利用野生抑制探针提升对BRAF V600E基因痕量突变检测的研究和临床应用

目的 BRAF V600E基因痕量突变的筛查可以避免肿瘤患者无效治疗的情况出现。方法用内部竞争性扩增片段提高野生抑制型(WTB)探针对野生型BRAF V600E基因的抑制,提高发生痕量突变的BRAF V600E基因型的检出率。结果当模板DNA浓度在50~200ng/μL时,构建的痕量基因突变实时荧光定量检测方法能够完全屏蔽BRAF V600E野生型基因扩增。该检测方法的灵敏度可以达到0.1%,符合基因痕量突变检测技术灵敏度的要求。在50例疑似结直肠癌患者的结直肠镜活检组织中,构建的该方法检测到BRAF V600E基因痕量突变的标本为8例(16.0%),具备较高的检出率。结论构建的基因痕量突变的检测方法能够对临床标本中BRAF V600E基因痕量突变做快速、简便、低成本的定量分析。     

BRAF基因突变在甲状腺乳头状癌中的临床意义

目的:探讨BRAF V600E基因突变与甲状腺乳头状癌的临床相关性。方法:采用PCR技术和直接测序法,对63例甲状腺乳头状癌患者和45例其他类型甲状腺疾病患者石蜡组织BRAF V600E基因突变进行检测。结果:甲状腺乳头状癌组中32例存在突变;而在其他类型甲状腺疾病组中未发现突变。BRAF V600E基因突变在甲状腺乳头状癌不同肿瘤直径组之间的比较差异以及在有无区域淋巴结转移组之间的比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:BRAF V600E基因突变与甲状腺乳头状癌的发生、肿瘤的大小和区域淋巴结的转移有关。     

利用等位基因特异性扩增检测人结直肠癌BRAF基因V600E突变

目的建立一种基于等位基因特异性扩增技术检测人BRAF基因V600E突变的技术,用于检测低水平肿瘤点突变。方法设计选择性扩增人BRAF基因V600E的引物,利用BRAF V600E突变型大肠癌细胞系HT29核酸混合于BRAF野生型大肠癌细胞系SW480中进行灵敏度检测,通过与Sanger测序法比较,利用其检测40例结直肠癌石蜡标本的BRAF V600E突变情况。结果模拟细胞系混合检测显示该方法可检测出6.2%混杂于野生型基因里的BRAF V600E突变,利用该方法在40例大肠癌标本中成功检测出3例BRAF V600E突变,与测序法检出结果一致。结论成功建立了利用等位基因特异性扩增技术检测人BRAF基因V600E突变的实验技术并用于检测实体肿瘤标本,与测序法相比该方法具有灵敏、简便、快速的特点,可用于人肿瘤BRAF V600E突变的筛查应用。     

恶性黑色素瘤患者肿瘤组织中BRAF基因突变的 分子病理检测

目的:探讨恶性黑色素瘤患者肿瘤组织中BRAF基因突变情况。方法:应用Taqman-ARMS方法检测164例恶性黑色素瘤患者肿瘤组织中BRAF基因突变情况。结果:恶性黑色素瘤患者肿瘤组织中BRAF基因总突变率为11.59%(19/164),均为V600E突变,BRAF基因突变在黑色素瘤亚型和临床分期Ⅰ或Ⅱ中差异有统计学意义(P0.05)。结论:恶性黑色素瘤患者中BRAF基因存在一定的突变率,且慢性日光损伤型或非慢性日光损伤型及Ⅲ或Ⅳ期恶性黑素瘤BRAF基因突变多见。     

甲状腺癌患者BRAF V600E基因突变与民族及临床病理特征的关系

目的 探讨甲状腺癌患者BRAF V600E基因突变与民族及其临床病理特征的关系。方法 选取2021年1月至2023年1月于右江民族医学院附属医院确诊的甲状腺癌患者300例作为研究对象,收集其病理标本,并根据患者民族将其分为壮族病例150例和汉族病例150例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测BRAF基因V600E位点的突变情况。结果 300例甲状腺癌患者中,突变型221例,野生型79例。壮族和汉族甲状腺癌患者BRAF V600E基因突变率比较(72.00%vs. 75.33%),差异无统计学意义(P>0.05)。相同民族不同性别甲状腺癌患者间BRAF V600E基因突变率比较,差异均有统计学意义(P<0.01);相同性别不同民族甲状腺癌患者间BRAF V600E基因突变率比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。<40岁的甲状腺癌患者BRAF V600E基因突变率为88.67%,明显高于≥40岁患者的58.67%,差异有统计学意义(P<0.05);但不同肿瘤最大径及不同淋巴结数目的甲状腺癌患者BRAF V600E基因突变率比较,差异均无统计...     

广东梅州客家人群甲状腺癌BRAF基因V600E突变特点分析——附316例单中心研究

目的 探讨广东梅州客家人群甲状腺癌鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1 （BRAF）基因V600E突变特点。方法 收集316例广东梅州客家地区的甲状腺癌患者的临床资料及BRAF基因V600E突变检测结果,对BRAF基因V600E突变与肿瘤特征的关系进行单因素分析和多因素Logistic回归分析。结果 316例患者BRAF基因V600E总体突变率为75.3% （238/316）,其中乳头状癌突变率为77.0%（238/309）。单因素分析显示BRAF基因V600E突变型患者肿瘤径线较小,纵横比大于1、微钙化比例较高,Ⅵ区和颈侧区淋巴结转移比例较低（P均< 0.05）;多因素Logistic回归分析提示BRAF V600E突变与Ⅵ区淋巴结转移（OR = 2.289, 95% CI = 1.283 ~ 4.081, P = 0.005）、超声回声（OR = 0.419, 95% CI = 0.209 ~ 0.841, P = 0.014）及粗大钙化（OR = 3.673, 95% CI = 1.395 ~ 9.668, P = 0.008）有关。结论 广东梅州客家地区人群甲状腺癌BRAF基因V600E突变率较高,BRAF基因V600E突变者易发生Ⅵ区淋巴结转移。     

二代测序技术检测442例甲状腺乳头状癌基因突变及其临床病理学特征

目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)基因改变及其与临床病理学特征的关系。方法 通过二代测序技术对442例PTC患者进行基因检测,同时收集患者的临床病理学资料。结果 (1)442例PTC患者中,423例患者检出基因突变,其中BRAF(385例)、RET(24例)、KRAS(5例)、NTRK3(3例)、NTRK1(3例);(2)BRAF基因突变仅与肿瘤最大径相关(P=0.006);(3)V600E突变丰度与性别、肿瘤最大径、肿瘤单/双侧、腺外侵犯、淋巴结转移、组织学亚型(P均<0.05)相关;(4)V600E不同突变丰度与肿瘤最大径、癌灶分布、腺外侵犯、淋巴结转移、组织学亚型(P均<0.05)相关。结论 应用NGS技术可以明确PTC各驱动基因变异的独特特征,此外BRAF基因V600E突变与多项高危的临床病理学特征相关。     

中国人群朗格汉斯组织细胞增生症患者BRAF V600E突变及临床意义

目的:探讨中国人群朗格汉斯组织细胞增生症(Langerhans cell histiocytosis,LCH)的BRAF V600E突变情况及其临床意义。方法:回顾性分析50例经病理诊断的LCH患者临床资料并对石蜡包埋的活检组织进行BRAF V600E的检测。全部病例采用免疫组化法检测BRAF V600E突变蛋白的表达,部分病例同时采用HRM-Sanger测序法进行基因检测(31例)。结果:本研究组中LCH患者BRAF V600E总体突变率为58%(29/50),免疫组化法测定阳性率为56%(28/50);而HRM-Sanger测序法阳性率为54.8%(17/31)。在14例基因检测阴性患者中2例突变蛋白检测阳性(2/14,14.3%);17例患者基因检测阳性中有1例患者突变蛋白检测呈阴性(1/17,5.9%);BRAF V600E突变与年龄、性别、临床分级及治疗反应均无显著相关性,突变患者与野生型患者的3年总体存活和无病存活时间也无统计学差别。结论:免疫组织化学法检测石蜡包埋组织中BRAF V600E突变具有较高的敏感性。58%的中国人群LCH患者存在BRAF V600E突变,提示该病是一种克隆性疾病,但是其临床意义有待进一步研究。     

非V600E BRAF突变结直肠癌突变形式及临床病理特征

目的 探讨BRAF非V600E突变结直肠癌突变形式及临床病理特征。方法 对827例结直肠癌标本行NGS检测,筛选BRAF非V600E突变病例,分析突变形式,比较其与V600E突变病例的临床病理特征差异。结果 检出BRAF突变58例,其中20例为非V600E突变。热点突变15例,罕见点突变1例;串联重复区域单核苷酸缺失(移码)突变1例,双核苷酸插入(剪切区域)突变1例;BRAF基因融合2例。与V600E突变相比,非V600E突变病例原发于右半结肠比例显著偏低(49%vs 80%,P=0.021),中位发病年龄更大(60岁vs 68岁,P=0.021)。有2例非V600E病例表现为错配修复缺陷(dMMR),突变形式均为串联重复区域插入/缺失突变。结论 非V600E突变在BRAF突变结直肠癌中占相当比例,突变形式丰富多样,与V600E突变患者具有不同的临床病理特征。     

结直肠腺癌BRAF基因突变的检测及其临床意义

目的:探讨结直肠腺癌BRAF基因突变的检测及临床意义。方法:采用PCR直接测序法检测结直肠腺癌患者石蜡包埋肿瘤组织中BRAF基因突变情况,分析BRAF基因突变与患者性别、年龄、组织学分级及临床分期的相关性。结果:17例BRAF基因突变结直肠腺癌病例中,16例为15外显子突变,1例为11外显子突变。16例中,突变位于15外显子第600位密码子14例,包括第1 799位碱基T突变为A(Val600Glu,V600E)13例(92.9%),第1 799、1 800位碱基T、G突变为A、A(Val600Glu,V600E)1例;突变位于15外显子第594位密码子2例,均为第1 780位碱基G突变为A(Asp594Asn,D594N)。1例11外显子突变位于第468位密码子,第1 403位碱基G突变为C(Gly468Va,G468V)。BRAF基因突变与患者性别、年龄无相关性;组织学分级为Ⅲ级的BRAF基因突变患者数多于Ⅱ级(P=0.029);临床分期为Ⅳ期的BRAF基因突变患者数多于Ⅱ期、Ⅲ期(P=0.011)。结论:BRAF基因突变与结直肠腺癌组织学分级和临床分期相关,随着组织学分级和临床分期的增加,BRAF基因突变率升高。     

伴BRAF V600E突变PTC患者超声特征及与淋巴结转移的关系研究

【摘要】目的:探讨伴鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1（v-raf murine sarcoma viral oncogene homologue B1，BRAF）突变甲状腺乳头状癌（Papillary carcinoma of thyroid，PTC）患者超声特征及与淋巴结转移的关系。方法：本次研究纳入绵阳市第三人民医院2015年1月-2022年1月收治PTC患者共417例，均经穿刺或手术病理组织学检查确诊，分析不同亚型患者BRAF V600E突变阳性率和淋巴结转移情况关系，采用Logistic回归模型评价BRAF V600E突变对不同亚型患者超声图像特征的影响。结果：①高细胞亚型BRAF V600E突变阳性率显著高于经典亚型、滤泡亚型（P<0.05）；②BRAF V600E突变阳性人群不同亚型颈部淋巴结转移率比较差异有统计学意义（P<0.05）；不同亚型BRAF V600E突变阳性患者颈部淋巴结转移率显著高于BRAF阴性者（P<0.05）；③合并BRAF V600E突变不同亚型患者钙化类型和是否贴近被膜比例比较差异有统计学意义（P<0.05）；④多因素分析结果显示，BRAF V600E突变与经典亚型/高细胞亚型患者钙化特征独立相关（P<0.05）。结论：合并BRAF V600E突变PTC患者出现颈部淋巴结转移几率更高；BRAF V600E突变存在可影响经典亚型/高细胞亚型PTC患者超声图像钙化类型。     

甲状腺乳头状癌石蜡标本BRAF V600E基因突变检测方法的比较研究

目的分析、比较聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法、微滴式数字聚合酶链反应(ddPCR)法、MassARRAY核酸质谱法和Sanger测序法检测甲状腺乳头状癌患者石蜡标本中BRAF V600E基因突变阳性率。方法收集35例2013年手术切除的甲状腺乳头状癌石蜡标本(已知新鲜组织用PCR-荧光探针法检测BRAF V600E基因突变全阳性),分别采用PCR-荧光探针法、ddPCR法、MassARRAY核酸质谱法和Sanger测序法检测甲状腺乳头状癌石蜡标本中BRAF V600E基因突变情况。结果 35例甲状腺乳头状癌石蜡标本PCR-荧光探针法、ddPCR法、MassARRAY核酸质谱法和Sanger测序法检测BRAF V600E基因突变阳性率分别为80.0%(28/35)、94.3%(33/35)、74.3%(26/35)和60.0%(21/35)。结论对于需要进行回顾性分析的甲状腺乳头状癌石蜡标本,ddPCR法更适用于BRAF V600E基因突变的检测。     

甲状腺乳头状癌BRAF V600E基因突变与超声及临床特征的相关性研究

目的:探讨甲状腺乳头状癌(PTC)BRAF V600E基因突变与超声及临床特征的相关性。方法:选取2020年6月—2022年7月湖南省人民医院手术病理证实为PTC患者627例,共737个结节,分为BRAF V600E(+)组和BRAF V600E(-)组,比较两组的基线资料。采用单因素及多因素Logistic回归分析与PTC BRAF V600E基因突变相关的超声及临床特征。结果:BRAF V600E基因突变率为71.8%。BRAF V600E(+)组和BRAF V600E(-)组在中央区淋巴结转移、颈侧区淋巴结转移、包膜外浸润、超声最大径、病理直径及PTC结节的回声、形态、边缘、微钙化方面的差异有统计学意义(P <0.05)。单因素及多因素Logistic回归分析显示,颈侧区淋巴结转移、包膜外浸润、PTC结节形态及微钙化是BRAF V600E基因突变的独立危险因素。结论:颈侧区淋巴结转移、包膜外浸润、甲状腺结节形态及微钙化与PTC患者BRAF V600E基因突变相关。对PTC的超声及临床特征进行评估可为患者治疗方案的制定提供帮助。     

伴BRAF V600E突变的甲状腺乳头状癌超声图像特征及其淋巴结转移风险分析

目的 分析BRAF V600E突变的甲状腺乳头状癌（PTC）患者的超声图像特征，探讨其淋巴结转移风险。方法 选取我院经穿刺或手术病理组织学检查确诊的PTC患者417例，分析不同病理组织学分型PTC的BRAF V600E突变阳性率、淋巴结转移率及其超声图像特征的差异；采用多因素Logistic回归分析BRAF V600E突变与不同亚型PTC超声图像特征的关系。结果 417例PTC患者中共检出BRAF V600E突变阳性327例，其中经典亚型、滤泡亚型及高细胞亚型PTC患者中BRAF V600E突变阳性率分别为73.53%、66.67%及86.96%，高细胞亚型BRAF V600E突变阳性率高于经典亚型和滤泡亚型，差异均有统计学意义（均P<0.05）。BRAF V600E突变阳性的PTC患者中，经典亚型、滤泡亚型及高细胞亚型的颈部淋巴结转移率、结节钙化类型及边缘贴近被膜占比比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）；各亚型BRAF V600E突变阳性患者颈部淋巴结转移率均高于突变阴性患者，差异均有统计学意义（均P<0.05）。多因素Logistic回归分析显示，BRAF ...     

Ventana 免疫组化检测甲状腺乳头状癌BRAFV600E突变蛋白表达

目的分析免疫组化(IHC)方法检测甲状腺乳头状癌(PTC)BRAF V600E突变蛋白的特异性、敏感性及与实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测BRAF V600E突变的一致性。方法用Ventana IHC方法(VE1抗体)检测BRAF V600E突变蛋白在108例PTC组织中的表达,检测结果与同一组织的qPCR方法检测结果进行对比。使用SPSS 21.0软件进行统计学分析。结果 Ventana IHC方法检测BRAF V600E突变蛋白的灵敏度和特异度分别为97.44%(76/78)和86.67%(26/30),与qPCR方法检测BRAF V600E突变的总体一致性为94.44%。两种方法检测结果存在一致性,且一致性较好(Kappa值=0.859,P0.05)。结论 Ventana IHC方法检测BRAF V600E突变蛋白的灵敏度和特异度均较高,与qPCR方法存在一致性,且一致性较好,在PTC组织可以作为检测BRAF V600E突变的方法之一,值得推广。     

BRAF V600E基因蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及潜在的诊断价值

目的通过免疫组化方法检测丝/苏氨酸特异性激酶基因V600E蛋白突变特异性抗体(即BRAF V600E)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达,及其与临床病理特征、预后之间的关系。方法采用En Vision免疫组化法检测BRAF V600E在315例样本中的表达(包括151例PTC)。结果 (1)BRAF V600E在PTC中阳性率为36.4%,显著高于甲状腺对照组(15.8%,P0.05)及其他病变组(6.3%,P0.05),且高于甲状腺对照组中的结节性甲状腺组(18%,P0.05)和滤泡型肿瘤组(7.1%、Fisher's精确值=0.0359),与乳腺病变组(18.5%)差异无统计学意义(P0.05);(2)BRAF V600E在PTC中表达与有无甲状腺被膜外侵、有无淋巴结转移2个临床指标差异有统计学意义:有被膜外侵组(71.5%)显著高于无被膜外侵组(28.5%),有淋巴结转移组(90%)显著高于无淋巴结转移组(28.2%),与组织学类型、年龄、性别、肿瘤大小、是否多发肿块无关;(3)BRAF V600E在PTC伴随桥本组阳性率(59.1%)高于PTC无伴随病变组(30.7%,P0.05),PTC伴随结节性甲状腺肿组、或滤泡型腺瘤组、或钙化组与PTC无伴随病变组差异无统计学意义。结论 BRAF V600E基因蛋白在PTC中高表达与患者的预后相关,提示BRAF V600E基因蛋白可能在PTC的发生、发展中发挥重要作用。     

甲状腺乳头状癌BRAF V600E突变及超声特征与颈部淋巴结转移的相关性研究

目的探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)患者鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B(v-Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B, BRAF) V600E基因突变及超声特征与颈部淋巴结转移的关系。方法 PTC患者34例,其中有颈部淋巴结转移11例,无颈部淋巴结转移23例;患者术前均行超声检查,记录肿瘤直径、边缘、纵横比、有无钙化等特征;取手术切除的PTC组织和癌旁组织各34份,采用DNA测序法检测BRAF V600E基因突变情况。比较有、无颈部淋巴结患者BRAF V600E基因突变率及超声声像特征。结果 PTC组织BRAF V600E基因突变率(52.94%)高于癌旁组织(0)(P0.05);有颈部淋巴结转移者超声声像示肿瘤钙化比率(81.82%)高于无颈部淋巴结转移者(43.48%)(P0.05),肿瘤直径[(21.36±7.54)mm]、BRAF V600E基因突变率(45.45%)、纵横比1比率(63.64%)和肿瘤边缘不光整比率(72.73%)与无颈部淋巴结转移者[(18.29±6.93)mm、56.52%、78.26%、69.57%]比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 PTC组织BRAF V600E基因突变率较高,其与颈部淋巴结转移无明显相关性,超声声像示肿瘤钙化者可能更易出现颈部淋巴结转移。     

甲状腺肿瘤组织中BrafV600E基因突变的检测

目的探讨甲状腺肿瘤石蜡包埋组织中Braf V600E基因突变状态及其与年龄、性别、发病部位、病理组织学分型的关系。方法采用实时荧光PCR技术检测144例甲状腺石蜡组织中Braf V600E基因突变。结果 122例甲状腺癌中发现Braf V600E基因突变77例,突变率为63.1%。Braf V600E基因突变与年龄、性别、肿瘤良恶性、甲状腺微小乳头状癌以及肿瘤大小密切相关(P<0.01),与肿瘤的被膜侵犯及广泛转移有关(P<0.05)。22例良性甲状腺病变组织中Braf V600E基因均未检测到突变。结论 Braf V600E基因可以作为甲状腺良、恶性肿瘤鉴别诊断中的一个重要生物标记物,其在甲状腺乳头状癌中的突变率与患者年龄、性别、肿瘤性质及肿瘤大小有关。     

甲状腺乳头状癌BRAF V600E基因突变与临床及超声特征的相关性研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)BRAF V600E基因突变与临床及超声特征的相关性.方法 回顾性分析术后证实为PTC的82例患者,共96个结节的临床及超声特征.分析PTC的BRAF V600E基因突变与临床、超声特征包括2017年ACR甲状腺影像报告和数据系统(TI-RADS)之间的关系.结果 96个PTC中,突变...     

甲状腺细针穿刺残留物标本BRAF V600E突变检测联合细胞学诊断在甲状腺乳头状癌中的诊断价值

目的 探讨使用甲状腺细针穿刺(FNA)残留物标本检测BRAF V600E突变的可行性及其联合细胞学诊断在甲状腺乳头状癌中的诊断价值.方法 回顾性收集2017年3月至2018年12月的1674例进行甲状腺FNA、具有完整细胞学诊断及FNA残留物标本BRAF V600E突变检测结果的患者信息,其中876例患者进行了手术切除且有组织病理诊断结果.同时对128例手术患者的配对术后切除组织进行BRAF V600E突变检测.结果 所有术后甲状腺乳头状癌患者的BRAF V600E突变率为86.6％(733/846).FNA残留物的BRAF V600E突变检测结果与配对术后切除组织的BRAF V600E突变检测结果一致性极好(Kappa=0.890,P<0.001).BRAF V600E突变和细胞学诊断联合检测可将灵敏度由单独细胞学诊断的83.5％提高到97.2％,准确度由83.7％提高到96.5％.结论 甲状腺FNA残留物标本BRAF V600E突变检测联合细胞学诊断可提高甲状腺乳头状癌诊断的灵敏度和准确度.