反相高效液相色谱法测定不同方法炮制关木通中马兜铃酸的含量

目的：为了确定中药材关木通的最佳减毒方法,探讨不同炮制方法对中药材关木通中马兜铃酸的脱除效果。方法对中药材关木通进行姜炙、醋炙、蜜炙、甘草炙、碱制、炒炙、酒炙以及碱蜜合制、碱酒合制、碱姜合制,采用反相高效液相色谱法测定马兜铃酸的含量,计算马兜铃酸的脱除率。结果醋炙关木通药材中马兜铃酸的含量为（0.101000±0.001700）%,醋炙品水浸出物与醇浸出物的含量相当。结论醋炙制法为最佳方法。     

回药石菖蒲蜜制前后化学成分变化研究

目的 对石菖蒲生品、传统蜜炙品及《回回药方》蜜煎菖蒲方中记载蜜制石菖蒲所含化学成分进行分析比较.方法 采用75％乙醇提取石菖蒲生品与两种蜜制品,分别用乙酸乙酯、正丁醇对提取物进行萃取,均采用HPLC-DAD法对萃取物进行分析比较.结果 石菖蒲生品与两种炮制品正丁醇层在230nm及254nm波长处的吸收图谱均明显不同;乙酸乙酯层中,石菖蒲生品中峰2和峰3吸收强度大,含量较高;传统蜜制之后相对含量均明显降低,回蜜制之后峰3含量明显降低.结论 蜜制石菖蒲与生品石菖蒲的化学成分有所不同,蜜制品的小极性化学成分含量明显低于生品;两种蜜炙方法所得提取物存在明显差异.     

马兜铃炮制前后化学成分的研究

通过醇提取法和高效液相法，研究了马兜铃炮制前后化学成分含量的变化，表明蜜炙可以降低生马兜铃的毒副作用，为中医临床安全有效用药提供科学依据。     

HPLC法测定马兜铃蜜炙过程中马兜铃酸A的含量变化

目的采用高效液相色谱法测定马兜铃蜜炙过程中马兜铃酸A的含量变化。方法色谱柱:Hypersil ODS2C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-0.05%H3PO4溶液(体积比40∶60),柱温:25℃,流速:1.0 mL.min-1;检测波长:260 nm。结果马兜铃酸A线性范围为0.021 2～0.424 0μg,r=0.999 9,平均加样回收率98.80%,RSD值为2.10%(n=6)。结论该含量测定方法简单、准确、可靠;马兜铃经蜜炙后马兜铃酸A的含量下降,说明蜜制马兜铃能起到降低毒性的作用。     

关黄柏不同炮制品中盐酸小檗碱与盐酸巴马汀含量测定

目的:以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀含量为指标,考察不同炮制方法对关黄柏季铵碱类成分含量的影响。方法 :采用HPLC测定不同炮制品中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量,色谱柱为Diamonsil TM(钻石)C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水(0.02 mol.L-1磷酸二氢钠)(25∶75),流速1.0 mL.min-1,柱温25℃;检测波长345 nm,参比波长500 nm。结果:不同炮制品中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量高低顺序依次为:酒炙品>生品>盐炙品>炒炭品,其中生品与盐炙品差异不明显,炒炭品中仅检出少量。结论:在关黄柏不同炮制品中,随着炮制程度的加大,炒炭品中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量大幅下降,而酒炙品中两者含量明显增加。     

基于特征图谱结合效毒值与外观性状的蜜马兜铃炮制工艺研究

目的 基于特征图谱结合效毒值与外观性状的测定,研究蜜马兜铃炮制过程中毒性成分的变化规律。方法 采用高效液相建立17批蜜马兜铃特征图谱,对炮制蜜用量、稀释倍数、润制时间、炒制时间进行考察;在炮制过程中隔点取样,测定色度值及特征图谱,进行外观性状与内在效毒值的综合评价。结果 蜜马兜铃特征图谱标定了10个共有峰,指认6个特征峰,其中峰2为木兰花碱、峰5为7-羟基马兜铃酸A、峰6为马兜铃酸D、峰8为马兜铃酸B、峰9为马兜铃内酰胺Ⅰ、峰10为马兜铃酸Ⅰ。前处理考察确定蜜用量为每100 kg待炮炙品用炼蜜25 kg,炼蜜加入3倍沸水稀释,润制时间为60 min。炒制过程显示,蜜马兜铃毒性成分的峰面积随着炮制时间的延长呈现明显的下降趋势,木兰花碱与5个毒性成分的效毒值也逐渐增大。结合外观性状与内在效毒值进行综合评价,炮制19～27 min的样品排名前5,炮制时间确定为23～27 min。结论 马兜铃经炮制后,毒性成分的相对含量降低,效毒值增加,毒性减弱。效毒值结合外观性状的质量评价方法,可为毒性中药饮片的炮制提供参考。     

川芎、当归炮制前后挥发性成分分析

目的:对川芎、当归酒炙前后挥发油含量及其组成进行分析。方法:采用超临界CO2萃取技术对酒炙前后川芎、当归中挥发油进行提取,用GC-MS联用技术对其组成成分进行研究。结果:当归酒炙后挥发油含量减少2.15%,川芎酒炙后挥发油含量减少2.50%,但酒炙后化学成分含量大多都高于生品,且组成上也发生了变化。结论:酒炙可以改变挥发油含量及其组成,进而改变其药效。本实验结果为当归、川芎酒炙品的炮制工艺和临床应用提供了理论依据。     

巫山淫羊藿及其不同炮制品中总黄酮、淫羊藿苷、绿原酸的含量

目的: 对巫山淫羊藿生品及其4种炮制品中总黄酮、淫羊藿苷及绿原酸的含量进行测定与比较.方法: 采用紫外分光光度法、高效液相色谱法测定含量.结果: 总黄酮的含量依次为:生品＞酒炙品＞盐蒸品＞盐炙品＞羊脂炙品;淫羊藿苷的含量依次为:羊脂炙品＞盐蒸品＞盐炙品＞酒炙品＞生品;绿原酸的含量依次为:盐蒸品＞酒炙品＞盐炙品＞生品＞羊脂炙品.结论: 临床用药历代均以炮制品为主,上述情况当是重要原因,值得深入研究.     

基于多元统计分析和网络药理学的升麻蜜炙前后化学成分及潜在活性差异分析

目的：分析升麻蜜炙前后的化学成分差异,并初步探讨蜜炙对升麻潜在药理活性的影响;方法：以辽宁产升麻为例,基于超高效液相色谱结合四极杆飞行时间质谱（UHPLC-Q-TOF-MS）技术对5批生品及其蜜炙品进行质谱数据采集,原始数据经过MS-DIAL软件处理后,通过Metaboanalyst网站进行多元统计分析筛选并鉴定升麻蜜炙前后的差异化学成分,并进一步通过网络药理学分析显著差异成分的相关靶点及通路,探究其功效存在差异的机制。结果：筛选并鉴定出15种差异成分,包括三萜类成分8种,色原酮类成分2种,酚酸类成分2种,脂肪酸类成分3种;热图分析发现Sinapic acid、Palmitic acid、Cimicifugoside H-1、Linoeic acid、Cimicidanol、Cimidahurine、Cimicifugic acid E、Visnagin、Cimiacerogenin B等9种成分在生品中的相对含量较高,其余6种成分如Cimigenol-3-one、26-Deoxycimicifugoside等在蜜炙品中相对含量较高;基于网络药理学研究发现,生品含量较高的成分富集到的通...     

白术炮制过程水分控制与挥发油的关系

目的:研究探讨白术炮制过程水分控制与挥发油之间的关系。方法:选用浙江磐安产白术为原材料,按照《浙江省中药炮制规范》要求炮制,以甲苯法测定水分、水分蒸馏法提取挥发油,分别测定自然晾晒和烘干干燥的生白术及蜜炙白术的水分含量和挥发油含量。结果:白术原材料的水分含量和挥发油含量平均值分别为18.79%和1.40%;蜜炙白术水分含量和挥发油含量平均值分别为8.29%和0.96%;生白术自然晾晒过程中挥发油含量与水分含量呈正相关关系(K=0.0524);烘干白术干燥过程中挥发油含量与水分含量呈正相关关系(K=0.0814)。结论:随着工艺增加和干燥时间增长,挥发油含量明显减少,自然晾晒对白术挥发油的影响较烘干大。     

马兜铃酪氨酸脱羧酶基因克隆、测序及同源性分析

【目的】从中草药马兜铃中获得酪氨酸脱羧酶基因(tyrDC)互补DNA(cDNA)序列并进行同源性分析，以进一步达到敲除tyrDC，减轻该药肾毒性的目的。【方法】参照已知的植物酪氨酸脱羧酶的保守性氨基酸序列设计简并引物，并通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)从马兜铃中扩增出cDNA片段。将扩增的cDNA序列克隆并测序，用以设计特异引物，并通过cDNA末端快速扩增(Rapid Ampli6cation of cDNA Ends，RACE)从马兜铃中扩增出全长tyrDC cCNA。【结果】该克隆的tyrDC cDNA的总长度为1678bp，包括一个编码516个氨基酸的1551bp开读框(ORF)和一段127bp的下游非翻译区(3’UTR)。序列比较结果表明，由马兜铃tyrDC核苷酸序列推导的氨基酸序列分别与已发布的罂粟酪氨酸脱羧酶和唐松草酪氨酸／多巴脱羧酶享有76％和79％的同源性。【结论】从马兜铃中扩增得到tyrDC cDNA全序列，且对酪氨酸脱羧酶的同源检索显示，不同植物的酪氨酸脱羧酶之间都存在普遍的序列相似性。为去除马兜铃肾毒性奠定了基础。     

三七不同加热炮制品中5种皂苷类成分的含量测定

目的：建立一种用HPLC测定三七生品及不同温度加热炮制品中5种皂苷类成分含量的方法,为研究三七炮制机理及探索生熟三七药理作用差异提供物质基础。方法采用HPLC同时测定生品及不同炮制品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的含量。Agilent Zorbax SB-C18（4.6mm×250mm,5μm）,乙腈和水梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温20℃,检测波长203nm。结果该方法中5种化合物线性关系良好,r均在0.9997及以上,回收率为97.6%～101.7%.3种炮制品（蒸制品、油炸品和砂炒品）中5种皂苷类成分含量整体比生品均有不同程度下降,同时均有新成分产生。炮制品中五种成分含量下降幅度和新产生成分含量增加幅度与加热温度相关。砂炒品中5种皂苷类成分含量下降幅度最大,新产生成分的含量最高。结论该方法可用于三七炮制品中皂苷类成分的含量测定和质量控制。砂炒法是一种有前景的三七炮制方法。生品与炮制品三七的物质组成和含量各不相同,这也许就是导致生熟三七药理作用差异的直接原因,相关研究正在进行中。     

回药瑞香狼毒最佳炮制的工艺研究

目的 优化回药瑞香狼毒的炮制工艺,考察影响瑞香狼毒炮制的因素.方法 参照〈宁夏中药炮制规范〉重点考核醋炙工艺,对其进行多因素考察,设计正交实验,在此基础上参考文献中其它炮制工艺,进行横向比较.以炮制品中有效部位总黄酮含量为指标,采用紫外分光光度法（UV）进行含量测定,并对数据作统计学处理,找出最佳优化方案.结果 醋炙瑞香狼毒总黄酮含量5.14%为最高,比生品3.46%含量提高48.6%左右;奶制比生品含量提高32.7%,诃子汤制提高33.6%.醋炙瑞香狼毒的最佳工艺为用醋量25%,浸润10 min,在150 ℃下炒制8 min.结论优化回药瑞香狼毒炮制工艺研究对规范瑞香狼毒的炮制具有一定的指导和参考意义.     

2种工艺姜半夏中氨基酸及无机元素含量的比较

目的:比较2种工艺姜半夏中总氨基酸和微量元素的含量。方法:氨基酸分析法;阳离子交换树脂层析法;等离子直读光谱法。结果:2种不同的炮制工艺炮制所得的姜半夏中总氨基酸含量、游离氨基酸含量,以正交法略高;2种姜半夏均含有与生半夏种类相同的无机元素,但Fe、Mg、Cr、Mn、Na、Ni、P、Sr、V的含量以正交法较高,而有害元素Al3 、Ba2 以药典法较高,半夏的其它炮制品中的微量元素均较正交法和药典法姜半夏低。单纯的姜汁煮半夏中未检出色氨酸。结论:正交法炮制工艺优于药典法。     

蒺藜炒制前后挥发性成分和脂肪油的GC-MS分析

目的:对蒺藜炒制前后挥发性成分和脂肪油进行分析,为科学评价蒺藜炒制意义提供相关化学依据。方法:利用自制实验室炒制装置收集蒺藜炒制过程中挥发出的成分,利用挥发油提取器收集生、炒品挥发油及甲酯化脂肪油中的脂肪酸,用气相色谱-质谱联用法对其组分进行测定和分析。结果:从生蒺藜挥发油中鉴定出14个化合物,炒蒺藜中鉴定出13个,炒制中挥发出的成分鉴定出11个。3类挥发性成分之间的相对含量亦发生变化,生、炒蒺藜中脂肪油含量相近,两者脂肪油中均检出了亚油酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、花生酸、反-9,12-十八碳二烯酸、山嵛酸。结论:蒺藜生、炒品挥发性成分存在一定差异。炒制对蒺藜脂肪油的含量和其中的脂肪酸组分没有影响。     

何首乌提取物对人正常肝细胞L02周期阻滞及凋亡的影响

目的：分析何首乌中致人肝细胞损伤物质的化学成分,初步探讨其致肝细胞损伤的机制。 方法：生、制何首乌用70%乙醇提取,提取物经AB-8型大孔树脂吸附分离,依次用水、50%乙醇和95%乙醇洗脱得到生何首乌和制何首乌水洗脱物、50%乙醇洗脱物和95%乙醇洗脱物;生、制何首乌直接水煎煮得到水提物。体外培养人正常肝细胞L02,用含何首乌洗脱物和水提物的细胞培养液与细胞共同孵育一定时间后,检测药物对L02细胞生长的影响,筛选致肝细胞损伤成分。高效液相色谱法对有明显细胞毒作用的洗脱物进行成分分析,噻唑蓝法检测其对L02细胞增殖的影响,Giemsa染色进行形态学观察,流式细胞术检测L02细胞周期和凋亡情况。 结果：生、制何首乌95%乙醇洗脱物对L02细胞有明显的生长抑制作用,其他组分对L02细胞的增殖无明显影响。成分分析显示,生、制何首乌95%乙醇洗脱物中大黄素含量最多,分别为（18.53±2.96）%和（10.28±1.34）%;何首乌95%乙醇洗脱物及大黄素可使L02细胞阻滞于S期,并诱导L02细胞凋亡。 结论：何首乌95%乙醇洗脱物是何首乌中导致肝细胞损伤的主要物质,而大黄素是导致肝细胞损伤的成分之一。     

不同炮制方法对菟丝子中多糖含量的影响

目的考察不同炮制方法对菟丝子中多糖含量的影响。方法采用硫酸-苯酚比色法测定菟丝子不同炮制品的多糖含量。结果菟丝子不同炮制品多糖含量有差异,生菟丝子多糖含量为5.34%,经酒炙后是其生品的1.98倍,是清炒品的1.62倍。结论菟丝子经炮制后能显著提高多糖的含量。     

液相色谱串联质谱用于原料药甲氧苄啶含量测定

目的建立甲氧苄啶原料药的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。方法样品经50%的甲醇溶解后进行液质联用分析。色谱柱为C18柱,流动相为甲醇：水（50∶50）,流速为0.2mL/min;质谱采用多重反应监测,正离子模式,离子对m/z（291.1→230.1）。结果甲氧苄啶的线性范围为60～252ng/mL,平均含量为93.64%,平均回收率为99.42%。结论利用液相色谱串联质谱技术测定原料药中甲氧苄啶的方法具有高选择性、高灵敏度等特点,具有一定实用性。     

脑灵片对青木香减毒作用的初步研究

目的本试验通过研究脑灵片对青木香中马兜铃酸A含量的影响，以初步探讨青木香的解毒问题。方法青木香与脑灵片共煎后用RP—HPLC法测定马兜铃酸A的吸收值，观测其含量的变化情况。结果加入脑灵片后，青木香中马兜铃酸A的含量明显降低。结论脑灵片可显著降低青木香中马兜铃酸A的含量。