重组血红素加氧酶-1乳酸乳球菌灌胃后大鼠肠道中血红素加氧酶-1重组蛋白含量变化

目的观察重组血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）乳酸乳球菌灌胃后大鼠肠道中重组HO-1蛋白的含量。方法制备HO-1乳酸乳球菌悬液和乳酸乳球菌悬液,不同剂量和不同次数灌胃SD大鼠,在规定时间取回肠组织,酶联免疫吸附法和免疫组化法分析回肠组织HO-1的含量和分布情况。结果重组HO-1蛋白吸收后进入肠上皮细胞的胞膜和胞质中。回肠组织中HO-1含量：5倍、10倍HO-1乳酸乳球菌灌胃比20倍HO-1乳酸乳球菌灌胃高（P〈0.01）,连续灌胃4天、7天比连续灌胃10天含量高（P〈0.01）。结论乳酸乳球菌中重组HO-1蛋白可以被回肠吸收,但在一定程度后增加HO-1乳酸乳球菌灌胃剂量和次数不能有效增加回肠中重组HO-1蛋白的含量。     

大鼠血红素加氧酶-1基因在乳酸乳球菌中的表达

目的:在乳酸乳球菌中表达大鼠血红素加氧酶-1(HO-1)基因。方法:采用RT-PCR技术从大鼠脾总RNA中分离扩增血红素加氧酶HO-1基因,将该基因克隆进pGEM-Teasy质粒中,转化大肠杆菌DH5α提取质粒,鉴定HO-1基因。酶切后与pSEC质粒连接,经电击转化,将重组质粒转入乳酸乳球菌NZ9000中,转化子在含有氯霉素的脑心浸液培养基上培养。用nisin诱导HO-1表达,SDS-PAGE、Westernblot鉴定表达产物,并采用分光光度法测定HO-1活性。结果:表达产物相对分子量约为32kU,表达量约为7.0mg/L,HO-1活性为2.386U/(mg·h)。结论:乳酸乳球菌能够表达具有生物活性的大鼠HO-1。     

血红素加氧酶-1在高氧肺损伤小鼠中的表达及作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在高氧造成的肺损伤转基因小鼠和正常小鼠中的肺部表达水平及其作用.方法 把32只新生小鼠分成4组:野生型组(WT组),特异性转基因小鼠全身高水平表达HO-1组[HO-1-FL(H)组,细胞质]、特异性转基因小鼠全身低水平表达HO-1组[HO-1-FL(L)组,细胞质]和切去C末端HO-1(Nuc-HO-1-TR组,细胞核).把4组小鼠暴露在高氧环境中3d,然后放到正常空气环境中,通过免疫组织化学、免疫荧光等实验技术来观察小鼠3d、7d和14 d肺泡发育情况及HO-1在小鼠肺部表达情况.结果 HO-1在HO-1-FL(H)组小鼠肺部高表达,高氧暴露3d后4组小鼠肺部肺泡发育都受到了损害,在正常空气环境中7、14 d时HO-1-FL(H)组小鼠的肺泡发育恢复得最好.结论 小鼠肺部适度高水平的HO-1表达有助于高氧环境造成的小鼠肺损伤的恢复.     

大鼠血红素加氧酶-1表达对呼吸机相关性肺损伤时SOD、MDA的影响

目的以大鼠呼吸机相关性肺损伤（VILI）为模型,用血晶素（hemin）诱导大鼠血红素加氧酶-1（HO-1）表达,观察VILI时超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）活性变化及HO-1对SOD和MDA的影响,探讨在VILI过程中的抗氧化应激保护作用及其机制。方法32只雄性SD大鼠随机分成4组（每组n=8）：对照组只做气管切开术,保留自主呼吸;模型组气管切开后行机械通气4 h;诱导剂组于模型制备前24 h腹腔注射血晶素40μmol/kg;抑制剂组于模型制备前24 h腹腔注射锌原卟啉（ZnPP）10μmol/kg。机械通气4 h后处死大鼠,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF）标本,测定BALF中总蛋白含量,肺组织湿/干重比值（W/D）,肺组织LDH、SOD活性和MDA含量,检测肺组织HO-1蛋白表达,光镜下行肺组织病理学观察。结果与对照组相比,模型组大鼠肺组织病理损伤严重,肺W/D、BALF中总蛋白、LDH活性均明显增加,VILI模型复制成功。与模型组比较,诱导剂组肺组织HO-1表达增加,肺组织病理损伤明显减轻,SOD活性明显增加而MDA含量明显下降,用ZnPP抑制HO-1表达,此种保护作用消失。结论血晶素诱导大鼠HO-1表达可以增加SOD活性,降低MDA含量,减轻肺的氧化应激损伤,降低VILI的程度。     

血红素加氧酶-1在大鼠原位肝移植急性排斥反应中的作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(hemooxygenase-1,HO-1)在大鼠原位肝移植急性排斥反应中的作用.方法 建立大鼠原位肝移植排斥模型后分为3组:对照组(A组),ZnPP组(B组)和CoPP组(C组).3组分别于3、7 d处死,取血及肝脏标本.进行肝功测定(AST、ALT、TBIL、ALB);肝组织HE染色;荧光RT-PCR检测HO-1表达.结果 ①3组肝功能3、7 d时比较有明显的统计学意义(P＜0.05).②HE染色:A组3 d出现I、Ⅱ级为主的排斥反应,7 d时出现Ⅱ级为主的排斥反应;B组3 d出现Ⅱ级为主的排斥反应,7 d时出现Ⅱ、Ⅲ级为主的排斥反应;C组3 d出现排斥反应0～Ⅱ级,以I级为主,7 d时出现排斥反应0～Ⅱ级,以I、Ⅱ级为主.③HO-1在C组表达明显升高,B组不明显,A组介于两组之间.结论 血红素加氧酶-1(HO-1)过表达能减轻急性排斥反应.     

血红素加氧酶-1的研究进展

血红素加氧酶-1与多种疾病的发生发展有着密切的关系,本文综述了近年来关于血红素加氧酶-1的研究进展.     

氯化血红素对大鼠肝脏血红素加氧酶1的诱导表达

目的观察氯化血红素（hemin）对大鼠肝脏血红素加氧酶-1（HO-1）的诱导表达作用。方法SD大鼠18只随机分为两组：氯化血红素处理组共10只，每日早晨hemin15mg／kg腹腔注射，每24h重复1次；生理盐水对照组共8只，每日早晨同时间腹腔注射等量生理盐水，每24h重复1次。第10d处死大鼠后检测血清ALT、AST水平，用免疫组织化学方法观察肝组织HO-1的表达，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝组织HO-1mRNA表达。结果hemin处理组与生理盐水对照组大鼠血清ALT，AST水平无明显差异。hemin处理组肝组织HO-1表达明显高于生理盐水对照组。结论hemin能诱导大鼠肝组织HO-1表达明显增加。     

血红素加氧酶-1对急性肺损伤大鼠肺形态学的影响

目的 研究血红素加氧酶-1(HO-1)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织形态学的影响.方法 180～200 g雄性SD大鼠32只,随机分为4组(n=8):C组(正常对照组),OA组(油酸损伤对照组),OA+AS组(阿司匹林预处理组),OA+Ⅸ组(锌卟啉Ⅸ预处理组).测定动脉血气,肺组织湿/干(W/D)重比.免疫组化法测肺...     

血红素加氧酶-1抗急性血管排斥反应的作用研究

目的探讨血红素加氧酶-1（HO-1）在异种心脏移植急性血管排斥反应中的作用。方法建立豚鼠到SD大鼠异位心脏移植模型,选用血红素分别诱导供体和受体,上调HO-1基因表达;眼睛毒蛇因子（CVF）、环孢素A抑制超急性排斥反应。采用免疫组织化学方法检测心脏组织中HO-1的表达;流式细胞仪检钡4受体血清异种抗体IgM的变化;免疫荧光方法观察异种抗体IgM在血管内膜的沉积情况;TUNEL方法检测心脏组织细胞凋亡情况。结果HO-1表达上调后,能明显延长移植心脏的存活时间,抑制异种抗体表达,减少心肌细胞的凋亡。结论HO-1在异种心脏移植中具有抗急性血管排斥反应的作用,对移植器官起保护作用。     

血红素氧合酶1干预对呼吸机所致肺损伤的影响

目的探讨血红素氧合酶1（HO-1）的干预对家兔呼吸机所致肺损伤（VILI）的影响。方法 24只家兔随机分为常规潮气量＋PEEP组（C组）、呼吸机所致肺损伤组（VILI组）、呼吸机所致肺损伤＋HO-1诱导剂干预组（Hm组）;实验终点行动脉血气分析,Western blot和免疫组化方法检测肺组织HO-1的表达水平和细胞定位,观察肺组织形态变化并进行肺损伤评分,测定肺组织湿干重比值。结果 VILI组较C组HO-1蛋白表达水平升高,HO-1蛋白主要定位于肺泡上皮细胞和血管内皮细胞,在肺泡巨噬细胞和中性粒细胞也有表达。Hm组与VILI组比较,HO-1蛋白表达水平升高,PaO2/FiO2升高,肺湿干重比值和肺损伤评分降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 HO-1蛋白表达升高能减轻VILI,对VILI有一定的保护作用。     

血红素加氧酶-1在肺疾病中的作用研究新进展

HO-1是一种应激蛋白,除了它本身固有的促进血红素代谢的作用外,还具有抗炎、抗凋亡、抗增生和抗氧化应激等许多重要生物学作用.HO-1及其代谢产物作用的研究将为肺疾病的临床治疗开辟新的途径.     

藻蓝素对脓毒性急性肺损伤大鼠血红素氧合酶-1表达的影响及分子机制

目的观察藻蓝素（CPC）对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠血红素氧合酶-1（HO-1）表达的影响及分子机制。方法 SD大鼠根据不同实验目的随机分为对照组、模型组和CPC干预组。其中模型组采用盲肠结扎穿刺建立脓毒症急性肺损伤大鼠模型。 CPC干预组在模型组基础上分别给予浓度为20、40、60 mg/kg CPC腹腔注射。术后72 h后获肺组织标本,观察CPC处理前后HO-1蛋白的表达,比色法检测HO-1酶活性改变情况。提取组织总蛋白和核蛋白,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）磷酸化以及转录因子E2相关因子2（Nrf2）核转位情况。化学发光法检测超氧化物的含量。结果 CPC处理可明显促进ALI的肺组织中HO-1的表达,并能增强其酶活性。同时,CPC也可促进Akt磷酸化,并能诱导转录因子Nrf2核转位。同时,CPC也可显著减少大鼠肺组织中过氧化物产生,而HO-1抑制剂锡原卟啉御（ SnPP）能明显降低CPC对超氧化物的抑制作用。结论 CPC诱导HO-1表达可能与Akt磷酸化以及Nrf2的激活有关。     

血必净通过上调血红素氧合酶-1减轻脓毒症诱导肺损伤

目的 探讨血必净（XBJ）是否能通过上调血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）的表达,来减轻脓毒症小鼠的肺损伤（ALI）。方法 本实验在哈尔滨医科大学附属第一医院肝脾外科中心实验室进行。采用改良盲肠结扎穿孔法（CLP）制作脓毒症小鼠模型。48只雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组（Sham组,n=12）、模型组（CLP组,n=12）、血必净组（XBJ+CLP,n=12）和HO-1抑制剂组（XBJ+ZnPP+CLP组,n=12）。血必净进行干预时,造模前2h经尾静脉注射血必净（2ml/kg）,HO-1特异抑制剂锌卟啉ZnPP（40μmol/kg）在给予血必净1h后经腹腔注射,其余各组给予等体积的生理盐水。术后12h后处死,光镜下观察肺组织的形态学改变,检测肺组织的湿干重比值（W/D）,测定小鼠血清中的炎性介质（TNF-α、IL-6）,采用Western blot法以及免疫组化法检测肺组织HO-1的表达情况,Western blot法检测HO-1上游转录因子——核因子E₂相关因子2（Nrf-2）的表达情况。用单因素方差分析（ANOVA）进行4组间比较,再进行Turkey检验,进行两组间多重比较差异有统计学意义（P<0.05）。结果 与参照组（Sham组）相比,CLP组血清中TNF-α、IL-6水平均明显增加（32.45±9.62 vs 573.51±105.26,47.38±11.84 vs 853.72±198.56pg/ml,P<0.05）,光镜下观察肺损伤及炎性细胞浸润程度明显加重（肺损伤评分：3.24±1.38 vs 12.32±3.45,P<0.05）,肺组织W/D比值增加（4.52±0.34 vs 5.98±0.85,P<0.05）,蛋白印迹法及免疫组化法检测结果显示肺组织中HO-1、Nrf-2的蛋白表达含量均轻度的增加（P < 0.05）。给予血必净（XBJ）干预后,与CLP组相比,血清中TNF-α、IL-6释放均减少（573.51±105.26 vs 327.45±68.52,853.72±198.56 vs 504.72±113.28pg/ml,P<0.05）,肺组织病理损伤及炎性细胞浸润程度减轻（肺损伤评分：12.32±3.45 vs 6.34±1.68,P<0.05）,肺组织W/D比值减少（5.98±0.85 vs 4.75±0.56,P<0.05）,肺组织中HO-1、Nrf-2蛋白表达含量均明显增加（P<0.05）。XBJ对于肺组织的上述保护作用被HO-1抑制剂ZnPP所逆转,HO-1抑制剂组的肺损伤程度与CLP组差异无统计学意义（肺损伤评分：12.32±3.45 vs 11.45±2.85,P>0.05;肺W/D值：5.98±0.85 vs 5.73±0.64,P>0.05）。结论 血必净对于脓毒症小鼠所诱发的急性肺损伤具有保护作用,其可能机制为上调HO-1通路减轻炎性反应,继而减轻肺损伤。     

吸入一氧化氮对内毒素性急性肺损伤大鼠的作用

目的观察并评估吸入一氧化氮(iNO)对内毒素性急性肺损伤大鼠肺部炎症和损伤程度的影响。方法 80只雄性清洁级SD大鼠随机分成4组:空白对照吸入空气(C+RA)组、空白对照吸入一氧化氮(C+iNO)组、脂多糖给药后吸入空气(L+RA)组和脂多糖给药后吸入一氧化氮(L+iNO)组。腹腔注射20%乌拉坦麻醉后建立静脉通路。L+RA组和L+iNO组股静脉输注脂多糖2mL(6mg/kg溶于2mL生理盐水);C+RA组及C+iNO组股静脉输注生理盐水2mL(脂多糖溶剂对照);静脉输注完成后马上将C+iNO组和L+iNO组大鼠放入特制的密封盒内[NO终浓度稳定在(40±2)ppm];C+RA组和L+RA组则放置于实验室吸入空气。观测各组肺组织病理改变;测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白浓度;同时检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)浓度。结果与C+RA组及C+iNO组相比,L+RA组大鼠的肺组织炎症损伤程度、BALF中总蛋白浓度、MPO活性、MDA浓度均显著增高(P<0.05或0.01);而与L+RA组比较,L+iNO组大鼠肺组织的炎症损伤程度、BALF中总蛋白浓度、MPO活性、MDA浓度均显著减轻或下降(均P<0.05)。结论吸入一氧化氮可改善内毒素导致的急性肺损伤,其可能的机制在于一氧化氮能抑制脂质过氧化反应,减少自由基的产生。     

血红素加氧酶-1在肺早期缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的研究血红素加氧酶-1（HO-1）与供肺缺血再灌注损伤之间的关系。方法采用改进的套管吻合技术，建立同系大鼠左肺原位再灌注损伤的动物模型。采用HO-1的诱导剂钴原卟啉（CoPP）和抑制剂锌原卟啉（ZnPP）分别进行干预处理后，运用免疫组织化学技术和RT-PCR技术分别检测HO-1蛋白在供肺组织中的表达以及供肺中HO-1mRNA的表达；运用TUNEL技术检测供肺组织中细胞凋亡。结果肺组织发生缺血再灌注时可诱导HO-1蛋白的表达，且随着再灌注时间的延长，表达逐步增多，再灌注8 h后达到高峰；再灌注前使用CoPP进行预处理，可以诱导HO-1蛋白的表达上调。HO-1蛋白表达上调可以降低肺缺血再灌注后细胞凋亡的发生率。结论肺缺血再灌注损伤可诱导HO-1表达上调，CoPP诱导的HO-1过表达可以抑制肺缺血再灌注损伤诱导的肺细胞凋亡，从而减轻供肺的再灌注损伤。     

氯沙坦对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的治疗作用

目的研究肾素-血管紧张素系统(RAS)药物氯沙坦在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)治疗中的作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制小鼠ALI/ARDS模型,术后分别腹腔注射不同浓度氯沙坦(5、10、15、20、25mg/kg),研究氯沙坦对ALI/ARDS小鼠肺损伤的影响,并观察氯沙坦作用后ALI/ARDS小鼠7d生存率的变化。结果氯沙坦显著改善ALI/ARDS小鼠肺损伤的程度,在5～15mg/kg范围内,ALI/ARDS小鼠的氧合指数和肺湿重/干重比(W/D)显示改善的趋势;但当氯沙坦的浓度超过15mg/kg时,氧合指数和W/D反而逐渐变差。氯沙坦(15mg/kg)干预使小鼠血清中TNF-α[(554.1±62.7)pg/mL比(759.2±21.5)pg/mL,P0.01]、IL-6[(1227.3±130.0)pg/mL比(2670.4±174.1)pg/mL,P0.01]和IL-1β[(444.0±38.6)pg/mL比(486.6±61.7)pg/mL,P0.05]水平均显著降低;肺水肿明显减轻;小鼠7d生存率显著提高(6.7%比0)。结论在一定剂量范围内RAS药物氯沙坦可减轻CLP诱导的ALI/ARDS肺损伤,提高ALI/ARDS小鼠7d生存率。     

灯盏花素肺部给药抗大鼠急性肺损伤氧化作用的研究

目的从抗氧化途径研究灯盏花素肺部给药抗大鼠急性肺损伤的作用．方法健康雄性SD大鼠气管内滴入内毒素（LPS）复制肺损伤模型,气管内分别给予灯盏花素50mg、100mg和200mg,肺部给药6h后,观察肺组织病理形态学变化和检测肺组织干湿比值（W／D）、髓过氧化物酶（MPO）和超氧化物歧化酶（SOD）的活力及丙二醛（MDA）含量．结果（1）肺组织病理学显示：急性肺损伤组大鼠肺组织呈现典型的炎症病理变化,包括肺泡充血,出血,水肿,肺泡腔和血管壁中性粒细胞浸润,肺泡壁增厚等肺损伤性病变．灯盏花素肺部给药组各剂量能够明显减轻肺损伤程度;（2）与正常对照组相比,急性肺急性肺损伤组W／D、MPO和MDA水平均增高（P〈0．05）,而SOD活力降低（P〈0．05）;灯盏花素肺部给药组各剂量均能降低急性肺急性肺损伤W/D、MPO和MDA水平,提高SOD的活性（P〈0．05）,且呈剂量依赖关系．结论灯盏花肺部给药能够降低肺W／D比值、肺组织髓过氧化物（MPO）活力和脂过氧化物（MDA）含量,提高肺组织内抗氧化酶SOD活力,明显减轻急性肺损伤程度,其作用机制可能与提高肺内抗氧化作用有关．     

机械通气对急性肺损伤兔肺水肿影响的实验研究

目的研究不同潮气量联合不同水平呼气末正压(PEEP)机械通气对急性肺损伤(ALI)兔肺水肿的影响。方法用数字表法将36只新西兰兔随机分为正常对照(NC)组、ALI组、常规潮气量(15mL/kg)低PEEP(5cmH2O)(CVLP)组、常规潮气量高PEEP(10cmH2O)(CVHP)组、小潮气量(8mL/kg)低PEEP(LVLP)组和小潮气量高PEEP组(LVHP组)。以内毒素静脉注射建立ALI动物模型,经机械通气的4组动物分别给予不同潮气量联合不同水平PEEP机械通气4h。实验结束后取肺组织测定湿质量/干质量比值评价肺水肿严重程度。结果NC组、ALI组、CVLP组、CVHP组、LVLP组和LVHP组的肺湿质量/干质量比值分别为4.81±0.19、5.84±0.20、5.47±0.28、5.25±0.12、5.24±0.12和5.12±0.10,NC组低于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05);ALI组高于各机械通气组,差异有统计学意义(P<0.05);LVHP组低于CVLP组,差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论机械通气能够减轻ALI肺水肿,小潮气量联合高PEEP机械通气减轻ALI肺水肿的作用更加显著。     

血红素氧合酶-1/一氧化碳系统与急性肺损伤

血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)系统在多种应激状态下诱导产生,通过抗氧化、抗炎、抗凋亡等机制发挥组织器官保护作用,基因治疗、药物诱导HO-1高表达或外源性CO可能成为治疗多种疾病的新途径。本文就HO-1/CO系统的产生、调控及在急性肺损伤中的表达和作用简要综述。