价方法。[方法]以2015版药典方法测定各批次白芍药材中芍药苷的含量;参考古法制备药材水煎液,摸索并建立其特征图谱,测定6个产地共21批白芍药材的水煎液特征图谱和出膏率,并进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。[结果]建立的白芍药材水煎液特征图谱,共标定6个共有峰,21批药材相似度介于0.829~0.999,可分为2类,聚类分析和主成分分析结果与相似度评价结果一致。[结论]以药材芍药苷含量、药材水煎液特征图谱及出膏率作为考察指标,通过化学计量学和成分分析可有效评价不同产地白芍药材的质量属性,具有一定的应用价值。     

亳芍内生真菌Alternaria alternate次生代谢产物的研究

目的研究亳芍内生真菌Alternariaalternate的次生代谢产物。方法利用硅胶、SephadexLH-20、反相、中压、高效液相制备等多种色谱法分离化合物,采用波谱方法对化合物进行结构鉴定。结果从内生真菌Alternaria alternate次生代谢产物中分离得到15个化合物,分别鉴定为methyl 4-acetamido-3-hydroxybenzoate(1)、(E)-methyl-5-hydroxy-3-methylpent-2-eno(2)、异苯并呋喃酮A(3)、对羟基苯乙酮(4)、6-hydroxy-isosclerone(5)、talaroflavone(6)、7-hydroxy-2-hydroxymethyl-5-methyl-4H-chromen-4-one (7)、 alternarienonicacid (8)、 7-hydroxy-2,5-dimethy-4H-1-benzopyran-4-one (9)、 5-hydroxy-epialtenuene(10)、交链孢醇(11)、methyl 3-hydroxybenzoate(12)、stemphyperylenol(13)、细格菌素(14)、交链孢烯(15)。结论其中化合物1、3、5～10、12～13为首次从内生真菌Alternaria alternate次生代谢产物中分离得到。     

芍药Actin基因在大肠杆菌中的高效表达

目的构建芍药Paeonia lactiflora Actin(Pl Actin)基因原核表达载体,优化Pl Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。方法基于Pl Actin基因c DNA序列及原核表达载体p ET-32a(+)多克隆位点序列,设计一对5’末端分别插入Bam H I和Hind III酶切位点的特异性PCR引物,基于RT-PCR技术亚克隆Pl Actin基因;用Bam H I和Hind III双酶切重组质粒p MD18-T-Pl Actin和原核表达载体p ET-32a(+),胶回收纯化目的基因和空载体,连接、转化后应用菌落PCR、质粒PCR和双酶切鉴定出重组子p ET-32a(+)-Pl Actin,转化BL21(DE3)菌株获得基因表达工程菌;分别设置诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度梯度、诱导的菌体起始密度梯度及表达时间梯度,诱导Pl Actin基因在大肠杆菌中表达,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝R250染色后制备干胶并比较重组Actin蛋白的表达量。结果亚克隆测序结果表明Pl Actin与目的序列完全一致,且其编码区序列(CDS)上下游成功插入了Bam H I和Hind III酶切位点;成功构建了芍药原核表达载体p ET-32a(+)-Pl Actin;诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L,诱导的菌体起始密度(A600)为0.4~0.6,最佳表达时间为4 h。结论构建了Pl Actin基因原核表达载体p ET-32a(+)-Pl Actin,建立了Pl Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。     

白芍饮片质量研究

目的：探讨白芍炮制过程中,饮片芍药苷含量及其差异的分布。方法：炒白芍、酒白芍及白芍片的中试生产,以HPLC测定样品芍药苷的含量。结果：亳芍,杭芍及川芍药材的芍药苷平均含量分别为0.97%,1.01%和0.88%；白芍片分别为0.91%(亳芍), 0.70%(杭芍)和0.41%(川芍); 炒白芍为0.725%(亳芍), 0.30%(杭芍), 0.22%(川芍); 酒白芍为0.91%(亳芍), 0.35%(杭芍), 0.21%(川芍)。结论：加工批次之间的饮片的芍药苷含量差异均低于10%,略高于亳芍、杭芍及川芍药材之间的差异, 说明在白芍的质量控制中,加工程序和工艺参数与对药材的控制同等重要。     

芍药FPPS基因的克隆及生物信息学分析

目的克隆芍药萜类物质生物合成关键酶法呢基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS)c DNA全长序列并对其进行生物信息学分析。方法根据芍药转录组测序数据,设计一对特异性PCR引物,应用RT-PCR技术扩增出芍药FPPS基因目标条带并克隆至p MD18-T载体上,菌落PCR和质粒PCR鉴定出阳性重组子后进行序列测定及序列同源性搜索、分子系统进化树构建、结构域搜索及3D结构预测等生物信息学分析。结果测序结果表明芍药FPPS基因全长1 315bp,含60 bp的5’-UTR、1 050 bp的CDS和205 bp的3’-UTR,共编码349个氨基酸,Gen Bank登录号为KP708571;Blastn和Blastp分析结果显示芍药FPPS(KP708571)及其编码的蛋白(AKJ26301)在核苷酸水平和氨基酸水平上与多种植物的FPPS基因和FPPS蛋白具同源性;分子进化树分析结果表明芍药FPPS蛋白与其他物种FPPS蛋白的亲缘关系相对较远;预测芍药FPPS蛋白相对分子质量为40 200,等电点为5.33,是一个定位于胞液、不含跨膜结构域、不含信号肽分子的亲水性、稳定蛋白;发现芍药FPPS含有底物结合位点、底物-Mg2+结合位点、催化位点、富含天冬氨酸位点1及富含天冬氨酸位点2共7个保守结构域;3D结构中α-螺旋所占比例高且α-螺旋之间由β-转角(loop)相连接;中央腔(central cavity)由大约10个核心α-螺旋排列而成。结论首次从芍药中克隆了FPPS基因并对其进行了初步的生物信息学分析。     

白芍总苷对自身免疫性甲状腺炎大鼠肠黏膜屏障及肠道菌群的影响

目的探讨白芍总苷对自身免疫性甲状腺炎(autoimmune thyroiditis,AIT)大鼠肠道菌群及肠黏膜屏障的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、硒酵母(36μg/kg)组及白芍总苷低、中、高剂量(160、320、640 mg/kg)组,每组8只。采用高碘水喂养联合sc猪甲状腺球蛋白与弗氏佐剂诱导AIT大鼠模型,造模后ig相应药物,1次/d,连续6周。采用ELISA法测定各组大鼠血清中甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulinantibodies,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibodies,TPOAb)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠甲状腺和结肠组织病理变化;采用透射电镜(TEM)观察各组大鼠结肠黏膜紧密连接结构;采用ELISA法测定各组大鼠结肠组织分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,s Ig A)水平;采用Western blotting法检测各组大鼠结肠组织闭锁连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭合蛋白(Occludin)表达情况;采用16S rRNA高通量测序技术检测各组大鼠肠道菌群变化。结果白芍总苷能够显著降低AIT大鼠血清中TGAb、TPOAb和TNF-α水平(P0.001),显著升高血清中IL-10水平(P0.001),减轻甲状腺滤泡损伤及结肠黏膜病变程度,改善结肠黏膜紧密连接超微结构,显著升高结肠组织中s Ig A水平(P0.05、0.01、0.001),显著升高结肠组织ZO-1和Occludin蛋白表达水平(P0.01、0.001),降低肠道菌群生物多样性及丰度指数,显著降低厚壁菌门相对丰度(P0.001),显著升高拟杆菌门相对丰度(P0.001),显著升高乳酸杆菌属Lactobacillus、普雷沃氏菌属Prevotellaceae和罗姆布茨菌属Romboutsia相对丰度(P0.05、0.001)。结论白芍总苷可能通过调节AIT大鼠肠道菌群组成及多样性,改善肠黏膜屏障损伤,从而发挥治疗AIT的作用。